液相色谱基本概念和术语
液相色谱柱几个参数的定义
液相色谱柱几个参数的定义液相色谱（Liquid Chromatography，LC）是一种将液体作为流动相进行分离、净化、分析和鉴定样品中化学成分的方法。
液相色谱柱是液相色谱中的核心部件，它通过填充不同类型和性质的固体填料，使样品溶液在流动相作用下发生分离。
液相色谱柱的参数对于分离效果、分离速度和分离选择性等方面都产生重要影响，下面将介绍几个重要的液相色谱柱参数的定义。
1. 柱型（Column Type）：柱型是指液相色谱柱填料的物理形态，包括管状柱、开管状柱、管束柱等。
不同类型的柱具有不同的优缺点，如管状柱具有高分离效果和分辨率，但样品容量较小；开管状柱则具有较大的样品容量，适合分离复杂样品。
2. 柱长度（Column Length）：柱长度是指填充物所占据的柱体长度，通常用毫米（mm）表示。
柱长的选择与实验要求有关，一般柱长越长，分离效果越好，但分离时间也相应增加。
柱长的选择还取决于仪器的型号和分析要求。
3. 内径（Inner Diameter）：内径是液相色谱柱内部流通通道的直径，通常用毫米（mm）表示。
较小直径的柱内液流速度快，分离效果好，但柱内压力较高，适用于高效液相色谱；较大直径的柱则适用于制备液相色谱。
4. 填料（Stationary Phase）：填料是液相色谱柱中的固体物质，用于将样品分离。
填料可以是无机或有机颗粒，也可以是化学修饰后的硅胶、高效液相填料等。
填料的选择取决于样品的性质和分析要求，不同填料具有不同的静相亲水性、反相亲水性等物化特性。
5. 粒径（Particle Size）：粒径是填料表面质量的衡量指标，即填料颗粒的直径。
粒径直接影响分离效果和柱压，通常用微米（μm）表示。
较小的粒径有更大的表面积，提供更好的分离效果，但柱压也相应增加，适用于高效液相色谱；较大的粒径则用于制备液相色谱。
6. 球形度（Sphericity）：球形度是填料颗粒外形的一个参数，它形容填料颗粒的形态规则程度，通常用于判断填料的质量和性能。
液相色谱基本概念和术语
Ⅱ基本概念和理论一、基本概念和术语1.色谱图和峰参数⊕色谱图（chromatogram）--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号－时间曲线，又称色谱流出曲线（elution profile）.⊕基线（base line）--流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。
一般应平行于时间轴。
⊕噪音（noise）――基线信号的波动。
通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。
⊕漂移（drift）基线随时间的缓缓变化。
主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。
⊕色谱峰（peak）--组分流经检测器时相应的连续信号产生的曲线。
流出曲线上的突起部分。
正常色谱峰近似于对称性正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。
不对称色谱峰有两种：前延峰（leading peak）和脱尾峰（tailing peak ）。
⊕拖尾因子（tailing factor,T）T=B/A,用以衡量色谱峰的对称性。
也称为对称因子（symmetry factor）或不对称因子（asymmetry factor）《中国药典》规定T应为0.95～1.05。
T<0.95为前延峰，T>1.05为拖尾峰。
⊕峰底――基线上峰的起点至终点的距离。
⊕峰高（Peak height,h）――峰的最高点至峰底的距离。
⊕标准偏差（standard deviation, σ）--正态分布曲线x=±1时（拐点）的峰宽之半。
正常峰宽的拐点在峰高的0.607倍处。
⊕峰宽（peak width,W）--峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。
W=4σ。
⊕半峰宽（peak width at half-height,W h/2）--峰高一半处的峰宽。
W h/2＝2.355σ。
⊕峰面积（peak area,A）――峰与峰底所包围的面积。
高效液相色谱仪常识
被分离组分在柱中的洗脱原理
Ⅱ 基本概念和理论
一、基本概念和术语
1.色谱图和峰参数
⊕色谱图（chromatogram）--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号－时间曲线，又称色谱流出曲线（elution profile）.
⊕基线（base line）--流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。
⊕拖尾因子（tailing factor,T）--T=B/A,用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子（symmetry factor）或不对称因子（asymmetry factor）《中国药典》规定T应为0.95～1.05。T<0.95为前延峰，T>1.05为拖尾峰。
⊕峰底――基线上峰的起点至终点的距离。
4.相平衡参数（distribution coefficient,K）--在一定温度下，化合物在两相间达到分配平衡时，在固定相与流动相中的浓度之比。K=[xs]/[xm]
Cs-溶质在固定相中的浓度
Cm－溶剂在流动相中的浓度
分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关，也与温度、压力有关。在不同的色谱分离机制中，K有不同的概念：吸附色谱法为吸附系数，离子交换色谱法为选择性系数（或称交换系数），凝胶色谱法为滲透参数。但一般情况可用分配系数来表示。
⊕保留时间（retention time,tR）--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。
⊕保留体积（retention volume,VR）--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积。又称洗脱体积。VR＝F*tR .
⊕调整保留时间（adjusted retention time,tR’）--扣除死时间后的保留时间。也称折合保留时间（reduced retention time）。在实验条件（温度、固定相等）一定时，tR’只决定于组分的性质，因此，tR’(或tR)可用于定性。TR’=tR-t0
经典液相色谱知识点总结
经典液相色谱知识点总结液相色谱（Liquid Chromatography, LC）是一种以液相为驱动相，将待测样品在静态相中进行分离的色谱分析方法。
液相色谱在分离生化样品、药物、天然产物等化合物时得到了广泛的应用。
本文将系统总结液相色谱的知识点，包括原理、分类、仪器设备、色谱柱、检测方法等方面的内容。
一、原理液相色谱的原理基于化合物在静态相（色谱柱填料）和流动相（溶剂）之间的分配与分离过程。
待分析的化合物在流动相与静态相之间的分配系数不同，因此当待测样品溶液通过色谱柱时，根据不同化合物在静态相中的分配行为，可以实现化合物的分离。
在液相色谱中，流动相主要由溶剂和缓冲液组成，可以根据需要进行调整。
而静态相则是色谱柱填料，填料的选择对色谱分离效果至关重要。
填料的种类、粒径、表面性质等都会影响到分离效果。
二、分类根据静态相的不同，液相色谱可以分为几种常见的类型：1、反相色谱：静态相是疏水性填料，流动相是亲水性溶剂，被分离物质的极性与填料相反。
反相色谱对极性化合物具有较好的分离效果，因此在分析生化样品、药物等方面得到了广泛的应用。
2、离子交换色谱：静态相是带电离子交换树脂填料，可进行阴离子或阳离子的分离。
离子交换色谱适用于分析离子化合物，如蛋白质、核酸等。
3、尺寸排除色谱：静态相是孔径大小均一的凝胶填料，根据分子大小进行排除分离。
尺寸排除色谱适用于分析大分子化合物，如蛋白质、多糖等。
4、亲和色谱：通过生物亲和分离剂与化合物间的特异性结合实现分离，主要应用于生化分析领域。
5、扩展液相色谱：液相色谱的一种改良方法，通过使用超高性能色谱柱和压力增加装置来提高分辨率。
三、仪器设备液相色谱仪器主要包括流动相输送系统、样品进样装置、色谱柱和检测器等部分。
1、流动相输送系统：用于输送流动相的高性能泵，包括梯度泵和等速泵两种，可实现不同流动相梯度的传送。
