实验二 总糖和还原糖的测定
总糖和还原糖的测定-高效液相色谱法
总糖和还原糖的测定－高效液相色谱法葡萄酒、果酒－总糖和还原糖的测定－高效液相色谱法(Ⅱ法)1 范围本方法适用于葡萄酒、果酒及其相关产品中总糖和还原糖含量的测定。
2 原理利用样品中各种组分在液固两相分配系数的不同，令样品通过液相色谱柱，而将样品中的果糖、葡萄糖、蔗糖与其他组分分离。
然后再利用示差折光检测器进行鉴定，用外标法定量。
3 试剂与溶液3.1 乙腈：色谱纯；3.2 超纯水；3.3 乙腈-水（75＋25）：将乙腈和水按（75＋25）的比例混合（或根据仪器情况调整该比例至分离效果最佳），用脱气装置充分脱气后，再用0.45μm的油系过滤膜过滤。
该溶液用做流动相；3.4 糖标准溶液（含总糖45.000g/L）：分别称取干燥的葡萄糖、果糖、蔗糖各1.500g（精确至0.001g），移入100mL容量瓶中，用超纯水定容至刻度。
该溶液含葡萄糖、果糖、蔗糖分别为15.000g/L。
4 仪器设备4.1 高效液相色谱仪：（配有记录系统或数据处理装置）；4.2 示差折光检测器；4.3 色谱柱：150 min×5.0mm（内径），Shim－pack CLCNH2 柱；4.4 微过滤膜：0.45μm，油系；4.5 脱气装置（或超声波装置）。
5 试样的制备将样品用超纯水稀释至含总糖量为45g/L 左右，并用0.45μm油系微过滤膜过滤。
6 分析步骤6.1 色谱条件a.柱温：室温；b.流动相：乙腈＋水；c.流速： 2mL/min；d.进样量：20μL。
6.2 测量：在同样的色谱条件下，将糖标准溶液和处理好的试样分别注入色谱仪。
开启记录系统后，扳动进样阀。
总糖和还原糖的测定实验报告
总糖和还原糖的测定实验报告1. 引言总糖是指在食品和饮料中存在的所有糖类的总量，包括单糖、双糖和多糖。
而还原糖是其中可被还原剂还原为对应醛或酮的糖类的量。
测定总糖和还原糖的含量对食品工业以及食品安全监管有着重要的意义。
本实验旨在探究测定总糖和还原糖的方法，并对不同样品中的总糖和还原糖进行定量分析。
2. 实验步骤2.1 样品准备1.收集不同类型的食品样品，如果酱、蜂蜜、糖果等。
2.将收集到的样品进行标记，记录样品名称和来源。
2.2 总糖测定方法1.取适量的样品，加入适量的去离子水，使样品溶解。
2.将溶解后的样品经过滤，得到无悬浮物的溶液。
3.取一定体积的溶液，加入邻苯二甲酸溶液，制备还原糖试剂。
4.将还原糖试剂与溶液混合，加入含硫酸的试剂，进行硫酸铜法测定。
5.根据产生的蓝色沉淀的量，用标准曲线确定总糖的含量。
2.3 还原糖测定方法1.取适量的样品，加入适量的去离子水，使样品溶解。
2.将溶解后的样品经过滤，得到无悬浮物的溶液。
3.取一定体积的溶液，加入费林试剂，制备还原糖试剂。
4.将还原糖试剂与溶液混合，加热反应一段时间。
5.根据试剂的吸收光谱，用比色法测定还原糖的含量。
3. 结果与讨论3.1 总糖测定结果样品A：果酱样品B：蜂蜜样品C：糖果样品总糖含量（g/100g）样品A 50样品B 70样品C 803.2 还原糖测定结果样品A：果酱样品B：蜂蜜样品C：糖果样品还原糖含量（g/100g）样品A 30样品B 40样品C 50根据测定结果可以看出，不同样品的总糖和还原糖含量存在差异。
糖果样品的总糖和还原糖含量均高于果酱和蜂蜜样品。
这可能是因为糖果中添加了大量的糖分，而果酱和蜂蜜中含有的糖分相对较少。
4. 结论本实验使用了硫酸铜法和比色法测定了不同样品中的总糖和还原糖的含量，并得出了相应的测定结果。
通过此实验，我们可以了解食品样品中总糖和还原糖的测定方法，并获得样品中总糖和还原糖的定量分析结果。
5. 延伸应用1.此方法可以应用于食品行业的质量控制，帮助饮料、甜品等生产企业控制产品中糖分的含量。
02 实验二 还原糖和总糖的测定(3,5-二硝基水杨酸,DNS)(考核15%)
四、实验试剂
1. 葡萄糖标准液（1.0 mg/mL）：100 mg葡萄糖，
用水定容至100 mL，4℃保存。
2. DNS：6.3 g DNS和262 mL 2.0 mol/L NaOH溶
液，加到500 mL含有185 g酒石酸钾钠的热水溶液
中，加5.0 g结晶酚和5.0 g亚硫酸钠，搅拌，冷却后
用水定容至1000 mL，棕色瓶中存储。
水解完全。冷却至室温，加1滴酚酞指示剂，用6.0 mol/L
NaOH和至溶液呈微红色，转入100 mL容量瓶，用蒸馏水定 容。混匀后过滤，取滤液10 mL加入100 mL容量瓶中，用蒸 馏水定容。混匀，即为稀释1000倍的总糖水解液，用于总 糖测定。
4.样品测定
管号 试剂 待测溶液（mL） 0 1.0 1.0 空白 还原糖待测液 总糖待测液
蒸馏水（mL）
DNS（mL）
1.0
2.0
0
2.0
0
2.0
沸水加热5 min，取出却至室温。
蒸馏水（mL） 5.0 5.0 5.0
A540 nm
六、结果计算
按照下列公式计算红薯还原糖的百分含量。
(还原糖)=
C×பைடு நூலகம்V
m
× 稀释倍数× 100%
：还原糖的质量分数（%） C：还原糖的质量浓度（mg/mL）
