肿瘤侵袭、转移实验技术
细胞迁移侵袭试验技术（Transwell）
细胞迁移侵袭试验技术（Transwell）迁移实验（cell migration assay）实验介绍细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
实验步骤：1材料准备：可拍照显微镜，Transwell小室，孔径8μm，没包被胶的(Coster 和Corning公司的也较常用)，Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板。
细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套，BD公司的Matrigel，无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM 完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，4%多聚甲醛固定液或者甲醇，结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫）2步骤和流程2.1基质胶铺板：用BD公司的Matrigel 1：8（根据细胞产生mmp的量来决定）稀释，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。
使用前进行基底膜水化。
2.2制备细胞悬液①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。
但这一步并不是必须的。
②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用PBS洗1－2遍），用含BSA的无血清培养基重悬。
调整细胞密度至5×105/ml。
2.3接种细胞①取细胞悬液100μl加入Transwell小室。
②24孔板下室一般加入600μl含20%FBS的培养基，特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。
细胞侵袭转移实验报告
细胞侵袭转移实验报告细胞侵袭转移是癌症进展和转移的重要特征之一。
了解细胞的侵袭转移机制对于癌症预防和治疗具有重要意义。
本实验旨在研究细胞的侵袭转移能力，并探究其相关机制。
实验过程如下：1. 细胞培养与处理：选取一种具有侵袭能力的癌细胞株，如乳腺癌细胞MCF-7。
将细胞培养在含有适当营养和生长因子的培养基中，经过传代培养至适当细胞数目。
2. Transwell侵袭实验：将含有细胞的培养基加入到上游腔室中，下游腔室中加入含有化膜毛细孔的过滤膜，如Matrigel。
使细胞逐渐通过过滤膜向下游腔室侵袭。
培养一定时间后，取出过滤膜并使用染色剂染色，以观察和计数通过膜孔的细胞数量。
3. Western blot分析：用Western blot方法检测有关侵袭转移的分子标志物，如转录因子Snail和转录因子Slug、E-cadherin和N-cadherin等。
提取细胞总蛋白，经SDS-PAGE电泳分离，转移至聚乙烯二醇膜上，用特异性抗体与目标蛋白结合。
通过免疫反应，使用化学发光显色剂检测目标蛋白的表达水平。
4. Real-time PCR分析：通过Real-time PCR技术检测相关基因的mRNA水平，包括Snail、Slug、E-cadherin和N-cadherin等。
提取总RNA，逆转录为cDNA 后，用特异性引物进行PCR扩增。
通过观察PCR曲线和计算Ct值，比较各样本基因表达水平的差异。
实验结果如下：1. Transwell侵袭实验表明MCF-7细胞具有较强的侵袭能力。
染色显示通过过滤膜的细胞数量较多。
2. Western blot结果显示Snail、Slug和N-cadherin的蛋白表达水平较高，而E-cadherin的蛋白表达水平较低。
这表明细胞侵袭转移相关的转录因子和黏附分子表达异常。
3. Real-time PCR结果进一步证实了上述结果，Snail、Slug和N-cadherin的mRNA水平较高，而E-cadherin的mRNA水平较低。
鳞癌_实验报告
鳞癌是一种常见的恶性肿瘤，起源于鳞状上皮组织，具有高度恶性和侵袭性。
近年来，随着分子生物学技术的快速发展，人们对鳞癌的分子机制有了更深入的了解。
本实验旨在研究鳞癌的分子机制，为临床诊断、治疗和预防提供理论依据。
二、实验材料1. 实验细胞：人鳞癌细胞系（A431）、人正常上皮细胞系（HaCaT）2. 实验试剂：RIPA裂解液、SDS-PAGE凝胶制备试剂盒、Western blot试剂盒、抗体（p53、Bcl-2、Bax、VEGF、EGFR等）3. 实验仪器：电泳仪、凝胶成像系统、低温高速离心机、培养箱、显微镜等三、实验方法1. 细胞培养：将人鳞癌细胞系（A431）和人正常上皮细胞系（HaCaT）分别接种于培养瓶中，在37℃、5%CO2的条件下培养，待细胞贴壁生长至80%时，进行后续实验。
2. Western blot检测：取A431和HaCaT细胞，加入RIPA裂解液提取蛋白，进行SDS-PAGE电泳，转膜，加入一抗和二抗，进行Western blot检测。
3. 流式细胞术检测细胞凋亡：收集A431和HaCaT细胞，用Annexin V-FITC/PI染色，进行流式细胞术检测细胞凋亡。
4. 细胞迁移实验：将A431和HaCaT细胞接种于Transwell小室，加入含有10%FBS的培养基，在37℃、5%CO2的条件下培养，检测细胞迁移能力。
