超高效液相色谱的特点
高效液相色谱的特点
高效液相色谱的特点
①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。
②高速：分析速度快、载液流速快，较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。
③高效：分离效能高。
可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。
④高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng，进样量在μL数量级。
⑤应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析医学教|育网搜集整理，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。
超高效液相色谱特点和作用
超高效液相色谱（Ultra-High Performance Liquid Chromatography，UHPLC）是一种高效、高速、高分辨率的液相色谱分析技术，具有以下特点和作用：
高效性：UHPLC采用高压泵和细直径色谱柱，使得溶剂流速增加，分离效率大大提高。
相比传统的液相色谱（HPLC），UHPLC能够更快速地完成分析，缩短分离时间，提高分辨率和峰形对称性。
高灵敏度：UHPLC的高效分离和峰形改善使得分离后的目标化合物更容易检测和定量。
它可以提供更低的检测限和更好的峰信号强度，适用于分析复杂样品中低浓度的化合物。
节约溶剂：由于UHPLC使用细直径色谱柱和较高的流速，相比传统的HPLC，其溶剂消耗更少。
这有助于降低实验成本和对环境的影响。
多样性和灵活性：UHPLC可以使用各种类型的色谱柱和检测器，适用于广泛的分析应用领域。
它可以用于分离和定量各种化合物，如药物、天然产物、环境污染物、食品成分等。
数据精确性和可重复性：UHPLC在分析中能够提供更高的数据精确性和可重复性。
其高分辨率和峰形改善使得峰识别和定量更准确，数据结果更可靠。
总的来说，超高效液相色谱技术具有高效、高灵敏度、节约溶剂、多样性和灵活性等特点，广泛应用于药物分析、环境监测、食品安全、生物分析等领域，为科学研究和质量控制提供了强大的分析工具。
高效液相色谱和超高效液相色谱
高效液相色谱和超高效液相色谱高效液相色谱（HighPerformanceLiquidChromatography，HPLC）和超高效液相色谱（Ultra High Performance Liquid Chromatography，UHPLC），是现代分析化学中常用的分离技术。
它们可以对复杂的混合物进行分离和定量分析，广泛应用于药物分析、食品分析、环境分析、生物分析等领域。
本文将从原理、仪器、方法和应用等方面，介绍高效液相色谱和超高效液相色谱的基本知识。
一、原理高效液相色谱和超高效液相色谱的原理基本相同，都是利用样品在流动相中的分配系数差异，通过固定相和流动相的作用，将混合物中的化合物分离出来。
不同的是，超高效液相色谱采用了更小的颗粒固定相，使得流动相可以更快地通过固定相，从而提高了分离效率和分离速度。
在高效液相色谱和超高效液相色谱中，样品首先被注入流动相中，然后通过固定相的柱子。
固定相通常是一种多孔的固体材料，如硅胶、C18等。
样品中的化合物在流动相中的分配系数不同，因此在通过固定相时，会被分离出来。
分离出来的化合物，会在检测器中被检测到，从而实现分离和定量分析。
二、仪器高效液相色谱和超高效液相色谱的仪器基本相同，主要由注射器、流动相泵、柱子、检测器和计算机控制系统等组成。
（一）注射器注射器是将样品引入流动相中的关键部分。
常用的注射器有手动注射器和自动进样器。
手动注射器通常用于小样品量的分析，而自动进样器可以实现高精度、高效率的样品进样。
（二）流动相泵流动相泵是将流动相送入柱子中的装置。
其主要功能是控制流动相的流速和流量，并确保流动相的稳定性。
常用的流动相泵有恒压流量泵和梯度流量泵。
恒压流量泵可以保持恒定的流量，适用于等浓度的流动相。
梯度流量泵可以实现不同浓度的流动相混合，从而实现更好的分离效果。
（三）柱子柱子是高效液相色谱和超高效液相色谱的核心部分，用于固定相的分离。
常用的柱子材料有硅胶、C18、C8等。
高效液相色谱分析HPLC31高效液相色谱的特点
