综合项目一--不同蔬菜水果中基本营养成分分析

综合项目一不同蔬菜水果中基本营养成分分析实验一总糖含量的测定（3,5-二硝基水杨酸法）

一、实验目的

1、掌握总糖的测定原理。

2、学习用比色法测定还原糖的方法。

二、实验原理

三、实验试剂

1、2mol/L氢氧化钠溶液：称取4g氢氧化钠，加少量的蒸馏水溶解后，定容至50mL。

2、3,5-二硝基水杨酸试剂：称取0.325g 3,5-二硝基水杨酸溶于15mL热蒸馏水中，溶解后移入50ml容量瓶中，加入2mol/L氢氧化钠溶液16.25mL，再加入2.25ml丙三醇，摇匀，冷却后定容至50mL。

3、2mg/mL葡萄糖标准溶液：称取0.04g葡萄糖，加少量的蒸馏水溶解后，定容至20mL。

4、6mol/L盐酸：取25mL浓盐酸用蒸馏水稀释至50mL。

5、6mol/L氢氧化钠：称取12g氢氧化钠，加少量的蒸馏水溶解后，定容至50mL。

四、实验步骤

1、葡萄糖标准曲线的制作

取6支试管，按下表加入2mg/mL葡萄糖标准溶液和蒸馏水：

在上述试管中分别加入3,5-二硝基水杨酸试剂2mL，摇匀后于沸水浴中加入2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9mL，摇匀，在540nm 波长处测定光吸收值。以葡萄糖含量（mg/mL）为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线，得出回归方程。

2、总糖的提取

称取1g实验材料（如新鲜果蔬），充分研磨后，放在锥形瓶中，加入6mol/L 盐酸10mL，蒸馏水15mL，在沸水浴中加热30min。水解完毕后，冷却至室温后，加入8mL 6mol/L氢氧化钠，最终用蒸馏水定容至50mL，此为总糖水解液，用于总糖测定。

3、总糖含量的测定

取4支试管，按下表加入不同溶液：

加完试剂后，摇匀后于沸水浴中加入2min进行显色，取出后用流动水迅速冷却，各加入蒸馏水9mL，摇匀，在540nm波长处测定光吸收值。测定后，取样品的光吸收值平均值在标准曲线上查出相应的糖含量（mg/mL）。

4、计算总糖的百分含量

总糖=（C×V / m×1000）×稀释倍数×0.9×100%

式中,C为总糖提取液的浓度mg/mL；V为总糖提取液的总体积mL；m为样品质量g

五、实验结果

1、葡萄糖标准曲线的绘制

（1）光吸收值测得结果

（2）葡萄糖标准曲线图：

（3）回归方程为：

2、样品总糖含量的测定

（1）材料____________总糖含量的测定

样品的光吸收值平均值为___________________________。

根据标准曲线的回归方程计算得出总糖浓度为________________。请说明具体计算过程：

从而得出样品__________总糖的百分含量为_________________。请说明具体计算过程：

（2）材料____________总糖含量的测定

样品的光吸收值平均值为___________________________。

根据标准曲线的回归方程计算得出总糖浓度为________________。请说明具体计算过程：

从而得出样品__________总糖的百分含量为_________________。请说明具体计算过程：

（3）材料____________总糖含量的测定

样品的光吸收值平均值为___________________________。

根据标准曲线的回归方程计算得出总糖浓度为________________。请说明具体计算过程：

从而得出样品__________总糖的百分含量为_________________。请说明具

体计算过程：

3、对比分析不同样品总糖含量。

实验二蛋白质含量的测定（考马斯亮蓝法）

一、实验目的

1、学习用考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的基本原理与方法。

2、了解考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的优缺点。

二、实验原理

三、实验试剂

1、0.15mol/L氯化钠溶液：称取0.2633g氯化钠，加少量的蒸馏水溶解后，定容至30mL。

2、0.1mg/mL牛血清白蛋白标准溶液：

（1）母液：称取0.01g牛血清白蛋白溶于10mL 0.15mol/L氯化钠溶液中，配成浓度为1mg/mL的溶液。

（2）标准液：取母液1mL，用0.15mol/L氯化钠溶液定容至10mL，配成0.1mg/mL的牛血清白蛋白标准溶液。

3、考马斯亮蓝G-250试剂：称取0.005g考马斯亮蓝G-250溶于2.5mL 95%乙醇，加蒸馏水40mL，加5mL 85%磷酸，最后加蒸馏水定容至50mL。

四、实验步骤

1、绘制标准曲线

取6支试管，按下表加入各种试剂。试剂加完后混匀，室温静置3min，以1号管为空白调零，在595nm处测定其吸光值。以蛋白质含量（mg/mL）为横坐标，对应的吸光值为纵坐标，绘制蛋白质含量标准曲线，得出回归方程。

2、总蛋白的提取

称取1g实验材料（如新鲜果蔬），加5mL蒸馏水研磨，过滤后将滤液用蒸馏水定容至10mL。

3、总蛋白测定

取3支试管，分别加0.1mL未知浓度的蛋白质样品液，加0.9mL 0.15mol/L 氯化钠溶液，再加入5mL考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀，室温静置3min，以1号管为空白管调零，在595nm处测其吸光值。测定后，取样品的光吸收值平均值在标准曲线上查出相应的蛋白浓度（ug/mL）。

4、蛋白质含量（mg/g）

蛋白质含量（mg/g）=（C×V

T ）/（1000×V

S

×W

F

）

式中，C为蛋白质提取液的浓度ug/mL；V

T 为提取液总体积mL；V

S

为测定时

加样量mL；W

F

为样品鲜重g。

五、实验结果

1、牛血清白蛋白标准曲线的绘制（1）光吸收值测得结果