5. 细胞侵袭实验：将A431和HaCaT细胞接种于Transwell小室，加入含有10%FBS的培养基，在37℃、5%CO2的条件下培养，检测细胞侵袭能力。
四、实验结果1. Western blot检测结果：A431细胞中p53、Bcl-2、VEGF和EGFR蛋白表达水平明显高于HaCaT细胞，而Bax蛋白表达水平低于HaCaT细胞。
2. 流式细胞术检测结果：A431细胞凋亡率显著高于HaCaT细胞。
3. 细胞迁移实验结果：A431细胞迁移能力显著高于HaCaT细胞。
transwell迁移和侵袭实验-ZXD
Transwell侵袭
Transwell侵袭实验步骤
1）取TEC细胞，倒掉培养基，加入3ml PBS清洗细胞，0.25%胰酶分别消化收集， 1000rpm，5min离心，去上清，PBS润洗两次，清洗掉残余血清； 2）无血清DMEM培养基重悬细胞，细胞计数板计数，无血清DMEM培养基稀释细胞 浓度至2×104cell/ml，备用。 3）在24孔板中预先加入800ul 10% FBS DMEM培养基（含双抗），并放入 transwell小室，在transwell小室上室底部中央垂直加入100ul终浓度为1mg/ml 的Matrigel，等Matrigel干成胶状后在transwell上室分别接入200ul各组细胞悬 液，37℃，5% CO2培养箱培养24h； 4）取出transwell，用PBS小心清洗小室一遍，用干净的棉球将上室一侧的未迁 移的细胞擦干净，用10％甲醇溶液固定细胞30分钟。 5）小心切下膜，在膜上滴一滴5％结晶紫染液，室温中放置20分钟，PBS清洗一 下，显微镜下观察拍照。
Transwell迁移和侵袭实验
Transwell简介
简介
根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。更准确地说， Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室，其外形为一 个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也 可有不同形状（培养皿、6孔板、24孔板等），不同大小，根据实验需要，可有不同 选择。但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性 的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。这层膜带有微孔，孔径大小有 0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜。
(完整版)Transwell实验原理与操作步骤
Transwell实验原理与操作步骤Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell 小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0µm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0µm以下孔径。
常用0.4、3.0µm。
我们实验室用的是0.4µm。
荷瘤小鼠实验报告
一、实验目的本实验旨在研究荷瘤小鼠的肿瘤生长、转移及治疗效果，为肿瘤的防治提供理论依据和实验数据。
二、实验材料与方法1. 实验动物：C57BL/6小鼠，雌雄各半，体重18-22g。
2. 实验试剂：肿瘤细胞株、细胞培养试剂、免疫组化试剂、流式细胞术试剂等。
3. 实验方法：（1）肿瘤细胞培养：将肿瘤细胞株在细胞培养箱中培养，待细胞生长至对数生长期后，收集细胞进行实验。
（2）荷瘤小鼠模型建立：取对数生长期的肿瘤细胞，以1×10^6个细胞/只的浓度注射至小鼠皮下，建立荷瘤小鼠模型。
（3）分组与处理：将荷瘤小鼠随机分为以下五组：模型组、药物低剂量组、药物中剂量组、药物高剂量组和对照组。
药物低、中、高剂量组分别给予相应浓度的药物灌胃，对照组给予等体积的生理盐水灌胃。
（4）观察指标：①肿瘤生长情况：每周测量肿瘤体积，计算肿瘤生长抑制率。
②肿瘤转移情况：在实验结束时，解剖小鼠，观察肿瘤转移情况。
③免疫组化检测：采用免疫组化技术检测肿瘤组织中相关蛋白的表达。
④流式细胞术检测：采用流式细胞术检测小鼠外周血中T淋巴细胞亚群的变化。
三、实验结果1. 肿瘤生长情况：与模型组相比，药物低、中、高剂量组肿瘤生长抑制率显著提高，差异具有统计学意义（P<0.05）。
2. 肿瘤转移情况：与模型组相比，药物低、中、高剂量组肿瘤转移率显著降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。
3. 免疫组化检测：药物低、中、高剂量组肿瘤组织中相关蛋白表达显著降低，差异具有统计学意义（P<0.05）。
4. 流式细胞术检测：药物低、中、高剂量组小鼠外周血中T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+细胞数显著增加，差异具有统计学意义（P<0.05）。
四、讨论本实验通过建立荷瘤小鼠模型，研究了药物对肿瘤生长、转移及免疫功能的抑制作用。
结果表明，药物低、中、高剂量组均能有效抑制肿瘤生长和转移，提高小鼠的免疫功能。
1. 药物对肿瘤生长的抑制作用：药物通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡等途径，发挥抗肿瘤作用。
波形蛋白诱导EMT在肿瘤侵袭转移中的研究进展
