鹿流行性出血病病毒高通量液相芯片检测方法的建立
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力 ； 测 样 本 量 需 求 少 ， 通 过 液 相 荧 光 编 码 微 球 芯 检 可
Ｐ ＣＲ Ａｍｐ ｉ ｃ ｔ ｎ Ｋｉ 和 ＤＮＡ ｒ ｇ ｎ ｕ ｉ ｅ — ｌ ｉａ ｉ ｔ ｆ ｏ Ｆ ａ ｍｅ ｔｐ ｒｆ ａ ｉ
Baidu Nhomakorabea
ｔ ｎ ｋｔ ２ ０ 为 宝 生 物工 程 （ ｉ ｉ（ 。 ） ｏ 大连 ） 限公 司产 品 ， 有
究较 少ｒ］ ２ 。虽 然 我 国 目 前 还 没 有 Ｅ 。 ＨＤ 发 生 ， 是 但
ＶＰ ７基 因的质粒 Ｐ — Ｔ Ｖ ７ 水 疱 性 口炎 病毒 ＭＴ Ｂ Ｖ— Ｐ 、
（ Ｖ） ＮＰ 基 因 质 粒 Ｐ ＶＳ 的 ＭＴ —ＶＳ Ｎ ＥＨＤ 的 Ｖ— Ｐ、 Ｖ
ＶＰ ７基 因 质 粒 Ｐ — ＭＴ ＥＨＤ ＶＰ 、 卡 斑 病 毒 Ｖ— ７ 阿 （ ＡＫＶ） Ｎ 基 因质 粒 Ｐ 的 ＭＴ ＡＫＶ Ｎ 和西 尼罗病 毒 — — （ ＨＤ 的 Ｅ基 因质粒 Ｐ — ＨＤ — 由深圳 出入 Ｅ Ｖ） ＭＴ Ｅ ＶＥ 境检验 检疫局 动植物 中心动 检实验 室 （ 下为本 室 ） 构 建 ， 有质粒 的菌株 由本 室保 存 。Ｅ Ｖ 由本 室保 带 ＨＤ 存， 所有样 品为进 口冻 品 。
Ｐ ｔ与 ＥＺ ｒ ｓ ｍｉｉＫｉ ． ＣＲ Ｋｉ １ Ｖｉｕ ｎ ｔ ０为 Ｑｉｇ ｎ公 司 ２ ａｅ 产 品 ；Ｅ ＤＣ （ （ － ｉ ｔ ｙａ ｎ ｐ ｏ ｙ ）Ｎ～ ｔ ｙ— Ｎ一 ３ ｄｍｅｈ ｌｍｉｏ ｒ ｐ １ 一 ｅｈ ｌ
动 物 医 学 进 展 ，０ ０ ３ （ ） ３ —０ ２ １ ， １２ ：６４
Ｐｒ ｇｒ ｓ ｎ Ｖ ｅ ｅ ｉ ａ ｙ Ｍ ｅ ｃ ｎ ｏ ｅ ｓｉ ｔ ｒｎ ｒ ｄｉｉ ｅ
鹿 流行 性 出血 病 病 毒 高通 量 液 相芯 片 检 测 方 法 的建立
詹 爱 军 ， 新 卫。 陈书 琨 孙 洁 陈 兵 阮 周 曦 花群 义 王 ， ， ， ， ，
（． 圳 出入 境 检 验 检 疫局 动 植 物 检 验 检疫 技 术 中心 ， 东 深圳 ５８ １ ； ． 南农 业 大学 牧 医工 程 学 院 ， 南 郑州 ４ ０ ０ ） １深 Ｊ 。 １０ ０ ２ 河 河 ５０ ２
摘 要 ： 为建 立可检测 鹿 流行 性 出血 病病 毒 （ ＨＤＶ） Ｅ 的液 相 芯 片快 速检 测 技 术 ， Ｄ ｔｒ 件 对 用 ＮＡ Ｓａ 软
ｚｏｉ ｈ ｍｏｒ ａ ｉ ｄｓａｅ ｉ ｓ ｆ ｅｒ Ｅ ｏ ｔ ｅ ｒｈ ｇｃ ｉ ｓ ｒ ｅ ， ＨＤＶ） ｃ ｅ ｖ ｕ ｏｄ 引
采用 Ｐ Ｒ检测 方法 与液相 芯 片检测技 术结合 ， Ｃ 初步 建立 Ｅ ＨＤＶ 液 相芯 片 快速 检 测 方法 ， 快速 、 为 高通
关键 词 ： 流行 性 出血 病痛毒 ； 液相芯 片 ； 测 检
中 图分 类 号 ：８ ８ ２ ； ８ ２ ６ ￥ ５ ．５ ￥ ５ ． ５ 文 献 标识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ７５ ３ （ ０ ０ ０ — ０ ６０ １ ０ —０ ８ ２ １ ） ２ ０ ３ — ５
鹿 流行 性 出 血 病 （ ｐｚ ｏｉ ｈ ｍｏｒ ａ ｉ ｄｓ Ｅ ｉ ｔ ｅ ｒｈ ｇｃ ｉ ｏ ｃ － ｅｓ ｆ ｅ ｒ Ｅ ａｅｏ ｅ ， ＨＤ） 由鹿流行 性 出血病病 毒 （ ｐ～ ｄ 是 Ｅｉ
Ｇｅ Ｂ ｎ ｎ ａ ｋ中 ＥＨＤ 的 ＶＰ Ｖ ７基 因进行序 列分析 ， 计 Ｅ Ｖ 特 异性 探针 并 用 生物 素标 记 ， 荧光编码 微球 设 ＨＤ 与
偶联 后与病毒 ＶＰ 基 因 的 Ｐ Ｒ 产 物 杂 交反 应 ， ７ Ｃ 用液 相 芯 片检 测仪 （ ｉｕｃ ｉ ２ ０ 检 测 荧光 信 号 建 立 了 Ｌｑ ｉ ｐ ０ ） ｈ
