饲料中粗蛋白的测定(教学课件)
饲料中粗蛋白测定方法
饲料中粗蛋白测定方法 Document serial number【KKGB-LBS98YT-BS8CB-BSUT-BST108】饲料中粗蛋白测定方法1、原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
2、试剂2.1硫酸（GB625）：化学纯，含量为98％，无氮。
2.2混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水（GB665），6g硫酸钾（HG3—920）或硫酸钠（HG3—908），均为化学纯，磨碎混匀。
2.3氢氧化钠（GB629）：化学纯，40％水溶液（m/V）。
2.4硼酸（GB628）：化学纯，2％水溶液（m/V）。
2.5混合指示剂：甲基红（HG3—958）0.1％乙醇溶液，溴甲酚绿（HG3—1220）0.5％乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为三个月。
2.6盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB601制备。
2.6.1盐酸标准溶液：c（HCl）=0.1mol/L。
8.3mL盐酸（GB622，分析纯），注入1000mL蒸馏水中。
2.6.2盐酸标准溶液：c（HCl）=0.02mol/L。
1.67mL盐酸（GB622，分析纯），注入1000mL蒸馏水中。
2.7蔗糖（HG3—1001）：分析纯。
2.8硫酸铵（GB1396）：分析纯，干燥。
2.9硼酸吸收液：1％硼酸水溶液1000mL，加入0.1％溴甲酚绿乙醇溶液10mL，0.1％甲基红乙醇溶液7mL，4％氢氧化钠水溶液0.5mL，混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程序用）。
3、仪器设备3.1实验室用样品粉碎机或研钵。
3.2分样筛：孔径0.45mm（40目）。
3.3分析天平：感量0.0001g。
3.4消煮炉或电炉。
3.5滴定管：酸式，10、25mL。
3.6凯氏烧瓶：250mL。
3.7凯氏蒸馏装置：半微量水蒸气蒸馏式。
饲料中粗蛋白的测定
根据蛋白质的物理、化学性质直接测定蛋白质含量。
双缩脲法 Folin—酚试剂法（Lowry法） 紫外吸收法（最常见的280nm） 考马斯亮兰法（Bradford法）－染料结合法
11/21/2019
一、蛋白质的测定方法
2．间接法
通过测定样品中总含氮量推算蛋白质含量（根据：每种蛋白质的含 氮量是恒定的，N×6.25）。
（2）CuSO4的作用 ① 催化剂，加速氧化分解；
2CuSO4=CuSO4+SO2↑+O2 C+2CuSO4=Cu2SO4+SO2↑+O2↑ Cu2SO4+2H2SO4=2CuSO4+2H2O+SO2↑ 此反应不断进行，待有机物被消化完后，不再有硫酸亚铜（褐色）生成，溶 液呈现清澈的蓝绿色。 ② 可以指示消化终点的到达； ③ 下一步蒸馏时作为碱性反应（加入碱量）的指示剂。
最后关闭电源，绝不能先关闭电源，否则吸收液 将发生倒吸！
11/21/2019
二、凯氏定氮法测定粗蛋白含量
3. 测定步骤 第二步 氨的蒸馏
注意事项：
凯氏定氮蒸馏过程中，要求整套装置呈密闭状态，蒸馏前应检查定氮仪各导 管间的连接处是否密闭，以免产生泄露；
测定样品前应清洗蒸馏装置，即用蒸馏水空蒸一次或数次；
蒸馏后立即清洗蒸馏器。蒸馏完毕后，移取热源，夹紧蒸汽发生器和收集器 间的橡皮管，此时由于收集器温度突然下降，即可将反应室残液吸至收集器。
蒸馏时，火力稳定，蒸汽发生要均匀充足，蒸馏中途不得停火断汽，否则发 生倒吸。加碱要足量（反应室液体呈深蓝色或褐色）并且碱液不能污染冷凝 管及接收瓶。
11/21/2019
K2SO4+H2SO4=2KHSO4 2KHSO4=K2SO4+H2O↑+SO3
饲料中粗蛋白的测定ppt课件
• 氮的蒸馏 采用定氮仪，将带消化液的管子插在蒸馏 装置上，以 25mL 硼酸为吸收液，加入两 滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要 浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消化 管中加入 50mL 氢氧化钠溶液进行蒸馏。 蒸馏时间以流出的液体呈中性为宜，可用 pH试纸测试。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗 冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。
试验步骤