2、样品进样装置：通常采用自动进样系统，可实现自动进样、样品预处理等功能。
最新整理HPLC的常用术语解释
H P L C的常用术语解释高效液相色谱法(H i g h P e r f o r m a n c e L i q u i d C h r o m a t o g r a p h y\H P L C)又称高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱、近代柱色谱等。
它是在生化和分析化学中常用的柱层析仪。
接下来小编为大家整理了H P L C的常用术语解释，希望对你有帮助哦!第一部分色谱曲线1、色谱图(c h r o m a t o g r a m)：色谱柱流出物通过检测器系统时所产生的响应信号对时间或流动相流出体积的曲线图，或者通过适当的方法观察到的纸色谱或薄层色谱斑点、谱带的分布图。
2、(色谱)峰(c h r o m a t o g r a p h i c p e a k)：色谱柱流出3、峰底(p e a k b a s e)：峰的起点与终点之间的连接的直线4、峰高(h，p e a k h e i g h t)：色谱峰最大值点到峰底的距离(图1中的B E)。
5、峰宽(W，p e a k w i d t h)：在峰两侧拐点(图1中的F，G)处所作切线与峰底相交两点的距离6、半高峰宽(W h/2，p e a k w i t h d a t h a l f h e i g h t)：通过峰高的中点作平行于峰底的直线，此直线与峰两侧相交两点之间的距离(图1中的H J)。
7、峰面积(A，p e a k a r e a)：峰与峰底之间的面积8、拖尾峰(t a i l i n g p e a k)：后沿较前沿平缓的不对称的峰。
9、前伸峰(l e a d i n g p e a k)：前沿较后沿平缓的不对称的峰。
(又叫伸舌峰、前延峰)10、假峰(g h o s t p e a k)：除组分正常产生的色谱峰外，由于仪器条件的变化等原因而在谱图上出现的色谱峰，即并非由试样所产生的峰。
这种色谱峰并不代表具体某一组分，容易给定性、定量带来误差。
高效液相色谱基础知识总结
（LC-MS），有效的弥补了色谱法定性分析特征性差的弱 点，成为最重要的分离分析方法之一， LC-MS在选择性、 灵敏度、分子量测定和提供结构信息方面具有明显的优 势，能够同时获得可靠的定性定量结果，因而被广泛应 用于药物的质量控制（杂质、副产物、降解产物等的鉴 定和测定）、药物在生物体内的吸收、分布和代谢研究 （包括代谢物的结构确定及定量）和临床医学研究（如 蛋白异常的研究）。 LC-MS已成为新药研究必不可少的 手段。20世纪70年代，高效液相色谱法崛起克服了
高效液相色谱基础知识总结
二、基本概念和术语
一、色谱图和峰参数 1、色谱图(chromatogram)--样品流经色谱柱和检测器， 所得到的信号-时间曲线，又称色谱流出曲线(elution profile)。 2、基线(base line)--经流动相冲洗，柱与流动相达到 平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行 于时间轴。基线反映仪器及操作条件的恒定程度，主要 由流动相中的杂质等因素决定。
键合相色谱法是将类似于气相色谱中的固定液的液 体，通过化学反应键合到硅胶表面，从而形成固定相。
高效液相色谱基础知识总结
采用化学键合固定相的色谱法称为键合相色谱。若采用 极性键合相、非极性流动相，则称为正相色谱；采用非 极性键合相、极性流动相，则称为反相色谱。这种分离 的保留值大小，主要决定于组分分子与键合固定液分子 间作用力的大小。
高效液相色谱基础知识总结
气相色谱法不能直接用于分析难挥发、热不稳定及高分 子化合物等的弱点，大大扩大了色谱法的应用范围，把 色谱法推进到一个新水平。
高效液相色谱（high performance liquid chromatography, HPLC）是一种高效、快速的分离分析 技术，具有灵敏度高、选择性好的特点。HPLC具有的同 时分离和分析的功能对于体内药物分析和体内内源性物 质的分析及成分复杂的中药分析尤其重要。 HPLC的分离 功能还广泛用于药物的纯化和制备，如用制备色谱分离
高效液相色谱基本概念和术语
高压液相色谱HPLC培训教程(一)I．概论一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
又称为色层法、层析法。
色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。
后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。
高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。
它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需用高压输送流动相，故又称高压液相色谱法(High Pressure Liquid Chromatography，HPLC)。
又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography，HSLP)。
也称现代液相色谱。
二、HPLC的特点和优点HPLC有以下特点：高压-压力可达150~300Kg/cm2。
色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上。
高速-流速为0.1~10.0 ml/min。
高效-可达5000塔板每米。
在一根柱中同时分离成份可达100种。
高灵敏度-紫外检测器灵敏度可达0.01ng。
同时消耗样品少。
HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：速度快-通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min内即可完成。
分辨率高-可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果。
液相色谱仪国标
液相色谱仪国标液相色谱仪是一种常用的分析仪器，用于物质的定性和定量分析。
为了保证液相色谱仪的质量和性能，我国制定了一系列国家标准，涵盖了液相色谱仪的术语和定义、技术要求、测试方法、检验规则等方面。
一、以下是一些关于液相色谱仪国家标准的概述：1. 术语和定义：国家标准对液相色谱仪的相关术语和定义进行了规定，如高效液相色谱仪、液相色谱仪、色谱柱、检测器等，为液相色谱仪的生产、使用和检验提供了统一的术语基础。
2. 技术要求：国家标准对液相色谱仪的主要技术性能指标进行了规定，包括仪器的准确度、重复性、稳定性、分辨率、峰宽等。
这些技术要求为液相色谱仪的设计、生产和检验提供了依据。
3. 测试方法：国家标准规定了液相色谱仪性能的测试方法，包括仪器的校准、重复性、稳定性、分辨率、峰宽等性能指标的测试。
这些测试方法保证了液相色谱仪性能的准确性和可靠性。
4. 检验规则：国家标准对液相色谱仪的检验规则进行了规定，包括检验的项目、方法、仪器设备、试验条件等。
这些检验规则保证了液相色谱仪的质量符合国家标准的要求。
5. 包装、标志、运输和贮存：国家标准对液相色谱仪的包装、标志、运输和贮存进行了规定，保证了液相色谱仪在运输和贮存过程中的安全性和稳定性。
二、具体到国家标准的内容，可以参考以下几个方面：1. GB/T 15341-2008《高效液相色谱仪》：这是高效液相色谱仪的国家标准，规定了高效液相色谱仪的术语和定义、技术要求、测试方法、检验规则以及包装、标志、运输和贮存要求。
2. GB/T 13610-2008《液相色谱仪》：这是液相色谱仪的国家标准，主要规定了液相色谱仪的分类、技术要求、测试方法、检验规则以及包装、标志、运输和贮存要求。
3. GB/T 12777-2019《液相色谱仪性能测试方法》：这个标准主要规定了液相色谱仪性能的测试方法，包括仪器的校准、重复性、稳定性、分辨率、峰宽等性能指标的测试方法。
4. GB/T 18627.1-2002《实验室仪器设备自动化液相色谱仪第1部分：通用要求》：这是关于自动化液相色谱仪的国家标准，规定了自动化液相色谱仪的术语和定义、技术要求、测试方法、检验规则等。
液相色谱法术语-最新国标
液相色谱法术语1 范围本文件界定了液相色谱法术语及有关符号。
本文件适用于涉及液相色谱法术语的各级标准、技术文件、书刊的编写。
本文件不适用于电泳及其有关的术语。
