淀粉中还原糖的测定
生化实验七 淀粉中还原糖含量的测定
实验七淀粉中还原糖含量的测定一、目的掌握还原糖含量的测定方法，学习用比色法测定还原糖的方法；二、原理单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基，有还原性，属于还原糖；而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其他产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在过量的NaOH 碱性溶液中此化合物在540nm处有最大吸收，在一定浓度范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中还原糖的含量三、器材1、吸管1.0mL（×2）、5.0mL（×1）、0.1mL（×1）、0.2mL（×1）、0.5mL（×3）2、试管1.5cm×15cm（×10）3、分光光度计 ,水浴锅、电子分析天平,电炉、容量瓶（100mL×1）、玻璃漏斗、量筒、研钵和三角烧瓶。
四、试剂与材料1、标准葡萄糖溶液（1.0mg/mL）：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，溶于蒸馏水并定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
2、3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：将6.3g DNS和262mL 2mol/L NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，存储于棕色瓶中备用。
3、食用面粉五、操作1、1. 葡萄糖标准曲线的制作：取8支15mm×180mm试管，按下表加入1.0mg/ml葡萄糖标准液和蒸馏水。
吸光度为纵坐标，葡萄糖含量（mg ）为横坐标做图得标准曲线。
2、样品中还原糖的提取和测定称取1.5g 食用面粉加水约5mL ，在研钵中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，并用约20mL 蒸馏水冲洗研钵2～3次，洗出液也转入三角烧瓶中。
于50℃水浴中保温约0.5h （使还原糖浸出），取出，冷却后定容至50mL 。
过滤，取1.0mL 滤液进行还原糖的测定。
淀粉的国标测定方法
淀粉的国标测定方法测定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法（酶-直接法）一、酶水解法1.原理样品经除去脂肪及可溶性糖类后,其中淀粉用淀粉酶水解成双糖,再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定,并折算成淀粉。
2。
适用范围GB5009。
9-85，适用于所有含淀粉的食物。
3.仪器（1） 回流冷凝器(2） 水浴锅4。
试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1） 乙醚（2） 0.5 ％ 淀粉酶溶液：称取淀粉酶（Sigma 公司， E 。
C3.2。
1.1）0。
5 g ，加100ml 水溶解,加入数滴甲苯或三氯甲烷，防止长霉，贮于冰箱中.（注：配成溶液的淀粉酶破坏很快，最好邻用现配。
）（3） 碘溶液：称取3.6 g 碘化钾溶于20 ml 水中，加入1。
3 g 碘，溶解后加水稀释至100 ml 。
（4） 85 ％乙醇.(5) 其余试剂同《蔗糖测定方法》5.操作方法5。
1 样品处理称取2~5 g 样品，置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用50 ml 乙醚分5次洗除脂肪(注：如果脂肪含量少，此步骤可免），再用约100 ml85 ％乙醇洗去可溶性糖类（注:此步骤目的是去除可溶性糖)，将残留物移入250 ml 烧杯内，并用50ml 水洗滤纸及漏斗,洗液并入烧杯内，将烧杯置沸水浴上加热15 min,使淀粉糊化，放冷至60 ℃以下,加20ml 淀粉酶溶液，再55～60 ℃保温1h,并时时搅拌(注：温度过高,淀粉酶的活性破坏）。
然后取1滴此液加1滴碘溶液，应不现兰色,若显兰色，再加热糊化并加20ml 淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显兰色为止。
加热至沸，冷后移入250ml 容量瓶中,并加水至刻度，混匀，过滤.(注：此时淀粉已水解成双糖,过滤可去除残渣和纤维素）弃去初滤液，取50 ml 滤液,置于250ml 锥形瓶中，加5 ml 6 mol/L 盐酸，装上回流冷凝器，在沸水浴中回流1h ，冷后加2滴甲基红指示剂,用5mol/L 氢氧化钠溶液中和至中性,溶液转入100 ml 容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并入100ml 容量瓶中，加水至刻度，混匀备用.（淀粉在沸水浴条件下糊化是淀粉水解的第一步反应，然后在淀粉酶的作用下，分解成短链淀粉、糊精、麦芽糖等低聚合的糖，所以在淀粉酶解后需用酸进一步水解得到葡萄糖。
食物中还原糖的测定方法
