尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylase ,UGP)试剂盒说明书
2024年研究生考试考研植物生理学与生物化学(414)试卷及解答参考
2024年研究生考试考研植物生理学与生物化学(414)复习试卷(答案在后面)一、选择题（植物生理学部分，10题，每题2分，总分20分）1、下列关于光合作用中光反应的描述，错误的是：A、光反应发生在叶绿体的类囊体膜上B、光反应需要光能将ADP和无机磷（Pi）合成ATPC、光反应不涉及氧气的产生D、光反应通过水的光解产生ATP和NADPH2、在植物生物化学中，下列哪种酶通常参与蛋白质的合成？A、RNA聚合酶B、DNA聚合酶C、转氨酶D、核糖体3、以下关于植物激素的描述，正确的是：A、赤霉素的作用是促进细胞伸长，抑制种子萌发B、脱落酸的作用是促进果实成熟，抑制植物生长C、生长素的作用是促进细胞分裂，抑制细胞伸长D、细胞分裂素的作用是促进细胞伸长，抑制叶绿素合成4、下列哪种物质不是植物激素？A. 赤霉素B. 细胞分裂素C. 生长素D. 叶绿素5、在植物细胞壁合成过程中，下列哪种酶起到关键作用？A. 淀粉合酶B. 纤维素合酶C. ATP合成酶D. 氧化还原酶6、下列哪种代谢途径与植物对逆境的适应无关？A. 脱水素的合成B. 抗冻蛋白的表达C. 脂肪酸的β-氧化D. 热激蛋白的产生7、植物光合作用中，叶绿体类囊体薄膜上的光反应主要产生以下哪种物质？A、ATPB、NADPHC、CO2D、O28、在植物生物化学中，以下哪个化合物不属于植物体内的初级代谢产物？A、葡萄糖B、氨基酸C、脂肪酸D、叶绿素9、以下哪种酶催化植物细胞壁的合成？A、纤维素酶B、果胶酶C、半乳糖醛酸酶D、尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶10、下列哪种物质在植物细胞内作为第二信使参与信号转导过程？A、cAMPB、RNAC、ATPD、DNA二、实验题（植物生理学部分，总分13分）题目：请设计一个实验方案，以探究植物光合作用过程中光合产物分配对植物生长的影响。
实验材料为同种植物的不同品种（品种A和品种B），实验条件为光照、温度、水分等均适宜。
实验步骤：1.将品种A和品种B的植物幼苗种植在相同的培养箱中，保证光照、温度、水分等条件一致。
过表达尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因及其重组大肠杆菌的构建方法和纯化方法[发明专利]
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专利名称：过表达尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因及其重组大肠杆菌的构建方法和纯化方法
专利类型：发明专利
发明人：彭刘杨,曾小群,潘道东,王刚,吴爱娟,吴振,曹锦轩,孙杨赢
申请号：CN201611115942.X
申请日：20161207
公开号：CN106701802A
公开日：
20170524
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明公开了过表达尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因及其重组大肠杆菌PLY127‑2的构建方法和纯化方法，特点是通过克隆嗜酸乳杆菌ATCC4356的UGPase基因LBA0625片段连接到
pET‑28a表达载体上，转化至大肠杆菌BL21（DE3）中，通过红霉素抗性筛选并鉴定获得带有目的基因的重组菌，即过表达尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶基因的重组大肠杆菌，对重组大肠杆菌进行诱导后，并利用Ni‑NTA琼脂糖亲和层析成功纯化出UGPase，优点是诱导后的UGPase酶活为
456.14IU/L，是对照组的2.34倍，获得的UGPase的活性回收率为53.55%，蛋白纯化倍数为12.96倍。
申请人：宁波大学
地址：315211 浙江省宁波市江北区风华路818号
国籍：CN