• 样品消化 • 样品粉碎后全部通过40目。称取试样 0.2 ～ 2.0g （含氮量 5 ～ 80mg），准确至0.0002g，放入消 化管中，加 10mL 浓硫酸摇匀，管口上放一只小 漏斗（在消化过程中起回流作用，以减少硫酸的 损失），放在电炉上消煮20min，当硫酸大量冒 烟、消化液呈酱油色时，将消化管取下稍冷却 （手摸不烫手），向管内加双氧水 10 ～ 15 滴， 加热消化。如此反复 2 ～ 3 次，直至管内溶液澄 清透明为止。取下消化管，冷却后注入30mL蒸馏 水备用。
滴定 空白测定 计算 （同国标法）
强碱直接蒸馏法
强碱直接蒸馏法 (Direct Distillation， 俗称DD法)是间接测定饲料中粗蛋白质的一 种简便的方法。
实验原理
其原理是将粉碎的饲料样品在强碱中消煮， 使饲料中的 α- 氨基、酰氨基以及某些特殊 基团上的氮素在强碱的作用下以氨的形式 释放出来，直接蒸馏到硼酸中，再用盐酸 溶液来滴定，根据盐酸消耗量来计算 DD 法所测得的表观含氮量。但是，由于 DD 法测定过程中的氨量的释放是不定量进行 的，因此必须根据经典的凯氏定氮法所标 定的校正数值，用一定的回归方程来计算 样品中的粗蛋白质的含量。
结果计算
• 粗 蛋 白 质 含 量（%）= （V-V0 ）×N ×0.014×6.25×100 [M×(V 2／V 1)]
饲料中粗蛋白的测定(精)(总6页)
饲料中粗蛋白的测定(精)(总6页)
饲料中粗蛋白的测定（精）主要是测量饲料中的蛋白质含量，以便更好地了解饲料的营养成分，为合理饲养和饲料配方提供基础数据。
本文将介绍几种常见的饲料中粗蛋白的测定方法，包括Kjeldahl法、Dumas法、Kjeltec自动消解仪法等。
一、Kjeldahl法
Kjeldahl法是测定饲料中粗蛋白含量的经典方法，该方法通过将饲料样品经过消解、蒸馏和滴定等步骤，测定其中的氨基含量，再计算得出粗蛋白含量。
具体步骤如下：
1. 取适量的饲料干样，加入适量的硫酸和氧化剂，进行消解，将其变为无机氮。
2. 在消解的样品中加入适量的碱液，使其中和，然后加入酚酞指示剂，在滴定时视颜色变化为终点，计算出氨基含量。
3. 将氨基含量乘以蛋白质的氮含量比例（通常为6.25），即可得到粗蛋白含量。
二、Dumas法
1. 取适量的饲料干样，放入Dumas燃烧管中，加入硼酸和催化剂等。
2. 将燃烧管加热，将样品完全燃烧，并将其中的氮转化成NO。
3. 将生成的NO经过固定，再经过电导检测器测定其含量，计算出氮含量。
三、Kjeltec自动消解仪法
2. 稍作冷却后，将消解液放入自动蒸馏装置中，进行蒸馏，将其中的氨基捕集在酸性溶液中。
综上所述，饲料中粗蛋白的测定方法有很多种，其中Kjeldahl法、Dumas法和Kjeltec自动消解仪法是较为常见的。
在测定时需严格按照操作步骤进行，确保测量结果的准确性和可靠性。
饲料分析与检测实验：饲料中粗蛋白质的测定
实验三、饲料中粗蛋白质的测定【学习目标】掌握饲料中粗蛋白质的测定方法，并能用此方法测定饲料中粗蛋白质的含量。
一、原理饲料中纯蛋白质和非蛋白氮总称粗蛋白质。
凯氏法的基本原理是用浓H2SO4在催化剂(CuSO4、K2SO4、Na2SO4等)的催化作用下消化饲料样本，使其中的蛋白质和非蛋白氮都转变为 (NH4)2SO4，(NH4)2SO4在浓碱作用下放出NH3，通过蒸馏，氨气随水蒸汽沿冷凝管流入硼酸吸收液被硼酸吸收并与之结合成为四硼酸铵，然后以甲基红、溴甲酚绿作指示剂，用标准HCL溶液滴定，求出氮含量，根据氮含量再乘以系数(通常为 6.25)，即为粗蛋白质的含量。
上述原理的主要化学反应如下：催化剂1.2CH3CHNH2COOH+13H2SO (NH4)2SO4+6CO2↑+12SO2↑+16H2O加热2.(NH4)2SO4+2NaOH 2NH3↑+2H2O+Na2SO43.4H3BO3+NH3 NH4HB4O7+5H2O4.NH4HB4O7+5H2O+HCL NH4CL+4H3BO3系数6.25是根据饲料蛋白质平均含氮量为16.0%而来的，而实际上，各种样本的蛋白质种类不同，含氮量有差异，变动为14.7～19.5%之间，故一般饲料换算系数用6.25，已确定的最好用实际系数。
为方便使用，将已知几种饲料的系数介绍如下：肉类6.25，玉米6.00，小麦、燕麦、黑麦、大豆、箭舌豌豆、蚕豆5.70，牛奶及制品6.28，坚果及油饼类5.30。
二、仪器设备1.样品粉碎机 40目分样筛；2.分析天平感量0.0001g；3.电子天平感量0.0001g；4.工业天平感量0.01g；5.六联电炉 6×800-1000W；6.半微量凯氏定氮仪或改良式半微量凯氏定氮仪(图1、图2)；7.酸式滴定管 25.0ml或50.0ml；8.凯氏烧瓶 100.0ml；9.烧杯 250.0ml；10.三角瓶 150.0ml；11.容量瓶 100.0ml；12.移液管 10.0ml；13.量筒 10.0ml、25.0ml。
饲料中粗蛋白质的测定课件(共25张PPT)《畜禽营养与饲料》
单元二 饲料中粗蛋白质的测定
一、适用范围
二、测定原理
凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用硫酸破 坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨 逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘 以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
三、所需试剂
1、硫酸（GB 625） 2、混合催化剂 3、氢氧化钠（GB 629） 4、硼酸（GB 628） 5、混合指示剂 6、0.02mol/l盐酸标准溶液 7、蔗糖（HG 3—1001） 8、硫酸铵（GB 1396） 9、硼酸吸收液
六、分析步骤
（1）试样的消毒： 称取试样0.5~1g(含氮量5~80 mg)准确至0. 0002 g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均 匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热， 开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力(360~410℃ ) 直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
取蔗糖 0.5g，代替试样，按以上步骤进行空白测定，消耗 0.02mol/L的盐酸标准溶液体积不得超过 0.3ml。
（三）分析结果的表述
1、计算结果如下式
2、重复性
每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。 当粗蛋白质含量在25%以上时，允许相对偏差为 1%。 当粗蛋白质含量在10%-25%之间时，允许相对偏差为2%。 当粗蛋白质含量在10%以下时，允许相对偏差为3%。
混合催化剂氧化钠溶液
蒸馏水
四、仪器设备
电子天平
滴定筒
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通风橱内电炉及消煮架
锥形瓶
容量瓶
凯氏烧瓶
洗瓶
刻度吸管
移液管
饲料中粗蛋白的测定(精)
饲料中粗蛋白的测定一、实验目的通过饲料样品中粗蛋白的测定，掌握饲料粗蛋白质含量的测定方法。
二、适用范围本方法适用于配合饲料、浓缩饲料和单一饲料。
三、实验原理凯氏法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用浓硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数，计算出粗蛋白含量。
四、试剂（1）硫酸：化学纯，含量为98%，无氮。
（2）混合催化剂：0.4g硫酸铜，5个结晶水；6g硫酸钾或硫酸钠，均为化学纯，磨碎混匀。
（3）氢氧化钠：化学纯，40%水溶液（m/V）。
（4）硼酸：化学纯，2%水溶液（m/V）。
（5）混合指标剂：甲基红%乙醇溶液，溴甲酚绿%乙醇溶液，两溶液等体积混合，在阴凉处保存期为3个月。
（6）盐酸标准溶液：基准无水碳酸钠法标定；① L盐酸标准溶液：盐酸注入1000ml蒸馏水中。
② L盐酸标准溶液：盐酸注入1000ml蒸馏水中。
（7）蔗糖：分析纯。
（8）硫酸铵：分析纯，干燥。
（9）硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1000mL，加入%溴甲酚绿乙醇溶液10mL，%甲基红乙醇溶液7mL，4%氢氧化钠水溶液，混合，置阴凉处保存期为1个月（全自动程序用）。
五、仪器设备（1）实验室用样品粉碎机或研钵。
（2）分样筛：孔径0.45mm（40目）。
（3）分析天平：感量0.0001g。
（4）消煮炉或电炉。
（5）滴定管：酸式，10、25mL。
（6）凯氏烧瓶：250mL。
（7）凯氏蒸馏装置：常量直接蒸馏式或半微量水蒸汽蒸馏式。
（8）锥形瓶：150、250mL。
（9）容量瓶：100mL。
（10）消煮管：250mL。
（11）定氮仪：以凯氏原理制造的各类型半自动、全自动蛋白质测定仪。
六、分析步骤试样的选取和制备: 选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。
（1）仲裁法①试样的消煮称取试样～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360～410℃）直至呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
饲料中粗蛋白的测定-凯氏定氮法
凯氏定氮仪测定步骤
影响因素分析
1.取样
试样粉碎后一般过40 目筛，且一定要把粉碎后的试样及粉碎机中残留的部分清扫后充 分混合均匀，避免粉碎的试样分级而影响分析结果的准确性。
2.催化剂及其用量
国标为0.4g 硫酸铜和6g 无水硫酸钾( 或无水硫酸钠)。若 添加量大，消化液容易结晶； 添加量减少，会延长消化时间或消化不完全。
