脂肪酶产生菌的筛选·产酶条件及酶特性研究

脂肪酶产生菌的筛选产酶条件及酶特性研究

薛静;陶树兴;田泽英;苏蕊;丛寅

【摘要】[ Objective ] To screen high lipase activity strains as strains producing lipase and donor of lipase gene. [ Method ]26 samples were collected,and the strains were isolated through adopting bromcresol purple preliminary screening plate and secon darily screening with shake flask loading fermentation medium. A higher lipase activity strain 09-7-1 was obtained and identified as Aspergillus niger. The factors of influencing lipase production and characterization of the lipase of strain 09-7-1 were researched. [ Result ] The soluble starch in 0. 5％ was the best carbon resource. The yeast extract in a ratio of 0.2％ was the best nitrogen resource. The optimum initial temperature was 32 ℃ ,and the optimum initial pH value was 5.2. The lipase activity of strain 09-7-1 achieved 24. 112 U/ml after optimization from 13. 164 U/ml and was 1. 83 times as high as the initial lipase activity. The best reaction temperature of lipase was

30 ℃. The best reaction pH was 7.0,and the activity were no much change in 60 ℃ for90 min and stable from pH 5.5 to pH 10.0. [Conclusion] The study can lay the foundation for study on producing lipaso and lipase gene.%[目的]筛选脂肪酶高活性菌株作为脂肪酶生产菌株和脂肪酶基因的供体菌.[方法]从油脂厂等地采集26份含菌样品,采用溴甲酚紫平板对样品进行初筛,以产脂肪酶发酵培养基摇瓶复筛,获得1株产脂肪酶活性较高的菌株09-7-1,经鉴定该菌株为黑曲霉(Aspergillus niger).采用正交试验对影响该菌株产酶的因素进行了研究,并探讨了该菌株所产脂肪酶的性质.[结果]该菌株最佳产酶条件:碳源为0.5%的

可溶性淀粉,氮源为0.2%的酵母膏,培养温度为32℃,发酵液pH为5.2,该菌株最初发酵液中酶活力为13.164 U/ml,优化后酶活力达24.112 U/ml,是最初酶活力的1.83倍.该菌株所产脂肪酶最适作用温度为30℃,最适作用pH为7.0;酶液在60℃保温90 min后,活性损失较少,pH为5.5～10.0内稳定.[结论]该研究可为脂肪酶生产和基因研究奠定基础.

【期刊名称】《安徽农业科学》

【年(卷),期】2011(039)015

【总页数】5页(P8826-8830)

【关键词】脂肪酶;筛选;黑曲霉;产酶条件;酶特性

【作者】薛静;陶树兴;田泽英;苏蕊;丛寅

【作者单位】陕西师范大学生命科学学院,陕西西安,710062;陕西师范大学生命科学学院,陕西西安,710062;陕西师范大学生命科学学院,陕西西安,710062;陕西师范大学生命科学学院,陕西西安,710062;陕西师范大学生命科学学院,陕西西

安,710062

【正文语种】中文

【中图分类】Q939.97

脂肪酶(Lipase，EC3.1.1.3，甘油酯水解酶)为作用于酯键的酶，专门作用于异向系统，可催化天然油脂水解，生成脂肪酸、甘油和甘油单酯或二酯，且优先水解长链酯类产生长链脂肪酸［1］，可以完成水解、酯化、转酯、酯交换及合成等反应，被广泛应用于油脂水解［2］、食品加工、食品品质改良、疾病诊断、催化药物合

成［3-4］、皮革生产［5］、可生物降解的无污染洗涤剂的研发［6］和生物柴油的生产［7］等方面。脂肪酶广泛存在于动物、植物和微生物中［8］。据报道，产脂肪酶的微生物有假单胞菌(Pseudomonas)［9-10］、荧光假单胞菌

(P.fluorescens)［5］、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)［11］、假丝酵母(Candida rugosa)［12-13］、根霉(Rhizopus)［14］、黑曲霉(Aspergillus niger)［15］和青霉(Penicillium)［16-17］等。微生物来源的脂肪酶一般是分泌性的胞外酶，易获得较高纯度酶制剂，适合于工业上大规模生产。笔者从油页岩有机堆肥样品筛选到1株产脂肪酶活性较高的Aspergillus niger 09-7-1，可作为脂肪酶生产菌株和脂肪酶基因的供体菌，有重要的理论和实践意义。

1 材料与方法

1.1 材料含菌样品取自榨油厂、屠宰场、油页岩有机堆肥、餐馆、水产市场和水产加工厂;解脂亚罗酵母(Yarrowia lipolytica)1444由中国工业微生物菌种保藏中心提供;菜籽油和黄豆粉购自市场;玉米浆由西安市户县国维淀粉厂提供;橄榄油和聚乙二醇由国药集团化学试剂有限公司提供;蛋白胨和酵母膏均为生化试剂;硫酸铵、磷酸氢二铵、硝酸铵、磷酸铵、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钠、可溶性淀粉、95%乙醇和溴甲酚紫等均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 培养基的配制。脂肪酶产生菌富集培养基、分离和初筛培养基和发酵培养基均参考《微生物学实验指导》［18］配制，分离细菌pH7.2，分离真菌pH5.8;菌种保藏斜面培养基:酵母膏0.5 g，蔗糖20.0 g，MgSO4·7H2O 1.0 g，20%马铃薯汁 1 L，pH自然。培养细菌和真菌时均加入KH2PO42.0 g。

1.2.2 菌株的分离和筛选。

1.2.2.1 富集培养。称取含菌样品5.0 g混悬于50 ml生理盐水中，振荡稀释，取5 ml稀释液接入1份50 ml富集培养基［pH 7.2(分离细菌)］中，28℃、160