代理机构：宁波奥圣专利代理事务所(普通合伙)
代理人：何仲
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udpg是什么物质
udpg是什么物质
udpg是葡萄糖的活化形式，udpg分子中葡萄糖基上的C1原子，因其羟基与udp的磷酸基团形成酯键而活化，生物化学名是尿苷二磷酸葡萄糖。
二磷酸尿苷葡糖（uridine diphosphate glucose），一般简称udp-葡萄糖或udpg等。
系广泛分布于微生物、动植物细胞内的核苷酸糖的一种，在udp-葡萄糖焦磷酸化酶的作用下由utp和1-磷酸－α－D-葡糖生物合成。
【扩展知识】
udpg中文名:尿苷二磷酸葡萄糖。
udpg的生理意义:是合成糖原葡萄糖基的直接供体。
udpg:高能态的udpg可容易的将其糖基供给糖原的合成。
在许多双糖和多糖的合成中，udpg都起着糖基供体的作用。
如体内充作葡萄糖供体。
最后在糖原合酶(glycogen synthase)作用下，udpg的葡萄糖基转移给糖原引(primer)的糖链末端，形成α-1,4糖苷键。
26糖原的分解与合成
糖尿病(Diabetes mellitus)
Insulin缺乏或其受体异常，不能对抗 由肾上腺素、胰高血糖素、肾上腺皮质 激素等引起的血糖升高作用，产生高血 糖和糖尿。病人的代谢发生障碍，机体 供能不足，表现出典型的多饮、多食、 多尿及体重减少的“三多一少”症状。 严重时还伴随酮血症及酸中毒。
三、糖原的分解
糖原分解需要三种酶参与，即糖原磷酸化酶 （glycogen phosphorylase)，糖原脱支酶(glycogen debranching enzyme)和磷酸葡萄糖变位酶 (phosphoglucomutase)。分步反应：
（1）从糖链的非还原端开始
磷酸化酶
糖原(Gn)+ H3PO4
分步反应：
（1） G
G-1-P
HO CH2
H
H
OH OH
H
ATP ADP P O CH2
O H
H
H
H OH
Mg+
OH OH
OH 葡萄糖激酶
H
HO CH2
O H
H OH
HH
OH OH
OH 磷酸葡萄 H
O H
H OP
OH
G
G-6-P 糖转位酶 G-1-P
（2）尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）的合成
UDPG焦磷 酸化酶
+
G
② G-1-P
磷酸葡萄糖 转位酶
G-6-P
葡萄糖-6-磷酸
酶（肝、肾）
③ G-6-P
G + H3PO4
葡萄糖-6-磷酸酶只存在于肝、肾中，而不存在于肌肉 中，所以只有肝和肾可补充血糖，而肌糖原不能分解为葡 萄糖，不能补充血糖，只能进行糖酵解或有氧氧化。
《兴安落叶松尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶促进转基因植物营养生长的分子机理》范文
《兴安落叶松尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶促进转基因植物营养生长的分子机理》篇一一、引言在生物技术的不断发展下，基因工程技术被广泛地运用于农业生产中，用以改善植物的产量和品质。
作为重要的研究内容之一，探究基因表达产物对植物生长的分子机理，对于提高农作物的生产效率和品质具有重要价值。
本文以兴安落叶松尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UFGPP）为研究对象，探讨其促进转基因植物营养生长的分子机理。
二、兴安落叶松尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UFGPP）简介兴安落叶松尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UFGPP）是一种重要的酶类，参与植物体内糖代谢过程。
该酶能够催化尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）与焦磷酸（PPi）反应生成尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸（UDPG-PPi），这一过程对于植物的生长和发育具有重要意义。