饲料中粗蛋白质含量的测定
凯氏定氮法
目录
1. 适用范围
2. 测定原理 3. 仪器设备及试剂
4. 测定步骤
5. 影响因素分析
适用范围
蛋白氮 （真蛋白质提供氮源 ）
粗蛋白质
非蛋白氮（氨基酸、酰胺、铵盐 ）
测定原理
凯氏法测定试样中含氮量，即在催 化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含 氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏 使氨逸出，用硼酸吸收后，在用标准浓 度的酸滴定，测出氮含量，将结果乘以 换算系数6.25，计算出粗蛋白质含量。
3.消化温度
刚开始时以低温(200 ～ 300℃ ) 加热，待试样焦化泡沫消失后，逐步缓慢提高温度 (360～410℃ )。起初低温加热是为防止试样起泡沫，而溢出烧瓶外或碳化后的颗粒 附于烧瓶壁，导致消化不完全，所测结果偏低。
4.消化时间
可根据试样的重量、蛋白含量的多少以及消化的难易程度而适当调整消化液澄清后的 消化时间。对于所称试样质量较多、蛋白含量高于蚕蛹或者难消化的试样，消化液澄 清后继续消化的时间可控制在45m i n ～ 2h 不等，具体时间化验工作者可根据自己的 工作经验而自行定夺。
仪器设备及试剂
样品粉碎机 40目分析筛 分析天平 消化炉 消化管 凯氏蒸馏装臵 滴定管
98%浓硫酸 硫酸钾 硫酸铜 硼酸溶液 标准盐酸溶液 混合指示剂
饲料中粗蛋白的测定方法
饲料中粗蛋白的测定方法原理：凯氏定氮法测定试样中的含氮量，即在催化剂作用下，用浓硫酸破坏有机物，使含氮物转化成硫酸铵。
加入强碱进行蒸馏逸出，用硼酸吸收后，再用酸滴定，测出氮含量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋白含量。
测定方法：1、试样的消煮称取试样0.5～1g（含氮量5～80mg）准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入6.4g混合催化剂，与试样混合均匀，再加入12mL硫酸和2粒玻璃珠，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加强火力（360-410℃）直呈透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2h。
2、半微量蒸馏法将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇匀，作为试样分解液。
将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂锥形瓶内。
蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数滴，硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色，否则需补加硫酸。
准确移取试样分解液10～20mL注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好人口玻璃塞，再加10mL氢氧化钠溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃塞塞好，且在人口处加水密封，防止漏气。
蒸馏4min降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面，再蒸馏1mi，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。
3、滴定用上述蒸馏法蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点。
4、分析结果的表述计算见下式：（V2-V1）·c×0.0140×6.25粗白质（%）= ×100V′M×V式中：V1——滴定试样时所需标准酸溶液体积，mLV2——滴定空白时所需标准酸溶液体积，mLC ——盐酸标准溶液浓度，mol/LM ——试样质量，gV ——试样分解液总体积，mLV′——试样分解液蒸馏用体积，mL0.0140——与1.00mL盐酸标准[c（HCl）=1.000 mol/L]相当的以克表示的氮的质量6.25——氮换算成蛋白质的平均系数。
动物营养与饲料学课件(12)
动物营养与饲料理论教学课件
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三、试剂
1、H2SO4 2、混合催化剂 3、NaOH 4、硼酸 5、混 合指示剂 6、HCl标准液 7、蔗糖 8、硫酸铵 9、硼 酸吸收液
四、仪器设备
1、粉碎机 2、分样筛 3、分析天平 4、消煮炉
5、滴定管 6、凯式定N仪 7、锥形瓶 9、容量瓶 10、消煮管