4.高灵敏度： 紫外检测器10-9 g
荧光检测器10-11g
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高效液相色谱
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5．高度自动化计算机的应用:使 HPLC 不仅能自动 处理数据、绘图和打印分析结果，而且还可以自 动控制色谱条件，使色谱系统自始至终都在最佳 状态下工作，成为全自动化的仪器。
6．应用范围广（与气相色谱法相比）: HPLC 可用 于高沸点、相对分子质量大、热稳定性差的有机 化合物及各种离子的分离分析。如氨基酸、蛋白 质、生物碱、核酸、甾体、维生素、抗生素等。 大约占有机物的70-80%。
1）输出有脉冲波动，会干扰检测器正常工作；2） 由于产生基线噪声而影响检测的灵敏度。
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b.气动放大泵—恒压泵 原理： p1SA = p2SB 特点82/-6:能供给无脉冲的稳定流量的输
出。 不足82/-8： 1）液缸体积大，更换流动相不方便； 2）不便于梯度洗提。
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2、洗脱方式
a.键合薄壳型：担体，薄壳玻珠； b.键合微粒担体型：担体，微粒硅胶. 四、排阻色谱法固定相 a.软质凝胶：葡萄糖凝胶；琼脂糖凝胶； b.半硬质凝胶：交联聚苯乙烯凝胶； c.硬质凝胶：多孔硅胶；多孔玻珠；
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§3-5 液相色谱法流动相
1.重要性：GC载气仅三四种，要提高柱效选择性， 主要是改变固定相的性质；
LC则不同，当固定相选定时，流动相的种类，配 比能显著地影响分离效果，因此流动相的选择很重 要。
2.选择流动相应注意的因素79/2：5点，
3.溶剂的选择79/-3：
a. 依据：溶剂的极性是重要依据。
b.溶剂极性顺序，水最大，煤油最小。
c.采用多元组合溶剂系统作为流动相（底液和洗 脱 液）
液相色谱仪、高效液相色谱仪、超高效液相色谱仪的关系
液相色谱仪、高效液相色谱仪、超高效液相色谱仪的关系液相色谱仪、高效液相色谱仪和超高效液相色谱仪之间的关系如下：
1. 高效液相色谱仪（HPLC）是一种将固相和液相结合运用的液相色谱技术。
其基本原理是将试样通过一根固定相注射器注入高压泵，再通过一定的流路进入色谱柱中，由于流动相对固相有较大的亲和力，所以运行过程中，固相和液相间的交换反应将会发生在色谱柱内，这对分离有很大帮助。
高效液相色谱技术主要应用在生化、制药、食品质量检测和环境检测等领域。
2. 超高效液相色谱仪（UPLC）则是在HPLC技术基础上发展而来的一种新型的液相色谱技术。
它在分离效率、分离速度、峰形对称性、响应灵敏度等方面较HPLC 有很大的提升，能够更快地完成复杂样品的分离和检测。
UPLC在制药、食品质量检测和环境检测等领域也有着广泛的应用。
综上所述，超高效液相色谱仪是液相色谱仪的一种，而高效液相色谱仪又是超高效液相色谱仪的一种特殊形式。
高效液相色谱法在药品检验中的特点和价值分析
高效液相色谱法在药品检验中的特点和价值分析摘要：高效液相色谱法是一种广泛应用的检测方法，它使得总体检测更加灵敏、高效、检测效果明显，具有广泛的应用前景。
为推动药品生产的规范化，本文对高效液相色谱法的原理、特性、高效液相色谱法技术在药品检验中的应用进行了综述。
关键词：高效液相色谱；药品检验；特点；定价；目前，我国药品生产企业的质量管理受到了较大的制约。
随着现代医学的迅速发展，各种药物检测技术也随之产生。
药品检验是药品安全管理的重要环节，它涉及药品质量、成分、不良反应、理化、安全、缺陷等方面的检测。
目前，常用的方法有：毛细管电泳法、薄层扫描法、分光光度法、高效液相色谱法等。
其中，高效液相色谱法以可操作性强、适用范围广、灵敏度高、结果测定速度快等优势得到了快速发展和应用【1】。
本文主要介绍 HPLC技术在药品检验中的应用，以提高检测效率，减少误差。
高效液相色谱法属于色谱法中的一种，主要将液体作为流动相，将其泵入到装有固定相的色谱柱之中，通过对比色谱柱信息，检验出药品中的各种成分，并实现对各成分的化学分析，这一技术被广泛应用于药品检测中，极大地缩短检测时间。