近年来，UFGPP被广泛应用于转基因植物的研究中，以提高植物的抗逆性、抗病性以及生长速度等。
三、UFGPP促进转基因植物营养生长的分子机理1. 增强光合作用与糖代谢UFGPP通过催化糖代谢过程，增加植物细胞内糖的含量，进而提高光合作用的效率。
这有利于植物对养分的吸收和利用，促进其营养生长。
此外，UDPG-PPi在细胞内的积累也可能通过信号转导等途径影响植物的生长调节过程。
2. 调控基因表达UFGPP的过量表达可能影响其他相关基因的表达水平，从而影响植物的生长和发育。
例如，UFGPP的过量表达可能激活或抑制某些与植物生长相关的基因的表达，进而影响植物的生长速度和品质。
此外，UFGPP的过量表达还可能影响植物激素的合成和信号转导过程，从而对植物的生长产生调节作用。
3. 改善营养分配与转运UFGPP的过量表达可能改善植物的营养分配和转运过程。
通过提高糖的合成和转运效率，使植物能够更好地分配养分，满足不同部位生长发育的需要。
这有助于提高植物的抗逆性和适应性，使其在恶劣环境下仍能保持良好的生长状态。
四、结论兴安落叶松尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UFGPP）在转基因植物中发挥了重要的促进作用。
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(UDP-glucose pyrophosphosphprylase ,UGP )试剂盒说明书
货号：MS3603-100 规格：100管/96样尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucosepyrophosphosphprylase ，UGP ）试剂盒说明书微量法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：UDPG焦磷酸化酶是生物体糖原合成过程中的关键酶。
在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖（UDPG）。
测定原理：UGP可逆催化反应生成1磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH，340nm的吸光值增加速率反映了UGP活性。
自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板试剂组成和配制：提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。
临用前加2mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存。
临用前加2mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存。
临用前加2mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后 -20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：液体2mL×1瓶，4℃保存。
酶液提取：1.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
3.液体：直接检测。
udp-葡萄糖焦磷酸化酶催化的反应
udp-葡萄糖焦磷酸化酶催化的反应UDP-葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose pyrophosphorylase）催化的反应是一种重要的生物化学过程，对细胞代谢和能量产生起着关键作用。
本文将对该反应的机制、功能以及相关的研究进展进行探讨。
葡萄糖焦磷酸化酶是一种催化酶，它能够将葡萄糖-1-磷酸和UDP （尿苷二磷酸葡萄糖）结合，形成葡萄糖-1-磷酸和PPi（焦磷酸二酯）。
该反应是一种重要的代谢途径，参与合成多种生物大分子，如淀粉、葡聚糖和壁聚糖等。
此外，该反应还能产生能量，在细胞代谢中扮演重要角色。