动物营养与饲料理论教学课件
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五、测定步骤
1、试样的分解 2、试样的测定
动物营养与饲料理论教学课件
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实验七 饲料中总P的测定
一、主题内容与适用范围
本标准规定了用钼黄显色光度法测定饲料中总P量的 方法
本标准适用于配合饲料，浓缩饲料，预混合饲料和单 一饲料
二、原理
将试样中的有机物破坏、使P游离出来，在酸性溶液
中 ， 用 钼 酸 铵 处 理 ， 生 成 黄 色 的 （ NH4 ）
二、原理
试样在550℃灼烧后所得残渣，用质量百分率来表示， 残渣中主要是氯化物、无机盐类等矿物质也包括混入 饲料中的砂石、土等、故称粗灰分。
动物营养与饲料理论教学课件
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三、仪器与设备
1、粉碎机 2、分样筛 3、分析天平 4、茂福炉 5、坩锅 6、干燥器
动物营养与饲料理论教学课件
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四、测定
将干净坩锅放入高温炉，在550±20℃下灼烧30min取 出，在空气中冷却约1min，放入干燥器中冷却30min 称重，再重复灼热，冷却、称重，直至两次重量之差小 于0.0005g为恒重。
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五、分析步骤
1、试样的消煮 2、NH3的蒸馏 3、滴定
动物营养与饲料理论教学课件
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实验四 饲料粗脂肪的测定
一、适用范围
4.7饲料中粗蛋白质含量测定 课件(共23张PPT)《动物营养与饲料》同步教学(中国农业出版社)
饲料中粗蛋白质含量测定
1 检测分析依据 2 检测分析原理 3 检测试剂材料 4 检测仪器设备 5 检测分析步骤 6 检测数据处理 7 检测清场工作
规定了测定饲料中粗蛋白质的凯氏定氮法
GB/T 6432-2018
适用范围
适用于饲料原料及饲料产品中粗蛋白质 的测定
方法广泛应用于粗蛋白质的检测
试样在催化剂的作用下，经硫酸消解，含氮 化合物转化成硫酸铵，加碱蒸馏使氨逸出，用硼 酸吸收，再用盐酸标准滴定溶液滴定，测出氮含 量，乘以6.25，计算出粗蛋白质含量。
硫酸铜的作用
（1）催化作用：加速有机物的氧化分解。 硫酸铜的作用机理如下： C+ 2CuSO4=Cu2SO4+SO2↑+CO2↑ Cu2SO4+2Ｈ2SO4 =2CuSO4 +SO2+2H2O
（2）消化终点指示剂：蓝绿色澄清透明 （3）做蒸馏时碱性指示剂
分析纯试剂 水：符合GB/T6682中规定的三级水
粉碎机
0.42mm孔径分析筛
吸量管 移液管
容量瓶
烧杯
1ml 3支
2ml 1支
5ml 2支
10ml 1支
20ml 1支
10ml 大肚移液管 1支
50ml 8个
100ml 2个
1000ml 2个 （透明棕色各一）
50ml 1个 500ml 4个 2000ml 1个
饲料中粗蛋白的测定-凯氏定氮法
测定原理
凯氏法测定试样中含氮量，即在催 化剂作用下，用硫酸破坏有机物，使含 氮物转化成硫酸铵。加入强碱进行蒸馏 使氨逸出，用硼酸吸收后，在用标准浓 度的酸滴定，测出氮含量，将结果乘以 换算系数6.25，计算出粗蛋白质含量。
仪器设备及试剂
样品粉碎机 40目分析筛 分析天平 消化炉 消化管 凯氏蒸馏装置 滴定管
注意事项
每个试样取两平行样进行测定，以其算术平均值 作为结果。 本方法不能区别蛋白氮和非蛋白氮。 每次蒸馏结束后，应用蒸汽将蒸馏装置反应腔中 残液洗净。
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凯氏定氮仪测定步骤
1.试样的消化 称取0.5~1g试样，准确至0.0001g，无损地 放入消化管中，加入硫酸铜0.4g，硫酸钾6g， 与试样混合均匀，再加浓硫酸12ml，将消化管 放置在消化炉上加热（此装置需安装在通风 橱内），待样品焦化，泡沫消失，加大火力 至410℃ ，直至溶液呈透明的蓝绿色，此溶液 为试样分解液。 2.试样的蒸馏 将试样分解液消化管安装在凯氏定氮仪上， 在250ml锥形瓶中加入2滴溴甲酚绿-甲基红 混合指示剂。按仪器操作程序蒸馏。 3.滴定 同上。
蛋白氮 （真蛋白质提供氮源 ）
粗蛋白质
非蛋白氮（氨基酸、酰胺、铵盐 ）
测定意义
蛋白质是生命的基础，是细胞组成、酶、 激素免疫抗体等的主要成分，是组织更新、 修补的原料。 饲料中蛋白质的质和量直接关系到动物生 命生长、发育、繁殖和生产，因此，测定 饲料中粗蛋白质含量对动物生活和生产有 重要作用。 测定饲料原料和成品料中粗蛋白质的含量， 为科学配置饲料提供可靠依据。