⾷物中还原糖的测定⽅法⾷物中还原糖的测定⽅法⼀、直接滴定法1.原理样品经除去蛋⽩质后，在加热条件下，直接滴定已标定过的菲林⽒液，菲林⽒液被还原析出氧化亚铜后，过量的还原糖⽴即将次甲基蓝还原，使蓝⾊褪⾊。
根据样品消耗体积，计算还原糖量。
2.适⽤范围GB5009.7-85，本⽅法适⽤于所有⾷品中还原糖的检测。
检出限0.1mg。
3.主要仪器滴定管4.试剂除特殊说明外，实验⽤⽔为蒸馏⽔，试剂为分析纯。
（1）菲林甲液：称取15 g硫酸铜（CuSO4·5H2O），及0.05 g次甲基蓝，溶于⽔中并稀释⾄1 L。
（2）菲林⼄液：称取50 g酒⽯酸钾钠与75 g氢氧化钠，溶于⽔中，再加⼊4 g亚铁氰化钾，完全溶解后，⽤⽔稀释⾄500ml，贮存于橡胶塞玻璃瓶内。
（3）⼄酸锌溶液：称取21.9 g⼄酸锌，加3 ml冰⼄酸，加⽔溶解并稀释⾄100 ml。
（4）亚铁氰化钾溶液。
称取10.6g亚铁氰化钾，⽤⽔溶解并稀释⾄100ml。
（5）盐酸。
（6）葡萄糖标准溶液：精密称取1.000 g经过80 ℃⼲燥⾄恒量的葡萄糖（纯度在99%以上），加⽔溶解后加⼊5ml盐酸，并以⽔稀释⾄1 L。
此溶液相当于1 mg/ml葡萄糖。
（注：加盐酸的⽬的是防腐，标准溶液也可⽤饱和苯甲酸溶液配制）5.操作⽅法5.1样品处理：5.1.1乳类、乳制品及含蛋⽩质的⾷品：称取约0.5～2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品），置于100 ml容量瓶中，加50ml ⽔，摇匀。
边摇边慢慢加⼊5 ml⼄酸锌溶液及5 ml亚铁氢化钾溶液，加⽔⾄刻度，混匀。
静置30min，⽤⼲燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备⽤。
（注意：⼄酸锌可去除蛋⽩质、鞣质、树脂等，使它们形成沉淀，经过滤除去。
如果钙离⼦过多时，易与葡萄糖、果糖⽣成络合物，使滴定速度缓慢；从⽽结果偏低，可向样品中加⼊草酸粉，与钙结合，形成沉淀并过滤。
）5.1.2酒精性饮料：吸取50 ml样品，置于蒸发⽫中，⽤1mol/L氢氧化钠溶液中和⾄中性，在⽔浴上蒸发⾄原体积1/4后，移⼊100 ml容量瓶中。
实验一 淀粉酸水解制糖与还原糖的测定
实验一淀粉酸水解制糖与还原糖的测定一、试验目的①掌握酸法制糖的工艺与方法；②掌握还原糖的测定方法。
二、酸水解制糖原理在淀粉酸水解过程中，有如下三种反应：在水解过程中，淀粉的颗粒结构被破坏，α－(1, 4)－糖苷键及α－(1, 6)－糖苷键在酸的催化下被切断，示踪同位素原子O18研究证明，H＋先与H2O结合生成H3O＋，H3O＋能与糖苷键的氧原子结合生成不稳定化合物Ⅰ，随后C1－O键断裂生成C1正碳离子Ⅱ，H2O与具有正电荷的C1结合，再使C1失去H＋，完成糖苷键的水解过程。
三、实验仪器7230型分光光度计、水浴锅或电炉、100mL量筒、100mL或50mL容量瓶9个、10mL与2mL移液管各1支、250mL烧杯、250mL锥形瓶2个、布氏漏斗、真空泵、牛皮纸。
四、实验试剂淀粉（化学纯）、3, 5-二硝基水杨酸（化学纯）、1%硫酸、氢氧化钠（分析纯）、酒石酸钾钠、苯酚（化学纯）、亚硫酸钠（Na2SO3）、葡萄糖（分析纯）、无水酒精、粉末CaCO3。
①配制DNS（3,5－二硝基水杨酸）试剂：取7.5克3,5－二硝基水杨酸，14.0 g氢氧化钠，充分溶解于1000mL蒸馏水中。
再加入酒石酸钾钠216.0克，苯酚（在50℃水浴中融化）5mL，亚硫酸钠6.0克，完全溶解后盛于棕色瓶中。
②葡萄糖标准溶液(1g/L)：准确称取干燥衡重的葡萄糖1g，加1mL 1%硫酸(防止微生物生长)，以蒸馏水定容至1000mL。
③1%硫酸；④碘-碘化钾溶液四、实验步骤(一)葡萄糖标准曲线的制定管号0 1 2 3 4 5 6葡萄糖标准液(mL) 0 0.5 1.0 2.0 3.0 5.0 10.0②将各溶量瓶溶液混匀，在水浴锅或电炉上沸水浴5分钟，取出后立即用冷水冷却至室温，并加水定容，摇匀。
③于550nm 处用分光光计测定吸光度A 值，以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制葡萄糖标准曲线。
(二)还原糖的制备与测定 ①淀粉酸水解工艺取淀粉5~10g ，加入250mL 锥形瓶，按照固液比1∶10加入1%硫酸，用牛皮纸封好口，在121~125℃水解30min ，取出1、2滴置于白瓷板上，加1滴碘-碘化钾溶液直到不呈蓝色，即为水解终点。
淀粉中还原糖的测定
淀粉中还原糖的测定
淀粉是葡萄糖的重要前体，它的还原糖的测定是淀粉的酶水解分解过程中得到更多的葡萄糖的研究重点之一。
淀粉中还原糖的测定是指检测淀粉酶水解分解时得到多少葡萄糖。
它可以不同程度地揭示淀粉水解过程中多种反应物和反应机制，从而为淀粉研究和使用提供理论指导。
常用淀粉还原糖测定包括银蓟素法和紫色葡萄糖酶缓冲液（CERB）法。
银蓟素法通常使用复银蓟素（AIF3 ）作为还原剂，并用银溶液用作指示剂。
其原理是复银蓟素可以与葡萄糖反应，形成无色化合物，在添加银溶液后，无色化合物反应为深蓝色化合物，因此，用反应液的蓝色强度来表示淀粉水解中可以生成的葡萄糖量。