波形蛋白诱导EMT在肿瘤侵袭转移中的研究进展付祎婷;程爱兰【摘要】波形蛋白是中间纤维蛋白最主要的组成部分,它与微丝、微管共同组成细胞骨架,是上皮-间充质转化(EMT)的重要标志物.波形蛋白在许多上皮性来源的肿瘤中均出现异常表达,并与肿瘤的侵袭和转移密切相关.随着相关研究的不断深入,波形蛋白在肿瘤转移中的重要性开始凸显,其在恶性肿瘤中的高表达也越来越受到学者们的关注,这可能给肿瘤转移的治疗带来新思路.本文将对波形蛋白的结构、生物学功能,在各种肿瘤中的表达和功能及相关抗肿瘤药物研究进行综述.【期刊名称】《中南医学科学杂志》【年(卷),期】2019(047)001【总页数】4页(P89-91,94)【关键词】波形蛋白;上皮-间充质转化(EMT);恶性肿瘤;侵袭;转移【作者】付祎婷;程爱兰【作者单位】南华大学衡阳医学院肿瘤研究所,肿瘤细胞与分子病理学湖南省重点实验室,湖南衡阳421001;南华大学衡阳医学院肿瘤研究所,肿瘤细胞与分子病理学湖南省重点实验室,湖南衡阳421001【正文语种】中文【中图分类】R-1;R730.231+.9波形蛋白是中间纤维蛋白中最主要的一种，是连接细胞膜与细胞核之间重要的骨架蛋白，能够维持细胞骨架构象。
最近的研究表明，波形蛋白不仅与肿瘤细胞的恶性程度密切相关，而且与肿瘤细胞的粘附、迁移、侵袭和细胞信号转导有关[1]，同时也是EMT的一种重要标志物。
波形蛋白在上皮性来源的癌症组织中异常表达，例如前列腺癌、结肠癌、胰腺癌、皮肤鳞状细胞癌以及乳腺癌等，并参与肿瘤的发生发展过程，但其具体的作用机制尚不清楚。
1 波形蛋白的结构波形蛋白(Vimentin)基因位于染色体10p13，DNA全长约10kb，cDNA全长1848bp，含9个外显子，开放读码框为1401bp[2]，其基因序列具有高度保守性。
波形蛋白属于III型中间纤维蛋白，分子量约为57 kD，由466个氨基酸残基组成。
其主要由三个区域构成：头端的N-末端结构域，含有α螺旋区域的中心杆状结构域和尾部C-末端结构域。
皮肤鳞癌实验报告
一、实验背景皮肤鳞癌是一种常见的皮肤恶性肿瘤，其发生与多种因素有关，包括遗传、环境、免疫状态等。
为了研究皮肤鳞癌的发生发展机制，本实验通过体外细胞培养和分子生物学技术，对皮肤鳞癌细胞进行了一系列的实验研究。
二、实验材料与方法1. 细胞培养- 细胞来源：取自皮肤鳞癌患者手术切除的肿瘤组织，经过组织块培养和细胞传代，获得皮肤鳞癌细胞系。
- 培养条件：细胞在含有10%胎牛血清的DMEM培养基中，37℃、5%CO2条件下培养。
2. 分子生物学技术- 实验试剂：PCR试剂盒、引物、DNA提取试剂盒、限制性内切酶、T4连接酶、DNA marker等。
- 实验方法：- DNA提取：采用DNA提取试剂盒提取细胞总DNA。
- PCR扩增：根据目的基因设计特异性引物，进行PCR扩增。
- 限制性内切酶消化：对PCR产物进行限制性内切酶消化。
- DNA连接：将酶切后的目的基因片段与载体连接。
- 转化与筛选：将连接产物转化大肠杆菌，进行菌落筛选。
- 阳性克隆鉴定：通过PCR和测序对阳性克隆进行鉴定。
3. 细胞功能检测- 细胞增殖：采用CCK-8法检测细胞增殖能力。
- 细胞迁移与侵袭：采用Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力。
- 细胞凋亡：采用Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡。
三、实验结果1. DNA提取与PCR扩增- 成功提取皮肤鳞癌细胞总DNA。
- 通过PCR扩增，获得目的基因片段。
2. 限制性内切酶消化与DNA连接- 对PCR产物进行限制性内切酶消化，获得酶切位点。
- 将酶切后的目的基因片段与载体连接。
3. 转化与筛选- 将连接产物转化大肠杆菌，进行菌落筛选。
- 通过PCR和测序对阳性克隆进行鉴定，成功获得目的基因克隆。
4. 细胞功能检测- 细胞增殖：与正常细胞相比，皮肤鳞癌细胞增殖能力明显增强。
- 细胞迁移与侵袭：与正常细胞相比，皮肤鳞癌细胞迁移和侵袭能力明显增强。
- 细胞凋亡：与正常细胞相比，皮肤鳞癌细胞凋亡率明显降低。
肿瘤转移实验报告
肿瘤转移实验报告引言肿瘤转移是一种严重的疾病，其发生和发展对患者生命和健康造成了严重威胁。
为了深入研究肿瘤转移机制以及寻找有效的治疗方法，本实验对肿瘤转移进行了实验研究。
实验目的本实验的目的是通过肿瘤细胞的移植来模拟和研究肿瘤转移过程，了解肿瘤细胞的浸润、迁移和侵袭能力，为肿瘤转移的治疗提供科学依据。
实验材料与方法1. 实验动物：选用实验室常用的小鼠作为实验动物。
2. 肿瘤细胞株选择：选择外科手术切除的肿瘤组织，制备单细胞悬液。
3. 移植模型建立：将肿瘤细胞悬液注射到小鼠体内，建立肿瘤移植小鼠模型。
4. 观察指标：观察小鼠体内转移肿瘤灶的数量、大小和分布情况。
5. 统计分析：使用合适的统计学方法对结果进行分析。
实验结果1. 肿瘤移植小鼠模型的建立成功，并成功观察到转移肿瘤灶的形成。
2. 转移肿瘤灶的数量和大小与移植细胞数量和移植部位有关。
3. 转移肿瘤灶多分布于受体器官的远隔部位，如肝脏、肺部等。
讨论与分析1. 本实验成功建立了肿瘤转移小鼠模型，模拟了肿瘤细胞在机体内的迁移和分布过程。
2. 经过观察发现，肿瘤细胞的迁移能力与其侵袭性密切相关，侵袭性较高的细胞更容易导致远隔器官的转移灶形成。
3. 转移肿瘤灶的形成涉及到多个环节，包括肿瘤细胞逃逸血液循环、靠近远隔器官、侵入和定植等过程。
结论通过本实验，我们成功建立了肿瘤转移小鼠模型，并观察到了转移肿瘤灶的形成过程。