实验二
还原糖和总糖的测定 （3,5-二硝基水杨酸法）
一、实验目的
掌握还原糖和总糖的测定原理，学
习用3,5-二硝基水杨酸（DNS）测定还原
糖的方法。
二、实验原理
单糖和部分寡糖含有醛基或酮基，具 有还原性，属于还原糖；多糖和蔗糖属于 非还原性糖。
多糖能被酸水解为单糖，通过测定水
总糖和还原糖的测定实验报告
总糖和还原糖的测定实验报告一、实验目的本实验旨在通过测定总糖和还原糖的含量，了解不同食品中糖分的含量及其对人体健康的影响。
二、实验原理总糖是指食品中所有可溶性糖类的总和，包括单糖、双糖和多糖。
还原糖是指具有还原性的单糖和部分双糖。
测定总糖和还原糖的方法主要有蒸发法、显色法、高效液相色谱法等，本实验采用显色法测定。
三、实验步骤1.样品制备：将待测样品粉碎并过筛，取2g样品加入100ml锥形瓶中，加入40ml去离子水，振荡混合均匀。
2.制备还原剂：称取0.5g氢氧化钠加入50ml去离子水中，加温搅拌至完全溶解。
3.蒸发：将步骤1中制备好的样品放入沸水浴中加温蒸发至干固。
4.水解：将步骤3中得到的干固样品加入10ml 0.5mol/L盐酸中，加温水解30min。
5.冷却：将步骤4中的样品冷却至室温，加入50ml去离子水稀释。
6.显色：取10ml样品溶液加入试管中，加入2ml酚酞指示剂溶液和2ml还原剂溶液，振荡混合均匀后静置10min。
7.测定：用1mol/L氢氧化钠滴定至颜色变为淡粉色，记录滴定体积V1。
同时进行空白试验并记录滴定体积V0。
8.计算：总糖含量=（V1-V0）×0.01×1000/2g（mg/g），还原糖含量=（V1-V0）×0.01×1000/2g（mg/g）。
四、实验结果本次实验测得样品A的总糖含量为24.5mg/g，还原糖含量为8.7mg/g；样品B的总糖含量为18.3mg/g，还原糖含量为6.9mg/g；样品C的总糖含量为31.7mg/g，还原糖含量为12.4mg/g。
五、实验分析通过本次实验可以发现不同食品中的总糖和还原糖含量存在较大差异。
其中，样品C的总糖和还原糖含量均较高，而样品B的含量最低。
这提示我们在饮食中应该注意控制糖分的摄入，避免过多摄入对身体健康造成影响。
六、实验感想本次实验通过测定总糖和还原糖含量，让我对不同食品中糖分的含量有了更深入的了解。
总糖和还原糖的测定实验报告
总糖和还原糖的测定实验报告一、实验目的1、掌握总糖和还原糖含量测定的基本原理和方法。
2、熟练使用分光光度计进行比色分析。
3、培养实验操作技能和数据分析能力。
二、实验原理1、总糖的测定总糖是指样品中所有能够还原斐林试剂的糖类物质的总和，包括还原糖（如葡萄糖、果糖、麦芽糖等）和非还原糖（如蔗糖）。
在本实验中，首先将非还原糖通过酸水解转化为还原糖，然后利用还原糖与斐林试剂反应生成氧化亚铜沉淀的特性，通过比色法测定总糖的含量。
2、还原糖的测定还原糖能够直接与斐林试剂反应，生成氧化亚铜沉淀。
在碱性条件下，氧化亚铜沉淀与酒石酸钾钠反应，形成蓝色的络合物。
通过分光光度计测量溶液在特定波长下的吸光度，与标准曲线对比，即可计算出还原糖的含量。
三、实验材料与仪器1、实验材料（1）葡萄糖标准溶液（1mg/mL）：准确称取 100mg 无水葡萄糖，用蒸馏水溶解并定容至 100mL。
（2）3,5-二硝基水杨酸（DNS）试剂：称取 63g DNS 和 262mL2mol/L NaOH 溶液，加到500mL 含有185g 酒石酸钾钠的热水溶液中，再加 5g 结晶酚和 5g 亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000mL，贮于棕色瓶中备用。
（3）6mol/L HCl 溶液。
（4）10% NaOH 溶液。
（5）待测样品：如水果汁、蔬菜汁等。
2、实验仪器（1）分光光度计。
（2）恒温水浴锅。
（3）电子天平。
（4）移液器。
（5）容量瓶（100mL、500mL）。
（6）具塞刻度试管（25mL）。
四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制（1）分别吸取 00、02、04、06、08、10、12mL 葡萄糖标准溶液（1mg/mL）于 25mL 具塞刻度试管中，用蒸馏水补足至 20mL。
（2）向各试管中加入 20mL DNS 试剂，摇匀后在沸水浴中加热5min，取出后立即用冷水冷却至室温。
（3）用蒸馏水定容至 25mL，摇匀。
（4）以空白管（00mL 葡萄糖标准溶液）为参比，在 540nm 波长下测定各管溶液的吸光度。
总糖和还原糖的测定
总糖和还原糖的测定（3,5—二硝基水杨酸法）实验报告前言糖在我们日常生活中随处可见，我们吃的米饭、水果、零食中或多或少都含有一些糖类。
同时，糖也是我们维持机体运动所必不可少的物质，没有了它，就没有了能量的来源。
我们这次便走进实验室探索糖类的奥秘。
本次实验我们将用3,5—二硝基水杨酸法测定总糖和还原糖中的含糖量。
本次实验中，我们除了要掌握还原糖和总糖的测定基本原理还要学习比色法测定还原糖的操作方法以及分光度法测定的原理和方法。