UDP-葡萄糖焦磷酸化酶的催化机制是一个复杂的过程。
首先，酶与底物UDP和葡萄糖-1-磷酸结合，形成酶-底物复合物。
然后，在酶的催化下，UDP的α-磷酸基团与葡萄糖-1-磷酸的羟基发生亲核攻击，形成磷酸二酯键。
最后，产物葡萄糖-1-磷酸和PPi从酶中释放出来，完成催化反应。
UDP-葡萄糖焦磷酸化酶的催化反应在生物体内具有广泛的功能。
首先，它参与细胞能量代谢，通过产生PPi释放能量，为细胞提供所需的ATP。
其次，该反应在植物中参与淀粉和葡聚糖的合成，对植物的生长和发育至关重要。
此外，在细菌和真菌中，该反应还参与合成细胞壁聚糖，维持细胞结构和稳定性。
近年来，对UDP-葡萄糖焦磷酸化酶的研究取得了一系列重要进展。
研究人员通过利用生物化学和分子生物学技术，成功克隆和表达了多个来源的该酶基因，并对其结构和功能进行了深入研究。
此外，研究人员还通过遗传学和转基因技术手段，对该酶在植物和微生物中的作用进行了进一步验证。
总结起来，UDP-葡萄糖焦磷酸化酶催化的反应在细胞代谢和能量产生中起着重要作用。
该反应通过合成生物大分子和产生能量，对维持细胞结构和功能至关重要。
近年来，对该酶的研究进展使我们对其机制和功能有了更深入的理解。
随着科学技术的不断发展，相信对UDP-葡萄糖焦磷酸化酶的研究将进一步推进，为生物医学和农业领域的应用提供新的思路和方法。
UDPG焦磷酸化酶检测
迪信泰检测平台
UDPG焦磷酸化酶检测
UDPG焦磷酸化酶（UDP-Glucosepyro Phosphosphprylase），是生物体糖原合成过程中的关键酶。
在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖（UDPG）。
UDPG焦磷酸化酶可逆催化反应生成1磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH，340nm 的吸光值增加速率反映了UDPG焦磷酸化酶活性。
迪信泰检测平台采用生化的方法检测糖原系列物质，结合相应的试剂盒，可高效、精准的检测UDPG焦磷酸化酶的活性变化。
此外，我们还提供其他糖原类的检测服务，以满足您的不同需求。
生化法测定UDPG焦磷酸化酶样本要求：
1. 请确保样本量大于0.2g或者0.2mL。
周期：2~3周。
项目结束后迪信泰检测平台将会提供详细中英文双语技术报告，报告包括：
1. 实验步骤（中英文）。
2. 相关参数（中英文）。
3. 图片。
4. 原始数据。
5. UDPG焦磷酸化酶含量/活性信息。
迪信泰检测平台可根据需求定制其他物质测定方案，具体可免费咨询技术支持。
生物化学 第13章 糖原代谢和糖异生作用
贮存糖原的动用(主要发生在肝脏中)可以为脑和红细胞 提供对葡萄糖部分需要。当进食之后葡萄糖很丰富时，葡萄糖便 会很快地以糖原的形式贮存起来。然而，肝脏贮存糖原的能力仅 能满足脑每日对葡萄糖的一半的需要。在禁食的条件下，机体所
需的大部分葡萄糖则通过葡萄糖的异生作用从非糖前体(例如氨基
糖原合酶催化糖原合成 UDP-葡萄糖的生成具备了将糖基转移用
于糖原合成的条件。在糖原合酶(glycogen
synthase)的催化下，UDP-葡萄糖的糖基被转移到 分子较小的糖原(作为引物)的非还原性末端C-4– OH上，形成α-1,4-糖苷键：
UDP-葡萄糖 ＋ 糖原(n个葡萄糖残基) →
UDP ＋ 糖原(n ＋ 1个葡萄糖基)
酸化酶b和有活性的磷酸化酶a。 1959年，E.Krebs和E.Fischer证实这种转换
涉及到磷酸化的共价修饰机制。
糖原磷酸化酶的共价修饰部位是每个亚基
第14位Ser残基。在Ser14被磷酸化酶激酶(一种转
换酶)催化而磷酸化时，糖原磷酸化酶由低活性的 b形式转变成有活性的a形式。
糖原磷酸化酶的活性变化是由于Ser14残基的
二
糖原合成酶催化糖原合成 UDP-葡萄糖的生成具备了将糖基转移用于糖
原合成的条件。在糖原合酶(glycogen synthase)的
催化下，UDP-葡萄糖的糖基被转移到分子较小的糖原 (作为引物)的非还原性末端C-4–OH上，形成α-1,4糖苷键：
UDP-葡萄糖 ＋ 糖原(n个葡萄糖残基) →
UDP ＋ 糖原(n ＋ 1个葡萄糖基)
一.
