实验一--凝集试验
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布病判定标准： 阳性：牛、马和骆驼凝集价1:100以上 猪、绵羊、山羊和狗1:50以上 可疑：牛、马和骆驼1:50 猪、羊等1:25
待检血清稀释度： 猪、羊、狗 1:25，1:50，1:100，1:200 牛、马、驼 1:50，1:100，1:200，1:400 大规模检疫可只用两个稀释度。 猪、羊、狗 1:25和1:50 牛、马、驼 1:50和1:100
1、布氏杆菌试管凝集抗原
由兽医生物药品厂生产供应。该抗原为布 氏杆菌死菌混悬液，每1ml约含菌100亿。 是将牛型、羊型、猪型三型布氏杆菌的培 养物杀死，悬浮于0.5%的石炭酸生理盐水 中制成。静置时上层清亮无色或略呈灰白 色，瓶底有菌体沉淀。用时需充分摇匀， 并用0.5%的石炭酸生理盐水按规定倍数稀 释（1：20）。
5、0.5％石炭酸生理盐水 自配
实验方法与步骤: （一）布氏杆菌试管凝集试验 按下表术式加样操作。
布氏杆菌试管凝集试验术式表
管号
1
2
3
4
最终血清稀释度 1:25 1:50 1:100 1:200
0.5%石炭酸生
理盐水（ml） 2.3
0.5
0.5
0.5
被检血清（ml） 0.2
0.5
0.5
0.5
弃1.5
（二）玻片凝集试验 材料： 1、布氏杆菌玻片凝集反应抗原 2、布氏杆菌病待检血清 3、布氏杆菌阳性血清 4、布氏杆菌阴性血清
方法与步骤：
① 取洁净载玻片一块，中间滴1滴布氏杆菌待检 血清；另取载玻片一块，左侧滴1滴布氏杆菌 阳性血清，右侧滴1滴布氏杆菌阴性血清。
② 上述3种血清上分别加布氏杆菌玻板凝集抗原 1滴，以牙签或火柴棍分别将血清与抗原混匀
实验一 凝集试验
目的要求: 1、掌握玻片凝集试验和试管凝集试验 的操作技术。 2、掌握凝集反应中阴阳性结果的判定。
凝集试验： 抗原与相应抗体结合，在电解质存在下，经 过一定时间，形成肉眼可见的凝集团块，称 为凝集试验（agglutination test，agg） 反应中的
抗原——凝集原 抗体——凝集素
2、布氏杆菌病待检血清 从被检动物采取。被检血清必须新鲜、无 明显蛋白凝块、无溶血现象和腐败气味， 采血后不得迟于2～3d检验。否则需加防 腐剂或冰冻保存。
3、布氏杆菌阳性血清 由兽医生物药品厂生产供应。通常取自 人工免疫的家畜，也可从送检血清中选 取。其凝集价不能低于1：800。
4、布氏杆菌阴性血清 由兽医生物药品厂生产供应。
作用： 在各试管加完抗原后，将7支试管同时充 分混匀，置37℃培养箱中4～l0h，取出后 置室温18～24h，然后观察并记录结果。
结果记录：
﹟： 液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于 管底，振荡时，沉淀物呈片状、块状或颗粒 状（即100％的菌体被凝集）
+++ 液体略呈混浊，菌体大部分被凝集沉于管 底，振荡时情况如上（75％菌体被凝集）。
++ 液体不甚透明，管底有明显的凝集沉淀，振
荡时有块状或小片絮状物（50％凝集）
+ 液体透明度不明显或不透明，有不甚显著的 沉淀或仅有沉淀的痕迹（25％菌体被凝集）
－：液体不透明，管底无凝集，有时管底可见有 一部分沉淀，但振荡后立即散开呈均匀混匀
确定被检血清凝集价（滴度）： 以出现“++”以上凝集现象的血清最高稀释 度为终点。
② 按上表在各管中先加0.5％石炭酸生理盐水。 ③ 以1ml吸管吸取待检血清0.2ml，加入第1管
中，充分混匀，吸出1.5ml弃之，再吸出0.5ml 加入第2管，混匀后吸出0.5ml加入第3管，依 此类推至第4管，混匀后弃去0.5ml。 ④ 第6管中加1:25稀释的布氏杆菌阳性血清0.5ml ⑤ 第7管中加1:25稀释的布氏杆菌阴性血清0.5ml ⑥ 每管各加以0.5％石炭酸生理盐水稀释20倍的 布氏杆菌试管凝集抗原0.5ml。
弃0.5
5
抗原
1:20 0.5
6
7
对照
阳性血清 阴性血清
1:25 1:25
－－
－ 0.5
0.5
Βιβλιοθήκη Baidu
1:20抗原（ml） 0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
混匀，37C温箱4～l0h，取出后置室温18～24h，观察并记录结果
结果
﹟ +++ ++ － － ﹟ －
加样：
① 每份血清用4支试管，另取对照试管3支，置 试管架上。
凝集试验的类型： 直接凝集试验 间接凝集试验 协同凝集试验 桥梁凝集反应 病毒的血凝和血凝抑制试验
一、直接凝集试验 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体 结合并出现凝集现象称直接凝集试验 (direct agglutination test)。
按操作方法分玻片法和试管法两种。
