退变腰椎间盘组织中p-JNK的表达变化及意义

床研究和影像学的发展 ， 发现炎性损伤 、 应激反应与
机械性 压 迫在椎 间 盘退 行 性 病 变 中起 重 要 作 用 ， 抑 制炎症 介 质对椎 间 盘 的作 用 、 阻断 炎性 反 应 可 能 成 为减缓 椎 间盘 退 变 进 程 的 一 条 治 疗 途 径 Ｊ 。以 往 在生 物力学 和 生 物化 学 方 面 进 行 了很 多研 究 Ｊ ， 随着 研 究 的进 一 步 深 人 ， 丝 裂 原 活 化 蛋 白 激 酶
１ ． ２ 腰 椎 间盘病 理 变 化 观 察
一
手术 切 除 腰 椎 间 盘
部分用甲醛固定后 ， 石蜡包埋切片 ， 制备 ４ ｍ厚
的组织 切 片 ， Ｈ Ｅ染 色 ， 光学显微镜观 察 ， 选 取 符 合 实 验条 件 的实验 标本 。 １ ． ３ ｐ － Ｊ Ｎ Ｋ定 位 观察 采 用 免 疫 荧 光 法 。称 取 两 组椎 间盘组织 约 ２ ０ ０ ｍ ｇ ， 充分 剪 碎 加入 采 用 苯 甲基
手术 切 除 的腰椎 间盘 突 出症 退 变 椎 间 盘组 织 ５ ０例
份（ 观察组 ） ， 男３ ０ 例， 女２ ０例 ； 年龄 （ ４ ６ ． ２± ４ ． ６ １ ）
缓 冲液漂洗 ３次 ， 每次 ５ ｍ ｉ ｎ ， Ｆ Ｉ Ｔ Ｃ标记的兔抗小 鼠
岁； 均经临床表现及病史 、 临床查体 、 影像学检查等 确诊 。另选 腰椎 爆裂骨 折患 者和 青少年 椎 间盘 突出
检测 ｐ － Ｊ Ｎ Ｋ蛋 白。结果 光镜下 ， 观察组 细胞增殖 明显 ， 细胞核呈 圆形 或卵 圆形 ， 髓 核细胞 细胞质 成空 泡状 ， 基质 增多 ， 纤维 网错乱 ， 纤维排 列紊 乱 ； 对照组可见纤维环 和髓核结 构 ， 腰 椎 间盘髓核 的软骨 细胞 表现为不 规则 的软骨 陷窝 ， 细胞核呈卵 圆形 ， 蓝染 ， 细胞质粉染 ， 基 质较 均匀 ， 可见 排列 整齐 的纤 维 网。免 疫荧光 示 ， 观察组 细胞质 和细 胞核 内均有 ｐ － Ｊ Ｎ Ｋ表达 ， 对照组细胞质及细胞核 内仅少量表达 。Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ 法示 ， 与对 照组 比较 ， 观察组 ｐ － Ｊ Ｎ Ｋ蛋
腰椎 间盘退 变是 引起下 腰疼 痛及 成人腰 椎 间盘 突 出的主要 原 因之 一 ， 其特 征 性 改 变是 髓 核 中蛋 白 聚糖 含量 的下 降 以及 伴 随 的 水 分 丢 失 Ｊ 。随 着 临
小 鼠抗人 ｐ － Ｊ Ｎ Ｋ单抗 ， 辣根过氧化物酶标记 的羊抗 小鼠 Ｉ ｇ Ｇ为第二抗 体 ， Ｆ Ｉ Ｔ Ｃ标 记 的兔抗 小 鼠 Ｉ ｇ Ｇ，
山东医药 ２ ０ １ ３年 第 ５ ３卷第 １ ９期
退 变腰 椎 间盘 组织 中 ｐ － Ｊ Ｎ Ｋ的 表 达变 化 及 意 义
李 洪涛 ， 陈 红芳 （ 潍 坊 市益 都 中心 医院 ， 山 东潍坊 ２ ６ ２ ５ ０ ０ ）
摘要： 目的
观察退 变腰椎 间盘组织 中 ｐ － ｃ － Ｊ ｕ ｎ氨基末端激酶 （ Ｊ Ｎ Ｋ） 的表 达变化 ， 并探讨 其意义 。方 法
Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ试剂 盒 ， 均购 自上 海碧 云天 生物技 术有 限公 司； Ｂ Ｃ Ａ蛋 白定 量试 剂盒 、 聚偏 二 氟 乙烯 （ Ｐ Ｖ Ｄ Ｆ ） 膜 购 自美 国 Ｍｉ ｌ ｌ ｉ ｐ ｏ ｒ ｅ公 司 ； Ｅ Ｃ Ｌ增 强化 学 发 光 试 剂 盒
购 自Ａ ｍ ｅ ￣ ｈ ａ ｍ公 司 ｏ
１ 材 料 与方法
磺酰氟化物 （ Ｐ Ｍ Ｓ Ｆ ） 裂解液 裂解 ， 收集的细胞裂解 液１ ４ ０ ０ ０ ｇ ， ４℃离 心 １ ０ ｍｉ ｎ ， 留取上 清 ， 分别 放 人 ６
孔板 内 ， 每孔 内加 入 ４ ％ 的多 聚 甲醛ห้องสมุดไป่ตู้１ ｍＬ ， 室 温 固定
１ ． １ 材料
收集本 院 ２ ０ ０ ９年 １ ０月 一 ２ ０ １ １年 ｌ Ｏ月
１ ０ ｍ ｉ ｎ 后， ０ ． ０ １ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ缓冲液漂洗 。用含有 山 羊血 清 的封 闭液室 温 封 闭 １ ０ ｍｉ ｎ ， 加 入 小 鼠抗 人 Ｐ ．
Ｊ Ｎ Ｋ抗 体 ， ３ ７℃ ， 湿 盒 内孵 育 １ ｈ 。０ ． ０ １ ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ
（ Ｍ Ａ Ｐ Ｋ ｓ ） 信号转导通路逐渐受 到重视 ， 其中 ｐ ３ ８在 椎 间盘 退变 过 程 中发 挥 了一 定 作 用 ］ ， 而 ｃ ． Ｊ ｕ ｎ氨
基 末端 激酶 （ Ｊ Ｎ Ｋ） 信 号转 导通路 与 ｐ ３ ８同属丝 裂 原 活化蛋 白激 酶 家 族 。本研 究 采 用 Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｎ ｂ ｌ ｏ ｔ 法对 腰 椎 间盘退 变组 织 中 的 ｐ － Ｊ Ｎ Ｋ蛋 白进 行 了 检测 ， 观 察 其表 达变化 并探 讨其 意义 。
白水平升高 （ Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ） 。结论
盘退变有关 。
ｐ － Ｊ Ｎ Ｋ在退变椎 间盘组 织 中的表达 明显 高于正 常椎间 盘 ， 提示 ｐ － Ｊ Ｎ Ｋ可能与椎 间
关键词 ： 腰椎间盘退变 ； ｃ － Ｊ ｕ ｎ氨基末端激酶 ； 蛋白印迹 杂交 法
ｄ ｏ ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ２ — ２ ６ ６ Ｘ． ２ ０ １ ３ ． １ ９ ． ０ ２ ８ 中图分类号 ： １ １ ３ ４ ９ ． ５ ３ 文献标志码 ： Ｂ 文章编号 ： １ ０ ０ ２ － ２ ６ ６ Ｘ（ ２ ０ １ ３ ） １ ９ － ０ ０ ７ ５ ￣３
选择
手术切 除的腰椎 间盘突 出症退变腰椎间盘组织 （ 观察组 ， ５ ０例份 ） 及腰椎 爆裂 骨折 、 椎 间盘突 出症 正常腰椎 间盘组
织（ 对照组 ， ２ ０ 例） ， 光学显微镜下 观察 两组腰椎 间盘组织 病理变化 ， 免疫荧光 法检 测 ｐ － Ｊ Ｎ Ｋ的定 位 ， Ｗｅ ｓ ｔ ｅ ｎ ｒ ｂ ｌ ｏ ｔ 法