测定步骤
2.试样的蒸馏 取2%硼酸溶液 20ml至锥形瓶中作为反应吸收液，并加混合指示剂 2滴， 将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入该液面下。准确移取试样分解液 10ml注入蒸馏装置的反应腔中，用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好玻 璃塞，并在入口处加水密封好。再在碱液入口缓慢加入10～20ml 40% 氢氧化钠溶液，亦使之流入反应腔中，并把碱液入口封存好。进行蒸 馏。以锥形瓶中溶液变蓝绿色开始计时3min，然后将冷凝管末端离开 锥形瓶液面，再蒸馏1min，用少量蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液亦流 入吸收液中。
3饲料中粗蛋白测定方法GBT6432—1994(精)
4.7 0.1mol/L盐酸（HCL）标准溶液：8.3mL 盐酸，分析纯，注入1000mL蒸馏水中。 4.8 0.2mol/L盐酸（HCL）标准溶液：1.67mL 盐酸，分析纯，注入1000mL蒸馏水中。 4.9 蔗糖（HG 3－1001）：分析纯。 4.10 硫酸铵（GB 1396）：分析纯，干燥。 4.11 硼酸吸收液：1%硼酸水溶液1000ｍL， 加入0.1%溴甲酚绿乙醇溶液10ｍL，0.1%甲基 红乙醇溶液7ｍL，4%氢氧化钠水溶液0.5ｍL， 混合，置阴凉处保存期为一个月（全自动程 序用）。
7.2 氨的蒸馏
7.2.1 常量蒸馏法 将试样消煮液冷却，加入60ｍL～80ｍL蒸馏水， 摇匀，冷却。将蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有 25ｍL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。
然后小心地向凯氏烧瓶中加入50ｍL氢氧化钠， 轻轻摇动凯氏烧瓶，使溶液混匀后再加热蒸馏， 直至流出体积为100ｍL。 降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸 馏1min～2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗 液均需流入锥形内，然后停止蒸馏。
8 空白测定 称取蔗糖0.5g，代替试样，按5测定步骤 进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶 液的体积不得超过0.2mL。消耗0.02mol/L 盐酸标准溶液体积不得超过0.3mL。
9 分析结果的表述 9.1 计算见下式：
式中：V2——滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL； V1——滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL； C——盐酸标准溶液浓度，mol/L； m——试样质量，g； V——试样—与1.00ml盐酸标准溶液[c(HCL)=1.000 mol/L]相当的、以克表示的氮的质量。 6.25——氮换算成蛋白质的平均系数。
7.2.2 半微量蒸馏法 将试样消煮液冷却，加入20mL蒸馏水，转入 100mL容量瓶中，冷却后用水稀释至刻度，摇 匀，作为试样分解液。 将半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有 20mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内。 蒸汽发生器的水中应加入甲基红指标剂数滴， 硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色， 否则需补加硫酸。
第三节 饲料中粗蛋白质的测定
教学方法
演示法、分组试验法
学法指导
听（教师讲解示范）
看（教师演示）
想（动脑思考）
做（动手操作）
教具准备
实验所需器材、原料等教学设备
教学过程
一、实验准备
1.实验材料及药品由实验教师准备。
2.教师要求学生提前预习本实验的操作方法。
3.提前开放实验室让学生熟悉实验仪器和设备。
2．蒸馏
将上述消化冷却,加蒸馏水20ML转入100ML容量瓶,冷却后用水稀释至刻度,混匀,作为试样分解液.取,加,使半微量蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有20ML2%硼酸溶液和2滴混合指示剂的锥形瓶中。用移液管移取10ML试样分解液，注入蒸馏装置的反应室中,用少量蒸馏水冲洗进样入口，塞好玻璃塞,再加10ML、40%的氢氧化钠溶液,小心提起玻璃塞使之流入反应室,将玻璃塞塞好,并在入口处密封好,以防止漏气.加热蒸馏4min,使冷凝管末端离开吸收液面,继续蒸馏1min,用蒸馏水冲洗冷凝管末端,洗液均流入吸收液