2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。
其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 4946 气相色谱法术语JJG 705 液相色谱仪3 一般术语 general terms3.1液相色谱法（LC） liquid chromatography用液体作为流动相的色谱法。
注：中文术语后圆括号内的英文大写正楷字母表示该术语的英文縮写词，下同。
3.2液-液色谱法（LLC） liquid-liquid chromatography将固定液涂渍在载体上作为固定相的液相色谱法。
3.3液-固色谱法（LSC） liquid-solid chromatography用固体（一般指吸附剂）作为固定相的液相色谱法。
3.4正相液相色谱法 normal phase liquid chromatography固定相的极性较流动相的极性强的液相色谱法。
3.5反相液相色谱法（RPLC） reversed phase liquid chromatography固定相的极性较流动相的极性弱的液相色谱法。
3.6柱液相色谱法 liquid column chromatography在柱管内进行组分分离的液相色谱法。
注：本文件中柱色谱法仅含柱液相色渚法，其他相同。
3.6.1高效液相色谱法（HPLC） high performance liquid chromatography具有高分离效能的柱液相色谱法。
3.6.1.1超高效液相色谱法（UHPLC） ultrahigh performance liquid chromatography与传统高效液相色谱法（HPLC）相比，在更高操作压力下进行分离分析、具有更高分离效能的液相色谱法。
高效液相色谱原理和操作详解
高效液相色谱之巴公井开创作我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比力表：鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多, 因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC.I．概论2一、液相色谱理论发展简况2二、HPLC的特点和优点2三、色谱法分类3四、色谱分离原理3II．基本概念和理论5一、基本概念和术语5二、塔板理论8三、速率理论（又称随机模型理论）9III．HPLC系统10一、输液泵11二、进样器13三、色谱柱14四、检测器17五、数据处置和计算机控制系统20六、恒温装置20IV．固定相和流动相20一、基质（担体）20二、化学键合固定相22三、流动相231．流动相的性质要求232．流动相的选择243．流动相的pH值244．流动相的脱气255．流动相的滤过256．流动相的贮存267．卤代有机溶剂应特别注意的问题268．HPLC用水26V．HPLC应用27一、样品测定27二、方法研究27附件：高效液相色谱法（HPLC）复核细则28一、对起草单元的要求：28二、对复核单元的要求：28I．概论一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时, 由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的年夜小、强弱分歧, 在固定相中滞留时间分歧, 从而先后从固定相中流出.又称为色层法、层析法.色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的, 色谱法(Chromatography)因之得名.后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法.液相色谱法开始阶段是用年夜直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相, 称为经典液相色谱法, 此方法柱效低、时间长（常有几个小时）.高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography, HPLC)是在经典液相色谱法的基础上, 于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的.它与经典液相色谱法的区别是填料颗粒小而均匀, 小颗粒具有高柱效, 但会引起高阻力, 需用高压输送流动相, 故又称高压液相色谱法(High PressureLiquidChromatography, HPLC).又因分析速度快而称为高速液相色谱法(High Speed Liquid Chromatography, HSLP).也称现代液相色谱.二、HPLC的特点和优点HPLC有以下特点：高压——压力可达150~300 Kg/cm2.色谱柱每米降压为75 Kg/cm2以上.高速——流速为0.1~10.0 ml/min.高效——可达5000塔板每米.在一根柱中同时分离成分可达100种.高灵敏度——紫外检测器灵敏度可达.同时消耗样品少.HPLC与经典液相色谱相比有以下优点：速度快——通常分析一个样品在15~30 min, 有些样品甚至在5 min内即可完成.分辨率高——可选择固定相和流动相以到达最佳分离效果.灵敏度高——紫外检测器可达, 荧光和电化学检测器可达.柱子可反复使用——用一根色谱柱可分离分歧的化合物.样品量少, 容易回收——样品经过色谱柱后不被破坏, 可以收集单一组分或做制备.三、色谱法分类按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC).气相色谱法适用于分离挥发性化合物.GC根据固定相分歧又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC), 其中以GLC应用最广.液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质.LC同样可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC).另外还有超临界流体色谱法(SFC), 它以超临界流体（界于气体和液体之间的一种物相）为流动相（经常使用CO2）, 因其扩散系数年夜, 能很快到达平衡, 故分析时间短, 特别适用于手性化合物的拆分.按原理分为吸附色谱法(AC)、分配色谱法(DC)、离子交换色谱法(IEC)、排阻色谱法(EC, 又称分子筛、凝胶过滤(GFC)、凝胶渗透色谱法(GPC）和亲和色谱法.（另外还有电泳.）按把持形式可分为纸色谱法(PC)、薄层色谱法(TLC)、柱色谱法.四、色谱分离原理高效液相色谱法按分离机制的分歧分为液固吸附色谱法、液液分配色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排阻色谱法.1．液固色谱法使用固体吸附剂, 被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力年夜小分歧而分离.分离过程是一个吸附－解吸附的平衡过程.经常使用的吸附剂为硅胶或氧化铝, 粒度5~10μm.适用于分离分子量200~1000的组分, 年夜大都用于非离子型化合物, 离子型化合物易发生拖尾.经常使用于分离同分异构体.2．液液色谱法使用将特定的液态物质涂于担体概况, 或化学键合于担体概况而形成的固定相, 分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度分歧而分离.分离过程是一个分配平衡过程.涂布式固定相应具有良好的惰性；流动相必需预先用固定相饱和, 以减少固定相从担体概况流失；温度的变动和分歧批号流动相的区别常引起柱子的变动；另外在流动相中存在的固定相也使样品的分离和收集复杂化.由于涂布式固定相很难防止固定液流失, 现在已很少采纳.现在多采纳的是化学键合固定相, 如C18、C8、氨基柱、氰基柱和苯基柱.液液色谱法按固定相和流动相的极性分歧可分为正相色谱法(NPC)和反相色谱法(RPC).正相色谱法采纳极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷）, 常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保管时间.经常使用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等）.