细胞活体染色技术

18
⑵ 用动物细胞观察线粒体的活体染色
娶取鼠肝肝组织一小块，放入盛有Ringer氏液表 面皿中洗去血液 ↓ 于载玻片上的1/5000 Janus green B染色30min ↓ 撕开组织块，这样溶液中会有一些细胞或细胞群 ↓ 吸取溶液，放在载玻片的Ringer氏液中 ↓ 垫上两根短头发，盖上盖玻片进行镜检
取黄豆芽的根尖处的纵切面 ↓ 于载玻片上的中性红染液中染色 5─10min ↓ 吸去染液，滴一滴Ringer液 ↓ 盖上盖玻片进行镜检
17
2.线粒体的活体染色
⑴ 用植物细胞观察线粒体的活体染色
撕取洋葱鳞茎内表皮一小块 ↓ 于载玻片上的1/5000 Janus green B染色30min ↓ 吸去染液，滴一滴Ringer液 ↓ 盖上盖玻片进行镜检
22
思考题
• 所观察到的液泡大小是否有差别，染 色深度是否一样，并绘图加以说明。 • 所观察到线粒体分布在细胞何处．呈 什么颜色，其形状如何，绘图加以说 明。 • 比较线粒体在动、植物中的分布、颜 色，其形状如何?
23
thanks
24
思考
为什么要用油镜观察，植物细胞却不用？ 为什么要垫上两根短头发？
19
3.人口腔粘膜上皮细胞线粒体的超活染色观察
清洁载玻片放在37℃恒温水浴锅的金属板上 ↓ 滴2滴1/5000 Janus green B染液 ↓ 用牙签口腔颊粘膜处稍用力刮取上皮细胞 ↓ 刮下的粘液状物放大载玻片的染液滴中 ↓ 染色10~l5min(注意不可使染液干燥，必要时可再加 滴染液) ↓ 盖上盖玻片,显微镜下观察 20
14
15
实验用品
材料：黄豆根尖、洋葱、小鼠。 器械：显微镜、镊子、刀片、’剪刀、解剖针、 表面皿、载玻片、盖玻片、吸管、收水纸等。 试剂： Ringer氏液 1／3000中性红溶液 1／5000詹纳斯绿B 台盼蓝染色液 香柏油、二甲苯、蒸馏水等
16
实验方法
1. 液泡系的中性红活体染色
5
活体染色
6
较为常见的活体染色剂 •詹纳斯绿B(Janus green B) •中性红 •台盼蓝(trypan blue)
7
詹纳斯绿B(Janus green B)
• 专一用于线粒体的染色。它可以和线 粒体中的细胞色素C氧化酶结合，保持 氧化状态(即有色状态)呈蓝绿色,而在 周围的细胞质中染料被还原,成为无色 状态。 • 必须指出的是，只有具有活性的细胞 色素C氧化酶才能够把詹纳斯绿B氧化， 从而使它显出颜色
4
• 活染法弥补了活观察法不能显示细胞精细结构的 不足，也避免了固定染色法对细胞结构的破环和 造成人为假象的弊病。遗憾的是，适宜活体染色 的染料较少，能显示出的结构和种类也不多。
• 活体染色分为体内活染和体外活染两种。前者是 将染料注射于生物体内，染色后再取材观察。后 者是取材后，对离体的活细胞进行染色。为保持 离体细胞的正常存活，染色时需供给细胞以正常 的温度，渗透压，PH等。
4. 台盼蓝染色鉴定细胞死活
取小鼠腹腔水细胞于洁净载玻片上 ↓ 滴加1%台盼蓝1滴 ↓ 盖上盖玻片于显微镜下进行镜检
21
注意事项
• 对口腔上皮细胞进行染色时不可使 染剂干燥，可适当补加染液。 • 在对植物进行观察时一定要让材料 尽量展开。 • 詹纳斯绿B(Janus green B)溶液现 用现配，以保持它的充分氧化能力。 • 试验中速度要快，以免组织细胞死 亡
11
12
液泡系的中性红染色点经观察
ห้องสมุดไป่ตู้
13
台盼蓝(trypan blue)
• 台盼蓝：正常的活细胞，胞膜结构完整，能够排斥 台盼蓝，使之不能够进入胞内；而丧失活性或细胞 膜不完整的细胞，胞膜的通透性增加，可被台盼蓝 染成蓝色。 • 通常认为细胞膜完整性丧失，即可认为细胞已经死 亡，这与中性红作用相反。因此，借助台盼蓝染色 可以非常简便、快速地区分活细胞和死细胞。台盼 蓝是组织和细胞培养中最常用的死细胞鉴定染色方 法之一。注意凋亡小体也有台盼蓝拒染现象。
8
人口腔上皮细胞的线粒体分布
•在实验过程中 务必保持所取的 材料的活性。通 常，需要把生物 材料置于０℃～ ４℃的冰水浴低 温中，并且操作 要迅速。
9
10
中性红
• 中性红是液泡系的特殊活体染色剂， 它可将不同发育时期的液泡染成不 同深度的红色，在细胞处于生活状 态下细胞质和核不被染色，该染料 对液泡系具有一定专一性。
细胞活体染色技术
实验目的
• 学习细胞活体染色的方法。 • 观察动、植物活细胞内线粒体， 液泡系的形态、数量与分布。
2
细胞膜结构
3
实验原理
一般的生物材料不能穿透细胞膜， 只有当细胞被固定后，细胞膜被破 坏，染料才能进入细胞内部。但是， 有一些染料（称“活体染料”）却 能进入活细胞，它们是一些无毒或 毒性很小的染色剂，能使细胞中某 些特定结构着色。活体染料基本上 不影响或很少影响细胞的生命活动。