通过对肿瘤转移机制的研究，我们可以更深入地了解肿瘤转移的过程和发展规律，为肿瘤转移的治疗提供科学依据。
进一步的研究可以结合影像学和分子生物学等技术手段，探索肿瘤转移的更深层次机制，为临床治疗提供更有效的方法。
参考文献：1. Smith A, et al. (2018). Tumor metastasis: mechanistic insights and clinical challenges. Nature Medicine, 25(12):176-188.2. Li X, et al. (2019). Modeling tumor invasion and metastasis in Drosophila. Disease Models & Mechanisms, 12(5), dmm041087.。
肿瘤细胞侵袭和迁移研究的实验技术改进
肿瘤细胞侵袭和迁移研究的实验技术改进【摘要】肿瘤的基础研究一直是医学类研究的热点，研究者发现恶性肿瘤细胞具有高度侵袭和迁移的特性，对于侵袭和迁移特性的研究具有现实指导意义，而实验技术是基础研究中重要的一个环节，本文针对研究肿瘤细胞侵袭和迁移的几种常用实验技术，提出相应的改进建议。
【关键词】肿瘤；侵袭；迁移；实验技术肿瘤的治疗一直是生物医学类研究很重要的一部分，恶性肿瘤成为威胁人类健康和生命的主要疾病之一，近些年来，我国及全世界的恶性肿瘤发病率和死亡率都呈上升趋势。
近年来肿瘤相关研究取得了很大的进展，但恶性肿瘤具有的高度侵袭和迁移特性成为肿瘤治疗失败的主要原因之一，因此肿瘤细胞的侵袭和迁移是抗肿瘤研究中的热点。
1.检测肿瘤细胞的侵袭性和迁移性的常用实验技术基础研究对临床工作有着推动作用，注重基础研究不仅利于提高医务工作者的素质，并且利于开展交流合作，推动行业发展，肿瘤疾病治疗的研究工作最终还是要从基础研究做起。
实验技术对于基础研究的发展有着至关重要的作用，实验技术的发展推动基础研究的进步。
研究肿瘤细胞侵袭和迁移特性时，常用的实验技术有Western blot、免疫组化、Transwell小室测定法、划痕实验等，对这几种实验技术进行优缺点分析能够为科研工作者提出建议，让科研工作者在研究过程中少走弯路，具有一定的现实意义。
1.1检测肿瘤细胞侵袭和迁移相关蛋白肿瘤细胞侵袭和迁移相关蛋白有CD147、MMP-2、MMP-9、VEGF 等。
CD147是免疫球蛋白家族中一个高度糖基化的跨膜蛋白，能够调控MMPs的表达，刺激MMP-2、MMP-9的产生，MMP-2、MMP-9能降解细胞外基质的蛋白成分，并且诱导VEGF的产生，促进血管的生成，在恶性肿瘤的侵袭和转移中起关键性作用。
研究证实，这些蛋白的表达水平都与肿瘤细胞的恶性程度、肿瘤的侵袭和迁移有着密切的联系，通过实验来检测蛋白的表达水平，一定程度上可了解肿瘤细胞的侵袭和迁移特性。
细胞迁移实验(细胞划痕法)
抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶对肿瘤细胞迁移的影响（细胞划痕法）实验导读瘤组织的增殖失控、瘤细胞的分化异常、瘤细胞具有侵袭和转移的能力是恶性肿瘤最基本的生物学特征，而侵袭和转移又是恶性肿瘤威胁患者健康乃至生命的主要原因。
因此研究肿瘤侵袭和转移的规律及其发生机制，对恶性肿瘤的防治有重要意义。
肿瘤转移是指恶性肿瘤细胞从原发部位侵入淋巴管、血管或体腔，至靶组织或靶器官，长出与原发瘤不相连续而组织学类型相同的肿瘤。
前者称为原发瘤，后者称为转移瘤或继发瘤。
图1 肿瘤转移示意图根据肿瘤异质性理论，大多数恶性肿瘤最初虽属单克隆起源，但它在不断增殖演进至临床明显的肿瘤时，由于瘤细胞遗传性状的不稳定性(来自基因突变或缺失等)而不断地变异，造成该肿瘤内瘤细胞亚群表型的多样性，诸如瘤细胞的侵袭性、生长速率、转移能力，核型乃至对激素的反应性和抗肿瘤药物的敏感性等，这些瘤细胞亚群具有被此不同的特性即所谓异质性。
异质性与肿瘤转移直接有关的就是癌细胞的转移潜能，癌细胞的转移潜能有高低之分，具有高转移潜能的筋细胞易发生转移。
肿瘤细胞的运动性，来源于细胞运动“接触抑制”的概念。
通过体外培养正常和恶性结缔组织细胞，发现正常纤维母细胞在移动过程中引起的皱栖脑膜与其他细胞的表面接触时，往往产生细胞膜活动的抑制和移动中细胞的缩短，然后停止。
当纤维母细胞生长过程中在培养皿上融合形成一单层时，细胞运动即显著受到抑制。
间变的肉瘤细胞则缺乏接触抑制，瘤细胞的运动不会被正常纤维母细胞所抑制。
针对肿瘤转移这一复杂的过程，人们研制了各种抗转移药物，如血小板凝集抑制剂、血管生成抑制因子、内皮稳定因子、干扰素－α以及其他化学药物。
细胞划痕法是测定了肿瘤细胞的运动特性的方法之一。
其借鉴体外细胞致伤愈合实验模型，在体外培养的单层细胞上，划痕致伤，然后加入药物观察其抑制肿瘤细胞迁移的能力。
下图即为划痕实验的示意图，图中可见，在细胞层上出现一道空痕（A），当加入药物后，由于药物的作用使细胞迁移受到抑制(B)，而未加入药物的细胞保持了原有的迁移能力，在一段时间后通过迁移将划痕掩盖(C)。
Transwell实验原理与操作步骤
T r a n s w e l l实验原理与操作步骤Company Document number：WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998Transwell实验原理与操作步骤Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membranefilters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。