反相色谱法一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液, 常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保管时间.适用于分离非极性和极性较弱的化合物.RPC在现代液相色谱中应用最为广泛, 据统计, 它占整个HPLC应用的80%左右.随着柱填料的快速发展, 反相色谱法的应用范围逐渐扩年夜, 现已应用于某些无机样品或易解离样品的分析.为控制样品在分析过程的解离, 经常使用缓冲液控制流动相的pH值.但需要注意的是, C18和C8使用的pH值通常为（2~8）, 太高的pH值会使硅胶溶解, 太低的pH值会使键合的烷基脱落.有陈说新商品柱可在pH 1.5~10范围把持.正相色谱法与反相色谱法比力表正相色谱法反相色谱法固定相极性高～中中～低流动相极性低～中中～高从上表可看出, 当极性为中等时正相色谱法与反相色谱法没有明显的界线（如氨基键合固定相）.3．离子交换色谱法固定相是离子交换树脂, 经常使用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架, 在概况未端芳环上接上羧基、磺酸基（称阳离子交换树脂）或季氨基（阴离子交换树脂）.被分离组分在色谱柱上分离原理是树脂上可电离离子与流动相中具有相同电荷的离子及被测组分的离子进行可逆交换, 根据各离子与离子交换基团具有分歧的电荷吸引力而分离.缓冲液经常使用作离子交换色谱的流动相.被分离组分在离子交换柱中的保管时间除跟组分离子与树脂上的离子交换基团作用强弱有关外, 它还受流动相的pH值和离子强度影响.pH值可改变动合物的解离水平, 进而影响其与固定相的作用.流动相的盐浓度年夜, 则离子强度高, 晦气于样品的解离, 招致样品较快流出.离子交换色谱法主要用于分析有机酸、氨基酸、多肽及核酸.4．离子对色谱法又称偶离子色谱法, 是液液色谱法的分支.它是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后, 在非极性固定相中溶解度增年夜, 从而使其分离效果改善.主要用于分析离子强度年夜的酸碱物质.分析碱性物质经常使用的离子对试剂为烷基磺酸盐, 如戊烷磺酸钠、辛烷磺酸钠等.另外高氯酸、三氟乙酸也可与多种碱性样品形成很强的离子对.分析酸性物质经常使用四丁基季铵盐, 如四丁基溴化铵、四丁基铵磷酸盐.离子对色谱法经常使用ODS柱（即C18）, 流动相为甲醇-水或乙腈-水, 水中加入3~10 mmol/L的离子对试剂, 在一定的pH值范围内进行分离.被测组分保时间与离子对性质、浓度、流动相组成及其pH值、离子强度有关.5．排阻色谱法固定相是有一定孔径的多孔性填料, 流动相是可以溶解样品的溶剂.小分子量的化合物可以进入孔中, 滞留时间长；年夜分子量的化合物不能进入孔中, 直接随流动相流出.它利用分子筛对分子量年夜小分歧的各组分排阻能力的不同而完成分离.经常使用于分离高分子化合物, 如组织提取物、多肽、卵白质、核酸等.II．基本概念和理论一、基本概念和术语1．色谱图和峰参数Ø色谱图(chromatogram)——样品流经色谱柱和检测器, 所获得的信号-时间曲线, 又称色谱流出曲线(elutionprofile).Ø基线(base line)——经流动相冲刷, 柱与流动相到达平衡后, 检测器测出一段时间的流出曲线.一般应平行于时间轴.Ø噪音(noise)——基线信号的摆荡.通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致.Ø漂移(drift)——基线随时间的缓缓变动.主要由于把持条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起, 柱内的污染物或固定相不竭被洗脱下来也会发生漂移.Ø色谱峰(peak)——组分流经检测器时响应的连续信号发生的曲线.流出曲线上的突起部份.正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）.分歧毛病称色谱峰有两种：前延峰(leading peak)和拖尾峰(tailing peak).前者少见.Ø拖尾因子(tailing factor, T)——T＝, 用以衡量色谱峰的对称性.也称为对称因子(symmetry factor)或分歧毛病称因子(asymmetry factor).《中国药典》规定T应为.T＜为前延峰, T＞为拖尾峰.Ø峰底——基线上峰的起点至终点的距离.Ø峰高(peak height, h)——峰的最高点至峰底的距离.Ø峰宽(peak width, W)——峰两侧拐点地方作两条切线与基线的两个交点间的距离.W＝4σØ半峰宽(peak width at half-height, W h/2)——峰高一半处的峰宽.W h/2＝Ø标准偏差(standard deviation, σ)——正态分布曲线x＝±1时（拐点）的峰宽之半.正常峰的拐点在峰高的倍处.标准偏差的年夜小说明组分在流超卓谱柱过程中的分散水平.σ小, 分散水平小、极点浓度高、峰形瘦、柱效高；反之, σ年夜, 峰形胖、柱效低.Ø峰面积(peak area, A)——峰与峰底所包围的面积.A＝×σ×h＝2.507 σ h＝1.064 W h/2 h2．定性参数（保管值）Ø死时间(dead time, t0)——不保管组分的保管时间.即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间.在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间.Ø死体积(dead volume, V0)——由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间.它包括4部份：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据,V m）、柱出口管路体积、检测器流动池体积.其中只有V m介入色谱平衡过程, 其它3部份只起峰扩展作用.为防止峰扩展, 这3部份体积应尽量减小.V0＝F×t0（F为流速）Ø保管时间(retention time, t R)——从进样开始到某个组分在柱后呈现浓度极年夜值的时间.Ø保管体积(retention volume, V R)——从进样开始到某组分在柱后呈现浓度极年夜值时流出溶剂的体积.又称洗脱体积.V R＝F×t RØ调整保管时间(adjusted retention time, t'R)——扣除死时间后的保管时间.也称折合保管时间(reduced retention time).在实验条件（温度、固定相等）一按时, t'R只决定于组分的性质, 因此, t'R（或t R）可用于定性.t'R ＝t R－t0Ø调整保管体积(adjusted retention volume, V'R)——扣除死体积后的保管体积.V'R＝V R－V0或V'R＝F×t'RØ理论塔板数(theoretical plate number, N)——用于定量暗示色谱柱的分离效率（简称柱效）.N取决于固定相的种类、性质（粒度、粒径分布等）、填充状况、柱长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质.如果峰形对称并符合正态分布, N可近似暗示为：N＝()2＝16()2＝()2N为常量时, W随t R成正比例变动.在一张多组分色谱图上, 如果各组分含量相当, 则后洗脱的峰比前面的峰要逐渐加宽, 峰高则逐渐降低.用半峰宽计算理论塔数比用峰宽计算更为方便和经常使用, 因为半峰宽更易准确测定, 尤其是对稍有拖尾的峰.N与柱长成正比, 柱越长, N越年夜.用N暗示柱效时应注明柱长, 如果未注明, 则暗示柱长为1米时的理论塔板数.（一般HPLC柱的N在1000以上.）若用调整保管时间(t'R)计算理论塔板数, 所得值称为有效理论塔板数(N有效或N eff).Ø理论塔板高度(theoretical plate height, H)——每单元柱长的方差.H＝.实际应用时往往用柱长L和理论塔板数计算：H＝, H有效＝.Ø分配系数(distribution coefficient, K)——在一定温度下, 化合物在两相间到达分配平衡时, 在固定相与流动相中的浓度之比.K＝.分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关, 也与温度、压力有关.在分歧的色谱分离机制中, K有分歧的概念：吸附色谱法为吸附系数, 离子交换色谱法为选择性系数（或称交换系数）, 凝胶色谱法为渗透参数.