1高效液相色谱法原理及特点与以往常规液相色谱法相似，但其在操作时引入高压输液泵，相较于常规液相色谱法来讲，能有效地提高检测的准确度和工作效率，有效提升药学检验水平。
此外，高效液相色谱法采用同一个色谱条件对药品中的多个成分进行分析，不易受外部因素影响，有效提高了分离效率，同时，该方法具有快速、高效、经济、成本低廉、适用范围宽、误差小等特点，能有效地提高测试精度，满足不同的测试要求，具有很好的推广价值【2】。
2高效液相色谱法在药品检验中的应用价值2.1药品中有效成分的测定药品成分是影响药品价格的主要因素，由于药品中的活性成分种类繁多，它们的药理作用机制也各不相同，因此在检测过程中要确定其有效成分，而常规的方法由于操作复杂、工作压力大，很容易产生误差。
高效液相检验法的应用与开展，能够通过信息技术手段对药品进行批量处理，提高药效，并通过对比色谱柱信息，正确测定出药品有效成分，减少了人工差错，提高了测定的准确性，为今后的检验工作提供了便利【3】。
高效液相色谱在药物分析中的应用研究进展
高效液相色谱在药物分析中的应用研究进展一、概述高效液相色谱（HPLC）是一种广泛应用于药物分析的重要技术，具有快速、高效、灵敏度高和分辨率高等特点。
自20世纪70年代以来，随着色谱理论和仪器技术的不断发展，HPLC已成为药物分析领域中不可或缺的工具。
其利用不同物质在固定相和流动相之间的分配差异，通过高压泵将流动相推动通过装有固定相的色谱柱，实现样品中各组分的分离。
随后，通过检测器对分离后的组分进行检测，从而实现对药物成分的定性和定量分析。
近年来，随着药物分析需求的不断提高，HPLC在药物分析中的应用研究也取得了显著的进展。
在药物质量控制方面，HPLC可用于药物有效成分的含量测定、杂质含量的检测以及药物制剂中各组分的分离分析等。
HPLC还可应用于药物代谢产物的分析，为药物研发提供重要的参考信息。
在药品检验中，HPLC的应用不仅提高了检验的准确性和效率，还有助于实现药品检验的自动化和智能化。
同时，随着HPLC技术的不断发展，其在药物分析中的应用也将不断拓展和完善。
本文旨在综述HPLC在药物分析中的应用研究进展，为相关领域的研究和实践提供参考和借鉴。
1. 高效液相色谱技术简介高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种重要的色谱分析技术，广泛应用于化学、医学、工业、农学、商检和法检等多个学科领域。
作为色谱法的一个重要分支，HPLC以液体为流动相，通过高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱。
在柱内，各成分因与固定相发生作用的大小、强弱不同，而在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出，进入检测器进行检测，实现对试样的分析。
HPLC具有“四高一广”的特点，即高压、高速、高效、高灵敏度和应用范围广。
高压是因为流动相为液体，流经色谱柱时受到的阻力较大，需要高压泵来推动流动相通过色谱柱。
高效液相色谱检测器的种类及特点
一、概述高效液相色谱（HPLC）是一种常用的分析化学技术，广泛应用于化学、生物、医药和食品等领域。
在HPLC技术中，检测器是至关重要的一部分，它负责检测样品中化合物的浓度，并将其转化为可读的信号输出。
本文将对HPLC检测器的种类及特点进行详细介绍。
二、紫外-可见光（UV-Vis）检测器1. 原理：UV-Vis检测器利用化合物中的紫外或可见光吸收特性来检测化合物。
2. 特点：1）广泛适用：UV-Vis检测器适用于大多数有机化合物和许多无机化合物的分析。
2）灵敏度高：对于绝大多数有机化合物，UV-Vis检测器的灵敏度较高。
3）简单易用：UV-Vis检测器的操作相对简单，适合实验室常规分析。
三、荧光检测器1. 原理：荧光检测器利用化合物在受激光照射下产生荧光的特性来检测化合物。
2. 特点：1）高灵敏度：荧光检测器对于有荧光活性的化合物具有极高的灵敏度。
2）特异性强：由于荧光本身具有较高的特异性，荧光检测器可以用于分析中对混杂物的忽略。
3）应用广泛：在生物学、医学和环境领域，荧光检测器得到了广泛的应用。
四、蒸发光散射检测器1. 原理：蒸发光散射检测器通过样品与蒸发后的溶剂之间的差异来检测化合物。
2. 特点：1）通用性强：蒸发光散射检测器对于大多数非吸收性化合物都具有较好的检测能力。