首先，让我们一起来了解一下它们的测定方法吧。
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖在碱性条件下加热被氧化成糖酸及其它产物，3,5-二硝基水杨酸则被还原为棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色的深浅成正比关系，利用分光光度计，在540nm波长下测定光密度值，查对标准曲线并计算，便可求出样品中还原糖和总糖的含量。
由于多糖水解为单糖时，每断裂一个糖苷键需加入一分子水，所以在计算多糖含量时应乘以。
一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定的基本原理2、学习比色法测定还原糖的操作方法3、学习分光光度法测定的原理和方法二、实验原理还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。
还原糖是指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖，双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还原糖以葡萄糖含量计）。
实验二 总糖和还原糖的测定
实验内容
1. 葡萄糖标准曲线的制备； 2. 样品（藕粉）中还原糖的提取和含量测定； 3. 样品（藕粉）中总糖的水解和含量测定。
1、葡萄糖标准曲线制作
1、取6支1. 5 cm×15 cm试管，按下表加入1 mg/ml葡萄糖 标准液和蒸馏水。
管号
0 1 2 3 4 5
葡萄糖标准液 (ml) 0
0.2 0.4 0.6 0.8 1
5、计 算
按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量：
式中：C──还原糖或总糖提取液的浓度，mg/mL； V──还原糖或总糖提取液的总体积，mL； m──样品重量，g； 1000──mg换算成g的系数。
思考题
1、比色时为什么要设计空白管？ 2、糖测定过程中的干扰物质有那些？如何除去？ 3、总糖和还原糖的提取有何不同？
2、样品中还原糖的提取
准确称取1g藕粉，放在100 ml烧杯中，先以少 量蒸馏水调成糊状，然后加入40 ml蒸馏水，混 匀，于50℃恒温水浴中保温20 min，不时搅拌， 使还原糖浸出。全部收集在50 ml的容量瓶中定 容，过滤出5ml，即为还原糖提取液。
3、样品总糖的水解及提取
准确称取0.5g藕粉，放在大试管中，加入6 M HCl 5ml，蒸馏水8ml，在沸水浴中加热15min，取出 1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是 否完全。如已水解完全，则不呈现蓝色。水解毕， 冷却至室温后加入1滴酚酞指示剂，以6M NaOH 溶液中和至溶液呈微红色，定容到50ml，取5ml 再次定容至50ml，过滤，取滤液用于总糖测定。
4、样品中含糖量的测定
1、取7支1.5 cm×15 cm试管，分别按下表加入试剂：
项目 试管号
样品溶液（ml）
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
实验2 还原糖及总糖的测定
基础生物化学实验-实验2 还原糖及总糖的测定实验2 还原糖及总糖的测定（3、5——二硝水杨酸比色法）目的和要求：掌握3、5-二硝基水杨酸比色法测定糖量的原理及方法。
熟悉722分光光度计基本工作原理和操作方法。
原理：各种单糖和麦芽糖是还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。
利用溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来，再用酸水解法使没有还原性的双糖和多糖彻底水解成有还原性的单糖。
在碱性条件下，还原糖与3、5—二硝基水杨酸共热，3、5—二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质），还原糖则被氧化成糖酸及其它物质。
在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，可在722型分光光度计540nm波长测定棕红色物质的消光值。
查标准曲线计算，便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。
多糖水解时，在单糖残基上加了一分子水，因而在计算中须扣除已加入的水量，测得所得到的总糖量乘以0.9即为实际的总糖量。
该方法是半微量定糖法，操作简便，快速，杂质干扰较少。
试剂和材料：试剂（1）1mg/ml葡萄糖标准液：准确称取100ml分析纯葡萄糖（预先在105℃烘至恒重），置于小烧杯中，用少量蒸馏水溶解后，定量转移到100ml容量瓶中，以蒸馏水定容到刻度，摇匀，冰箱中保存备用。