紫色葡萄糖酶缓冲液法（CERB）测定淀粉中生成的葡萄糖量，采用一定浓度的葡萄糖酶和一定浓度的磷酸柠檬酸钠缓冲液（pH 7.5）在中性环境下，葡萄糖酶将糖原分解成葡萄糖，而丙二醛大量生成，丙二醛和磷酸柠檬酸形成一种紫色混合物，并在530 nm处吸收光谱，计算其浓度来表示淀粉水解中的葡萄糖量。
淀粉的葡萄糖量有许多影响因素，如淀粉的粒径大小，水解温度、淀粉活性、淀粉溶液的pH值等。
淀粉还原糖测定可以反映淀粉水解过程中反应物和反应机制，可以用来研究淀粉的水解活性，进而洞察淀粉活性和可食用食品性能的关系。
淀粉中还原糖含量的测定实验报告
淀粉中还原糖含量的测定实验报告实验目的：了解淀粉中还原糖的含量测定方法,掌握其操作技能。
实验原理：淀粉在加热过程中会被分解为半乳糖单元,再由半乳糖单元与水分解产生葡萄糖和果糖,这些糖叫做还原糖。
还原糖会与硝酸铜溶液发生化学反应,生成蓝色沉淀。
利用这一特性,可以用硝酸铜法测定淀粉中还原糖的含量。
实验仪器：试管、恒温水浴、移液管、手持离心机、比色皿、分光光度计等。
实验材料：淀粉溶液、葡萄糖标准品、醋酸钠-醋酸酸钠缓冲液、硝酸铜试液、碱式氯化钾溶液。
实验步骤：1.准备工作：将硝酸铜试液浓度稀释至0.1mol/L,将酸性醋酸钠-醋酸酸钠缓冲液PH值调至4.5,将碱性氯化钾溶液稀释至10%。
2.样品制备：取1ml淀粉溶液加10ml酸性醋酸钠-醋酸酸钠缓冲液混合,放至沸水中加热5分钟,冷却至室温后离心取上清液,加50ml水调至粘度适宜。
3.标准品制备：取30mg葡萄糖溶于50ml水中,称取1、2、3、4、5ml混合溶液,并分别转移至不同的试管中,加入2ml酸性醋酸钠-醋酸酸钠缓冲液中。
4.加入试液：取淀粉样品0.5ml放入离心管中,加入2.5ml缓冲液和2.5ml硝酸铜溶液混合均匀,置于60℃水浴中加热15分钟后冷却,加入2.5ml碱性氯化钾溶液,静置10分钟。
5.比色测定：将标准品和样品离心管中的试液吸入移液管中,分别加入不同比色皿中静置10分钟后,用660nm的波长分光光度计检测蓝色产物溶液的吸光度值。
实验结果：样品试验：A值 = 0.45标准品试验：第一组：1ml葡萄糖,A值 = 0.12第二组：2ml葡萄糖,A值 = 0.24第三组：3ml葡萄糖,A值 = 0.37第四组：4ml葡萄糖,A值 = 0.49第五组：5ml葡萄糖,A值 = 0.60计算：以葡萄糖标准曲线计算样品中还原糖含量。
样品中还原糖含量 = (A值 - A0) / S其中,A0是淀粉试样的吸光度,S为标准曲线斜率。
计算得出样品中还原糖含量为3.5mg/ml。
淀粉、总糖、还原糖的测定方法
淀粉、总糖、还原糖的测定方法淀粉的测定方法---蒽酮法一( 原理用乙醇将烟叶中可溶性糖浸出并分离出去，而后烟叶中淀粉用适量Hcl，因淀粉在稀酸作用下被水解成葡萄糖，再按葡萄糖测定进行。
根据葡萄糖的含量从而算出淀粉含量。
二( 仪器设备三角瓶50ml 容量瓶100ml 移液管10ml、1ml 漏斗圆底烧瓶1000ml 离心管和离心机水浴锅温度计烘箱滤纸天平分光光度计三( 试剂盐酸乙醇氢氧化钠蒽酮四、试剂的配制和标准曲线的绘制1. 葡萄糖标准液的配制称取无水葡萄糖(AR级)0.1g溶于蒸馏水中，定容至100毫升，用前取此液10毫升，再用水稀释至100毫升。
2. 标准曲线的绘制取6支干洁刻度试管，依次移入葡萄糖标准液(100μg/ml)0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00ml后，再从1至6试管依次补加1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0ml蒸馏水后，再分别加入蒽酮试剂5毫升，于沸水中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色，记录OD值，以吸光值为纵坐标，糖含量为横坐标，绘出标准曲线 3. 80%乙醇的配制取400毫升乙醇加水定容至500ml4. 1当量的盐酸配制 43毫升浓盐酸加水定容至500ml5. 10%氢氧化钠配制 10g氢氧化钠溶于100ml水中6. 蒽酮试剂:1克蒽酮溶于72%的HSO1000ml(98%的HSO+240的蒸馏水)，棕色瓶冰箱2424保存2,3周。
五实验步骤1. 分离出水溶性糖0.1g样置于离心管中加入8毫升80%乙醇 80?水浴浸提30分钟冷却后离心(3600转)5分钟残渣再加入8ml80%乙醇。
重复三次2. 水解残渣用1当量的盐酸15ml洗入50ml三角瓶，摇匀后烘箱105度加热3.5小时，冷却后加10%氢氧化钠6ml中和，过滤，蒸馏水定容100ml。
3. 测定取滤液1ml(空白用1ml蒸馏水代替)，加入蒽酮试剂5ml，摇匀，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色六结果的计算与表述C=AN*0.9/WC—样品淀粉含量(μg/g) W—样品重量(g)A—标准曲线查得的糖量(μg) N—样品提取液占样品反应液的倍数蒽酮比色法测总糖:实验步骤:1、可溶性糖的提取:准确称取烟叶样品0.100克，置于离心管中，加入8毫升80%乙醇，于80?水浴浸提30分钟，冷却后于4000转离心5分钟，收集上清液，残渣再加入8毫升80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100毫升容量瓶中并定容至100毫升。