2）无需色谱柱：相比于其他检测器，蒸发光散射检测器可以不需要色谱柱，适用于高分子化合物的检测。
3）灵敏度较低：蒸发光散射检测器的灵敏度通常较低，需要较高浓度的样品才能进行检测。
五、质谱检测器1. 原理：质谱检测器通过将化合物转化为离子，并对离子进行质量分析来检测化合物。
2. 特点：1）高分辨率：质谱检测器具有极高的分辨率，可以准确确定化合物的质荷比。
2）特异性强：质谱检测器对于复杂混合物的成分分析具有很强的特异性。
3）操作复杂：相比于其他检测器，质谱检测器的操作和维护较为复杂，需要专业的操作人员。
六、综述HPLC检测器种类繁多，每种检测器都有其特定的适用场景和优势。
超高效液相色谱-质谱联用法
超高效液相色谱-质谱联用法（UHPLC-MS）是一种高分辨率、高灵敏度的分析技术，常用于生物化学、药物研发、环境分析等领域。
UHPLC-MS技术的基本原理是利用超高效液相色谱（UHPLC）分离化合物，然后将分离后的化合物送入质谱仪进行分析。
UHPLC-MS技术具有以下优点：
1. 分离效率高：UHPLC技术采用高效的分离机制，能够在较短时间内分离出复杂混合物中的化合物。
2. 分析灵敏度高：UHPLC-MS技术具有高灵敏度和高选择性，可以检测出低浓度的化合物。
3. 分析速度快：UHPLC-MS技术可以实现快速分析，一般只需要几分钟到几十分钟。
4. 分析范围广：UHPLC-MS技术可以用于分析各种化合物，包括天然产物、药物、环境污染物等。
UHPLC-MS技术的应用范围非常广泛，可以用于药物研发、生物化学、环境分析、食品安全等领域。
在药物研发领域，UHPLC-MS技术可以用于药物代谢产物的鉴定、定量分析、药物相互作用的研究等；在生物化学领域，UHPLC-MS技术可以用于蛋白质组学、代谢组学的研究；在环境分析领域，UHPLC-MS技术可以用于环境污染物的分析、生物标志物的鉴定等。
超高效液相色谱(uplc)
超高效液相色谱(UPLC TM)：重新定义液相色谱分离科学的能力随着首次成功地使用小颗粒得到惊人的分离能力而进入了一个新的时空。
这个新的色谱领域，所谓超高效液相色谱（UPLC TM），与传统的HPLC技术相比提供了更高的效率，因而具有更强的分离能力。
作为世界第一个商品化UPLC TM产品的Waters ACQUITY UPLC TM超高效液相色谱系统，利用创新技术进行整体设计，大幅度地改善了液相色谱的分离度、样品通量和灵敏度。
UPLC TM的商品化，是分离科学和技术的巨大进步，液相色谱亦由此进入了全新的时代。
基于1.7 μm小颗粒技术的UPLC TM，与人们熟知的HPLC技术具有相同的分离原理。
不同的是：UPLC TM不仅比传统HPLC具有更高的分离能力，而且结束了人们多年不得不在速度和分离度之间取舍的历史。
使用UPLC TM可以在很宽的线速度、流速和反压下进行高效的分离工作，并获得优异的结果。
小颗粒分离的理论与科学基础图1：填料技术的沿革液相色谱30年的发展史是颗粒技术的发展史。
颗粒度的改变直接影响到柱效，从而对分离结果产品直接影响。
由上图可知：随着颗粒度的不断降低，色谱分离度不断提高。
事实上，上述规律的理论基础是著名的范德米特(van Deemeter)方程――这是全世界所有从事色谱研究的科学家熟知的理论。
由此得到的范德米特(van Deemeter)曲线，亦是色谱科学家预测颗粒度变化而引起的色谱变化的根本依据。
该曲线预测最佳柱效与相应的流动相流速。
由曲线得知：随着颗粒度减小，相应的理论塔板高度（HETP）也下降，得到的柱效会更高。
还应该注意到1.7 μm颗粒的HETP最小值区域扩大了，这表明可以在比大颗粒更宽的流量范围内得到最高的柱效，结果可以不损失高分离度的同时来优化流速（分析速度）。
小颗粒为色谱分离带来如此的高柱效和速度优势，使利用小颗粒技术成为色谱科学家梦寐以求的目标。
然而HPLC系统的设计，一直苦于难于发挥出最小颗粒的优点。
仪器分析实验的课后习题答案及讨论
高效液相色谱1．高效液相色谱法的特点特点：检测的分辨率和灵敏度高，分析速度快，重复性好，定量准确度高，应用围广。
适用于分析高沸点、大分子、强极性、热不稳定有机及生化试样的高效别离分析方法。