（2）3、5—二硝基水杨酸试剂（又称DNS试剂）；甲液——溶解6.9g结晶酚（苯酚）于15.2ml 10%NaOH中，并稀释至69ml，在此溶液中加入6.9g 亚硫酸氢钠。
乙液——称取22.5g酒石酸钾钠，加到300ml 10% NaOH中，再加入880ml 1%的3、5—二硝基水杨酸溶液。
将甲液和乙液相混合即得黄色试剂，贮于棕色试剂瓶中，放置7—10天使用。
（3）碘—碘化钾溶液（碘试剂）：称取5g碘和10g碘化钾，研匀后溶于100ml蒸馏水中。
（4）酚酞指示剂：称取0.1g酚酞溶于70%乙醇中。
（5）6 mol·L-1 HCl（6）6 mol·L-1NaOH（7）面粉2、器材大试管、大离心管、量筒、三角瓶、容量瓶、刻度吸管、玻璃漏斗、滤纸、白瓷板、电热恒温水浴槽、低速台式离心机、天平、722型分光光度计。
还原糖和总糖的测定实验报告
还原糖和总糖的测定实验报告实验目的，通过化学方法测定食品中还原糖和总糖的含量，了解不同食品中糖的含量差异。
实验原理，还原糖是指能够还原铜离子的糖类物质，如葡萄糖、果糖等；总糖是指食品中所有的糖类物质的总和，包括还原糖和非还原糖。
在本实验中，我们将利用费林试剂将还原糖氧化成酸，然后用氢氧化钠将酸中和，再用硫酸将非还原糖氧化，最后用费林试剂滴定还原糖。
实验步骤：1. 样品制备，取不同食品样品，如蜂蜜、果酱等，分别称取适量样品。
2. 提取糖液，将样品加水稀释，加热至沸腾，过滤得到糖液。
3. 还原糖的测定，取一定量糖液，加入费林试剂，滴定至蓝色消失，记录滴定所需费林试剂的体积V1。
4. 总糖的测定，取一定量糖液，加入硫酸，再加入氢氧化钠，加热至沸腾，冷却后加入费林试剂，滴定至蓝色消失，记录滴定所需费林试剂的体积V2。
实验数据：样品 | V1（mL） | V2（mL） | 。
蜂蜜 | 12.3 | 15.6 | 。
果酱 | 8.7 | 10.5 | 。
实验结果：1. 蜂蜜中还原糖的含量为12.3mL，总糖的含量为15.6mL。
2. 果酱中还原糖的含量为8.7mL，总糖的含量为10.5mL。
实验分析：通过实验数据可以看出，蜂蜜的总糖含量明显高于果酱，说明蜂蜜中含有更多的糖类物质。
而果酱中的还原糖含量略高于蜂蜜，这可能是因为果酱中的果糖含量较高。
通过本实验，我们可以初步了解不同食品中糖的含量差异，为食品质量的评价提供了一定的依据。
实验结论：本实验通过测定不同食品中的还原糖和总糖含量，初步了解了食品中糖的含量差异。
蜂蜜中总糖含量明显高于果酱，而果酱中的还原糖含量略高于蜂蜜。
这为我们对食品质量的评价提供了一定的依据。
实验注意事项：1. 实验中需要注意操作的精确性，尤其是在滴定过程中需要小心操作，避免误差的产生。
2. 实验中的废液需要妥善处理，不可直接倒入下水道，以免对环境造成污染。
结语：通过本次实验，我们初步了解了食品中还原糖和总糖的测定方法，以及不同食品中糖的含量差异。
实验二 总糖和还原糖的测定1
实验二总糖和还原糖的测定1实验目的：通过化学反应，定量测定果汁、蜂蜜和其他实验样品中的总糖和还原糖含量。
实验原理：总糖是指以糖为主要成分的物质。
而还原糖是指那些具有还原性质，并能够将还原铜离子还原为沉淀的单糖和双糖类糖分。
还原糖在碱性溶液中容易还原铜离子，产生还原铜沉淀，这种化学反应叫做费林试剂反应。
2.费林试剂反应原理费林试剂是由铜离子(Cu2+)、草酰肼和钠碱组成的混合物。
在碱性条件下，草酰肼被还原成草酸，同时将 Cu2+ 还原为 Cu+ 并生成棕色的沉淀。
当样品中加入碱性费林试剂时，还原性糖分（如果糖、葡萄糖等）能够将 Cu2+ 还原为 Cu+，从而生成棕色的沉淀。
这个过程是一个可以定量的过程，衡量沉淀的多少就能够推算出溶液中还原性糖分的含量。
另外，总糖含量的计算是通过使用苏丹III试剂实现的。
实验器材：1.量筒2.移液管3.试管4.洗瓶5.恒温摇床6.温度计1.果汁2.蜂蜜3.标准葡萄糖溶液4.碳酸钠5.草酰肼6.苏丹III试剂7.浓硫酸实验步骤：1.总糖的测定：取一定量的果汁样品，用量筒量取 10 毫升到试管中，再加入 2 - 3 滴苏丹III 试剂，晃动均匀。
在搅拌下加入 5 - 10 滴浓硫酸，并再次使试管均匀地摇晃。
静止 5 分钟，颜色稳定后，在光谱计中读取样品的吸光度。
取一定量的果汁样品，用量筒量取 10 毫升入 50 毫升锥形瓶中，再加入 15 毫升碳酸钠。
轻轻振摇均匀后，再将 5 毫升草酰肼溶液滴入锥形瓶中。
接下来，用标准葡萄糖溶液调节光密度值，以达到与实验样品相同的吸光度比值。
从光谱计中记录每个样品反应的吸光度。
实验注意事项：1.实验操作要认真，保证实验片刻的稳定，确保实验数据的准确。
2.注意光源是光谱计的重要组成部分，因此要记得把光源打开，以确保性能。
总结：通过总糖和还原糖的测定，我们可以测定样品的果糖、葡萄糖等还原糖分的含量，以及样品中糖类总含量的含量。
这对于分析果汁和蜂蜜等样品非常有用，也为食品行业提供了重要的检测方法和标准。
实验二、总糖和还原糖的测定
实验二、总糖和还原糖的测定（一）──费林试剂热滴定法目的要求掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用直接滴定法测定还原糖的方法。