糖原磷酸化酶和糖原合酶的别构调节
糖原磷酸化酶可被AMP别构激活，而ATP和葡萄糖-
植物中的糖代谢及其相关酶_罗玉[1]
![植物中的糖代谢及其相关酶_罗玉[1]](https://img.taocdn.com/s3/m/91643bfdb8f67c1cfad6b8a1.png)
植物中的糖代谢及其相关酶罗 玉X (文山师范高等专科学校生化系,云南文山663000)=摘要> 概述了糖在植物代谢、生长、发育中的作用,总结了糖代谢相关反应及相关的酶:如尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶、蔗糖磷酸合成酶、蔗糖合成酶、转化酶、己糖激酶的亚细胞定位,酶学特性。
论述了通过转基因等手段探知的这些相关酶的生物学作用。
=关键词> 糖代谢;尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶;转化酶;己糖激酶=中图分类号>Q493.4 =文献标识码>A =文章编号>1671-3303(2004)02-00155-05糖在植物的代谢、生长、发育上是一个重要的、多重的角色。
糖是光合作用的产物,又是呼吸作用的底物,它为植物的生长发育提供碳骨架和能量,并能增强植物抗逆性。
糖的代谢是整个生物代谢的中心,它勾通了蛋白质代谢、脂类代谢、核酸代谢及次生物质代谢。
糖类的合成与分解影响细胞及溶液的渗透势,渗透势的变化是氧份运输的动力之一,它会影响糖分的运输;渗透势变化会影响水势及水份的流动,从而影响气孔开闭、花药裂开等活动;渗透势的变化影响植物抗协迫环境的能力。
糖类的运输及分配勾通了源器官和库器官。
叶片光合作用合成的糖分,通过韧皮部的装载运到库端,卸载进入库细胞,为库的生长提供氧分。
如花粉管的萌发、果实、种子的膨大与成熟。
块根、块茎的膨大生长。
如果增大源端的装载能力和库端卸载能力,将有更多的光合产物合成并输出进入库组织。
这将大大增加作物的产量,对农业生产上很有意义。
糖类的代谢及运输分配还会影响进入库细胞的糖及库细胞贮存的糖的形式,从而对作物及果蔬的品质产生影响,对中药材的有效成份含量产生影响。
例如水果中所含糖份的种类及比例是决定水果品质、风味的主要因素。
马铃薯块茎中非还原糖含量的高低,决定薯块加工品质的好坏。
多糖常是中药材中的有效成分,黄芪总多糖含量受糖代谢调控。
近年来,糖在植物中的作用最引人关注的方面是糖的信号功能。
抗尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶2单克隆抗体的制备与鉴定
抗尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶2单克隆抗体的制备与鉴定王婉，高媛，杨金菊，柳晓兰，鞠艳芳，刘莉，陈志成刘蓉，迟俊，邢维贤，高建恩，安立国，孙启鸿【摘要】本研究制备抗人尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶2（UDP glucose pyrophosphorylase 2）的单克隆抗体（mAb）并进行初步鉴定。
将正常成人肝组织匀浆离心并分离肝脏胞浆总蛋白，用肝脏胞浆总蛋白免疫BALB/c小鼠，采纳杂交瘤技术制备单克隆抗体，通过间接ELISA法、Western blot及免疫组织化学的方式对单克隆抗体进行特性鉴定，通过Uni ZAP XR肝脏cDNA表达文库挑选鉴定抗体特异性。
结果说明：通过间接ELISA挑选取得1株可稳固分泌抗人UGP2 mAb 的杂交瘤细胞系BAD062，其分泌的单克隆抗体的Ig亚类(型)为IgG2b (κ)，Western blot 结果显示该抗体能够特异地识别分子量为56 kD的蛋白；应用单克隆抗体BAD062对人肝脏cDNA表达文库（Uni ZAP XR）进行挑选，阳性噬菌斑测序结果显示2个阳性克隆插入序列均为UGP2。
结论：单克隆抗体BAD062特异地识别抗原UGP2，该抗体可用于ELISA检测、Western blot、免疫组织化学实验，为UGP2的研究提供了有力的工具。
【关键词】尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶 2 单克隆抗体 cDNA 表达文库Preparation and Identification of Monoclonal Antibody AgainstAbstract The study was aimed to generate monoclonal antibodies (mAbs) against homo sapiens UDP glucose pyrophosphorylase 2 (UGP2). Normal human liver tissues homogenized, and cytosolic proteins isolated by centrifugation were used to immunize BALB/c mice to generate mAbs by hybridoma technique. The mAbs were identified by ELISA, Western blot, and immunohistochemistry assay. The antibody specificity was confirmed by Uni ZAP expression library screening. The results indicated that one hybridoma BAD062 secreting specific mAb against UGP2 was established. The Ig subclass of this mAb was IgG2b (κ), and it could be used in ELISA, Western blot, immunohistochemistry assay. The antigen recognized by BAD062 mAb was localized in the hepatocyte cytoplasm, with molecular weight of 56 kD in the cytosolic proteins of human liver tissue. The BAD062 mAb was further confirmed by immunoscreening of Uni ZAP XR liver cDNA expression library. It is concluded thata hybridoma cell line stably secretes specific mAb against UGP2. This mAb reacted with UGP2 in ELISA, Western blot, immunohistochemistry assay, and would be very useful for the UGP2 studies.Key words UGP2; mAb; cDNA expression library尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶2（UDP glucose pyrophosphorylase2, UGP2）是糖原生物合成进程中的一种酶，由508个氨基酸组成，相对分子质量（Mr）约为56 000，催化UTP与葡萄糖1P的反映, 生成UDP葡萄糖。
UDPG焦磷酸化酶(UGP)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法