但一般情况可用分配系数来暗示.在条件（流动相、固定相、温度和压力等）一定, 样品浓度很低时（C s、C m很小）时, K只取决于组分的性质, 而与浓度无关.这只是理想状态下的色谱条件, 在这种条件下, 获得的色谱峰为正常峰；在许多情况下, 随着浓度的增年夜, K减小, 这时色谱峰为拖尾峰；而有时随着溶质浓度增年夜, K也增年夜, 这时色谱峰为前延峰.因此, 只有尽可能减少进样量, 使组分在柱内浓度降低, K恒按时, 才华获得正常峰.在同一色谱条件下, 样品中K值年夜的组分在固定相中滞留时间长, 后流超卓谱柱；K值小的组分则滞留时间短, 先流超卓谱柱.混合物中各组分的分配系数相差越年夜, 越容易分离, 因此混合物中各组分的分配系数分歧是色谱分离的前提.在HPLC中, 固定相确定后, K主要受流动相的性质影响.实践中主要靠调整流动相的组成配比及pH值, 以获得组分间的分配系数不同及适宜的保管时间, 到达分离的目的.Ø容量因子(capacity factor, k)——化合物在两相间到达分配平衡时, 在固定相与流动相中的量之比.k＝.因此容量因子也称质量分配系数.分配系数、容量因子与保管时间之间有如下关系：k＝＝＝K ＝, t'R＝k t0.上式说明容量因子的物理意义：暗示一个组分在固定相中停留的时间（t'R）是不保管组分保管时间（t0）的几倍.k ＝0时, 化合物全部存在于流动相中, 在固定相中不保管, t'R＝0；k越年夜, 说明固定相对此组分的容量越年夜, 出柱慢, 保管时间越长.容量因子与分配系数的分歧点是：K取决于组分、流动相、固定相的性质及温度, 而与体积V s、V m无关；k除与性质及温度有关外, 还与V s、V m有关.由于t'R、t0较V s、V m易于测定, 所以容量因子比分配系数应用更广泛.Ø选择性因子(selectivity factor, α)——相邻两组分的分配系数或容量因子之比.α＝＝（设k2＞k1）.因k＝t'R/t0, 则α＝, 所以α又称为相对保管时间（《美国药典》）.要使两组分获得分离, 必需使α≠1.α与化合物在固定相和流动相中的分配性质、柱温有关, 与柱尺寸、流速、填充情况无关.从实质上来说, α的年夜小暗示两组分在两相间的平衡分配热力学性质的不同, 即分子间相互作用力的不同.5．分离参数Ø分离度(resolution, R)——相邻两峰的保管时间之差与平均峰宽的比值.也叫分辨率, 暗示相邻两峰的分离水平.R ＝.当W1＝W2时, R＝.当R＝1时, 称为4σ分离, 两峰基天职离, 裸露峰面积为95.4%, 内侧峰基重叠约2%.R＝时, 称为6σ分离, 裸露峰面积为99.7%.R≥称为完全分离.《中国药典》规定R应年夜于.Ø基天职离方程——分离度与三个色谱基本参数有如下关系：R＝××其中称为柱效项, 为柱选择性项, 为柱容量项.柱效项与色谱过程动力学特性有关, 后两项与色谱过程热力学因素有关.从基天职离方程可看出, 提高分离度有三种途径：①增加塔板数.方法之一是增加柱长, 但这样会延长保管时间、增加柱压.更好的方法是降低塔板高度, 提高柱效.②增加选择性.当α＝1时, R＝0, 无论柱效有多高, 组分也不成能分离.一般可以采用以下办法来改变选择性：a. 改变流动相的组成及pH值；b. 改变柱温；c. 改变固定相.③改变容量因子.这经常是提高分离度的最容易方法, 可以通过调节流动相的组成来实现.k2趋于0时, R也趋于0；k2增年夜, R也增年夜.但k2不能太年夜, 否则不单分离时间延长, 而且峰形变宽, 会影响分离度和检测灵敏度.一般k2在1~10范围内, 最好为2~5, 窄径柱可更小些.二、塔板理论1．塔板理论的基本假设塔板理论是Martin和Synger首先提出的色谱热力学平衡理论.它把色谱柱看作分馏塔, 把组分在色谱柱内的分离过程看成在分馏塔中的分馏过程, 即组分在塔板间隔内的分配平衡过程.塔板理论的基本假设为：1）色谱柱内存在许多塔板, 组分在塔板间隔（即塔板高度）内完全服从分配定律, 并很快到达分配平衡.2）样品加在第0号塔板上, 样品沿色谱柱轴方向的扩散可以忽略.3）流动相在色谱柱内间歇式流动, 每次进入一个塔板体积.4）在所有塔板上分配系数相等, 与组分的量无关.虽然以上假设与实际色谱过程不符, 如色谱过程是一个静态过程, 很难到达分配平衡；组分沿色谱柱轴方向的扩散是不成防止的.可是塔板理论导出了色谱流出曲线方程, 胜利地解释了流出曲线的形状、浓度极年夜点的位置, 能够评价色谱柱柱效.2．色谱流出曲线方程及定量参数（峰高h和峰面积A）根据塔板理论, 流出曲线可用下述正态分布方程来描述：C＝e 或C＝e由色谱流出曲线方程可知：当t＝t R时, 浓度C有极年夜值, C max＝.C max就是色谱峰的峰高.因此上式说明：①当实验条件一按时（即σ一定）, 峰高h与组分的量C0（进样量）成正比, 所以正常峰的峰高可用于定量分析.②当进样量一按时, σ越小（柱效越高）, 峰高越高, 因此提高柱效能提高HPLC分析的灵敏度.由流出曲线方程对V(0~∞) 求积分, 即得超卓谱峰面积A＝×σ×C max＝C0.可见A相当于组分进样量C0, 因此是经常使用的定量参数.把C max＝h和W h/2＝代入上式, 即得A＝×W h/2×h, 此为正常峰的峰面积计算公式.三、速率理论（又称随机模型理论）1．液相色谱速率方程1956年荷兰学者Van Deemter等人吸收了塔板理论的概念, 并把影响塔板高度的动力学因素结合起来, 提出了色谱过程的动力学理论——速率理论.它把色谱过程看作一个静态非平衡过程, 研究过程中的动力学因素对峰展宽（即柱效）的影响.后来Giddings和Snyder等人在Van Deemter方程（H＝A＋B/u＋Cu, 后称气相色谱速率方程）的基础上, 根据液体与气体的性质不同, 提出了液相色谱速率方程（即Giddings方程）：H＝2λd p＋＋\s\up 5(2p＋\s\up 5(2p＋\s\up 5(2f 2．影响柱效的因素1）涡流扩散（eddy diffusion）.由于色谱柱内填充剂的几何结构分歧, 分子在色谱柱中的流速分歧而引起的峰展宽.涡流扩散项A＝2λd p, d p为填料直径, λ为填充不规则因子, 填充越不均匀λ越年夜.HPLC经常使用填料粒度一般为3~10μm, 最好3~5μm, 粒度分布RSD≤5%.但粒度太小难于填充均匀（λ年夜）, 且会使柱压过高.年夜而均匀（球形或近球形）的颗粒容易填充规则均匀, λ越小.总的说来, 应采纳细而均匀的载体, 这样有助于提高柱效.毛细管无填料, A＝0.2）分子扩散（molecular diffusion）.又称纵向扩散.由于进样后溶质分子在柱内存在浓度梯度, 招致轴向扩散而引起的峰展宽.分子扩散项B/u＝2γD m/u.u为流动相线速度, 分子在柱内的滞留时间越长（u小）, 展宽越严重.在低流速时, 它对峰形的影响较年夜.D m为分子在流动相中的扩散系数, 由于液相的D m很小, 通常仅为气相的10-4~10-5, 因此在HPLC中, 只要流速不太低的话, 这一项可以忽略不计.γ是考虑到填料的存在使溶质分子不能自由地轴向扩散, 而引入的柱参数, 用以对D m进行校正.γ一般在左右, 毛细管柱的γ＝1.3）传质阻抗（mass transfer resistance）.由于溶质分子在流动相、静态流动相和固定相中的传质过程而招致的峰展宽.溶质分子在流动相和固定相中的扩散、分配、转移的过程其实不是瞬间到达平衡, 实际传质速度是有限的, 这一时间上的滞后使色谱柱总是在非平衡状态下工作, 从而发生峰展宽.液相色谱的传质阻抗项Cu又分为三项.①流动相传质阻抗H m＝C m d2pu/D m, C m为常数.这是由于在一个流路中流路中心和边缘的流速不等所致.靠近填充颗粒的流动相流速较慢, 而中心较快, 处于中心的分子还未来得及与固定相到达分配平衡就随流动相前移, 因而发生峰展宽.②静态流动相传质阻抗H sm＝C sm d2pu/D m, C sm为常数.这是由于溶质分子进入处于固定相孔穴内的静止流动相中, 晚回到流路中而引起峰展宽.H sm对峰展宽的影响在整个传质过程中起着主要作用.固定相的颗粒越小, 微孔孔径越年夜, 传质阻力就越小, 传质速率越高.所以改进固定相结构, 减小静态流动相传质阻力, 是提高液相色谱柱效的关键.H m和H sm都与固定相的粒径平方d2p 成正比, 与扩散系数D m成反比.因此应采纳低粒度固定相和低粘度流动相.高柱温可以增年夜D m, 但用有机溶剂作流动相时, 易发生气泡, 因此一般采纳室温.③固定相传质阻抗H s＝C s d2fu/D s（液液分配色谱）, C s为常数, d f为固定液的液膜厚度, D s为分子在固定液中的扩散系数.