肠致泻性大肠埃希氏菌实验活动风险评估报告

肠致泻性大肠埃希氏菌实验活动风险评估报告一、生物学特性(一)种类和细菌分型大肠埃希氏菌是人和动物肠道中的正常菌群，一般对人无害。

本菌为革兰阴性的短杆菌，其抗原结构有3种，即菌体抗原（O抗原）、包膜抗原（K抗原）和鞭毛抗原（H抗原）。

O抗原是血清分型的基础，目前已发现有170多种，其中一些特殊的血清型具有病原性，能引起人类腹泻，故称为肠致泻性大肠埃希氏菌。

根据发病机制、临床特征、流行病学特征、抗原血清型及细菌的毒力测定可将肠致泻性大肠埃希氏菌分为5类：肠致病性大肠埃希氏菌（EnteropahogenicE.Coli,EPEC)、肠产毒性大肠埃希氏菌（Enterotoxingen-icE.Coli,ETEC)、肠侵袭性大肠埃希氏菌（EnteroinvasiveE.Coli,EIEC)、肠出血性大肠埃希氏菌（EnterohemorrhagicE.Coli,EHEC)和肠集聚黏附性大肠埃希氏菌（Entero-aggregativeE.coli,EAggEC)。

(二)来源大肠埃希氏菌属包括多种细菌，临床上以大肠埃希氏菌最为常见。

大肠埃希氏菌(E.coli通称大肠杆菌，是所有哺乳动物大肠中的正常寄生菌，一方面能合成维生素B及维生素K供机体吸收利用，另一方面能抑制腐败菌及病原菌和真菌的过度增殖。

但当它们离开肠道的寄生部位，进人到机体其他部位时，能感染发病。

有些菌型有致病性，引起肠道或尿路感染性疾患。

肠致泻性大肠埃希氏菌是指能使人、动物（尤其是婴儿和幼龄动物）感染及人食物中毒的一群大肠埃希氏菌。

在自然界中，本菌分布广泛，主要的寄居场所是人和其他恒温动物的肠道中，是一类条件性致病菌。

(三）传染性大肠埃希氏菌所引起的食源性疾病主要由食人被污染的食物和水而引起，可以导致肠道外感染，如泌尿系感染、菌血症、胆囊炎、肺炎及新生儿脑膜炎等，也会造成从轻微股泻到霍乱样严重腹泻，乃至引起致死性的并发症。

肠侵袭性大肠杆菌由人一人传染而致病，推测为粪一口途径感染。

(四)传播途径肠道内感染以粪一口途径为主，可通过食用污染的食品、水而传播，引起食源性细菌性腹泻。

人与动物的密切接触也可传播。

苍蝇、蟑螂等昆虫因其生活习性特殊，在一些细菌性腹泻的传播中发挥了重要作用。

通过医务人员的手或污染公共物品可造成医院内感染从而引起医院内腹泻传播。

多数大肠埃希氏菌在肠道内不致病，但如移位至肠道外的组织，则可引起感染，即肠道外感染。

(五)易感性人群普遍易感，没有交叉免疫。

儿童、老年人、有免疫抑制或慢性疾病者为高危人群，并且容易发生严重并发症。

一些正使用抗生素的患者是抗生素相关性腹泻的高危人群。

另外，旅游者易发生细菌性腹泻，称为旅游者腹泻。

患病后一般可获得免疫力，但持续时间较短。

(六)潜伏期不同的肠致泻性大肠埃希氏菌引起的中毒，症状各不相同，潜伏期也各有长短。

肠出血性大肠埃希氏菌引起的中毒潜伏期较长，一般可达3～10d，肠产毒性大肠埃希氏菌、肠侵袭性大肠埃希氏菌、肠致病性大肠埃希氏菌、肠集聚黏附性大肠埃希氏菌引起的中毒潜伏期一般为1～4d，短者为数小时，长者可达7d。

