NHS磁珠使用原理及详细的操作步骤应用范畴(精)

操作流程
磁珠 准备
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目标生物分子 的偶联
封闭未反应 的活性基团
偶联后 磁珠保存 IP实验 （可选择）
1.磁珠的准备（以100uL为例）
100ul NHS磁珠
PBS 清洗2次
弃上清
100ul 偶联缓冲液
2.目标生物分子的偶联
500ul 偶联缓冲液
10-15ug IgG
孵育 1-2h
弃上清 可用于 偶联率测定
3.封闭未反应的活性基团
1ml PBS 500ul 封闭剂 混匀15-30min /4℃反应1h 重复一次 弃上清 弃上清
4.磁珠保存/后续实验
1ml 保存剂 4℃保存
产品特点
1
偶联量高，每100ul磁珠约偶联20~30ug生物分子；
100ul
20~30ug
100ul
5~10ug
2
与ProteinA/G相比， 免疫反应后洗脱可获得 无背景干扰的目标蛋白； （轻重链影响）
*：偶联体系：1mL，pH=8.0；磁珠使用量：100μL。 随着AFM1浓度的增大，偶联上磁珠的抗体增多，抗体投量为30μg时，偶联 效率达84.40%。
谢谢
由于SDS-PAGE加样缓冲液中含有 巯基乙醇从而导致抗体的重链与轻链之 间的二硫键被破坏从而使得抗体分子变 成重链分子(55KD)和轻链分子(25KD)。 所以当目的蛋白的大小接近重链或者轻 链分子时，重链或者轻链分子的WB信 号常常由于信号过强而导致影响对目的 蛋白的WB结果判断。
3
生物相容性好，非特异性吸附少；
NHS磁珠 产品介绍
-----英芮诚生化科技
专注于“磁纳米，微萃取”
目录 CONTENTS
背景知识 产品介绍 产品特点
应用实例
背景知识
免疫磁珠，也称免疫磁性微球，
是一种均匀、具有超顺磁性及保护性壳的 球形小粒子，基本上由载体微球和免疫配 基结合而成。其核心为顺磁性粒子，核心 外层包裹聚合物， 最外层是免疫配基。
4.5μg
30μg
85.00%
NHS磁珠偶联黄曲霉毒素单克隆抗体AFM1测试（Bradford 蛋白定量法测定）(*)
AFM1单克隆抗体投量（μg） 偶联量（μg） 偶联效率（%）
5.00
10.00 20.00
4.71
9.46 19.52
92.40
94.60 97.60
30.00
25.32
84.40
4 5
快速分离，效率高，外加磁场10-20s实现磁珠分离。
操作简单、条件温和，可直接与生物配体共价偶联，偶联生物配体后稳定；
应用范围
抗 体
封闭剂
NHS磁珠可与带有伯氨基的生物配体直 接偶联，形成稳定的C-N共价键，实现生物 配体与 NHS磁珠的共价偶联。
发光试剂盒
应用实例
英芮诚NHS磁珠与A公司磁珠偶联甲胎蛋白（AFP）测试对比 （Bradford 蛋白定量法测定）
免疫磁珠技术：是一种以特异
的抗原抗体反应为基础的免疫学检测和分 离技术。它是以抗体包被的磁珠为载体， 通过抗体与反应介质中特异性抗原结合， 形成抗原—抗体复合物，此复合物在外加 磁场的作用下发生定向移动，从而达到分 离抗原的目的。
产品介绍
NHS磁珠|Prot Elut NHS
【偶联容量】：200-300ug生物分子/ml磁珠悬浮液 【性 状】：棕黑色均匀悬浊液； 【保 存】： 2℃~8℃保存，请勿冻融使用。分散剂：DMF。 【规 格】：100-120nm，单分散；1mL； 【用 途】：适用于含伯胺（或者伯胺标记）的蛋白、抗体、 酶、多肽、核酸等生物分子。
通过独特的高分子聚合技术，在超顺磁性 Fe3O4纳米核外形成结构致密、性能稳定的 核-壳聚合体，在单分散的磁珠表层键合高密 度的功能基团，形成界限清晰核壳结构的 NHS磁珠。 与传统的羧基、氨基磁珠相比，采用Prot Elut NHS无需事先采用EDC或戊二醛活化， 在偶联缓冲液中室温混合30min，Prot Elut NHS即可与带有伯氨基的生物配体直接偶联 ，形成稳定的C-N共价键，实现生物配体与 Prot Elut NHS的共价偶联。
与A公司磁珠相比，英芮诚 NHS磁珠的偶联量更高，偶联 效率达85%。
OD-1 A磁珠 0.097116 OD-2 0.097686 均值 0.097401 残留浓度 0.033 残留量 9.9μg 加入量 30μg 偶联率 66.70%
英芮诚NHS
0.084650
0.085044
0.084847
0.015