大豆肽
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超滤法
超滤是利用膜的选择性，在膜的两侧存在一定量的能 量差作为推动力，通过溶液中各组分透过膜的迁移速率的 不同而实现非均相物系的分离。 具体操作：超滤处理在不添加任何化学试剂的情况下直接 从发酵产物中利用超滤膜分离提纯出大豆肽纯化物。将大 豆肽粗品溶于一定量的蒸馏水中，进行超滤处理，收集滤 出液，得到纯化的大豆肽。
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大豆肽的介绍和提取工艺
第一组：梁准成，刘丽娟，莫利梅，李治，陈海谊，刘淑媚 指导老师：廖劲松
大豆肽的介绍和提取工艺
1
2 3
大豆肽的概述 大豆肽的生产工艺
大豆肽的提取工艺
大豆肽展望
4
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大豆肽的概念
生物活性肽: 是能够调节生物机体的生命活动或具 有某些生理活性的寡肽和多肽的总称
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大豆肽各类型产品
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大豆肽展望
在大豆肽研究开发中还存在许多急需解决的问题： ( 1)蛋白酶的选择及高产菌株的筛选问题, 这是保证水解质 量的关键; ( 2) 蛋白酶水解机理及过程控制问题,需要建立相关酶解和 发酵过程中的数学模型,优化生产工艺; ( 3)水解产物相对分子质量大小及精制工艺的研究问题, 需 要建立相关的检测和质量标准; ( 4)水解产物风味的控制问题, 尤其是酶解产物中苦味的消 除和控制; ( 5) 大豆肽结构和功能之间的关系问题,需要明确不同氨基 酸组成、 排列顺序及氨基酸 数量小分子肽的功能特性; ( 6) 价格问题, 选择成本低的工艺是工厂化生产的前提; ( 7) 安全及认识问题,加强产品的安全控制及正确的宣传报 道也不容忽视。
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大豆肽的介绍和提取工艺
第一组：梁准成，刘丽娟，莫利梅，李治，陈海谊，刘淑媚 指导老师：廖劲松
由于生物活性肽具有种类多、功能全、吸收快、效率高、应用范围广、 无毒副作用等优点，被添加到各类食品中，开发功能性食品，如促进 钙吸收食品、降血压食品、醒酒食品、运动食品、婴儿食品等一些列 产品。
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大豆肽的概念
大豆肽: 是大豆蛋白质经 酶水解作用后，再经特殊 处理而得低肽混合物。
特点：相对于大豆肽而言，酶解液中的杂质大多为大分子 物质。超滤法可以按膜的截留分子质量(MWCO) 对物料 理进行分离，用于蛋白制品的纯化具有工艺流程短、耗用 化学试剂少等优点。
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大豆肽的应用领域
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大豆肽市场现状
武汉天天好生物制品有限 公司 山东中食都庆生物技术股 份公司 哈尔滨乐能生物股份有限 公司 哈高科大豆食品有限责任 公司 东莞市银华饲料有限公司
1
2 3
正交轴逆流色谱法 凝胶过滤法
高效液相色谱法
超滤法
4
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正交轴逆流色谱法
采用连续的液液萃取的机理，主要用于中等分子量(分 子量>3000Da)大豆肽的分离。
具体操作：分别以12.5%PEG8000：25% 磷酸氢二 钾( 质量比1：1) 的溶剂系统，以及正丁醇：三氟乙酸： 水( 120 ：1：160，V/V)的溶剂系统，用下相作流动 相，上相作固定相，采用500 r/ min 的转速 1mL/min流动相流速，从大豆肽粗提取物中分离纯化大 豆肽。 特点：逆流色谱是一种不用固态载体的液液分配层析法, 它具有分离纯度高、样品回收率高、对样品无沾染吸附、 溶剂用量少、适应性强、能兼作小量分析和制备提纯等优 点，该方法适用于分离极性物质和生物活性物质。