淀粉的国标测定方法
淀粉的国标测定方法测定食物中淀粉的方法有酶水解法、酸水解法、可消化淀粉和抗性淀粉的测定方法（酶-直接法）一、酶水解法1.原理样品经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。
2.适用范围GB5009.9-85，适用于所有含淀粉的食物。
3.仪器（1）回流冷凝器（2）水浴锅4.试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
（1）乙醚（2）0.5 % 淀粉酶溶液：称取淀粉酶（Sigma公司，E.C3.2.1.1）0.5 g，加100ml水溶解，加入数滴甲苯或三氯甲烷，防止长霉，贮于冰箱中。
（注：配成溶液的淀粉酶破坏很快，最好邻用现配。
）（3）碘溶液：称取3.6 g碘化钾溶于20 ml水中，加入1.3 g碘，溶解后加水稀释至100 ml。
（4）85 %乙醇。
（5）其余试剂同《蔗糖测定方法》5.操作方法5.1 样品处理称取2～5 g样品，置于放有折叠滤纸的漏斗内，先用50 ml乙醚分5次洗除脂肪（注：如果脂肪含量少，此步骤可免），再用约100 ml85 %乙醇洗去可溶性糖类（注：此步骤目的是去除可溶性糖），将残留物移入250 ml烧杯内，并用50ml水洗滤纸及漏斗，洗液并入烧杯内，将烧杯置沸水浴上加热15 min，使淀粉糊化，放冷至60 ℃以下，加20ml淀粉酶溶液，再55～60 ℃保温1h，并时时搅拌（注：温度过高，淀粉酶的活性破坏）。
然后取1滴此液加1滴碘溶液，应不现兰色，若显兰色，再加热糊化并加20ml淀粉酶溶液，继续保温，直至加碘不显兰色为止。
加热至沸，冷后移入250ml容量瓶中，并加水至刻度，混匀，过滤。
（注：此时淀粉已水解成双糖，过滤可去除残渣和纤维素）弃去初滤液，取50 ml滤液，置于250ml锥形瓶中，加5 ml 6 mol/L盐酸，装上回流冷凝器，在沸水浴中回流1h，冷后加2滴甲基红指示剂，用5mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，溶液转入100 ml容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并入100ml容量瓶中，加水至刻度，混匀备用。
不同品种马铃薯淀粉和还原糖含量的测定
不同品种马铃薯淀粉和还原糖含量的测定张祥乐，蒋战强甘肃农业大学，兰州（730070）摘要：本试验测定了26个马铃薯品种（系）的淀粉、还原糖含量，结果表明了甘3好淀粉含量最高达26.06%，及适宜也做淀粉加工原料；AC转甘2还原糖含量最低，为0.057%，适宜于加工于油炸薯片。
关键词：马铃薯，淀粉，还原糖。
1前言马铃薯是一种产量高，深受群众喜欢的粮菜兼作作物，随着市场经济的发展，马铃薯无论是作为一种工业原料还是食品加工原料都有其重要的利用价值，它对商品价值也随消费方式和营养品质的改善呈现不断增长的趋势。
因此，对马铃薯品种的要求，也随着市场经济的发展和人民生活的多种需求方式，向早熟、高产、优质和适合多种加工方式专用品种发展。
随着市场的日趋繁荣，马铃薯应用范围也越来越广泛，对其品质的要求也越严格，其中大多是对淀粉、还原糖有特别的要求。
淀粉是光合作用制造的最稳定的天然大分子物质之一，按其结构不同可大致分为直链淀粉和支链淀粉，淀粉不仅是人类的食物来源之一，同时也是重要的工业原料，马铃薯淀粉的含量高低，是衡量马铃薯品质好坏的主要标准之一[6]。
加工食品油炸的专用马铃薯品种要求成品马铃薯块中还原糖的含量不能过高，因过高的还原糖会与游离的氨基反应是马铃薯的颜色变得焦黄甚至发褐。
这样会严重影响油炸马铃薯的商品价值[1]。
若作为蔬菜品种食用，还原糖过高会使菜的质地变柔口感不爽，冷贮也会导致块茎中的还原糖含量的大幅度提高，加工品质下降。
此外，还发现还原糖含量高的马铃薯易受病原菌的侵染引起软腐病[2]。
因此，还原糖的测定对检测马铃薯品质和育种工作都是一个不可缺少的重要指标。
研究马铃薯品种资源中各个材料的品质状况，挖掘利用优质资源，成为当今我国马铃薯育种工作中期待解决的问题。
本文对不同马铃薯品种（系）的淀粉、还原糖含量进行了详细的研究，以期为马铃薯育种工作者选择优质材料及生产上选用加工提供理论依据[3-5]。
2.材料与方法2.1试验材料参试材料共26份，包括大西洋、ac转甘2、大西洋m、浅眼面包、3-33、2-28、浅芽面包、Novally、3-44、杂2、陇薯3号、九号甘2、甘2白、甘农1号、夏百弟、大西洋2号、杂1实生、1-20、大西洋×甘1、2-296、甘3号、甘农2号、卡那贝克、D 6、ac转大西洋、克新。
DNS法淀粉含量测定
淀粉含量测定侯曼玲，食品分析，化学工业出版社，北京，2004 1 实验原理样品经除去脂肪和可溶性糖类后，其中的淀粉用酸水解成具有还原性的单糖，然后按还原糖测定，并折算成淀粉。
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖、麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以0.9。