1．消化
准确称取0.2—1克试样（准确至0.0002克）,无损失地放入凯氏烧瓶中,加入6.4克混合催化剂，与试样混合均匀,再加硫酸12mI和两粒玻璃球，将凯氏烧瓶在消煮炉或电炉上小火加热,待样品焦化,泡沫消失,再加强火力(360---410℃),直至溶液变为透明的蓝绿色，然后再继续加热，至少2小时
注意事项：消化管中加浓硫酸时，应戴胶皮手套；消煮炉加热消化管时，应从低温开始分阶段升温，消化液按黑色→黄绿色→绿色→蓝色或浅绿色变化，一般样品消化液呈现绿色后，再消化30min即可；消化中应防止管内液体过度沸腾喷溅，上冲粘到瓶颈上，使得部分样品消化不完全，造成系统误差过大。消化管内液体泡沫过多时可适当降温；消化完成后，向容量瓶转移，不要立即定容，因为此时浓硫酸加水释放出大量热，立即定容会造成偶然误差偏大
如何准确测定饲料中的粗蛋白质含量
６ 质 控 实验
国家 标 准规 定 称 取 试 样 ０ ． ５ — １ ｇ ，浓 缩 饲 料 可
凯 氏定 氮 的质 控 实 验是 测 定 分 析 纯 硫 酸 铵 的
称取０ ． ５ ＋ － ０ ． ０ ５ ｇ ，配合饲料可称取 ０ ． ７ ＋ － ０ ． ０ ５ ｇ ，这样 能 保证 滴定 时消 耗盐 酸标 准 溶液 的体积 较 为一
作 简 单 ，但 过 程 比较 复杂 ，如果 不 注 意 细 节 ，往 往会 导致 结果 准 确度 不高 。
１ 采样 及 制备
盐 酸 标 准 滴 定 溶 液 的浓 度 直 接 影 响 结 果 的准 确 度 ，配 制 和 标 定 一 定 要 严 格 按 照 Ｇ Ｂ ／ Ｔ ６ ０ １ 的规
国 家标 准 规 定 用 消 煮 炉 或 电 炉 ，建 议 选 择 带
程 序 升 温 的 凯 氏专 用 消 煮 炉 ， 能 保 证 升 温 均 匀 ，
重 复性好 ，准确度高。 国家标准规定使用 五水硫 酸铜 和无水硫酸钾 ，消煮液容易结 晶 ，建议使用 商 品化硫 酸钾 和硒粉 ，产品为 片状 ，使 用方便 ，
试样采集必须 具有代表性 ，这是 准确测定饲
料 粗 蛋 白质 的基 础 。样 品 制备 也 很 关 键 ，粉 碎 后 要 能全 部通 过 ４ ０目分样 筛并 立 即放入 密 封容 器 。
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专业 课件
8
• 空白测定
• 称取蔗糖0.5g，代替试样，按照前面的消 化蒸馏方法进行空白测定，消耗0.1mol/L盐 酸标准溶液的体积不得超过 0.2mL，消耗 0.2mol/L 的盐酸标准溶液不得超过0.3mL。
专业 课件9ຫໍສະໝຸດ • 滴定蒸馏后的吸收液立即用 0.1mol/L 或 0.2mol/L标准盐酸溶液滴定，溶液由蓝绿色 变成灰红色。同样滴定试剂空白消化液。
专业 课件
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蒸馏
向凯氏烧瓶中加入 25mL 10% 氯化钡溶液， 振荡摇匀，再加120mL 40% 的氢氧化钠溶 液，立即连接蒸馏装置进行蒸馏。把蒸馏 装置冷凝管的末端浸入盛有 50mL 2% 的硼 酸溶液和 2 滴混合指示剂的锥形瓶中，轻 轻摇动凯氏烧瓶使溶液混匀，然后加热进 行蒸馏，待蒸馏出的液体体积达到100mL （总体积达到150mL）时停止蒸馏。
释放出来，直接蒸馏到硼酸中，再用盐酸 溶液来滴定，根据盐酸消耗量来计算 DD 法所测得的表观含氮量。但是，由于 DD 法测定过程中的氨量的释放是不定量进行
的，因此必须根据经典的凯氏定氮法所标
定的校正数值，用一定的回归方程来计算 样品中的粗蛋白质的含量。
专业 课件
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试验步骤
• 消化 称量5.000g样品，粉碎经40目筛后放 500mL 凯氏烧瓶中，加 50mL 蒸馏水（边 加边摇），使充分混合。
专业 课件
6
操作步骤
• 试样的消化 称取试样 0.5 ～ 1g（含氮量5 ～ 80mg），准确至0.0002g， 小心无损的将样本放入 100mL洗净烘干的凯氏烧瓶中。 加入 6.4g 混合催化剂与试样混合均匀，再加入 12mL 硫 酸和两粒玻璃珠。将凯氏烧瓶置于通风厨里的电炉上加热， 开始加热时，先用小火，待样品焦化，泡沫消失后，再加 强火力，消化时经常转动消化瓶，使全部样本浸入硫酸内， 如有黑色油在瓶壁，应待烧瓶冷却后加少量蒸馏水冲洗， 再继续加热消化。如有黑炭粒不能全部消化，则待烧瓶冷 却后，补加少量硫酸加热，直至呈透明的蓝绿色，然后再 继续加热至消化完毕。
专业 课件
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滴定 空白测定 计算
（同国标法）
专业 课件
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强碱直接蒸馏法