(七)剂量一效应关系关于是否发生肠致泻性大肠埃希氏菌食物中毒，不同肠致泻性大肠埃希氏菌的感染剂量各不相同，不同个体也存在差异。

肠致泻性大肠埃希氏菌食物中毒的感染及程度主要与致病机制和感染剂量密切相关。

(八）致病性肠致泻性大肠埃希氏菌具有病原性，能引起人类腹泻。

部分大肠埃希氏菌菌株与婴儿腹泻有关，并可引起成人腹泻或食物中毒的暴发。

ETEC的主要毒力因子为热不稳定毒素、热稳定毒素及与致病性相关的定居因子；EPEC的主要毒力因子有菌毛、志贺样毒素（Shiga-liketoxins,SLTs)和LEE毒力岛；EIEC在毒力因子和致病机制上与志贺菌基本一致；EHEC的主要毒力因子有志贺样毒素（SLTs)、溶血素、LEE毒力岛及其他未知的毒力因素；EAggEC是一类新发现的致泻性大肠杆菌，目前已知的毒力因子有菌毛和热稳定肠毒素。

(九)变异性滥用抗生素使得大肠埃希氏菌存在着基因突变，导致耐药菌株的产生。

（十）环境中的稳定性因无芽孢，对理化因素抵抗力不强，在60℃中30min即死亡。

（十一）药物敏感性肠致泻性大肠埃希氏菌对磺胺类、链霉素、氯霉素等敏感。

对于抗生素治疗，首选氯霉素、多粘菌素、庆大霉素、卡那霉素。

但是对于肠出血性大肠埃希氏菌感染者，应慎用抗生素，因抗生素非但不能缩短病程，反而会增加发生溶血性尿毒综合征的机会。

肠产毒性大肠埃希氏菌易产生耐药性。

（十二）消毒剂敏感性肠致泻性大肠埃希氏菌易被一般化学消毒剂杀灭，常用氯进行饮水消毒。

胆盐、煌绿等染料对非致病性肠杆菌科细菌有抑制作用。

（十三）物理灭活在55℃中60min或60℃加热15min仍有部分细菌存活。

EHEC可在7～50℃的温度中生长，其最佳生长温度为37℃，有些甚至可在pH值达到4.4和最低水活度为0.95的食物中生长。

烹调食物时，必须使食物的所有部分至少达到70℃以上时才可认为该菌被消灭。

（十四）在宿主体外存活肠致泻性大肠埃希氏菌体外抵抗力较强，在自然界中的水和土壤中能存活数周至数月，在温度较低的粪便中存活更久，在阴凉处的室内尘埃中可存活1个月。

（十五）与其他生物和环境的交互作用凡是体内有肠致泻性大肠埃希氏菌感染的病人、带菌者和家畜、家禽等都可传播本病。

一些动物可成为储存宿主，较常见的可传播本病的动物有牛、鸡、羊、狗、猪等，其中以牛的带菌率最高，患病或带菌动物往往是动物来源食品污染的根源。

带菌动物在其活动范围内也可通过排泄的粪便污染当地的食物、草场、水源或其他水体及场所，造成交叉污染和感染，危害极大。

（十六）预防和治疗方案1.预防措施预防接种目前尚没有成熟的、可供大范围使用的疫苗。

但在ETEC的免疫预防研究中，发现其菌毛抗原在自然感染和人工主动免疫中是关键抗原之一。

预防原则应以改善公共卫生条件、切断传播途径为主，同时加强对传染源的管理，采取综合性预防措施，对重点人群、集体单位应特别注意预防暴发和流行。

不吃生的或加热不彻底的牛奶、肉等动物性食品。

不吃不干净的水果、蔬菜。

剩余饭菜食用前要彻底加热。

防止食品生熟交叉而产生污染。

养成良好的个人卫生习惯，饭前便后洗手。

食品加工、生产企业特别是餐饮业应严格保证食品加工、运输及销售的安全性。

2.治疗方案排除毒物，必要时进行催吐、洗胃和导泻；对症治疗；抗生素治疗，首选氯霉素、多粘菌素、庆大霉素和卡那霉素。

二、实验室相关活动风险评估与控制（一）实验室感染性因子的种类、来源和危害1.感染性因子的种类肠致泻性大肠埃希氏菌产生多种毒力因子。

根据其生物学特性和本院实验室检测的能力范围，本实验室可能的感染因子为肠致泻性大肠埃希氏菌病原体本身。

2.感染性因子的来源⑴食物中毒事件中采集的食物、粪便等可疑标本，日常检测的食品、水等样品。

⑵样本采集和检测过程中涉及的所有实验场所。

⑶实验室检验过程操作中可能产生的含病原体的气溶胶。