2.材料与方法2.1实验材料谷物种子2.2主要仪器本实验用到的实验仪器有：具塞玻璃刻度比色管：25mL×19；烧杯：100mL×4；三角瓶：100mL×1；容量瓶：100mL×3，50mL×3；刻度吸管：1mL×4；2mL×3；10mL×1；沸水浴；冰浴；扭力天平；721型可见分光光度计2.3实验试剂乙醚，乙醇溶液(φ=85%)，HCl溶液(1+1)，NaOH溶液：配制的质量浓度分别为10%和40%，Pb(Ac)2溶液(200g/L)，Na2SO4溶液(100g/L)甲基红指示剂(2g/L)溶解0.2g甲基红于60mL乙醇中，加水稀释至100mL1mg/mL葡萄糖标准液准确称取80℃烘至恒重的分析纯葡萄糖100mg，置于小烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至100mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。
3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂将6.3g DNS和262mL 2M NaOH溶液，加到500mL含有185g酒石酸钾钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
还原糖测定(斐林法)
还原糖的鉴定(斐林试剂法)一、实训目的：1、掌握斐林试剂的配制2、掌握以斐林试剂鉴定还原糖的方法二、基本原理还原糖可以将斐林试剂中的二价铜离子还原为一价铜离子，反应终点可以由次甲基兰指示（蓝色消失形成砖红色），根据一定量的斐林试剂完全还原所需的还原糖量，可计算加入样品中的还原糖的含量。
三、试剂和仪器1、试剂（1）斐林试剂甲液：称取7.5g CuSO4，0.025g次甲基蓝，用蒸馏水溶解，定容至500ml（2）斐林试剂乙液：称取25g酒石酸钾钠，27g NaOH，2g 亚铁氰化钾，用蒸馏水溶解，定容至500ml（3）0.1%标准葡萄糖溶液：准确称取干燥至恒重的葡萄糖1.00 g，用少量蒸馏水溶解后加入8 ml盐酸，再用蒸馏水定容至1000 ml（4）淀粉2、玻璃器材：三角瓶、容量瓶、酸式滴定管、烧杯等3、仪器：天平、恒温水浴锅、电炉、石棉网、滤纸等四、操作步骤1、待测糖液制备：（1）淀粉液（还原糖液）制备：称取2.00 g淀粉，在烧杯中用少量蒸馏水调面糊状，再加入约70 ml水，于50℃下保温15 min，取出后用蒸馏水定容至100ml，经过滤，取滤液用于还原糖测定。
（2）蔗糖液制备：称取2.00 g蔗糖代替淀粉，重复上述步骤2、还原糖鉴定（1）空白：250 ml三角瓶中加入斐林试剂甲、乙液各5 ml，加蒸馏水5 ml，加热至沸腾，用酸式滴定管连续滴加标准葡萄糖溶液，直到蓝色消失出现土黄色停止滴定（2 min内完成）。
记录滴定用去G溶液用量V0。
注：若三角瓶离开电炉后又出现蓝色，不能再继续滴定。
(2)还原糖测定：分别用5 ml淀粉液、5 ml蔗糖液代替蒸馏水重复上述实验。
记录滴定用去G溶液用量V。
五、结果计算：还原糖含量（以葡萄糖计）＝(V0-V)×标准G浓度×稀释倍数÷样品质量（g）思考：蔗糖是还原糖吗？淀粉有还原性吗？。
淀粉中还原糖的测定
得出吸光值
实 验 步
骤
管号
1mg/ml葡 萄糖标准
液(ml)
蒸馏水 (ml)
0
0
2
1
0.2
1.8
2
0.4
1.6
DNS (ml)
葡萄糖含 量（mg)
光密度值
1.5
0
0
1.5
0.2 0.052
1.5
0.4 0.196
3
0.6
1.4
1.5
0.6 0.293
4
0.8
1.2
1.5
0.8 0.441
5
1.0
1.0
实
• 1. 掌握还原糖和总糖测定的基本原理。
验 目
• 2. 学习比色法测定还原糖的操作方法
的
和分光光度计的使用。
还原糖是具有还原性的糖类的统称。分子中含有
游离醛基或者酮基的单糖和含有游离醛基的二糖
都具有还原性。如葡糖糖、果糖、半乳糖、乳糖、
阿拉伯糖、麦芽糖等。 在碱性条件下，还原糖与
实 验
3 ， 5 一二硝基水杨酸共热， 3 ， 5 一二硝基水 杨酸被还原为 3-氨基 -5- 硝基水杨酸（棕红色物
材料 ： 食用面粉。
1. 沸水浴时应将试管口用保鲜膜封住，以防 止水分蒸发引起体积误差。
注 2. 应该待反应体系稳定后进行比色（约 10min）。
意 3. 比色时，比色皿中盛放的溶液体积不应过
事
多，一般在2/3~3/4。
项 4. 比色时不能将溶液溅在仪器面板和仪器内。
5. 标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进
1.在称取面粉时候，滤纸上有少许淀粉未倒
实
干净，或者电子天平不太准确造成的质量 上的误差。
淀粉的糖化实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 了解淀粉糖化的基本原理和过程。
2. 掌握淀粉糖化实验的操作步骤。
3. 通过实验验证淀粉在酶的作用下糖化的效果。
4. 掌握还原糖的检测方法。
二、实验原理淀粉是由大量葡萄糖分子通过α-1,4-糖苷键和α-1,6-糖苷键连接而成的多糖。
在淀粉糖化过程中，淀粉首先在淀粉酶的作用下被水解成糊精和低聚糖，这一过程称为液化。
随后，在糖化酶的作用下，糊精和低聚糖进一步水解成葡萄糖，这一过程称为糖化。
实验中常用的淀粉酶包括α-淀粉酶和糖化酶。