强碱直接蒸馏法 (Direct Distillation， 俗称DD法)是间接测定饲料中粗蛋白质的一 种简便的方法。
专业 课件
16
实验原理
其原理是将粉碎的饲料样品在强碱中消煮，
使饲料中的 α- 氨基、酰氨基以及某些特殊 基团上的氮素在强碱的作用下以氨的形式
实验原理 国标法测定试样中含氮量，即在催化剂作 用下，用硫酸破坏有机物，使含氮物转化 为硫酸铵，加入碱进行蒸馏使NH3 逸出， 用硼酸吸收后，再用盐酸滴定，测出含氮 量，将结果乘以换算系数6.25，计算出粗蛋 白的含量。
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实验试剂
• 硫酸：化学纯，含量为98%，无氮； • 混均合为催化化 学剂 纯： ，磨0.4碎gC混u匀SO；4，6gK2SO4 或 Na2SO4
0.014—氮的毫克当量数；
M—样品的质量（g）；
N—盐酸标准溶液当量浓度
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凯氏定氮仪法
试剂 同凯氏定氮测粗蛋白法 仪器 自动或半自动定氮仪
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12
操作步骤
• 试样的消化
称取试样 0.5 ～ 1g（含氮量5 ～ 80mg）， 准确至0.0002g，放入消化管中，加两片消 化片（仪器自备）或6.4g混合指示剂、 12mL硫酸，于420℃在消煮炉上消化1h， 取出放凉后加入30mL蒸馏水。
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滴定
用0.1mol/L的盐酸标准溶液进行滴定。
专业 课件
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结果计算
• 粗蛋白质含量（%）=
（V 2－V 1）×C ×0.014×6.25 ×100 M
专业 课件
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• 氮的蒸馏
采用定氮仪，将带消化液的管子插在蒸馏 装置上，以 25mL 硼酸为吸收液，加入两 滴混合指示剂，蒸馏装置的冷凝管末端要 浸入装有吸收液的锥形瓶内，然后向消化 管中加入 50mL 氢氧化钠溶液进行蒸馏。 蒸馏时间以流出的液体呈中性为宜，可用 pH试纸测试。降下锥形瓶，用蒸馏水冲洗 冷凝管末端，洗液均需流入锥形瓶内。
专业 课件
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结果计算
• 粗 蛋 白 质 含 量（%）= （V-V0 ）×N ×0.014×6.25×100 [M×(V 2／V 1)]
式中： V—滴定样品吸收液时所消耗的盐酸标准溶（mL)；
V0
—空白测定吸收液所消耗的盐酸标准溶液（mL) V1 — 样品消化液总的体积（mL）；
；
V2 —从100mL消化分解液中吸取的消化液体积（mL)；
• NaOH：40% 水溶液，化学纯； • 硼酸：2% 水溶液，化学纯； • 混合指示剂； • 0.1mol/LHCl标准溶液； • 0.02mol/LHCl标准溶液； • 蔗糖：分析纯； • 硫酸铵：分析纯，干燥； • 硼酸吸收液。
专业 课件
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仪器
• 实验用样品粉碎机或研钵； • 40目分析筛； • 分析天平； • 电炉； • 酸式滴定管； • 凯氏蒸馏装置； • 凯氏定氮装置
饲料中粗蛋白的测定
专业 课件
1
常用方法
• 国标法 • 凯氏定氮仪法 • 强碱直接蒸馏法 • 双氧水法
专业 课件
2
样品的采集、制备
• 生产单位有代表性的原料检样：鱼粉、玉 米蛋白粉、豆粕
• 采用四分法将检样缩至500g，粉碎后通过 40目筛，装于密闭容器中，防止试样成分 变化或变质
专业 课件
3
国标法
专业 课件
7
• 氨的蒸馏 试样消煮液冷却后加入20mL蒸馏水，转入 100mL 容量瓶内，冷却后用水稀释至刻度，摇匀， 作为试样分解液。将蒸馏装置的冷凝管末端浸入 装有 20mL 硼酸吸收液和 2 滴混合指示剂的锥形 瓶内。蒸汽发生器的水中应加入甲基红指示剂数 滴、硫酸数滴，在蒸馏过程中保持此液为橙红色， 否则需补加硫酸。准确移取试样分解液10～20mL 注入蒸馏装置的反应室中，用少量蒸馏水冲洗进 样入口，塞好入口玻璃塞，再加入10mL氢氧化钠 溶液，小心提起玻璃塞使之流入反应室，将玻璃 塞塞好，且在入口处加水密封，以防漏气。蒸馏 4min后降下锥形瓶使冷凝管末端离开吸收液面， 再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗液均 流入锥形瓶内，然后停止蒸馏。