在分配色谱中H s与d f的平方成正比, 在吸附色谱中H s与吸附和解吸速度成反比.因此只有在厚涂层固定液、深孔离子交换树脂或解吸速度慢的吸附色谱中, H s才有明显影响.采纳单分子层的化学键合固定相时H s可以忽略.赶快率方程式可以看出, 要获得高效能的色谱分析, 一般可采纳以下办法：①进样时间要短.②填料粒度要小.③改善传质过程.过高的吸附作用力可招致严重的峰展宽和拖尾, 甚至不成逆吸附.④适当的流速.以H对u作图, 则有一最佳线速度u opt, 在此线速度时, H最小.一般在液相色谱中, u opt很小（年夜约）, 在这样的线速度下分析样品需要很长时间, 一般来说都选在1mm/s的条件下把持.⑤较小的检测器死体积.3．柱外效应速率理论研究的是柱内峰展宽因素, 实际在柱外还存在引起峰展宽的因素, 即柱外效应（色谱峰在柱外死空间里的扩展效应）.色谱峰展宽的总方差即是各方差之和, 即：σ2＝σ2柱内＋σ2柱外＋σ2其它柱外效应主要由差劲的进样技术、从进样点到检测池之间除柱子自己以外的所有死体积所引起.为了减少柱外效应, 首先应尽可能减少柱外死体积, 如使用“零死体积接头”连接各部件, 管道对接宜呈流线形, 检测器的内腔体积应尽可能小.研究标明柱外死体积之和应＜V R/.其次, 希望将样品直接进在柱头的中心部位, 可是由于进样阀与柱间有接头, 柱外效应总是存在的.另外, 要求进样体积≤V R/2.柱外效应的直观标识表记标帜是容量因子k小的组分（如k＜2）峰形拖尾和峰宽增加得更为明显；k年夜的组分影响不显著.由于HPLC的特殊条件, 当柱子自己效率越高（N越年夜）, 柱尺寸越小时, 柱外效应越显得突出.而在经典LC中则影响相对较小.III．HPLC系统HPLC系统一般由输液泵、进样器、色谱柱、检测器、数据记录及处置装置等组成.其中输液泵、色谱柱、检测器是关键部件.有的仪器还有梯度洗脱装置、在线脱气机、自动进样器、预柱或呵护柱、柱温控制器等, 现代HPLC仪还有微机控制系统, 进行自动化仪器控制和数据处置.制备型HPLC仪还备有自动馏分收集装置.最早的液相色谱仪由粗拙的高压泵、低效的柱、固定波长的检测器、绘图仪, 绘出的峰是通过手工丈量计算峰面积.后来的高压泵精度很高并可编程进行梯度洗脱, 柱填料从单一品种发展至。
色谱术语大全
色谱术语大全色谱术语在分析化学领域具有重要的意义。
它们用于描述色谱技术中所涉及的过程、参数和方法。
本文将为您介绍一些常见的色谱术语，以帮助您更好地理解和应用色谱技术。
一、色谱基本概念1. 色谱法（Chromatography）：一种将化学混合物分离为其组成部分的物理方法，基于物质在移动相（流动相）和固定相（静止相）之间的分配行为。
2. 色谱柱（Column）：色谱仪中用来分离混合物成分的部分，通常由填料填充或涂覆固定相而成。
3. 流动相（Mobile Phase）：在色谱柱中通过的移动液体，负责将样品分离物质携带到检测器。
4. 静止相（Stationary Phase）：在色谱柱中的固定填料或涂覆物，用于与分离物质相互作用，实现其分离。
5. 保留时间（Retention Time）：某化合物从进样口注入到达检测器所需的时间，用来表征化合物在色谱柱中的保留情况。
二、气相色谱术语1. 气相色谱（Gas Chromatography, GC）：将气体作为流动相用于分离物质的色谱技术。
2. 气相色谱柱（Gas Chromatography Column）：用于气相色谱分离的柱子，通常由带有固定相的管子构成。
3. 信号峰（Peak）：在色谱图中呈现的峰状信号，用来表示各组分在不同保留时间下的峰值。
4. 分辨力（Resolution）：色谱柱对两相邻峰的识别和分离能力。
5. 峰宽度（Peak Width）：色谱图中峰的宽度，常用于评估色谱分离的效果。
三、高效液相色谱术语1. 高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography, HPLC）：将液体作为流动相用于分离物质的色谱技术。
2. 高效液相色谱柱（High Performance Liquid Chromatography Column）：在HPLC中用于分离物质的柱子，通常由填料或涂覆有固定相材料制成。
3. 保留因子（Retention Factor）：衡量某化合物在流动相和静止相之间分配行为的指标，通常由某组分的保留时间与流动相通过时间之比计算得出。
HPLC(液相色谱)常识及疑难详解(附实际操作图解)
1 液相色谱基础知识1.1 液相色谱名词术语Mobile phase：流动相，在色谱柱中存在着相对运动的两相，一相为固定相，一相为流动相。
流动相是指在色谱过程中载带样品（组分）向前移动的那一相。
Stationary phase：固定相，柱色谱或平板色谱中既起分离作用又不移动的那一相。
Gradient elution: 梯度洗脱,一个分析周期中，按一定程序不断改变流动相的浓度配比, 使一个复杂样品中的性质差异较大的组分能按各自适宜的容量因子k达到良好的分离目的。
Detection wavelength：检测波长，retention time：保留时间，被分离样品组分从进样开始到柱后出现该组分浓度极大值时的时间Peak:峰Peak Base：峰基线，经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。
一般应平行于时间轴Peak Height：峰高，色谱峰顶点至峰底的距离。
Peak Width：峰宽，色谱峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点间的距离Peak Width at Half Height：半峰高宽Peak Area：峰面积Tailing Peak: 后沿较前沿平缓的不对称峰Leading Peak:前沿较后沿平缓的不对称峰Ghost Peak: 假峰，并非由试样所产生的峰Baseline Drift:基线漂移Baseline Noise:基线噪音Band Broadening:组分在色谱柱内移动过程中谱带宽度增加的现象. 1.2 流动相1.2.1 流动相类型正相液相色谱流动相：一般正相色谱固定相极性大于流动相极性，采用极性固定相（如聚乙二醇、氨基与腈基键合相）；流动相为相对非极性的疏水性溶剂（烷烃类如正已烷、环已烷），常加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等以调节组分的保留时间。
常用于分离中等极性和极性较强的化合物（如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等），极性小的组分先出柱。
反相液相色谱流动相：一般用非极性固定相（如C18、C8）；流动相为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂以调节保留时间。
高效液相色谱名词解释
附录: 高效液相色谱名词解释氧化铝[Alumina]一种多孔微粒状的铝氧化物[Al203]，用作正相吸附色谱的固定相。
氧化铝有高活性碱性表面；10% 的浆态pH 值是10。
用强酸清洗可成功变至中性或酸性范围[浆态pH值分别是7.5 和4 ]。
氧化铝比硅胶吸湿性强。
它的活性根据Brockmann† 级含水量衡量：如活性一级含水1% 。
基线*[Baseline*]仅有流动相从色谱柱通过时色谱图记录的检测器响应信号。
管状柱[Cartridge]一种色谱柱，没有末端装置，只是一个空管，填充材料被两端玻璃简单封口。
固相萃取色谱柱可平行地在真空状态下操作。
高效液相色谱柱放置在支架上，每一端都有流路连接。
色谱柱容易拆换，价廉，比常规的集成末端管体的色谱柱方便。
色谱图*[Chromatogram*]表示分析物流出浓度的图形或检测器响应信号或其他量化信号对时间或洗脱体积的曲线图。
在平面色谱[即：薄层色谱或纸色谱]中，色谱图指含有的分离区域的纸或层。
色谱法*[Chromatography*]一个动态的物理化学分离方法，它利用组分在两相中的分配不同而分离，一种是固定的[固定相]，另一种[流动相]相对固定相而移动。
柱体积* [Vc][Column Volume* [Vc]]装填料部分的管路几何体积[管内衡截面积乘以填料床长L]。
色谱柱的颗粒间体积也称为粒间体积，是指流动相在填料床颗粒间占据的体积。
空隙体积[V0]是流动相所占有的总体积，即粒间体积和颗粒内体积[也称为孔隙体积]的总合。
检测器*[Detector*] [见灵敏度]通过测量物理或化学性质[如，紫外/可见光吸收，示差折光率，荧光或传导率]，来表示流出物组分变化的器件。