（一）试管凝集试验
实验材料:
③ 将玻片置室温，3～5min内记录反应结果。 ④ 结果判定 液滴中出现凝集颗粒为阳性，不
出现凝集颗粒为阴性。
谢谢观看！ 2020
待检血清稀释度： 猪、羊、狗 1:25，1:50，1:100，1:200 牛、马、驼 1:50，1:100，1:200，1:400 大规模检疫可只用两个稀释度。 猪、羊、狗 1:25和1:50 牛、马、驼 1:50和1:100
1、布氏杆菌试管凝集抗原
由兽医生物药品厂生产供应。该抗原为布 氏杆菌死菌混悬液，每1ml约含菌100亿。 是将牛型、羊型、猪型三型布氏杆菌的培 养物杀死，悬浮于0.5%的石炭酸生理盐水 中制成。静置时上层清亮无色或略呈灰白 色，瓶底有菌体沉淀。用时需充分摇匀， 并用0.5%的石炭酸生理盐水按规定倍数稀 释（1：20）。
5、0.5％石炭酸生理盐水 自配
实验方法与步骤: （一）布氏杆菌试管凝集试验 按下表术式加样操作。
布氏杆菌试管凝集试验术式表
管号
1
2
3
4
最终血清稀释度 1:25 1:50 1:100 1:200
0.5%石炭酸生
理盐水（ml） 2.3
0.5
0.5
0.5
被检血清（ml） 0.2
0.5
0.5
0.5
弃1.5
（二）玻片凝集试验 材料： 1、布氏杆菌玻片凝集反应抗原 2、布氏杆菌病待检血清 3、布氏杆菌阳性血清 4、布氏杆菌阴性血清
方法与步骤：
① 取洁净载玻片一块，中间滴1滴布氏杆菌待检 血清；另取载玻片一块，左侧滴1滴布氏杆菌 阳性血清，右侧滴1滴布氏杆菌阴性血清。
② 上述3种血清上分别加布氏杆菌玻板凝集抗原 1滴，以牙签或火柴棍分别将血清与抗原混匀
实验一 凝集试验
目的要求: 1、掌握玻片凝集试验和试管凝集试验 的操作技术。 2、掌握凝集反应中阴阳性结果的判定。
凝集试验： 抗原与相应抗体结合，在电解质存在下，经 过一定时间，形成肉眼可见的凝集团块，称 为凝集试验（agglutination test，agg） 反应中的
抗原——凝集原 抗体——凝集素
2、布氏杆菌病待检血清 从被检动物采取。被检血清必须新鲜、无 明显蛋白凝块、无溶血现象和腐败气味， 采血后不得迟于2～3d检验。否则需加防 腐剂或冰冻保存。
3、布氏杆菌阳性血清 由兽医生物药品厂生产供应。通常取自 人工免疫的家畜，也可从送检血清中选 取。其凝集价不能低于1：800。
4、布氏杆菌阴性血清 由兽医生物药品厂生产供应。
作用： 在各试管加完抗原后，将7支试管同时充 分混匀，置37℃培养箱中4～l0h，取出后 置室温18～24h，然后观察并记录结果。
结果记录：
﹟： 液体完全透明，菌体完全被凝集呈伞状沉于 管底，振荡时，沉淀物呈片状、块状或颗粒 状（即100％的菌体被凝集）
+++ 液体略呈混浊，菌体大部分被凝集沉于管 底，振荡时情况如上（75％菌体被凝集）。
++ 液体不甚透明，管底有明显的凝集沉淀，振
荡时有块状或小片絮状物（50％凝集）
+ 液体透明度不明显或不透明，有不甚显著的 沉淀或仅有沉淀的痕迹（25％菌体被凝集）
－：液体不透明，管底无凝集，有时管底可见有 一部分沉淀，但振荡后立即散开呈均匀混匀
确定被检血清凝集价（滴度）： 以出现“++”以上凝集现象的血清最高稀释 度为终点。
② 按上表在各管中先加0.5％石炭酸生理盐水。 ③ 以1ml吸管吸取待检血清0.2ml，加入第1管
中，充分混匀，吸出1.5ml弃之，再吸出0.5ml 加入第2管，混匀后吸出0.5ml加入第3管，依 此类推至第4管，混匀后弃去0.5ml。 ④ 第6管中加1:25稀释的布氏杆菌阳性血清0.5ml ⑤ 第7管中加1:25稀释的布氏杆菌阴性血清0.5ml ⑥ 每管各加以0.5％石炭酸生理盐水稀释20倍的 布氏杆菌试管凝集抗原0.5ml。
弃0.5
5
抗原
1:20 0.5
6
7
对照
阳性血清 阴性血清
1:25 1:25
－－
－ 0.5
0.5
Βιβλιοθήκη Baidu
1:20抗原（ml） 0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
0.5
混匀，37C温箱4～l0h，取出后置室温18～24h，观察并记录结果
结果
﹟ +++ ++ － － ﹟ －
加样：
① 每份血清用4支试管，另取对照试管3支，置 试管架上。
凝集试验的类型： 直接凝集试验 间接凝集试验 协同凝集试验 桥梁凝集反应 病毒的血凝和血凝抑制试验
一、直接凝集试验 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体 结合并出现凝集现象称直接凝集试验 (direct agglutination test)。
按操作方法分玻片法和试管法两种。
（一）试管凝集试验
实验材料:
③ 将玻片置室温，3～5min内记录反应结果。 ④ 结果判定 液滴中出现凝集颗粒为阳性，不
出现凝集颗粒为阴性。
谢谢观看！ 2020