α-淀粉酶作用于淀粉的α-1,4-糖苷键，将淀粉分解成糊精和低聚糖；糖化酶作用于糊精和低聚糖的α-1,4-糖苷键，将它们分解成葡萄糖。
还原糖是指具有还原性的糖类，如葡萄糖、果糖等。
在实验中，通过检测还原糖的含量来评价淀粉糖化的效果。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：恒温水浴锅、锥形瓶、滴定管、移液管、玻璃棒、烧杯、漏斗、滤纸等。
2. 试剂：淀粉、α-淀粉酶、糖化酶、葡萄糖标准溶液、硫酸铜溶液、氢氧化钠溶液、硫酸锌溶液、苯酚溶液等。
四、实验步骤1. 配制淀粉溶液：称取一定量的淀粉，用蒸馏水溶解，配制成一定浓度的淀粉溶液。
2. 预处理淀粉溶液：将淀粉溶液在60℃下加热处理30分钟，以消除淀粉溶液中的杂质。
3. 液化：向淀粉溶液中加入适量的α-淀粉酶，调节pH值至最适值，在恒温水浴锅中反应一定时间，使淀粉液化。
4. 糖化：向液化后的淀粉溶液中加入适量的糖化酶，调节pH值至最适值，在恒温水浴锅中反应一定时间，使淀粉糖化。
5. 还原糖的检测：取一定量的糖化液，按照还原糖的检测方法进行检测。
五、实验结果与分析1. 液化过程：通过实验观察到，淀粉溶液在α-淀粉酶的作用下，逐渐由透明变为浑浊，说明淀粉已发生液化。
2. 糖化过程：通过实验观察到，液化后的淀粉溶液在糖化酶的作用下，浑浊度逐渐降低，说明淀粉已发生糖化。
3. 还原糖的检测：通过检测还原糖的含量，可以评价淀粉糖化的效果。
淀粉中还原糖的测定
误差分析
误差来源1
误差来源2
样品制备过程中可能存在的误差，如称量 不准确、样品溶解不充分等。
实验操作过程中可能存在的误差，如滴定 管读数不准确、溶液混合不均匀等。
误差来源3
实验环境因素可能对实验结果产生影响， 如温度、湿度等。
为了减小误差，可以采取以下措 施
提高称量准确度、增加样品溶解时间、使 用精确度更高的滴定管、确保溶液混合均 匀、控制实验环境条件等。
仪器昂贵，操作复杂。
分光光度法
原理
利用还原糖在特定波长下的吸 光度，通过标准曲线法计算还
原糖的含量。
步骤
样品处理、显色反应、测定吸 光度、标准曲线法计算结果。
优点
操作简便，对仪器要求较低。
缺点
精度相对较低，受其他物质干 扰较大。
03 材料与设备
CHAPTER
实验材料
淀粉样品：需要准备不同来源和 种类的淀粉样品，以便进行比较
电子天平：用于准确称量淀粉样品和各 种试剂。
离心机：用于在实验前将淀粉样品中的 可溶性糖分离出去。
恒温水浴锅：用于在实验过程中保持恒 定的温度。
04 步骤与操作
CHAPTER
实验前准备
实验器材
准备实验所需的所有器材，如试 管、滴定管、烧杯、容量瓶等， 确保它们干净、干燥、无污染。
试剂
根据实验要求，准备足够的试剂， 如葡萄糖标准溶液、硫酸铜溶液、 氢氧化钠溶液等，确保它们的质量 和浓度符合要求。
和评估。
葡萄糖标准品：用于建立标准曲 线，以确定样品中还原糖的含量。
硫酸、氢氧化钠、苯酚、硫酸铜 等试剂：用于实验过程中的化学
反应和显色反应。
实验设备
分光光度计：用于检测样品中还原糖与 苯酚-硫酸反应生成的黄色物质在 490nm处的吸光度。
《还原糖的测定方法_国标》
《还原糖的测定方法_国标》还原糖是利用还原性固体物质与硫酸酸作用而形成的糖类物质，是各种天然糖和蔗糖等碳水化合物的主要成分。
还原糖的测定方法主要包括酚酞法和锁紫法两种。
一、酚酞法1.原理还原糖在酸性溶液中能够与酚酞形成红色络合物，按照这个特性可以利用测定还原糖的含量。
酚酞法是将酚酞加入葡萄糖溶液，并加入硫酸，使葡萄糖反应生成邻磺酸基苯甲醛，酚酞与邻磺酸基苯甲醛产生红色络合物，根据颜色变化来测定还原糖的含量。
2.步骤（1）样品处理：将样品取适量加入标准瓶中，加入适量蒸馏水稀释。
（2）试剂溶液制备①酚酞指示剂：0.1%酚酞水溶液，加入适量氢氧化钠溶液调节其pH值到8左右；②还原剂：0.05mol/L的亚硫酸钠溶液。
（3）测定操作①在滴定管中加入5ml淀粉指示液；②将50ml试剂用热水浴加热至60℃，在加热的过程中不断振荡，直到试剂完全溶解；③加入3ml样品，再加入1.5ml的硫酸；④加入恰好的量的还原剂，至混合溶液变成淡绿色，继续振荡至反应彻底；⑤从头部滴入酚酞指示液，直至溶液变为粉色，记录滴定管体积。
（4）计算还原糖的质量浓度二、锁紫法1.原理锁紫法是一种定量测定还原糖的方法，其原理是利用还原性糖在酸性条件下氧化生成醛酸物质，再与锁紫剂作用形成深紫色络合物，根据反应色深与被测样品中还原糖含量成正比关系的特点，来定量测定还原糖的含量。
2.步骤（1）样品前处理：将样品取适量加入到锥形瓶中加入适量蒸馏水稀释，搅拌溶解。
（2）试剂溶液制备①锁紫试剂：将0.2g锁紫用少量水样吸湿后加入10mL浓氢氧化钠（4mol/L），用水稀释到100ml，在加入5ml浓硫酸搅拌，备用；②还原剂：0.05mol/L的亚硫酸钠溶液。
（3）操作流程①在锥形瓶中加入1ml锁紫试剂和30ml蒸馏水；②加入3ml样品后加入2ml还原剂，充分搅拌均匀；③经过10分钟左右，样品溶液颜色变为紫色，放置待沉淀，用滤纸滤掉沉淀；④将过滤后的溶液转移到光度计试样池，用蒸馏水稀释至标线；⑤根据光度计读数计算样品中还原糖的质量浓度。
淀粉含量的测定
淀粉含量的测定一、实验目的掌握淀粉含量测定二、实验原理采用盐酸水解标准葡萄糖液反滴定法，测出的量实际是包括还原糖 的总糖量。