2.高效液相色谱与气相色谱的主要区别可归结于以下几点：(1)进样方式的不同：高效液相色谱只要将样品制成溶液，而气相色谱需加热气化或裂解；(2)流动相不同，在被测组分与流动相之间、流动相与固定相之间都存在着一定的相互作用力；(3)由于液体的粘度较气体大两个数量级，使被测组分在液体流动相中的扩散系数比在气体流动相中约小4~5个数量级；(4)由于流动相的化学成分可进展广泛选择，并可配置成二元或多元体系，满足梯度洗脱的需要，因而提高了高效液相色谱的分辨率〔柱效能〕；(5)高效液相色谱采用5~10Lm细颗粒固定相，使流体相在色谱柱上渗透性大大缩小，流动阻力增大，必须借助高压泵输送流动相；(6)高效液相色谱是在液相中进展，对被测组分的检测，通常采用灵敏的湿法光度检测器，例如，紫外光度检测器、示差折光检测器、荧光光度检测器等。
3.高效液相色谱的定性和定量分析的方法定性：〔1〕利用纯物质定性的方法利用保存值定性：通过比照试样中具有与纯物质一样保存值的色谱峰，来确定试样中是否含有该物质及在色谱图中位置。
不适用于不同仪器上获得的数据之间的比照。
利用参加法定性：将纯物质参加到试样中，观察各组分色谱峰的相对变化。
〔2〕利用文献保存值定性相对保存值r21：相对保存值r21仅与柱温和固定液性质有关。
在色谱手册中都列有各种物质在不同固定液上的保存数据，可以用来进展定性鉴定。
定量：有归一法、标法、外标法在定量分析中，采用测量峰面积的归一化法、标法或外标法等，但高效液相色谱在别离复杂组分式样时，有些组分常不能出峰，因此归一化法定量受到限制，而标法定量则被广泛使用。
4．高效液相色谱实验时，选择流动相时应注意的几个问题〔1〕尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。
高效液相色谱法介绍(一)
使用单一溶剂，往往不能达到很好的分离效果，往往使用混合溶剂通常使用 一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂，高极性的溶剂还有增加区分度的 作用，常用的溶剂组合 洗脱剂：一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为： 石油迷<己烷<苯<乙醚<THF（次氢呋喃）<乙酸乙酯<丙酮<乙醇<甲醇 极性小的用乙酸乙酯：石油醚系统 极性较大的用甲醇：氯仿系统 极性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系统 拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸
七、常见故障的排除
故 泵启动不良
障
故 障 原 因 （1）溶剂水平面太低 （2）溶剂中有气泡析出 （1）色谱柱超负荷 （2）非缓冲流动相使酸性 或碱性样品的色谱峰 发生拖尾 （1）柱子超负荷 （2）样品组分在柱子上积 聚，柱子沾污柱效变 坏 （3）柱填料与流动相未完 全达到平衡 （1）柱子被玷污，柱效下 降 （2）固定相流失 （3）梯度系统对色谱柱 （固定相）不合适. （4）柱温过高 （5）流动相强度太高
峰形不好，出现平头峰或拖 尾峰
分离度下降
保留时间减少
故
障
故 障 原 因 （1）温度不稳 （2）泵启动不良 （3）溶剂中有气泡 （1）长时间的基线漂移可 能由于室温波动引起 （2）池座垫圈漏液 （3）流通池污染 （4）UV灯不亮 （1）样品阀，进样垫或注 射器被污染 （2）溶解样品溶剂的洗脱 峰 （3）样品溶液中有气泡 （4）梯度洗脱溶剂不纯 （特别是水） （1）电源线内部折断 （2）灯启动器有毛病 （3）UV灯泡有毛病 （4）保险丝断开
a.光源（氘灯）发出的光经聚光透镜聚焦，由可旋转组合滤光片滤 除杂散光，再通过入口狭缝至下面反射镜，经反射到达光栅，光 栅将光衍射色散成不同波长的单色光，当某一波（190nm~600nm） 的单色光经平面镜反射，反射至分束器时，透过光分束器的光通 过样品的流通池，最终到达检测样品的光电二极管测量；被光分 束器反射的光到达检测基线波动的参比光电二级管；当获得测量 和参比光电二极管的信号差，即为样品的检测信息。 b.可变波长紫外吸收检测器的某一时刻只能采集某一特定波长的 吸收信号。 光栅的偏转可由预先编制的采集信号程序加以控制，以便于采 集某一特定波长的吸收信号，并可使色谱分离过程洗脱出的每 个组分峰都获得最灵敏的检测。
什么是UPLC？和HPLC有什么区别？
什么是UPLC？和HPLC有什么区别？UPLC是一个新兴的领域，今日就跟大家共享一些干货。