高效液相色谱法
高效液相色谱法(HPLC)已广泛用来分离、分析和制备大 豆肽等生物样品。尤其是反向高效液相色谱法已成为许多 研究肽类的实验室的主要分离手段。 具体操作： 1.酶水解反应——超滤分离——凝胶过滤分离（与凝胶过滤 法相同）； 2.高效液相色谱 ：将分子量在1000以下的小肽用 0.1%TFA 水溶液溶解后，取一定浓度的小肽样品溶液 进样至已用流动相A液（水+0.1%TFA(V/V/%)平衡 过的RP-HPLC色谱上，然后进行凸形梯度洗脱直至达到 要求的B液浓度（乙腈+0.1%TFA(V/V/%)，再用 100%B液洗脱30min，流速1.0ml/min,大豆肽的检 测波长为220nm。 特点：分离提纯效率高，但是价格昂贵，只能适用于分离 分析或价值较高的产品分离，不适合大规模生产
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小结
我国大豆资源丰富、 价格低廉、 且大豆蛋白质含 量高,氨基酸平衡优于其他植物蛋白 ,是一种重要的 植物蛋白资源, 由大豆蛋白质制备得到的大豆肽可 以有效改善原料蛋白的各项理化特性, 同时还能赋 予产品特殊生理活性。因此, 开发食用及饲用大豆 肽产品, 不仅可以增加大豆制品的附加值 , 丰富大 豆制品的种类, 同时也为油脂工厂大豆粕的综合利 用提供了一条有效途径。随着科学技术的进步, 人 们认识的提高以及相关问题的解决, 大豆肽将具有 更为广阔的应用发展前景。
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大豆肽的生理功能
易吸收性
多肽在肠道中吸收率最好，体内蛋白质大部分是以多肽形式直接吸收；与氨 基酸和其它蛋白质相比，大豆肽吸收速率最高。因此，大豆肽可作为肠道营 养剂和流态食品用于康复期患者、消化功能衰退老年人及消化功能未成熟婴 幼儿
降血脂和胆固醇 降血压 低过敏原性 促进矿物质吸收 增强运动员肌肉和恢复疲劳 促进脂肪代谢
它由大豆蛋白质水解后的许多种肽分子 混合物所组成，产品中还含有少量的游 离氨基酸、糖类和无机盐等成分。大豆 功能性低聚肽通常由 3～6 个氨基酸组 成，其分子量分布以低于1000的为主。
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大豆肽的理化特性
低渗透压 大豆肽溶液渗透压处于大豆蛋白质与同一组成氨基酸之间，大豆肽 渗透压比氨基酸低得多 高溶解性 a. 大豆肽不论条件如何都能显示出良好溶解性； b. 大豆肽溶解性不受加热影响； c. 抑制蛋白质凝胶形成，调整蛋白食品硬度和改善食感。 吸水性 蛋白质被水解后，分子结构被破坏，大量亲水基团外露，导致大豆 肽吸水性明显高于大豆分离蛋白，因此大豆肽具有较强吸湿性和保 湿性 低粘性、 高流动性 大豆肽溶液粘度与大豆蛋白溶液粘度相当 ，高浓度时仍呈低粘度性。 乳化性 这是由于水解使包埋于蛋白质内部疏水性残基暴露而出，提高其在 界面吸附，形成内聚性膜；加之，也因系疏水性残基与油相互作用， 亲水性残基与水相互作用所致
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大豆肽的加工工艺
酶解法 由于酶法生产肽其产品安全性高，生产条件温和，容易控 制，因此已成为目前生产大豆蛋白肽的主要方法 缺点是比 微生物发酵法生产肽的成本高 工艺流程：
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大豆肽的加工工艺
微生物发酵法 微生物发酵法是通过微生物的生化反应将大豆蛋白转化为 大豆蛋白肽，是小肽之间的移接重排的过程，通过微生物 作用可以对某些苦味基因进行修饰转移和重组在发酵过程 中，小肽氨基酸之间又经过代谢同化，将大豆蛋白肽转化 为生物活性肽。目前用微生物发酵法生产大豆肽是较先进 的方法 应用较多的有固态发酵和液态发酵2种 工艺流程：
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凝胶过滤法