实验原理还原糖是指含有自由醛基（如葡萄糖）或酮基（如果糖）的单糖和某些二糖（如乳糖和麦芽糖）。
在碱性溶液中，还原糖能将Cu2+、Hg2+、Fe3+、Ag+等金属离子还原，而糖本身被氧化成糖酸及其他产物。
糖类的这种性质常被用于糖的定性和定量测定。
本实验采用费林试剂热滴定法。
费林试剂由甲、乙两种溶液组成。
甲液含硫酸铜和亚甲基蓝（氧化还原指示剂）；乙液含氢氧化钠，酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。
将一定量的甲液和乙液等体积混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀：2NaOH + CuSO4 = Cu(OH)2+ Na2SO4在碱性溶液中，所生成的氢氧化铜沉淀与酒石酸钠反应，生成可溶性的络合物酒石酸钾钠铜：在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，其反应如下：反应生成的氧化亚铜沉淀与费林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐，便于观察滴定终点。
Cu2O + K4Fe(CN)6 + H2O K2Cu2Fe(CN)6 + 2KOH滴定时以亚甲基蓝为氧化－还原指示剂。
因为亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，待二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。
根据样液量可计算出还原糖含量。
试剂和器材一、试剂费林试剂：甲液：称取15g硫酸铜（CuSO4·5H2O）及0.05g亚甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释到1000mL。
乙液：称取50g酒石酸钾钠及75g NaOH，溶于蒸馏水中，再加入4g亚铁氰化钾［K4Fe（CN）6］，完全溶解后，用蒸馏水稀释到1000mL，贮存于具橡皮塞玻璃瓶中。
0.1％葡萄糖标准溶液：准确称取1.000g经98～100℃干燥至恒重的无水葡萄糖，加蒸馏水溶解后移入100 0mL容量瓶中，加入5mL浓HCl（防止微生物生长），用蒸馏水稀释到1000mL。
总糖和还原糖的测定实验报告
总糖和还原糖的测定实验报告
实验目的，通过对食品中总糖和还原糖的测定，掌握测定方法和原理，了解不同食品中糖的含量。
实验原理，总糖是指食品中所有可溶解于水的糖的总和，包括葡萄糖、果糖、蔗糖等；还原糖是指具有还原性的糖，如葡萄糖、果糖等。
测定总糖的方法一般采用硫酸酚法，而测定还原糖的方法则是费林试剂法。
实验步骤：
1. 样品制备，将食品样品研磨成细粉，称取适量样品置于烘干器中，使其干燥后称取一定质量的样品备用。
2. 总糖的测定，取一定质量的样品，加入硫酸酚溶液，放入水浴中加热，再加入苯酚，用硫酸铜溶液滴定，记录滴定消耗的体积。
3. 还原糖的测定，取一定质量的样品，加入水和费林试剂，加热沸腾后立即加入硫酸，冷却后用蒸馏水定容至刻度线，用紫外分光光度计测定吸光度。
实验结果：
经过实验测定，得出样品中总糖的含量为10.5g/100g，还原糖的含量为
8.3g/100g。
实验分析：
通过对样品中总糖和还原糖的测定，可以了解到样品中糖的含量，为食品质量的评定提供了重要依据。
总糖的含量反映了食品的甜度，而还原糖的含量则反映了食品中具有还原性的糖的含量，对于不同类型的食品，其糖的含量也会有所不同。
实验总结：
通过本次实验，我们掌握了总糖和还原糖的测定方法和原理，了解了不同食品中糖的含量。
在实际生活中，我们可以通过这些方法对食品进行质量检测，保障食品安全和营养健康。
总糖和还原糖的测定实验报告到此结束。
还原糖和总糖的实验报告
还原糖和总糖的实验报告实验目的本实验旨在使用化学方法测定还原糖和总糖的含量，并通过实验结果对食品样品进行分析。
实验材料•还原糖标准溶液•总糖标准溶液•食品样品•蒸馏水•试剂瓶•烧杯•称量器•离心机•恒温水浴•分光光度计•显色剂实验步骤1.准备工作–将实验室器材清洗干净。
–准备还原糖和总糖的标准溶液。
–根据实验需要，调整分光光度计的波长和基线。
2.样品制备–将食品样品加入烧杯中，使用称量器测量准确的样品质量。
–加入适量的蒸馏水，使样品溶解均匀。
3.酶解还原糖–取一定量的样品溶液，放入恒温水浴中加热。
–加入适量的酶解液，保持一定的温度和时间，使还原糖完全酶解。
4.离心分离–将酶解液离心一段时间，使得悬浮的物质沉淀在底部。
–将上清的液体转移到试剂瓶中。
5.光度计测定–在分光光度计中设置合适的波长。
–取一定量的样品溶液和标准溶液，放入分光光度计中分别测定吸光度值。
6.统计数据–根据测得的吸光度值，使用标准曲线计算样品中的还原糖和总糖的含量。
–记录每个样品的测量值和计算结果。
7.数据分析–对比不同食品样品中的还原糖和总糖含量。
–推断食品样品的甜度和糖分含量。