UPLC：超高效液相色谱（Ultra Performance Liquid Chromatography）色谱理论认为提高色谱柱的效能（efficiency）就能增加仪器的解析度（resolution），而运用粒径低于2m的小颗粒无疑是增加效能的好方法。
但减小固定相的粒度以增加色谱柱效能始终的色谱仪器科学的瓶颈，由于小颗粒不仅要求系统能承受高于目前极限压力（比如9000psi），需要更小的系统体积（死体积），并且需要能适应可能只有几秒峰宽的高速检测器。
UHPLC：超高效液相色谱(Ultra-High Performance Liquid Chromatography)特点是工作压力超过6000 psi或工作温度超过环境温度的应用。
由于 UHPLC 应用中使用的硬件通常可以承受 9000 psi或更高的系统压力，因此色谱工作人员可以使用由更高级固相（其颗粒远远小于传统的5 m直径硅胶）填充的色谱柱。
采纳颗粒更小的固相不仅可以实现更高的辨别率，同时还能缩短整体分析时间。
HPLC：高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography）又称"高压液相色谱'、"高速液相色谱'等。
高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流淌相，采纳高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流淌相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分别后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。
该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分别分析技术。
UPLC和HPLC的区分与传统的高效液相色谱(HPLC)相比，UPLC具有高分别度(ultra resolution)、高速度(ultra speed)、高灵敏度(sensitivity)等优势。
《仪器分析》4-高效液相色谱法
(4) 示差折光检测器： 是一种中等灵敏度(10–6 g/mL)的通用型检测器。
是利用纯流动相和含有待测组分的流动相之间折射率的 差别进行检测的。
可分为三类：反射式；折射式（偏振式）和干涉式。常 用前两种。
优点：灵敏度适宜，操作简便是一种通用型的检测器； 缺点：对温度变化敏感，不能用于梯度洗脱。 应用范围：聚合物、糖。还用于分析以紫外检测和荧光
精选课件
药典中的液相色谱检测器
精选课件
常用的检测器:
(1) 紫外光度检测器：是一种选择性浓度检测器，仅 对那些在紫外波长有吸收的物质有响应。
作用原理：基于待测试样对特定波长的紫外光有选择 性的吸收，试样浓度与吸光度的关系服从比尔定律。
结构：
1－低压汞灯 2－透镜 3－遮光板 4－测量池 5－参比池 6－紫外滤光片 7－双紫外光敏电阻
精选课件
⑶ 色谱柱 GC柱很长，特别是毛细管柱可长至几十米至上百米，柱效
很高(理论塔板数N = 104~106)。HPLC柱较短，一般为15~25 cm，柱效(理论塔板数N = 103~104)，低于GC柱。 ⑷ 检测器
与GC相比，HPLC检测器种类较多。 ⑸ 制备色谱
GC难以制备样品，因为进样量小，难以收集或被破坏。 HPLC可进行制备，即制备色谱。
精选课件
2. 进样系统
在高效液相色谱中，常用的进样方式： 高压阀进样：优点是能用于高压，适于大体积进样，重现性
好；缺点是进样阀进样时需排掉一部分试样，不同的进样 量需用不同的定量管，同时峰的扩展也比注射进样大。 微量注射器进样：也可由微量注射器注入取样环少量样品， 即采用较大体积取样环而进少量试样，进样量由注射器控 制，试样不充满取样环，只填充一部分体积。
高效液相色谱仪的特点 液相色谱如何操作
高效液相色谱仪的特点液相色谱如何操作高效液相色谱仪紧要有进样系统、输液系统、。
分别系统、检测系统和数据处理系统，下面将分别叙述其各自的构成与特点。
1.进样系统一般接受隔膜注射进样器或高高效液相色谱仪紧要有进样系统、输液系统、。
分别系统、检测系统和数据处理系统，下面将分别叙述其各自的构成与特点。
1.进样系统一般接受隔膜注射进样器或高压进样间完成进样操作，进样量是恒定的。
这对提高分析样品的重复性是有益的。
2.输液系统该系统包括高压泵、流动相贮存器和梯度仪三部分。