Ｍ ｉ ＢＥＳＴ Ｐｌ ｓ ｄ ｎｉ ａ ｍｉ Ｐｕ ｉｉ ａ ｉ ｎ ｒｆｃ ｔｏ Ｋｉ ｔ（２ ．０）、
由于 Ｅ ＨＤ 已存 在 于周 边 国 家 （ 日本 、 鲜 ）ｔ Ｖ 如 朝 ［， Ｊ
有传 人我 国的风险 ， 因此应 加强监 测 。
液相芯片检 测技术是 一个全新 的 快速 高通量 检 测技术 ， 该技术 集流 式 细 胞技 术 、 光 编码 微 球 、 荧 激 光、 数字信 号处理 和传 统 的生化 技 术 于一 体 ， 具 有 独特 的优 点 ， 过 高通 量 手段 可 降 低成 本 和 劳动 通
１ １ 材 料 ．
１ １ １ 质 粒 和 试 剂 带 有 蓝 舌 病 病 毒 （ ＴＶ） ．． Ｂ 的
尾鹿 中分离到 ， 随后加拿 大 、 日本 、 南非 、 大利亚 和 澳 尼 日利 亚都分 离 到 Ｅ ＨＤＶｌ 。由于此 病 危 害较 大 ， ＿ ２ ］ 严重影 响着许 多 国家 的畜 牧业 和 国际 贸易 的 发 展 ， 我 国已将 Ｅ ＨＤ列 为 二 类 传 染病 ， 国内对 此 病 研 但
Ｅ Ｖ 快速 高通 量液相芯 片检 测方 法。检测 结果显 示 ， ＨＤ 该法具 有较好 的特 异性 ， 不与 其他 虫媒病 病毒 反应 ；
检 测灵敏度 为 １ ０个 Ｔ Ｉ ５。建 立 了快速检 测 ＥＨＤ 的液相 芯片技 术 ， ０ ＣＤｏ Ｖ 为进 一步搭 建 Ｅ ＨＤＶ 快速 高通量
检 测 平 台奠 定 了基 础 。
量检测 Ｅ ＨＤ提 供 了技术 储备 。
起的， 以自尾 鹿体温 升高 、 黏膜 和浆膜 面广泛 出血并
常处于 昏迷 状 态 下 死 亡 为 特 征 的 严重 致 死 性 虫 媒
病 。Ｅ Ｖ 于 １ ５ ］ ＨＤ ９ ５年 首 次 在 美 国 新 泽 西 州 的 白
１ 材 料 与 方法
Ｑｉｇ ｎ Ｖｉａ ａ ｅ ｒ ｌＲＮＡ ｉｉＫｉ、 ａ ｅ ｅ ｔｐ ＲＴ— Ｍ ｎ ｔ Ｑｉｇ ｎ Ｏｎ Ｓ ｅ
片 的方 法 ， 自然 的液相 反应条件 下缩 短检 测 时间 ； 在 相对于 固相平板芯 片 ， 液相 反应动 力学 反应更 快 速 ， 重复性更好 ； １种 ～ １０种灵 活 多 重检 测 ， 足 多种 ０ 满
Ｐ ＣＲ Ａｍｐ ｉ ｃ ｔ ｎ Ｋｉ 和 ＤＮＡ ｒ ｇ ｎ ｕ ｉ ｅ — ｌ ｉａ ｉ ｔ ｆ ｏ Ｆ ａ ｍｅ ｔｐ ｒｆ ａ ｉ
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鹿 流行 性 出血 病 病 毒 高通 量 液 相芯 片 检 测 方 法 的建立
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中 图分 类 号 ：８ ８ ２ ； ８ ２ ６ ￥ ５ ．５ ￥ ５ ． ５ 文 献 标识 码 ： Ａ 文 章 编 号 ：０ ７５ ３ （ ０ ０ ０ — ０ ６０ １ ０ —０ ８ ２ １ ） ２ ０ ３ — ５
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液相芯片检 测技术是 一个全新 的 快速 高通量 检 测技术 ， 该技术 集流 式 细 胞技 术 、 光 编码 微 球 、 荧 激 光、 数字信 号处理 和传 统 的生化 技 术 于一 体 ， 具 有 独特 的优 点 ， 过 高通 量 手段 可 降 低成 本 和 劳动 通
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Ｅ Ｖ 快速 高通 量液相芯 片检 测方 法。检测 结果显 示 ， ＨＤ 该法具 有较好 的特 异性 ， 不与 其他 虫媒病 病毒 反应 ；
检 测灵敏度 为 １ ０个 Ｔ Ｉ ５。建 立 了快速检 测 ＥＨＤ 的液相 芯片技 术 ， ０ ＣＤｏ Ｖ 为进 一步搭 建 Ｅ ＨＤＶ 快速 高通量
检 测 平 台奠 定 了基 础 。
量检测 Ｅ ＨＤ提 供 了技术 储备 。
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