如果检测器的相应信号与样品浓度成线性，通过适当的标准样品校准后，可以定量某个组分。
通常，使用两种不同的检测器对分析有帮助。
这样，可得到样品被分析物的更多确定的或特定的信息。
有些检测器[如，电化学，质谱]是破坏性的；即它们使样品组分发生化学变化。
第十八章 高效液相色谱法 - 章节小结
一、主要内容1．基本概念（1）化学键合相：利用化学反应将有机基团键合在载体表面形成的固定相。
（2）化学键合相色谱法：以化学键合相为固定相的色谱法。
（3）正（反）相色谱法：流动相极性小（大）于固定相极性的液相色谱法。
（4）抑制型（双柱）离子色谱法：用抑制柱消除流动相的高电导本底，以电导为检测器的离子交换色谱法。
（5）手性色谱法：利用手性固定相或手性流动相添加剂分离分析手性化合物的对映异构体的色谱法。
（6）亲合色谱法：利用或模拟生物分子之间的专一性作用，从复杂生物试样中分离和分析特殊物质的色谱方法，是基于组分与固定在载体上的配基之间的专一性亲和作用而实现分离的色谱法。
（7）梯度洗脱：在一个分析周期内程序控制改变流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等。
（8）静态流动相传质阻抗Csm：由于组分的部分分子进入滞留在固定相微孔内的静态流动相中，因而相对晚回到流路中，引起的峰展宽。
（9）键合相的含碳量：键合相碳的百分数，可通过对键合硅胶进行元素分析测定。
（10）键合相的覆盖度：参加反应的硅醇基数目占硅胶表面硅醇基总数的比例。
（11）封尾：在键合反应后，用三甲基氯硅烷等对键合相进行钝化处理，减少残余硅醇基，即封尾。
（12）溶剂的极性参数P'：表示溶剂与三种极性物质乙醇（质子给予体）、二氧六环（质子受体P'）和硝基甲烷（强偶极体）相互作用的强度。
用于度量分配色谱的溶剂强度。
P'越大，溶剂的极性越强，在正相分配色谱中的洗脱能力越强。
（13）溶剂的强度因子S：常为反相键合相色谱的溶剂洗脱能力的度量。
（14）三维光谱－色谱图：用DAD检测器检测，经过计算机处理，将每个组分的吸收光谱和试样的色谱图结合在一张三维坐标图上，即获得三维光谱-色谱图。
2．基本理论（1）速率理论在HPLC中表达式为：H=A+C m u+C s m u 用于指导实验条件的选择。
A、Cm和Csm均随固定相粒度dp变小而变小，因此保证HPLC高柱效的主要措施是使用小粒度的固定相。
高效液相色谱基本常识
被分离组分在柱中的洗脱原理Ⅱ基本概念和理论一、基本概念和术语1.色谱图和峰参数⊕色谱图（chromatogram）--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号－时间曲线，又称色谱流出曲线（elution profile）.⊕基线（base line）--流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。
一般应平行于时间轴。
⊕噪音（noise）――基线信号的波动。
通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。
⊕漂移（drift）基线随时间的缓缓变化。
主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。
⊕色谱峰（peak）--组分流经检测器时相应的连续信号产生的曲线。
流出曲线上的突起部分。
正常色谱峰近似于对称性正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。
不对称色谱峰有两种：前延峰（leading peak）和脱尾峰（tailing peak ）.前者少见。
⊕拖尾因子（tailing factor,T）--T=B/A,用以衡量色谱峰的对称性。
也称为对称因子（symmetry factor）或不对称因子（asymmetry factor）《中国药典》规定T应为0.95～1.05。
T<0.95为前延峰，T>1.05为拖尾峰。
⊕峰底――基线上峰的起点至终点的距离。
⊕峰高（Peak height,h）――峰的最高点至峰底的距离。
⊕峰宽（peak width,W）--峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。
W=4σ。
⊕半峰宽（peak width at half-height,Wh/2）--峰高一半处的峰宽。
W h/2＝2.355σ。
⊕标准偏差（standard deviation, σ）--正态分布曲线x=±1时（拐点）的峰宽之半。
正常峰宽的拐点在峰高的0.607倍处。
标准偏差的大小说明组分在流出色谱柱过程中的分散程度。
高效液相色谱术语入门 (HPLC术语介绍)
HPLC术语介绍（高效液相色谱术语指南）1.氧化铝使用一种多孔、颗粒状氧化铝[Al203]作为正相吸附色谱中的固定相。
氧化铝具有高活性的碱性表面；10%水性浆液的pH约为10。
继续用强酸清洗，可制成中性和酸性级浆液[pH分别为7.5和4]。
氧化铝的吸湿性高于二氧化硅。
其活度根据Brockmann†级含水量进行判定；例如，活度I级包含1%的水。
2.基线*记录当仅有流动相从色谱柱中流出时检测器响应的色谱图部分。
3.小柱一种不带末端接头的色谱柱，仅由一个开放管路组成，其中填料被两端筛板保留。
SPE小柱可以在真空萃取装置上并行使用。
HPLC小柱放置在小柱卡套中，该小柱卡套的每一端都有流路连接。
与带有一体式末端接头的传统色谱柱相比，小柱易于更换、成本更低且使用更方便。
4.色谱图*检测器响应或洗脱液中分析物浓度的其他量度相对于洗脱液体积或洗脱时间所作的图或其他表示。
在平面色谱[例如，薄层色谱或纸色谱]中，色谱图可以表示包含分离区域的纸或薄层。
5.色谱*一种动态物理化学分离方法，待分离组分被分配到两相中，其中一相静止[固定相]，另一相[流动相]相对于固定相流动。
6.柱体积* [Vc]管路部分的几何体积，包含填料[管路的内横截面积乘以填充床长度L]。
色谱柱的颗粒间体积，又称柱隙体积，是填充床中颗粒间流动相所占据的体积。
死体积[V0]是流动相占据的总体积，即柱隙体积与颗粒间体积的总和[又称孔隙体积]。
7.检测器* [请参阅“灵敏度”]通过测定物理或化学特性（例如紫外/可见光吸光度、折射率差、荧光性或导电率）指示洗脱液组分变化的装置。
如果检测器的响应与样品浓度呈线性关系，则使用标准品进行适当校正，可以对组分进行定量。
通常，串联使用两种不同类型的检测器是有利的。
这种方式有助于获得有关样品分析物的更多确证或具体的信息。
某些检测器[例如电化学检测器、质谱检测器]是破坏性的，即它们会导致样品组分发生化学变化。
如果这类检测器与非破坏性检测器配合使用，则通常将这类检测器置于流路后方。
液相基本术语及操作
液相基本术语及操作(总32页)本页仅作为文档封面，使用时可以删除This document is for reference only-rar21year.March液相色谱检测1 仪器的基本常识及术语仪器结构：液相色谱仪主要包括泵、进样器、色谱柱、检测器；仪器分类：液相色谱仪属于精密仪器中的色谱仪器；按照分为离机制，吸附、分配、离子交换、亲和色谱，体积排阻色谱；按照流动相与固定相的极性，分为正相色谱法和反相色谱法；1.2.2 高效液相色谱法的应用范围：高效液相色谱法适用于高沸点不易挥发、受热不稳定易分解、分子量大的，不同极性的有机化合物，生物活性物质和多种天然产物，合成的和天然的高分子化合物等。
仪器检定：液相色谱仪检定周期为1年，在两次检定间期内进行一次期间核查，也可以根据情况增加核查次数；维护保养：对于液相维护方式主要是周维护和日维护，其中周维护包括联机系统及中工作站软件维护、数据库整理备份、检测器自检、维护单向阀、溶剂砂芯滤头、进样器、电机泵检查维护、溶剂瓶清洗等；日维护包括环境温度、环境湿度、色谱柱温度、压力流速、进样口是否洁净、进液处的砂芯过滤头是否洁净、流动相交换时是否有沉淀；色谱法的常用基本术语基线：在色谱操作条件下,没有被测组分通过鉴定器时,记录器所记录的检测器噪声随时间变化图线称为基线.死时间,保留时间及校正保留时间:从进样到惰性气体峰出现极大值的时间称为死时间,以td表示.从进样到出现色谱峰最高值所需的时间称保留时间,以tr表示.保留时间与死时间之差称校正保留时间.以Vd表示.死体积,保留体积与校正保留体积:死时间与载气平均流速的乘积称为死体积,以Vd表示,载气平均流速以Fc表示,Vd=tdxFc.保留时间与载气平均流速的乘积称保留体积,以Vr表示,Vr=trxFc峰面积：流出曲线(色谱峰)与基线构成之面积称峰面积,用A表示.拖尾因子：是反映峰对称性的指标，计算公式：拖尾因子 T＝2d1（其中为5%峰高处的峰宽，d1为峰顶点至峰前沿之间的距离）。