实验注意事项1.实验过程中要注意实验器材的洁净，避免污染样品。
2.在酶解过程中，要控制好温度和时间，确保还原糖能够完全酶解。
3.分光光度计的使用要按照正确的方法进行操作，确保测量结果准确可靠。
4.实验数据的记录要详细，以便后续的数据分析和结果推断。
实验结果通过实验测定和计算，我们得到了不同食品样品中的还原糖和总糖的含量。
根据这些数据，我们可以比较不同样品之间的甜度和糖分含量，进一步分析食品的品质和营养成分。
实验结果将有助于我们了解食品的糖分成分，为食品安全和营养评估提供数据支持。
总结通过本次实验，我们掌握了使用化学方法测定还原糖和总糖含量的实验步骤和技巧。
实验结果为我们分析食品样品的甜度和糖分含量提供了数据支持。
在今后的食品分析和研究中，我们可以运用这些方法来评估食品的品质和营养成分，并为食品安全和营养评估提供科学依据。
还原糖和总糖的测定实验报告
还原糖和总糖的测定实验报告一、实验目的1、掌握还原糖和总糖的测定原理和方法。
2、学会使用分光光度计进行定量分析。
3、熟悉实验操作过程，提高实验技能和数据处理能力。
二、实验原理1、还原糖的测定还原糖含有游离的醛基或酮基，在碱性条件下，能将斐林试剂中的Cu²⁺还原为 Cu₂O 沉淀，而斐林试剂是由质量浓度为 01g/mL 的NaOH 溶液和质量浓度为 005g/mL 的 CuSO₄溶液混合而成。
产生的Cu₂O 沉淀的量与还原糖的含量成正比。
通过用标准葡萄糖溶液标定斐林试剂，再用标定后的斐林试剂测定样品中的还原糖含量。
2、总糖的测定总糖包括还原糖和非还原糖。
先将非还原糖通过酸水解的方法转化为还原糖，再用斐林试剂法测定总糖含量。
水解后测定的总还原糖量减去水解前样品中还原糖的含量，即可得到样品中非还原糖的含量。
三、实验材料与仪器1、材料苹果、葡萄糖标准溶液（1mg/mL）、3mol/L HCl 溶液、10% NaOH 溶液、斐林试剂甲液（质量浓度为 01g/mL 的 NaOH 溶液）、斐林试剂乙液（质量浓度为 005g/mL 的 CuSO₄溶液）。
2、仪器电子天平、恒温水浴锅、容量瓶（100mL、500mL）、移液管（1mL、2mL、5mL、10mL）、锥形瓶（250mL）、碱式滴定管、分光光度计。
四、实验步骤1、葡萄糖标准曲线的绘制（1）取 6 支 25mL 具塞刻度试管，编号 0、1、2、3、4、5，分别加入 0、02、04、06、08、10mL 葡萄糖标准溶液。
（2）向各试管中分别加入蒸馏水，使总体积均为 10mL。
（3）在各试管中分别加入 2mL 斐林试剂甲液，摇匀，再加入 2mL 斐林试剂乙液，摇匀。
（4）将试管置于沸水浴中加热 2min，取出后用流水冷却至室温。
（5）以 0 号试管为空白对照，在 590nm 波长下，用分光光度计测定各试管中溶液的吸光度值。
（6）以葡萄糖含量（mg）为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
实验二总糖和还原糖的测定(精)
五、计算
X= 0.5 V空 － V标 X（V空－V未知）
六、注意事项
1.
各试管的处理应一致，测定溶液应同时放入沸
水中，再同时从沸水浴中取出。
2.
在用碘化钾和硫酸洗涤试管时要洗净，否则会
影响滴定结果的准确性。
3.
滴定终点时溶液呈现二价铜离子的浅蓝色，切 勿将它与终点混淆。
七、 思考题
1、碱性铜试剂法测定还原糖是直接滴定还是间 接滴定？两种滴定方法各有何优点？
沸 水 浴 中 煮 沸 15 分 钟
2. 各试管冷却后，摇动试管，使试管底部的红色沉淀分 散后倾入相应的三角瓶中； 3. 分别在每个试管中加入2mL 2％碘化钾溶液和2mL 2 mol/L H2SO4，以洗涤管中的残留物，并转入相应的 试管中，最后再用1mL蒸馏水洗涤试管2次； 4. 用0.005 mol/L NaS2O3滴定至碘颜色接近消失时加入 淀粉指示剂5滴，继续滴定至蓝色消失为止。
IO3¯ + 5 I¯ + 6 H Cu2O + I2 + H + I2 + 2 S2O3 2-
+
3 I 2 + 3 H 2O Cu
2+Βιβλιοθήκη + I ¯ + H2 O
S4O6 2-+ 2 I¯
因此，用硫代硫酸钠滴定剩余的碘，在有已知浓度的 标准还原糖浓度时，可以间接地计算出未知样品的还原 糖的含量。
三、试剂与器材
1. 试剂 铜试剂、0.005 mol/L硫代硫酸钠溶液、2%碘化 钾溶液、
0.5 mg/mL标准葡萄糖溶液、1％淀粉指示剂
2. 器材 碱式滴定管、恒温水浴锅
四、操作步骤
1. 取6只试管，按照下表的次序加入试剂。另取6
生化实验二--果蔬中总糖及还原糖含量的测定
一、目的 掌握总糖和还原糖含量的测定方法。 学习分光光度计的原理和操作方法。
二、原理 总糖是指样品中的还原单糖及在本实
验条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽 糖和可部分水解成葡萄糖的淀粉。
多糖为非还原糖，可用酸将没有还原性的 多糖和寡糖彻底水解成具有还原性的单糖，再 利用还原糖的性质进行测定，这样就可分别求 出总糖和还原糖的含量。
蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。 其原理：糖类在较高温度下可被硫酸脱水成糠 醛或糠醛衍生物，再与蒽酮缩合成蓝色化合物， 在620nm处有最大吸收。
三、实验器材
1、植物材料 2、吸管（1.0mL×2、5.0mL×2、
0.1mL×2 、0.2mL×2 、0.5mL×2 ） 3、试管（1.5cm×15cm×7） 4、分光光度计 5、水浴锅、电炉 6、电子分析天平 7、容量瓶（100mL×1）、玻璃漏斗 8、量筒、研钵、三角烧瓶
×0.9①×100%
① 乘0.9是为了从测定出的总糖水解成的单糖中扣除 水解时所消耗的水量。
式中：
W（还原糖）：还原糖质量分数（%） W（总糖）：总糖质量分数（%） C1：还原糖的质量浓度（mg/mL） C2：水解后还原糖的质量浓度（mg/mL） V1：样品中还原糖提取液的体积（mL） V2：样品中总糖提取液的体积（mL） m：样品质量
四、实验试剂
1、蒽酮试剂：取2g蒽酮溶于1000mL体积分数为 80%的硫酸中，当日配制使用。 2、标准葡萄糖溶液（0.1mg/mL）：称取100mg 葡萄糖，溶于蒸馏水并稀释至1000mL（可加几 滴甲苯作防腐剂）。 3、6mol/L HCl溶液 4、20% NaOH溶液：称取20g NaOH固体，溶于 蒸馏水并稀释至100mL。
冬枣、柚子、梨：取滤液5mL用蒸馏 水定容至100mL。
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本实验是利用3， ～ 本实验是利用 ，5～二硝基 水杨酸溶液（ 水杨酸溶液（DNS法）与还 法 原糖溶液共热后被还原成棕 红色氨基化合物， 红色氨基化合物，在一定范 围内还原糖的量和棕红色物 质深浅的程度成一定比例关 可用于比色测定。 系，可用于比色测定。操作 简便，快速，杂质干扰较少。 简便，快速，杂质干扰较少。
三、实验步骤
1、葡萄糖标准曲线的制定 、 葡萄糖标准液的配制：准确称取 葡萄糖标准液的配制：准确称取100mg分 分 析纯的无水葡萄糖（预先在 析纯的无水葡萄糖（预先在105℃干燥至恒 ℃ 重），用少量蒸馏水溶解后，定量转移到 ），用少量蒸馏水溶解后， 用少量蒸馏水溶解后 100ml容量瓶中，再定容到刻度，摇匀。浓 容量瓶中，再定容到刻度，摇匀。 容量瓶中 度为1mg/ml。 。 度为
将各管溶液混合均匀，沸水浴加热 将各管溶液混合均匀，沸水浴加热5min，取出后立 ， 即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5ml蒸馏水， 蒸馏水， 即用冷水冷却到室温，再向每管加入 蒸馏水 摇匀。 波长处测定OD值 摇匀。于520nm波长处测定 值。以葡萄糖毫克数 波长处测定 为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。 为横坐标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。
2、样品中总糖和还原糖含量的测定 、 还原糖的提取 （1）样品中还原糖的提取： ）样品中还原糖的提取： 准确称取10g新鲜材料（或2g材料干样粉 准确称取 新鲜材料（ 材料干样粉 新鲜材料 末），放在 烧杯中， ），放在100ml烧杯中，先以少量水调成糊 放在 烧杯中 蒸馏水， 状，然后加50～60ml蒸馏水，于50℃恒温水 然后加 ～ 蒸馏水 ℃ 浴中保温20min，过滤，将滤液收集在100ml ，过滤，将滤液收集在 浴中保温 容量瓶中，再定容至 容量瓶中，再定容至100ml。 。
加完试剂后， 加完试剂后，与制作标准曲线时 相同的操作测定样品糖含量。 相同的操作测定样品糖含量。
四、实验结果
在Excel绘制葡萄糖标准曲线，并求出标准线性方程。 Excel绘制葡萄糖标准曲线，并求出标准线性方程。 绘制葡萄糖标准曲线 以表格形式列出实验数据，取样品的OD 以表格形式列出实验数据，取样品的OD520平均值用标 准线性方程求出相应的糖量， 准线性方程求出相应的糖量，并用下式计算出待测样品 中还原糖与总糖的含量。 中还原糖与总糖的含量。
的试管， 取7支25×250mm的试管，分别按下表加入试剂： 支 × 的试管 分别按下表加入试剂：
管号 葡萄糖标准液（ ） 葡萄糖标准液（ml） 相当于葡萄糖量(mg) 相当于葡萄糖量 蒸馏水（ ） 蒸馏水（ml） 3,5二硝基水杨酸 二硝基水杨酸(ml) 二硝基水杨酸 0 0 0 2.0 1.5 1 0.2 0.2 1.8 1.5 2 0.4 0.4 1.6 1.5 3 0.6 0.6 1.4 1.5 4 0.8 0.8 1.2 1.5 5 1.0 1.0 1.0 1.5 6 1.2 1.2 0.8 1.5
二、实验原理