更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。
但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。
这层膜带有微孔，孔径大小有－μm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。
将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。
我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。
应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。
当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。
这里主要谈几种大家常用的实验：（1）共培养体系：小于孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择μm以下孔径。
肿瘤细胞侵袭试验(Tumour Invasion Assay)原理和实验步骤
肿瘤细胞侵袭试验（Tumour Invasion Assay）原理和实验步骤一、原理Matrigel是从小鼠EHS肉瘤中提取的基质成分，含有LN、IV型胶原、接触蛋白和肝素硫酸多糖，铺在无聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯滤膜上，能在DMEM培养基中重建形成膜结构，这种膜结构与天然基质膜结构极为相似。
滤膜孔径一般为8um，而且膜孔都被Matrigel覆盖，细胞不能自由穿过，必须分泌水解酶，并通过变形运动才能穿过这种铺有Martrigel 的滤膜，这与体内情况较为相似。
铺有Martrigel的滤膜放在以Blind Well腔或MICS腔上下室之间，铺有Martrigel面朝向上室，在下室中加有趋化剂，如一定浓度的LN、FN或小鼠3T3条件培养液或人睾丸上皮成纤维细胞培养液，上室加入重悬的瘤细胞，具有侵袭能力的细胞在趋化剂诱导下开始穿膜运动。
细胞穿膜所用的时间与Martrigel的用量有关，选择25ugMartrigell铺膜，16小时后观察结果较为合适。
穿过滤膜的细胞多数粘附在滤膜下表面，可用棉签将上表面的细胞拭去，然后用乙醇固定滤膜，PE染色，在光镜下观察统计穿过Martrigel的细胞数。
另外用Trans well小室也可进行重建基质膜侵袭分析，这一方法是在Transwell小室吊篮式上腔的滤膜上铺上30ugMartrigel，加入细胞72h后观察结果。
值得注意的是，细胞在TransWll腔中培养72小时后，有相当数量穿过滤膜的细胞不再粘附在滤膜下表面，而是脱落进人下腔溶液中．因此统计穿过基质膜的细胞数目时应把这部分细胞考虑在内。
肿瘤细胞穿过重建基质膜的能力与它的体内侵袭转移能力表现出较好的相关性，可以用重建基质膜模型初筛抗侵袭药物。
在上述分析中，如果不在膜上铺Martrigel而直接将8um孔径滤膜安放在侵袭腔室上下腔室之间，细胞通过变形运动穿过滤膜，用这种模型对分析细胞运动能力和药物对细胞运动能力的影响。
细胞侵袭数据分析报告(3篇)
第1篇一、引言细胞侵袭是肿瘤发生发展过程中的关键步骤，也是肿瘤转移的先导环节。
为了研究肿瘤细胞的侵袭能力，本研究通过细胞侵袭实验，收集了不同处理条件下肿瘤细胞的侵袭数据。
本报告将对这些数据进行分析，旨在揭示肿瘤细胞侵袭能力的变化规律及其影响因素。
二、实验方法1. 细胞培养本研究选用人肺腺癌细胞系A549作为实验对象，将其接种于6孔板中，进行常规培养。
2. 细胞处理将A549细胞分为实验组和对照组，实验组采用不同浓度的药物进行处理，对照组采用等体积的溶剂进行处理。
3. 细胞侵袭实验采用Transwell小室进行细胞侵袭实验，将处理后的细胞接种于Transwell小室的上室，下室加入含有基质胶的培养基。
孵育一定时间后，取出小室，用棉签轻轻擦去未侵袭的细胞，用4%的甲醛固定，结晶紫染色，在显微镜下观察并计数侵袭细胞。
4. 数据分析采用SPSS 22.0软件对实验数据进行统计分析，包括描述性统计、t检验、方差分析等。
三、结果与分析1. 细胞侵袭能力的变化（1）实验组细胞侵袭能力显著高于对照组（P<0.05），表明药物处理能够增强肿瘤细胞的侵袭能力。
（2）随着药物浓度的增加，细胞侵袭能力逐渐增强（P<0.05），说明药物处理对细胞侵袭能力的影响呈剂量依赖性。
2. 影响细胞侵袭能力的因素（1）细胞周期：通过流式细胞术检测实验组和对照组细胞的周期分布，发现实验组细胞G2/M期比例显著高于对照组（P<0.05），表明药物处理能够促进细胞周期向G2/M期转变，进而增强细胞侵袭能力。
（2）细胞黏附：通过检测实验组和对照组细胞的黏附能力，发现实验组细胞黏附能力显著低于对照组（P<0.05），说明药物处理能够降低细胞黏附能力，从而增强细胞侵袭能力。
（3）细胞骨架：通过免疫荧光技术检测实验组和对照组细胞骨架蛋白的表达，发现实验组细胞骨架蛋白的表达水平显著高于对照组（P<0.05），表明药物处理能够增强细胞骨架蛋白的表达，进而增强细胞侵袭能力。
transwell assay原理
转移孔试验（Transwell Assay）是一种常用的细胞实验技术，用于研究细胞的迁移能力和侵袭性。
它在生物医学研究中非常重要，特别是在肿瘤转移和疾病发展的研究中扮演着关键的角色。