采用凝胶过滤色谱法可分离分子量< 1200Da的小肽。 具体操作： 1.酶水解：将AS1.398 中性蛋白酶与大豆分离蛋白按一定 比例混合（底物浓度为5%（W/V），酶用量为6%）， 在T=48℃、pH 值为7.5条件下酶解时间为4h，此条件 下水解度可达24.57%。 2.超滤分离：将水解产物1000mL分别通过三种超滤膜进行 分离，分别获得分子量在<20000、20000～10000、 10000～6000、<6000 4 个肽段。 3.脱苦脱色处理：对分子量6000以下肽利用活性炭进行脱 苦脱色处理，脱苦脱色条件为：活性炭0.03%（W/V）， 53℃，pH值4.3～4.5，慢速搅拌2h，抽滤得大豆肽样 品。 4.凝胶过滤分离：将分子量6000以下的肽通过SepHadex Company Logo G15 进行分离收集分子量1200以下的肽段。
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参考文献
[1]李善仁,陈济琛,胡开辉等. 大豆肽的研究进展[J].中国 粮油学报,2009,24,(7):142-147; [2]姜曼,宋俊梅. 大豆肽研究概况[J].中国酿 造,2009,(3):8-11; [3]邹险峰,李梅,谷冉峰. 大豆肽的功能性研究[J]. 广东技 术师范学院学报（自然科学）,2009(4):44-46; [4]孙月梅,李杨,江连洲. 超滤技术在抗氧化大豆肽制备中 的研究[J].食品工业科技,2009(2):94-96; [5]曹玉华,汪海峰,杨慧萍等. 应用固定化木瓜蛋白酶制备 大豆肽的研究[J].中国粮油报,2009,24(3):113-116; [6]钱磊,张业尼,唐翔宇等.双酶酶法制备大豆肽及其性质 研究[J].现代食品科技,2006,23(4):6-10
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大豆肽的加工工艺 合成法 合成法国内刚处于研究阶段，采用液相或固相化 学合成法制取活性肽，但成本高，副反应物及残 留化合物多等因素制约其发展 基因重组法是采用 DNA重组技术来制取活性肽，但此实验尚在研究 中，还没有进入工业生产阶段
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大豆肽提取工艺
超滤法
超滤是利用膜的选择性，在膜的两侧存在一定量的能 量差作为推动力，通过溶液中各组分透过膜的迁移速率的 不同而实现非均相物系的分离。 具体操作：超滤处理在不添加任何化学试剂的情况下直接 从发酵产物中利用超滤膜分离提纯出大豆肽纯化物。将大 豆肽粗品溶于一定量的蒸馏水中，进行超滤处理，收集滤 出液，得到纯化的大豆肽。
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大豆肽的介绍和提取工艺
第一组：梁准成，刘丽娟，莫利梅，李治，陈海谊，刘淑媚 指导老师：廖劲松
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大豆肽的概述 大豆肽的生产工艺
大豆肽的提取工艺
大豆肽展望
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大豆肽的概念
生物活性肽: 是能够调节生物机体的生命活动或具 有某些生理活性的寡肽和多肽的总称
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大豆肽各类型产品
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大豆肽展望
在大豆肽研究开发中还存在许多急需解决的问题： ( 1)蛋白酶的选择及高产菌株的筛选问题, 这是保证水解质 量的关键; ( 2) 蛋白酶水解机理及过程控制问题,需要建立相关酶解和 发酵过程中的数学模型,优化生产工艺; ( 3)水解产物相对分子质量大小及精制工艺的研究问题, 需 要建立相关的检测和质量标准; ( 4)水解产物风味的控制问题, 尤其是酶解产物中苦味的消 除和控制; ( 5) 大豆肽结构和功能之间的关系问题,需要明确不同氨基 酸组成、 排列顺序及氨基酸 数量小分子肽的功能特性; ( 6) 价格问题, 选择成本低的工艺是工厂化生产的前提; ( 7) 安全及认识问题,加强产品的安全控制及正确的宣传报 道也不容忽视。
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大豆肽的介绍和提取工艺