UDPG焦磷酸化酶（UGP）活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
货号:BC3360规格:50T/48S产品简介：尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UDP-glucose pyrophosphosphprylase，UGP，EC 2.7.7.9）在自然界广泛分布。
在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖（UDPG），UDPG是高等植物和动物中主要活化酶的形式，作为葡萄糖基供体参与糖原、蔗糖、纤维素等的合成代谢。
UGP可逆的催化生成1-磷酸葡萄糖，其在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH，UGP活性可以用340nm的吸光值的变化来反应。
试验中所需的仪器和试剂：紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
产品内容：提取液：液体55mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×2瓶，-20℃避光保存。
临用前加15mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，-20℃保存2周。
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存。
临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后4℃保存，禁止反复冻融，4℃保存1周。
试剂三：粉剂×1支，-20℃避光保存。
临用前加1.4mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，-20℃保存2周。
试剂四：粉剂×2支，-20℃避光保存。
临用前每支加1mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融，-20℃保存2周。
试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保存。
试剂六：液体15mL×1瓶，4℃保存。
操作步骤：一、粗酶液提取：组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行冰浴匀浆，然后，10000g，4℃，离心10min。
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货号: QS3603 规格：50管/48样
尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶
（UDP-glucose pyrophosphosphprylase ，UGP）试剂盒说明书
紫外分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义：
UDPG焦磷酸化酶是生物体糖原合成过程中的关键酶。
在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，将1-磷酸葡萄糖与UTP分子合成为UDP-葡萄糖（UDPG）。
测定原理：
UGP可逆催化反应生成1磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶作用下将NADP转化为NADPH，340nm的吸光值增加速率反映了UGP活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、研钵、紫外分光光度计、1 mL石英比色皿。
试剂组成和配制：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体25mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加5mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加5 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂四：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。
临用前加5 mL蒸馏水充分溶解；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。
试剂五：液体5mL×1瓶，4℃保存。
酶液提取：
1.组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提
取液）加入提取液，冰浴匀浆后于4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
2.细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细
胞加入1mL提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；
然后4℃，10000g离心10min，取上清置冰上待测。
3.液体：直接检测。
测定操作：
1.分光光度计预热30min，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2.取1mL石英比色皿，依次加入500μL试剂一，100μL试剂二，100μL试剂三，100μL试
剂四，100μL试剂五，100μL粗酶液，充分混匀，记录340nm处30s的吸光值A1和330s 的吸光值A2，△A=A2-A1
计算公式：
（1）按照样本蛋白浓度计算
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酶活单位定义：每毫克组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA÷（ε×d）×V反总×109]÷(V样×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
（2）按照样本质量计算
酶活单位定义：每克组织每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min /g 鲜重）＝[ΔA÷（ε×d）×V反总×109]÷(W ×V样÷V样总) ÷T=321.54×ΔA÷W
（3）按照细胞数量计算
酶活单位定义：每104个细胞每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min /104 cell）= [ΔA÷（ε×d）×V反总×109]÷(500×V样÷V样总) ÷T =0.643×ΔA
（4）按照液体体积计算
酶活单位定义：每毫升液体每分钟消耗1 nmol的NADP定义为一个酶活力单位。
UGP（nmol/min/mL）＝[ΔA÷（ε×d）×V反总×109]÷V样÷T=321.54×ΔA
V反总：反应体系总体积，1×10-3 L；ε：NADPH摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V样：加入样本体积，0.1mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g ；500：细胞或细菌总数，500万。
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