1. 原理Transwell Assay的原理基于细胞在不同化学环境下的迁移和侵袭行为。
该实验通常使用转移孔板（Transwell Plate）进行，该板上有一个具有微孔滤膜的孔，可分为上下两个腔室。
上腔室通常包含待检测的细胞悬液，下腔室为培养基或其他化学物质。
2. 应用范围Transwell Assay广泛应用于肿瘤转移、细胞迁移和侵袭、药物筛选等领域。
通过该实验，可以评估细胞对化学因子、药物的反应以及细胞自身的迁移和侵袭能力。
3. 操作步骤a. 孵育：将细胞悬液加入上腔室，培养一定时间以使细胞附着并生长。
b. 处理：根据实验设计，在上下腔室分别加入化学因子或药物。
c. 染色：对下腔室的细胞进行染色，观察和统计细胞迁移或侵袭情况。
d. 分析：通过显微镜观察和图像分析，得出细胞迁移和侵袭情况的定量结果。
4. 个人观点我认为Transwell Assay可以帮助我们更好地理解细胞迁移和侵袭的机制。
通过该实验，我们可以研究不同因素对细胞行为的影响，为疾病的治疗和药物的研发提供重要参考。
总结：Transwell Assay以其独特的原理和广泛的应用范围成为细胞生物学领域中不可或缺的技术手段。
通过逐步的操作步骤，我们可以准确地评估细胞的迁移和侵袭能力，为研究和临床应用提供可靠的数据支持。
我相信随着科技的不断发展，Transwell Assay将在更多领域展现其重要价值。
Transwell Assay作为一种先进的细胞实验技术，已经在许多领域得到了广泛的应用和发展。
在肿瘤转移方面，Transwell Assay可以帮助科学家们深入研究肿瘤细胞的侵袭和转移机制，从而为肿瘤的早期诊断和治疗提供重要的理论依据。
在药物筛选和药理学研究中，Transwell Assay的应用也为新药研发提供了有效的评台，有助于评估药物对细胞迁移和侵袭的抑制或促进作用。
SIRT3过表达抑制肝癌细胞的迁移与侵袭
Abstract:Objective Toexploretheinfluenceofsilentinformationregulator (SIRT)3onthemigration andinvasionofhepatomacarcinomacells.Methods TransfectedHuh-7cellswithcontrolpc-DNA3.1plasmid (controlgroup),andtransfected Huh-7cellswithSIRT3plasmid (experimentalgroup).Real-timefluorescencequantitativePCR wasusedtodetecttheexpressionlevelofSIRT3 mRNAinthetwogroups,andtheex-
国际检验医学杂志2021年6月第42卷第12期 IntJLabMed,June2021,Vol.42,No.12
·论 著·
SIRT3过表达抑制肝癌细胞的迁移与侵袭*
· 1423 ·
宋春丽,张 琰,周义文△ 南方医科大学深圳医院临床检验医学中心,广东深圳 518100
摘 要:目 的 探 讨 沉 默 信 息 调 节 因 子(SIRT)3 对 肝 癌 细 胞 迁 移 与 侵 袭 能 力 的 影 响。方 法 用 对 照 pc-
tancebetweenthecellsonbothsidesoftheexperimentalgroupwassignificantlywiderthanthatofthecontrol group,andthemigrationdistancewasshorter.Theresultsofcellinvasiontestshowedthatthecellsinthetwo groupswerecollected10hafterinoculationintheupperchamber,andcountedunderthemicroscope,thenumberofcellsineachfieldwas(45±5)inthecontrolgroup,andthenumberofcellsineachfieldwas(25±2)in theexperimentalgroup,thedifferencewasstatisticallysignificant(P<0.05).Conclusion SIRT3overexpressioninhibitsthemigrationandinvasionofhepatomacarcinomacells,anditisexpectedtoserveasanew mo-
肠腺癌的实验报告
一、实验背景肠腺癌是一种常见的恶性肿瘤，具有高度侵袭性和转移性，严重威胁人类健康。
近年来，我国肠腺癌的发病率逐年上升，已成为常见的消化道恶性肿瘤之一。
为了深入研究肠腺癌的发生、发展和治疗机制，本实验通过对肠腺癌细胞系进行体外培养、基因表达分析、细胞凋亡检测等实验，探讨肠腺癌的发生机制及治疗策略。
二、实验材料1. 细胞：人肠腺癌细胞系（HCT-116）、人正常肠上皮细胞（Caco-2）。
2. 试剂：DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒、PCR试剂盒、Western blot试剂盒等。
3. 仪器：细胞培养箱、离心机、PCR仪、凝胶成像系统、显微镜等。
三、实验方法1. 细胞培养：将HCT-116和Caco-2细胞分别接种于培养瓶中，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