高压泵的一般压强为l。
47～4、4X107Pa，流速可调且稳定，当高压流动相通过层析柱时，可降低样品在柱中的扩散效应，可加快其在柱中的移动速度，这对提高辨别率、回收样品、保持样品的生物活性等都是有利的。
流动相贮存错和梯度仪，可使流动相随固定相和样品的性质而更改，包括更改洗脱液的极性、离子强度、PH值，或改用竞争性抑制剂或变性剂等。
这就可使各种物质（即使仅有一个基团的差别或是同分异构体）都能获得有效分别。
3.分别系统该系统包括色谱柱、连接管和恒温器等。
色谱柱一般长度为10～50cm（需要两根连用时，可在二者之间加一连接管），内径为2～5mm，由"优质不锈钢或厚壁玻璃管或钛合金等材料制成，住内装有直径为5～10μm粒度的固定相（由基质和固定液构成）。
固定相中的基质是由机械强度高的树脂或硅胶构成，它们都有惰性（如硅胶表面的硅酸基因基本已除去）、多孔性（孔径可达1000？）和比表面积大的特点，加之其表面经过机械涂渍（与气相色谱中固定相的制备一样），或者用化学法偶联各种基因（如磷酸基、季胺基、羟甲基、苯基、氨基或各种长度碳链的烷基等）或配体的有机化合物。
因此，这类固定相对结构不同的物质有良好的选择性。
例如，在多孔性硅胶表面偶联豌豆凝集素（PSA）后，就可以把成纤维细胞中的一种糖蛋白分别出来。
另外，固定相基质粒小，柱床极易达到均匀、致密状态，极易降低涡流扩散效应。
高效液相色谱HPLC简介
4.1.2 色谱法简介（二）
体积排阻色谱法--------以多孔性凝胶为固定相，借助 多孔性凝胶孔径的大小，使样品中的大分子不能进入凝胶 孔洞而完全被排阻，只能沿凝胶粒子之间的空隙通过色谱 柱，而首先被洗脱出来。被分析样品可按分子的相对大小 分别先后流出。
4、色谱分析法简介
4.1.1 色谱分析法介绍（一）
液固色谱------以固体吸附剂为固定相，依靠吸附－脱附 平衡实现分离，常用的固定相有碳酸钙、硅胶、三氧化二铝、 氧化镁、活性炭等。
特点：有时会发生不可逆吸附，应用受到限制。
液液色谱------以吸附载带在惰性固相载体上的极性或非 极性固定液为固定相，依靠溶解－解吸平衡实现分离。
反相柱------固定相通常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱 官能团的键合相。反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓 冲液与甲醇、乙腈等的混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强的 组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。 常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5 （Phenyl）等。
◆ 荧光检测器（FLD）
原理：某些溶质在紫外光激发后能发射可见光（荧光） 的性质检测。
特点：选择性检测器、灵敏度高（10-12g）、对流量和 温度敏感性低。
3.4.3 检测器简介（三）
◆ 蒸发光散射检测器（ELSD） 原理：通过检测光散射程度而测定溶质浓度的检测器。
色谱柱后流出物在通向检测器途中，被高速载气 （氮气）喷成雾状液滴，再进入蒸发漂移管中，流 动相不断蒸发，含溶质的雾状液滴形成不挥发的微 小颗粒，被载气载带通过检测器。在检测器中，光 被散射的程度取决于溶质颗粒的大小与数量。 特点：消除了溶剂的干扰，不受温度变化影响，灵敏 度高，是通用型检测器。
高效液相色谱法(HPLC)简介
高效液相色谱法分离过程
主要在于固定相的性质、形状及粒度，其次 差别： 是检测手段和输液设备。
经典液相色谱 固定相： 粒度：60~600μｍ（多孔） 柱长：10~200cm（d=10~50mm） n 约为 2~50/m
流动相：靠重力输送
经典液相色谱无在线检测器
缺点：
①粒度范围宽、不规则，不易填充均匀，扩散和传质阻 力大。 ②无检测设备，分析速度慢、效率低。 只能作为分离手段
（3）不能完全替代气相色谱
（4）不适于分析受压分解、变性的具有生物活性的
Hale Waihona Puke 生化样品。高效液相色谱法与其他分析方法一样，
不是尽善尽美的。
第二节 高效液相色谱法的基本理论
一、高效液相色谱参数 1.定性参数 tR 、 t 0 、 t’ R t’R= tR- t0 2.柱效参数 σ、 W1/2 、W W=4 σ 或 w=1.699W1/2 n=（ tR / σ）2 H=L/n