还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。 还原糖的测定是糖定量测定的基本方法。还原糖是 指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖， 指含有自由醛基或酮基的糖类，单糖都是还原糖， 双糖和多糖不一定是还原糖， 双糖和多糖不一定是还原糖，其中乳糖和麦芽糖是 还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。 还原糖，蔗糖和淀粉是非还原糖。 利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、双 利用糖的溶解度不同，可将植物样品中的单糖、 糖和多糖分别提取出来， 糖和多糖分别提取出来，对没有还原性的双糖和多 糖，可用酸水解法使其降解成有还原性的单糖进行 测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（ 测定，再分别求出样品中还原糖和总糖的含量（还 原糖以葡萄糖含量计）。 原糖以葡萄糖含量计）。
还原糖毫克数×提取液总体积（ ） 还原糖毫克数×提取液总体积（ml）×稀释倍数 还原糖（ 还原糖（mg•g-1）= 测定用提取液体积（ ） 样品重量（ ） 测定用提取液体积（ml）×样品重量（g）
样品水解后还原糖毫克数×提取液总体积（ ） 样品水解后还原糖毫克数×提取液总体积（ml）×稀释倍数 总糖（ 总糖（mg•g-1）= 测定用提取液体积（ ） 样品重量（ ） 测定用提取液体积（ml）×样品重量（g）
六、改进实验建议
附：仪器和试剂
主要仪器：分光光度计，水浴锅，容量瓶，刻度试管， 主要仪器：分光光度计，水浴锅，容量瓶，刻度试管， 移液管等。 移液管等。 3,5-二硝基水杨酸试剂： 二硝基水杨酸试剂： 二硝基水杨酸试剂 甲液：溶解6.9g结晶酚于 结晶酚于15.2ml 10%氢氧化钠溶液中， 氢氧化钠溶液中， 甲液：溶解 结晶酚于 氢氧化钠溶液中 并用水稀释至69ml，在此溶液中加 亚硫酸氢钠。 并用水稀释至 ，在此溶液中加6.9g亚硫酸氢钠。 亚硫酸氢钠 乙液：称取255g酒石酸钾钠加到 酒石酸钾钠加到300ml 10%氢氧化钠溶 乙液：称取 酒石酸钾钠加到 氢氧化钠溶 液中，再加入880ml 1% 3,5-二硝基水杨酸溶液。 二硝基水杨酸溶液。 液中，再加入 二硝基水杨酸溶液 将甲乙二溶液混合即得黄色试剂，贮于棕色瓶中备用。 将甲乙二溶液混合即得黄色试剂，贮于棕色瓶中备用。 在室温放置7-10天后使用。 在室温放置 天后使用。 天后使用 6 mol•L-1 盐酸 10%氢氧化钠溶液 氢氧化钠溶液 酚酞指示剂 碘化钾溶液：称取5g碘 碘化钾溶于100ml蒸馏 碘～碘化钾溶液：称取 碘，10g碘化钾溶于 碘化钾溶于 蒸馏 水中。 水中。
（3）样品中糖含量的测定： ）样品中糖含量的测定： 试管分别按下表加入试剂： 取7支25×250mm试管分别按下表加入试剂： 支 × 试管分别按下表加入试剂
管号 样品溶液（ ） 样品溶液（ml） 蒸馏水（ml） 蒸馏水（ ） 3,5二硝基水杨酸 二硝基水杨酸 (ml) OD 空白 0 0 2 1.5 1 1.0 1.0 1.5 还原糖 2 1.0 1.0 1.5 3 1.0 1.0 1.5 总糖 1 1.0 1.0 1.5 2 1.0 1.0 1.5 3 1.0 1.0 1.5
的水解提取： （2）样品中总糖的水解提取： ） 准确称取10g新鲜材料（或1g材料干样粉末）， 新鲜材料（ 材料干样粉末）， 准确称取 新鲜材料 材料干样粉末 放在锥形瓶中，加入10ml 6 mol•L-1 盐酸，15ml 盐酸， 放在锥形瓶中，加入 在沸水浴中加热30min，取出一、二滴置于 水，在沸水浴中加热 ，取出一、 白瓷板上， 滴碘～ 白瓷板上，加1滴碘～碘化钾溶液检查水解是否完 滴碘 如已水解完全，则不呈现蓝色。冷却后加入1 全。如已水解完全，则不呈现蓝色。冷却后加入 滴酚酞指示剂，以10%氢氧化钠溶液中和至溶液 滴酚酞指示剂， 氢氧化钠溶液中和至溶液 呈微红色，过滤并定容到100ml。再精确吸取上 呈微红色，过滤并定容到 。 述溶液10ml于100ml容量瓶中，定容至刻度，混 容量瓶中， 述溶液 于 容量瓶中 定容至刻度， 匀备用。 匀备用。
五、讨论分析
1、在被测样品中，还原糖可能是些什么糖？总糖 、在被测样品中，还原糖可能是些什么糖？ 包括哪些？ 包括哪些？ 2、用来测定总糖的样品，为什么要加盐酸水解？ 、用来测定总糖的样品，为什么要加盐酸水解？ 而在其测定前，又为何要用NaOH中和？ 中和？ 而在其测定前，又为何要用 中和 3、标准葡萄糖浓度梯度和样品含糖量的测定为什 、 么应该同步进行？比色时设0号管有什么意义 号管有什么意义？ 么应该同步进行？比色时设 号管有什么意义？
实验二 总糖和还原糖的测定
(3， (3，5～二硝基水杨酸法) 二硝基水杨酸法)
《食品生物化学实验》课程 食品生物化学实验》
一、实验目的
掌握3， ～ 掌握 ，5～二硝基水杨酸法测定待测 样品的总糖和还原糖含量的基本原理， 样品的总糖和还原糖含量的基本原理， 学会处理721型或 型分光光度计出 型或722型分光光度计出 学会处理 型或 现的问题