第一组：梁准成，刘丽娟，莫利梅，李治，陈海谊，刘淑媚 指导老师：廖劲松
由于生物活性肽具有种类多、功能全、吸收快、效率高、应用范围广、 无毒副作用等优点，被添加到各类食品中，开发功能性食品，如促进 钙吸收食品、降血压食品、醒酒食品、运动食品、婴儿食品等一些列 产品。
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大豆肽的概念
大豆肽: 是大豆蛋白质经 酶水解作用后，再经特殊 处理而得低肽混合物。
特点：相对于大豆肽而言，酶解液中的杂质大多为大分子 物质。超滤法可以按膜的截留分子质量(MWCO) 对物料 理进行分离，用于蛋白制品的纯化具有工艺流程短、耗用 化学试剂少等优点。
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大豆肽的应用领域
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大豆肽市场现状
武汉天天好生物制品有限 公司 山东中食都庆生物技术股 份公司 哈尔滨乐能生物股份有限 公司 哈高科大豆食品有限责任 公司 东莞市银华饲料有限公司
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正交轴逆流色谱法 凝胶过滤法
高效液相色谱法
超滤法
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正交轴逆流色谱法
采用连续的液液萃取的机理，主要用于中等分子量(分 子量>3000Da)大豆肽的分离。
具体操作：分别以12.5%PEG8000：25% 磷酸氢二 钾( 质量比1：1) 的溶剂系统，以及正丁醇：三氟乙酸： 水( 120 ：1：160，V/V)的溶剂系统，用下相作流动 相，上相作固定相，采用500 r/ min 的转速 1mL/min流动相流速，从大豆肽粗提取物中分离纯化大 豆肽。 特点：逆流色谱是一种不用固态载体的液液分配层析法, 它具有分离纯度高、样品回收率高、对样品无沾染吸附、 溶剂用量少、适应性强、能兼作小量分析和制备提纯等优 点，该方法适用于分离极性物质和生物活性物质。
高效液相色谱法
高效液相色谱法(HPLC)已广泛用来分离、分析和制备大 豆肽等生物样品。尤其是反向高效液相色谱法已成为许多 研究肽类的实验室的主要分离手段。 具体操作： 1.酶水解反应——超滤分离——凝胶过滤分离（与凝胶过滤 法相同）； 2.高效液相色谱 ：将分子量在1000以下的小肽用 0.1%TFA 水溶液溶解后，取一定浓度的小肽样品溶液 进样至已用流动相A液（水+0.1%TFA(V/V/%)平衡 过的RP-HPLC色谱上，然后进行凸形梯度洗脱直至达到 要求的B液浓度（乙腈+0.1%TFA(V/V/%)，再用 100%B液洗脱30min，流速1.0ml/min,大豆肽的检 测波长为220nm。 特点：分离提纯效率高，但是价格昂贵，只能适用于分离 分析或价值较高的产品分离，不适合大规模生产
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小结
我国大豆资源丰富、 价格低廉、 且大豆蛋白质含 量高,氨基酸平衡优于其他植物蛋白 ,是一种重要的 植物蛋白资源, 由大豆蛋白质制备得到的大豆肽可 以有效改善原料蛋白的各项理化特性, 同时还能赋 予产品特殊生理活性。因此, 开发食用及饲用大豆 肽产品, 不仅可以增加大豆制品的附加值 , 丰富大 豆制品的种类, 同时也为油脂工厂大豆粕的综合利 用提供了一条有效途径。随着科学技术的进步, 人 们认识的提高以及相关问题的解决, 大豆肽将具有 更为广阔的应用发展前景。
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大豆肽的生理功能
易吸收性
多肽在肠道中吸收率最好，体内蛋白质大部分是以多肽形式直接吸收；与氨 基酸和其它蛋白质相比，大豆肽吸收速率最高。因此，大豆肽可作为肠道营 养剂和流态食品用于康复期患者、消化功能衰退老年人及消化功能未成熟婴 幼儿
降血脂和胆固醇 降血压 低过敏原性 促进矿物质吸收 增强运动员肌肉和恢复疲劳 促进脂肪代谢