三、溶液和试剂斐林试剂、0.2%标准葡萄糖液、1:4盐酸和20%的氢氧化钠溶液都与粗淀粉测定相同。
四、测定方法1、水解液制备准确称取入池醅5g(出池醅10g)（准确到0.1g ）于250mL 三角瓶中，加入1：4盐酸100mL ，安装回流冷凝器，或者1m 长的玻璃管，微沸水解30min ，中和、过滤、定容到500mL 管操作步骤相同，即冷却后用20%氢氧化钠中和至pH5~7，约耗碱11mL ，用pH 试纸试验检查，经滤纸过滤，滤液接受在500mL 容量瓶中，洗净残渣，定容至刻度备用。
2、还原糖的测定斐林液标定 准确吸取斐林甲乙液各5mL 于250mL 三角瓶中，加水20mL ，次甲基蓝指示液2滴，在沸腾状态下用上述水解糖液滴定到终点，消耗体积为V 0试样测定 a 、预试：为正确掌握预加标准液体积，应先做预试，准确吸取斐林甲乙液各5mL 于250mL 三角瓶中，加入水解糖液10mL ，水10mL ，用0.2%标准葡萄糖液滴定到次甲基蓝终点，消耗体积为V 1。
b 、正式滴定：准确吸取斐林甲乙液各5mL 于250mL 三角瓶中，加入水解糖液10mL ，加一定量水，使总体积与斐林液标定终体积基本一致[加水量=10+（V 0- V 1）]。
从滴定管中加入（V 1-1）mL 标准糖液，煮沸2min ，加2滴次甲基蓝，继续用标准糖液在1min 内滴定到终点，消耗标准糖液体积为V 。
3、计算0(V )%=0.910010500V m ρ-⨯⨯⨯⨯淀粉（） 式中 V 0——标定斐林液消耗的标准糖液的体积（mL ）V 1——试样滴定时消耗标准糖液的体积（mL ）ρ——标准糖液浓度（g/mL ）10500——试样分取倍数 0.9——还原糖换算成淀粉系数m ——试样质量（g ）。
还原糖检测方法
糖液质量的检测方法1、糖浆OD值的检测方法：1ml糖浆样品（DS%≈30%）＋9ml无水乙醇，迅速混匀后，在650nm下测其OD值。
2、斐林滴定法测DE值淀粉酶将淀粉水解成短链的糊精及少量的葡萄糖。
斐林试剂由甲乙液组成，甲液为硫酸铜溶液，乙液为氢氧化钠与酒石酸钾钠溶液。
平时甲、乙液分别储存，测定时才等体积混合，混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀。
NaOH + CuSO4→Cu（OH）2+NaSO4生成的氢氧化铜和酒石酸钾钠反应，生成酒石酸钾钠与铜的络合物，使氢氧化铜溶解。
COOK（CHOH）2COONa + Cu（OH）2→COOK（CHO ）2 Cu COONa +2H2O 酒石酸钾钠铜络合物中的二价铜就是一个氧化剂，能使还原糖氧化，而二价铜被还原成一价的红色氧化亚铜沉淀：2 Cu（OH）2→COOK（CHO）2Cu COONa + CHO（CHOH）4CH2OH +2 H2O→2 COOK（CHOH）2COONa + COOH（CHOH）4CH2OH + Cu2O剩余的二价铜在酸性调价下与碘化钾反应，生成碘，用硫代硫酸钠滴定，I2被还原成I-，随着其缓缓加入，颜色由棕黄色逐渐变成黄色，当呈现淡黄色时，2%的淀粉指示剂，缓慢滴加硫代硫酸钠直至溶液中的蓝色消失，为浅粉色，即为滴定终点。
通过这个反应，能够测量存在于淀粉水解物中的还原糖含量。
用纯水代替样品与斐林试剂反应，所消耗硫代硫酸钠的体积为空白值。
定义：葡萄糖当量浓度（DE）代表淀粉水解的程度，是以葡萄糖计算的还原糖含量占干物质的百分率，其数值的大小与淀粉水解的程度成正比。
化学试剂：Na2CO3C 4H4O6KNa，4H2OCuSO4NaOH葡萄糖（Dextrose）；HPLC级KII2H2SO4Na2S2O35H2O蒸馏水试剂：试剂配置方法有效期斐林试剂：甲液69.3g CuSO45H2O溶解在大约600ml蒸馏水中，将其转移到1000ml容量瓶中，用水定容至刻度线6个月斐林试剂：乙液346g C4H4O6KNa4H2O和100g NaOH溶解在大约800ml蒸馏水中，将其转移到1000ml容量瓶中，用水定容至刻度线。
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6. 实验完成后洗净仪器，放回原位。
骤步验实
? 1.标准曲线的绘制
管号
1mg/ml 葡
萄糖标准 液(ml)
蒸馏水 (ml)
0
0
2
1
0.2
1.8
2
0.4
1.6
3
0.6
1.4
4
0.8
1.2
5
1.0
1.0
6
1.2
0.8
DNS (ml)
葡萄糖含 量（mg)
光密度值
1.5
0
1.5
0.2
1.5
0.4
1.5
0.6
材料 ： 食用面粉。
项事意注
1. 沸水浴时应将试管口用保鲜膜封住，以防 止水分蒸发引起体积误差。
2. 应该待反应体系稳定后进行比色（约 10min ）。
3. 比色时，比色皿中盛放的溶液体积不应过 多，一般在 2/3~3/4 。
4. 比色时不能将溶液溅在仪器面板和仪器内。
5. 标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进 行，一起显色和比色。
还原糖的测定
3,5-二硝基水杨酸比色 法
班级 ： 生科2班 姓名 ： 胡雨雨 同组人 ：张贤明
的目验实
? 1. 掌握还原糖和总糖测定的基本原理。 ? 2. 学习比色法测定还原糖的操作方法