2. 基因表达分析：采用实时荧光定量PCR技术检测HCT-116和Caco-2细胞中凋亡相关基因（如Bax、Bcl-2）的表达水平。
3. 细胞凋亡检测：采用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测HCT-116和Caco-2细胞的凋亡率。
4. Western blot检测：采用Western blot技术检测HCT-116和Caco-2细胞中凋亡相关蛋白（如Caspase-3）的表达水平。
四、实验结果1. 基因表达分析：结果显示，与Caco-2细胞相比，HCT-116细胞中Bax表达上调，Bcl-2表达下调，提示凋亡相关基因表达异常可能与肠腺癌的发生发展有关。
2. 细胞凋亡检测：结果显示，与Caco-2细胞相比，HCT-116细胞的凋亡率显著升高，提示肠腺癌细胞具有凋亡能力。
3. Western blot检测：结果显示，与Caco-2细胞相比，HCT-116细胞中Caspase-3表达上调，提示Caspase-3可能在肠腺癌细胞的凋亡过程中发挥重要作用。
五、讨论本实验通过体外培养肠腺癌细胞系，检测凋亡相关基因和蛋白的表达水平，发现肠腺癌细胞具有凋亡能力，且凋亡相关基因和蛋白的表达异常可能与肠腺癌的发生发展有关。
检测细胞迁移的实验方法之细胞划痕实验、Transwell试验
检测细胞迁移的实验⽅法之细胞划痕实验、Transwell试验检测细胞迁移侵袭能⼒是细胞表型实验中常⽤到的检测⼿段，细胞的迁移是活细胞普遍存在的⼀种运动形式，涉及到胚胎发育、⾎管⽣成、伤⼝愈合、免疫反应、炎症反应、动脉粥样硬化、癌症转移等过程。
具备迁移能⼒的正常细胞，受到损伤病变后，迁移能⼒会减弱，⽽肿瘤细胞的迁移能⼒则普遍会⽐较强。
⽣物公司提供的细胞迁移实验服务可以观察细胞的侵袭和粘附能⼒，以探索和寻找抑制肿瘤细胞迁移和侵袭的化合物。
细胞侵袭主要指的是肿瘤细胞的⼀种恶性⾏为，肿瘤细胞的侵袭能⼒，可对应临床上肿瘤的浸润和转移。
细胞划痕实验的原理很简单，当细胞长到融合成单层状态时，在融合的单层细胞上⼈为制造⼀个空⽩区域，称为“划痕”。
划痕边缘的细胞会逐渐进⼊空⽩区域使“划痕”愈合。
该实验是实验室分析细胞迁移能⼒的常⽤⽅法，在⼀定程度上模拟了体内细胞迁移的过程，⾮常适合研究细胞与胞外基质（ECM），细胞与细胞之间相互作⽤引起的细胞迁移。
细胞划痕试验和Transwell实验服务都是⽐较常见的细胞迁移实验服务。
EMT——从上⽪细胞到间质细胞的转变，可赋予细胞侵袭和转移的能⼒，因此，有研究认为EMT是肿瘤侵袭和早期转移的重要过程。
细胞划痕法可借鉴体外细胞致伤愈合实验模型，在体外培养的单层细胞上划痕致伤，加⼊药物观察其抑制肿瘤细胞迁移的能⼒，是测定肿瘤细胞运动特性⽅法之⼀。
美迪西提供细胞迁移实验服务，其⽣物部在分⼦⽣物学、细胞⽣物学、体外⽣物学和结构⽣物学领域有丰富⼴泛的经验。
从最初的cDNA⽂库构建到药物设计，通过蛋⽩质纯化，结构测定和分析测定，提供⼀套完整的⽣物学服务。
通过细胞划痕实验可以研究癌症组织中的某个因⼦对肿瘤细胞迁移的影响，为探索肿瘤治疗的靶点提供了研究基础。
如在FGF4对结肠癌细胞迁移的作⽤研究⼀⽂中，有研究者应⽤重组质粒pCDNA3.1-FGF4和RNA⼲扰技术分别对低转移结肠癌细胞株T47D和⾼转移结肠癌细胞株MDA-MB-231中的FGF4进⾏过表达和⼲扰并验证,对处理前后的细胞株进⾏划痕实验[1]。
中药抗肿瘤药理常用的技术和方法
中药抗肿瘤药理常用的技术和方法
中药抗肿瘤药理研究的常用技术和方法包括以下几个方面：
1. 体外细胞实验：通过体外培养的癌细胞株，使用中药提取物或纯化组分进行处理，评估其对肿瘤细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等方面的影响。
常用的实验方法包括MTT法、流式细胞术、细胞凋亡检测等。
2. 动物模型研究：使用小鼠、大鼠等动物建立肿瘤模型，在给药后观察肿瘤生长的变化，并通过病理学、免疫组织化学等技术手段评估中药对肿瘤的治疗效果。
常用的动物模型包括移植瘤模型和转基因小鼠模型。
3. 分子生物学方法：通过PCR、Western blot、Real-time PCR等技术，研究中药对肿瘤细胞信号通路、基因表达、蛋白质水平的调控作用，以及对肿瘤相关的细胞周期、凋亡、血管生成等关键过程的影响。
4. 药物代谢动力学研究：通过药代动力学方法，评估中药在体内的吸收、分布、代谢和排泄情况，揭示中药抗肿瘤作用的药理学基础。
常用的技术包括药物浓度测定、药物动力学参数计算等。
5. 分子影像学研究：利用核磁共振成像（MRI）、正电子发射断层扫描（PET）等分子影像学技术，观察中药对肿瘤的影响，如肿瘤体积、代谢活性的变化等。
6. 组织病理学分析：通过组织切片染色、免疫组织化学等技术手段，观察中药对肿瘤细胞形态学、组织结构的影响，以及对血管生成、免疫细胞浸润等指标的调节作用。
以上所述仅为中药抗肿瘤药理研究中的常见技术和方法，实际研究过程中还可根据具体需要选择其他适合的技术手段。
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二、细胞划痕实验
实验优点：
1.在一定程度上模拟了体内细胞迁移的过程。 2.适合研究细胞与胞外基质（ECM）、细胞与细胞之间相互作用引起的细胞迁移。 3.与包括活细胞成像在内的显微镜系统兼容，可用于分析细胞间的相互作用。 4.研究细胞迁移的体外实验中最简单的方法。
二、细胞划痕实验
实验材料：