它由大豆蛋白质水解后的许多种肽分子 混合物所组成，产品中还含有少量的游 离氨基酸、糖类和无机盐等成分。大豆 功能性低聚肽通常由 3～6 个氨基酸组 成，其分子量分布以低于1000的为主。
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大豆肽的理化特性
低渗透压 大豆肽溶液渗透压处于大豆蛋白质与同一组成氨基酸之间，大豆肽 渗透压比氨基酸低得多 高溶解性 a. 大豆肽不论条件如何都能显示出良好溶解性； b. 大豆肽溶解性不受加热影响； c. 抑制蛋白质凝胶形成，调整蛋白食品硬度和改善食感。 吸水性 蛋白质被水解后，分子结构被破坏，大量亲水基团外露，导致大豆 肽吸水性明显高于大豆分离蛋白，因此大豆肽具有较强吸湿性和保 湿性 低粘性、 高流动性 大豆肽溶液粘度与大豆蛋白溶液粘度相当 ，高浓度时仍呈低粘度性。 乳化性 这是由于水解使包埋于蛋白质内部疏水性残基暴露而出，提高其在 界面吸附，形成内聚性膜；加之，也因系疏水性残基与油相互作用， 亲水性残基与水相互作用所致
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大豆肽的加工工艺
酶解法 由于酶法生产肽其产品安全性高，生产条件温和，容易控 制，因此已成为目前生产大豆蛋白肽的主要方法 缺点是比 微生物发酵法生产肽的成本高 工艺流程：
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大豆肽的加工工艺
微生物发酵法 微生物发酵法是通过微生物的生化反应将大豆蛋白转化为 大豆蛋白肽，是小肽之间的移接重排的过程，通过微生物 作用可以对某些苦味基因进行修饰转移和重组在发酵过程 中，小肽氨基酸之间又经过代谢同化，将大豆蛋白肽转化 为生物活性肽。目前用微生物发酵法生产大豆肽是较先进 的方法 应用较多的有固态发酵和液态发酵2种 工艺流程：
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凝胶过滤法
采用凝胶过滤色谱法可分离分子量< 1200Da的小肽。 具体操作： 1.酶水解：将AS1.398 中性蛋白酶与大豆分离蛋白按一定 比例混合（底物浓度为5%（W/V），酶用量为6%）， 在T=48℃、pH 值为7.5条件下酶解时间为4h，此条件 下水解度可达24.57%。 2.超滤分离：将水解产物1000mL分别通过三种超滤膜进行 分离，分别获得分子量在<20000、20000～10000、 10000～6000、<6000 4 个肽段。 3.脱苦脱色处理：对分子量6000以下肽利用活性炭进行脱 苦脱色处理，脱苦脱色条件为：活性炭0.03%（W/V）， 53℃，pH值4.3～4.5，慢速搅拌2h，抽滤得大豆肽样 品。 4.凝胶过滤分离：将分子量6000以下的肽通过SepHadex Company Logo G15 进行分离收集分子量1200以下的肽段。
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参考文献
[1]李善仁,陈济琛,胡开辉等. 大豆肽的研究进展[J].中国 粮油学报,2009,24,(7):142-147; [2]姜曼,宋俊梅. 大豆肽研究概况[J].中国酿 造,2009,(3):8-11; [3]邹险峰,李梅,谷冉峰. 大豆肽的功能性研究[J]. 广东技 术师范学院学报（自然科学）,2009(4):44-46; [4]孙月梅,李杨,江连洲. 超滤技术在抗氧化大豆肽制备中 的研究[J].食品工业科技,2009(2):94-96; [5]曹玉华,汪海峰,杨慧萍等. 应用固定化木瓜蛋白酶制备 大豆肽的研究[J].中国粮油报,2009,24(3):113-116; [6]钱磊,张业尼,唐翔宇等.双酶酶法制备大豆肽及其性质 研究[J].现代食品科技,2006,23(4):6-10
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大豆肽的加工工艺 合成法 合成法国内刚处于研究阶段，采用液相或固相化 学合成法制取活性肽，但成本高，副反应物及残 留化合物多等因素制约其发展 基因重组法是采用 DNA重组技术来制取活性肽，但此实验尚在研究 中，还没有进入工业生产阶段
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大豆肽提取工艺