3.感染性因子可能造成的危害⑴被污染的实验器材、器皿等对实验室环境造成污染。

⑵实验室废弃物对环境造成污染。

⑶实验人员暴露后感染。

⑷实验室含病原菌的气溶胶对实验室环境造成的污染。

由于肠致泻性大肠埃希氏菌主要通过肠道内感染，粪一口途径可通过食用污染的食品、水而传播，引起食源性细菌性腹泻。

通过医务人员的手或污染公共物品可造成医院内感染从而引起医院内腹泻传播。

虽然引起食物中毒的感染剂量要达到一定的剂量才可引发疾病，但仍然存在感染的风险。

（二）实验室常规活动过程中的风险评估与控制1.实验方法⑴主要风险点识别未采用国家标准、行业标准进行检测；使用新的或变更过的国家标准或行业标准前,未经技术确认，可能存在安全风险。

⑵风险控制措施尽量采用国家标准、行业标准进行检测，在使用新的或变更过的国家标准、行业标准前，必须经过严格的技术确认。

2.样品米集⑴食品和水样等样品米集①主要实验设备和器材采样剪刀或镊子、密闭盛样容器等。

②主要风险点识别食品和水样等样品中可能存在感染性病原体，采样人员采样不规范、盛样容器密合不严、意外破损等，可导致样品溅洒、溢出、渗漏而污染环境；同时，锐器使用不当，存在意外刺伤或划伤采样人员的风险。

③风险控制措施采集容器必须防水、防漏，容器外面要包裹足量的吸收性材料，以便容器被打破或泄漏时，能吸收溢出的所有液体。

在使用剪刀、镊子、玻璃容器等锐器时，必须规范操作，做好防护，防止刺伤或划伤。

⑵食物中毒事件中粪便、呕吐物、食品加工环节涂抹物、剩余食物等采集①主要实验设备和器材PV螺旋盖采便盒（管）、玻璃试管或培养皿、采样棉签、食品盛器等。

②主要风险点识别疑似食物中毒粪便、呕吐物、剩余食物、食品加工环节涂抹物等样品中可能存在大量感染性病原体，采集过程存在样本溅出从而形成小颗粒气溶胶；工作人员采样不规范、个人防护不到位，导致环境污染和人员感染。

③风险控制措施采样人员应戴手套、口罩，采样时动作轻柔，采样容器尽量使用外螺旋盖塑料管；发生污染时，应立即进行消毒处理。

⑶血样的采集①主要实验设备和器材一次性采血针、真空采血管、消毒棉签及一次性利器盒。

②主要风险点识别血液样品可能存在不明感染性病原体，真空采血管密封盖意外脱落或采血针内残留血滴落，造成血样溅洒从而污染人员或环境；采血针头存在意外刺伤或划伤采样人员的风险。

③风险控制措施使用一次性采血针和真空采血管，采样人员经过正规采血培训，并熟练掌握采血技巧。

采血前做好个人防护（防护服、乳胶手套、口罩）；认真、仔细、谨慎操作，抽血后的针头直接放入利器盒内，禁止用手直接接触使用后的针头或将使用后的针头重新套上针头套；采好血后直立于试管架中，防止倒翻；消毒棉签等污染物放入医疗废弃物专用袋中，统一进行消毒处理。

3.样品的包装和运送⑴主要实验设备和器材真空密封采血管、外螺旋盖玻璃瓶、PV螺旋盖采样罐（管）主容器、95千帕样品运输罐、B类标本运输箱（UN2814冷藏箱）、运送车辆。

⑵主要风险点识别盛样容器不坚固、密合不严，有可能存在样品溅洒、溢出、渗漏；样本运输包装不符合生物安全要求，可能导致样品的侧翻、渗漏而造成污染扩散。

⑶风险控制措施盛装样品容器必须坚固，不易破碎，尽可能选用塑料制品，采样后必须检查容器的密合性。

样品严格按照B类要求包装和运送。

4.样品接收和前处理⑴主要实验设备和器材剪刀、慑子、振荡器、均质器、均质袋、离心机、生物安全柜、洁净工作台等。

⑵主要风险点识别样品管理员未按实验室样品管理程序要求接收样品；样品前处理时打开感染性样本包装的动作过猛，会造成样品侧翻；对食品等固形物样品进行剪切时，操作不慎发生手剪伤；均质器均质样本时发生均质袋破裂，离心操作时离心管破裂等意外情况。

⑶风险控制措施①样品接收必须在专用的区域进行，合同评审人员和收样人员严格按照《样品管理程序》要求交接样品，不得擅自打开样品包装，收样后及时洗手。