细胞样品 仪器、耗材：6孔板 marker笔 直尺 枪头 试剂、试剂盒：无血清培养基、PBS
3.24孔板下室一般加入500µl含FBS 或趋化因子的培养基。
三、细胞划痕实验
4.培养细胞：常规培养48h，具体调整
问：某药可抑细胞侵袭，24h后可抑制细胞增 殖，可以培养36h看结果吗？
5.结果测定： ①直接测定：细胞染色，镜下计数 ②间接测定：MTT法、荧光试剂检测、结晶紫染色
三、Transwell
二、细胞划痕实验
谈几点问题： 1.细胞的选择：一般适用于上皮，纤维样细胞系
a.本身有迁移能力，且较强。 b.有极性，方便测量，观察。 c.对无血清有较强的忍受力。 2.观察的时间：一般为0、6、12、24h a.时间太久，无血清，易死亡，相对坚强 b.时间太久，细胞繁殖，假阳性
三、Transwell
1.裸鼠的选择：4-6周裸鼠、价格约 100+rmb
2.细胞的选择：查阅文献，选择合 适细胞株； 细胞浓度：具体不定，动物肿瘤 一般接种2～600万/只就100%成瘤， 而人癌则需要1000万以上才能较 高的成瘤
四、裸鼠尾巴静脉注射
3.注射技巧： ①固定：50ml离心管自制或购买成品 ②注射位置：鼠尾部侧面的2条静脉，一般在尾
③ 细胞：有侵袭能力细胞 先撤血清让细胞饥饿12－24h，再进行实验
三、Transwell
材料准备及说明：
④ 基质胶：常用的是人工重构基底膜材料 Matrigel
⑤ 下层培养液：含5%－10% FBS的培养基， 也可用趋化因子
⑥ 细胞培养板：6孔板、12孔板、24孔板等， 以24孔最常用
三、Transwell
部远端的1/3到1/2处进针。 ③注射：选择1-2ml注射器，针头采用4号或4.5
号。 ④凸显静脉：温水，烤灯等
四、裸鼠尾巴静脉注射
问：如何判断已经注射进入： 注射到静脉的推液几乎没有阻力，可快速将液体推完通常600ul可在10秒推完。 如果注射到静脉以外，强行推液，阻力较大，注射处周围会出现露水样渗液， 而且出针后，出血较少。 并且由于药液瘀阻在尾部，导致血流不畅，尾部缺血，易导致尾部炎症和坏 死。
2.铺满后再饿一夜
问：如何处理并取一定个数的细胞？
胰酶消化-终止消化-计数板计数-加入
二、细胞划痕实验
5.用1ml枪头垂直于孔板和线制造细胞 划痕，尽量保证各个划痕宽度一致
注：.人工枪头制造划痕难以保证划痕宽度的一 致性，影响实验结果，这也是该方法最大的 缺陷
二、细胞划痕实验
6.吸掉旧培养基，用无菌PBS冲洗细胞 3次，去除划下的细胞
570nm 测其OD值，间接反映细胞数。
四、裸鼠尾巴静脉注射
小鼠肿瘤转移模型分类：
1.人工转移模型：将肿瘤细胞体外培养株或腹 水等行注射，在肺(尾静脉注射)、脑(颈动 脉注射）肝脏(肝动脉注射）等部位观察
2.自发转移模型：肿瘤细胞接种在小鼠腋部或 足趾的皮下、腹腔肌肉或原组织中，观察 转移灶。
四、裸鼠尾巴静脉注射
直接观察：
① 用棉签擦去基质胶和上室内的细胞 ② 染色：推荐采用0.1%结晶紫固定染色。 ③ 细胞计数：把小室反过来直接观察或把膜切下直接染色，取若干个视野计数
细胞个数
问：①、②先后问题？
三、Transwell
间接观察：结晶紫法
① 用棉签擦去基质胶和上室内的细胞 ② 染色：推荐采用0.1%结晶紫固定染色。 ③ 染色后可以用33%醋酸脱色，将结晶紫完全洗脱下来，洗脱液可在酶标仪上
二、细胞划痕实验
1.所有能灭菌的器械都要灭菌 2.超净工作台 紫外线消毒30min
注：需要灭菌的器材包括——离心管、吸管筒、移液枪、枪 头等
二、细胞划痕实验
（3. 6孔板背面画线5-6条）
4.每孔加入5X105个细胞并培养约24h
注：1.数量以过夜贴壁能铺满为宜，适当调整 数量少时可培养一段时间至铺满板底
二、细胞划痕实验
新：德国IBIDI（易必迪）技术
1.准备细胞，培养液，culture Insert。 2.将细胞接种于Dish中间的Insert，培养。 3.细胞长满Insert 区域后用镊子移除Insert即可 产生500μm宽度的划痕。 4.每隔4-6小时拍照记录。 5.根据收集图片数据分析实验结果
Transwell是一种应用Transwell 小室来探究细胞共培养 、细胞 趋化 、细胞迁移 、细胞侵袭等的问题的实验技术。
三、Transwell
材料准备及说明：
①Transwell小室：常用8.0um膜，铺胶130rmb、 不铺胶40rmb，可重复利用
②上层培养液：无血清培养基，为维持渗透压， 需加入0.05%-0.2% BSA底膜：用50mg/LMatrigel 1:8稀释液包被Transwell小室底部膜的上 室面，4℃风干
② 水化基底膜：吸出培养板中残余液体，每孔加入50ul含10g/LBSA的无血清 培养液，37℃，30min。
三、Transwell
2.取细胞悬液加入Transwell小室， 24孔板小室一般200µl。细胞密 度为1－10×105个.
注：冲洗时温柔，贴壁加入，避免冲掉单层细胞
7.加入无血清培养基，并根据需要设 加实验组、对照组
二、细胞划痕实验
8.放入37度5%CO2培养箱，培养。按0， （6），12，24小时取样，拍照。
9.计算、比较、分析
①image J 软件计算每个视野的划痕面积 ②/en/
肿瘤侵袭、转移实验技术
目录
一、概述 二、细胞划痕实验 三、Transwell 四、裸鼠尾静脉注射实验 五、总结
一、概述
肿 瘤 侵 袭 和 转 移
体外 体内
细胞划痕实验
Transwell 裸鼠尾静脉注射
二、细胞划痕实验
细胞划痕实验是一种简单易行的检测细胞运动的方法，实验成本低，可 以用来检测贴壁生长肿瘤细胞的迁移能力。