和分光光度计的使用。
理原验实
还原糖是具有还原性的糖类的统称。分子中含有
游离醛基或者酮基的单糖和含有游离醛基的二糖 都具有还原性。如葡糖糖、果糖、半乳糖、乳糖、 阿拉伯糖、麦芽糖等。 在碱性条件下，还原糖与 3 ， 5 一二硝基水杨酸共热， 3 ， 5 一二硝基水 杨酸被还原为 3-氨基 -5- 硝基水杨酸（棕红色物 质），还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。一定 范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程 度成一定的比例关系， 540nm 波长下测定棕红 色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分 别求出样品中还原糖和总糖的含量。
骤步验实
得出吸光值
管号
1mg/ml葡
萄糖标准 液(ml)
蒸馏水 (ml)
0
0
2
1
0.2
1.8
2
0.41.63源自0.61.44
0.8
1.2
5
1.0
1.0
6
1.2
0.8
DNS (ml)
葡萄糖含 量（mg)
光密度值
1.5
0
0
1.5
0.2 0.052
1.5
0.4 0.196
1.5
0.6 0.293
1.5
0.8 0.441
析分差误验实
1. 在称取面粉时候，滤纸上有少许淀粉未倒 干净，或者电子天平不太准确造成的质量 上的误差。
2. 在定容和移取液体时，读数不准确，或者 有的移液管没有写吹字却吹了，造成的误 差。
3. 在测吸光度值的时候没有擦干净导致的测 量误差，或者用酒精洗的时候没有洗干净 造成的误差。
骤步验实
3 ）显色和比色，取 2 支 25 ml 刻度试管， 编号，按下表所示的量操作。
管号
还原糖待 蒸馏水 测液（ml) （ml)
DNS
查曲线葡 光密度值 萄糖含量
(ml)
(mg)
样品1 0.5
1.5
1.5 0.112 0.27
样品2 0.5
1.5
1.5 0.121 0.28
样品光密度平均值=(0.112+0.121)/2=0.1165
1.5
0.8
1.5
1.0
1.5
1.2
骤步验实
? 按照上表取 7支试管配好试剂，将各管摇匀， 在沸水浴中加热 5min ，取出后立即冷却 至室温，再以蒸馏水定容至 25ml ，混匀。 在 540nm 波长下，用 0 号管调零，分别 读取 1-6 号管的吸光度。以吸光度为纵坐 标，葡萄糖毫克数为横坐标，绘制标准曲 线。
根据函数 y=0.595x-0.046 可得葡萄糖含量
理处据数及果结验实
? 已知提取液总体积为100ml、测定时取用体积为 0.5ml、样品毫克数为3000mg、根据以下公式进 行计算。
样品平均葡萄糖 =0.27+0.28=0.275mg 还原糖%= （0.275*100*100% ）/
（0.5*3000 ）=18.3%
法方他其
糖含量定量测定的方法除此之外还有 ①高效液相色谱法（ HPLC ） ②苯酚-硫酸法 ③蒽酮法 ④双折射现象
得心
从结果中所得到的的心得 并不是所有的糖有甜的味 道，只有少数结构简单的糖是有甜味的，如葡萄 糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、乳糖等，充斥于各种 甜食之中的就是它们。自然界存在的多数糖——多
1.5
1.0 0.549
1.5
1.2 0.668
? 以吸光度为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐 标，绘制标准曲线
骤步验实
骤步验实
2. 样品中还原糖和总糖含量的测定
样品中还原糖的提取：准确称取 3.0g 食用 面粉，放在 50ml 三角瓶中，先以少量蒸 馏水调成糊状，然后加 25ml 蒸馏水，搅 匀，置于 5 0 ℃恒温水浴中保温 20min ， 使还原糖浸出。离心，用 2Oml 蒸馏水洗 残渣，再过滤，将两次的滤液全部收集在 50ml 的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度， 混匀，作为还原糖待测液。
料材、剂试、器仪
仪器 ： （ 1 ）试管X 11 （ 2 ）玻璃漏斗 X2 （ 3 ）烧杯： 1OOml X
1 （ 4 ）三角瓶： 100m1 X 1 （ 5 ）容量瓶： 100ml X 3 （ 6 ）恒温水浴 （ 7 ）沸水浴 （ 8 ）电子天平 （ 9 ）分光光 度计
试剂 ： （ 1 ） 1 mg/ ml 葡萄糖标准液：准确称取 10mg 分析纯葡萄 糖（预先在 8 0 ℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏 水溶解后，定量转移到 10ml 的容量瓶中，以蒸馏水定容至 刻度，摇匀，冰箱中保存备用。 （ 2 ） 3 ， 5- 二硝基水杨 酸试剂：将 0.315g 3, 5- 硝基水杨酸和 13.1ml 2mol/NaOH 溶液，加到 25ml 含有 9.25g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再 加 0.25g 结晶酚和 0.25g 亚硫酸钠，搅拌溶解。冷却后加蒸 馏水定容至 50ml ，贮于棕色瓶中备用。