高效液相色谱法(HPLC)的概述
此帖与GC版的对应，是为了让大家更好的学习和了解LC主要内容包括：1.高效液相色谱法（HPLC）的概述2. 高效液相色谱基础知识介绍（1——13楼）3. 高压液相色谱HPLC发展概况、特点与分类4. 液相色谱的适用性5.应用高效液相色谱法（HPLC）的概述以高压液体为流动相的液相色谱分析法称高效液相色谱法（HPLC）。
其基本方法是用高压泵将具有一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂泵入装有填充剂的色谱柱，经进样阀注入的样品被流动相带入色谱柱内进行分离后依次进入检测器，由记录仪、积分仪或数据处理系统记录色信号或进行数据处理而得到分析结果。
由于高效液相色谱法具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、适用X围广（样品不需气化，只需制成溶液即可）、色谱柱可反复使用的特点，在《中国药典》中有50种中成药的定量分析采用该法，已成为中药制剂含量测定最常用的分析方法。
高效液相色谱法按固定相不同可分为液-液色谱法和液-固色谱法；按色谱原理不同可分为分配色谱法（液-液色谱）和吸附色谱法（液-固色谱）等。
目前，化学键合相色谱应用最为广泛，它是在液－液色谱法的基础上发展起来的。
将固定液的官能团键合在载体上，形成的固定相称为化学键合相，不易流失是其特点，一般认为有分配与吸附两种功能，常以分配作用为主。
C18（ODS）为最常使用的化学键合相。
根据固定相与流动相极性的不同，液-液色谱法又可分为正相色谱法和反相色谱法，当流动相的极性小于固定相的极性时称正相色谱法，主要用于极性物质的分离分析；当流动相的极性大于固定相的极性时称反相色谱法，主要用于非极性物质或中等极性物质的分离分析。
在中药制剂分析中，大多采用反相键合相色谱法。
系统组成：（一）高压输液系统由贮液罐、脱气装置、高压输液泵、过滤器、梯度洗脱装置等组成。
1.贮液罐由玻璃、不锈钢或氟塑料等耐腐蚀材料制成。
贮液罐的放置位置要高于泵体，以保持输液静压差，使用过程应密闭，以防止因蒸发引起流动相组成改变，还可防止气体进入。
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Ⅱ基本概念和理论
一、基本概念和术语
1.色谱图和峰参数
⊕色谱图（chromatogram）--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号－时间曲线，又称色谱流出曲线（elution profile）.
⊕基线（base line）--流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。
一般应平行于时间轴。
⊕噪音（noise）――基线信号的波动。
通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。
⊕漂移（drift）基线随时间的缓缓变化。
主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。
⊕色谱峰（peak）--组分流经检测器时相应的连续信号产生的曲线。
流出曲线上的突起部分。
正常色谱峰近似于对称性正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。
不对称色谱峰有两种：前延峰（leading peak）和脱尾峰（tailing peak ）。
⊕拖尾因子（tailing factor,T）T=B/A,用以衡量色谱峰的对称性。
也称为对称因子（symmetry factor）或不对称因子（asymmetry factor）《中国药典》规定T应为0.95～1.05。
T<0.95为前延峰，T>1.05为拖尾峰。
⊕峰底――基线上峰的起点至终点的距离。
⊕峰高（Peak height,h）――峰的最高点至峰底的距离。
⊕标准偏差（standard deviation, σ）--正态分布曲线x=±1时（拐点）的峰宽之半。
正常峰宽的拐点在峰高的0.607倍处。
⊕峰宽（peak width,W）--峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。
W=4σ。
⊕半峰宽（peak width at half-height,W h/2）--峰高一半处的峰宽。
W h/2＝2.355σ。
⊕峰面积（peak area,A）――峰与峰底所包围的面积。
A=2.507σh=1.064W h/2h
2.定性参数（保留值）
⊕死时间（dead time,t0）--不保留组分的保留时间。
即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。
在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间。
⊕死体积（dead volume,V0）――由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。
它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。
其中只有Vm参与色谱平衡过程，其他3部粉只起峰扩展作用。
为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。
V0＝F×t0（F为流速）
⊕保留时间（retention time,t R）--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。
⊕保留体积（retention volume,V R）--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积。
又称洗脱体积。
VR＝F*t R .
⊕调整保留时间（adjusted retention time,t R’）--扣除死时间后的保留时间。
也称折合保留时间（reduced retention time）。
在实验条件（温度、固定相等）一定时，t R’只决定于组分的性质，因此，t R’(或t R)可用于定性。
T R’=t R-t0
⊕调整保留体积（adjusted retention volume,V R’）--扣除死体积后的保留体积。
V R’=V R-V0或V R’=F*t R’
3.柱效参数
⊕理论塔板数（theoretical plate number,N）用于定量表示色谱柱的分离效率（简称柱效）。
N=（t R/σ）2=16(t R/W)2 =5.54(t R/W1/2)2
⊕理论塔板高度（theortical plate height,H）每单位柱长的方差。
实际应用时往往用柱长L和理论塔板数计算：H=L/N
4.相平衡参数
⊕容量因子（capacity factor,K）--化合物在两相间达到平衡时，在固定相与流动相中的量之比。
K＝（t R-t0）/t0=t R’/t0（或溶质在固定相中的量/溶质在流动相中的量）,因
此，容量因子也称质量分配系数。
⊕选择性因子（selectivity factor,α）--相邻两组份的分配系数或容量因子之比。
α＝k2/k1（设k2>k1），α又称为相对保留时间（《美国药典》）。
要使两组分得到分离，必须使α≠1。
α与化合物在固定相和流动相中的分配性质、柱温有关，与柱尺寸、流速、填充情况无关。
5.分离参数
⊕分离度（resolution,R）--相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值。
也叫分辨率，表示相邻两峰的分离程度。
R=（t R2-t R1）/[(W1+W2)/2]。
,
当W1=W2，R=1时,称为4σ分离，两峰基本分离，裸露锋面积为95.4％，内测峰基重叠约2％。
当R=1.5时，称为6σ分离，裸露锋面积为99.7％。
R≥1.5称为完全分离。
《中国药典》规定R应大于1.5。
⊕基本分离方程――分离度与三个色谱基本参数有如下关系：
R=1/4（а-1）×N0.5×［k’/(1+k’)］
其中N称为柱效项，α为柱选择项，k’为柱容量项。
柱效项与色谱过程动力学特性有关，后两项与色谱过程热力学因素有关。