四、高效液相色谱法的应用范围和局限性
1.应用范围 高效液相色谱法适于分析高沸点、受热不稳定易 分解、分子量大、不同极性的有机化合物；生物活性 物质和多种天然产物；合成和天然高分子化合物。 涉及石油化工产品、食品、药品、生物化工产品 及环境污染物。约占全部有机物的80%。 2.方法的局限性
（1）使用多种溶剂为流动相，成本高，污染环境 （2）缺少通用检测器
美国药典委员会（USPC）成立于1820年，至今近200 年。出版发行了25版药典。 75年（19版）将HPLC载入药典 20版-62项；21版-363项；22版-871项；23版-1188项； 24版-含量测定法：1386项 鉴别：519项 杂质检查：206项
如今：在评价世界各国药典水平时，HPLC法成为 反映各国药典先进性的重要指标之一。
超高效液相飞行时间质谱原理
超高效液相飞行时间质谱原理
超高效液相飞行时间质谱结合了超高效液相色谱（UHPLC）和飞行时间质谱（TOFMS）两种技术，具有高灵敏度、高分辨率和高分析速度的特点。
其原理如下：
1.超高效液相色谱（UHPLC）：UHPLC是一种色谱技术，其利用高压系统和细小粒径的填充物，使得样品在极短的时间内得到分离。
这种高效的分离能力使得待测物质迅速通过色谱柱，并且可以更好地分辨和定量目标分子。
2.飞行时间质谱（TOFMS）：TOFMS是一种质谱技术，它利用飞行时间原理测定样品分子离子在电场作用下飞行所需的时间。
由于具有高灵敏度和高分辨率，TOFMS可以精确地确定待测物质的分子质量。
3.联合应用：UHPLC-TOFMS将UHPLC与TOFMS结合，前者提供高效的分离，后者提供高灵敏度的质谱分析。
当样品通过UHPLC分离后，进入TOFMS进行离子化和质谱分析，可以获得高分辨率、高灵敏度的分析结果。
同时，由于其分析速度快，因此适用于高通量的分析需求。
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应用
例子 比较HPLC和UPLC法测定复方黄连素 片中吴茱萸碱和吴茱萸次碱的含量
需60 分钟内完成测定 需10 分钟内完成测定
HPLC
检测限均为1. 0 ng
UPLC
检测限均为0.6 ng
UPLC 法在保证含量测定结果准确的前提下，将提 高分析效率，节省分析时间，减少溶剂损耗，降低分析 成本，凸显现代色谱法
液相色谱是现代色 谱技术中最活跃的分析 方法之一，而超高效液 相色谱是一种基于小颗 粒填料的液相色谱技术 已成功地应用于各种分 析领域。
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UPLC法的建立前提条件
提高小颗粒填料的耐压性，并解决小颗粒填 料的装填问题 设计超过15000psi的高压溶剂输送系统 完善系统整体性设计，减小死体积，提高超 高压下仪器部件的耐压性及密封性 设计高速检测器和流动池以解决高速检测及 扩散问题
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解决高速数据的采集、仪器的控制问题
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超高效液相色谱技术
新型色谱填料及装填技术
超高压液相色谱泵
自动进样器
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高速检测器
优化系统综合性能设计
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超高效液相色谱的特点
1 高分离度
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高分析速度
3 高灵敏度
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方法转换简便
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易与质谱串联
应用
UPLC目前主要用来解 决高通量分析和复杂体系的 分离问题，如代谢组学分析、 天然产物的分析。使用UPLC 与TOF或Q-TOF等质谱检测 器连接，促进了复杂体系中 多组分分析的发展。 5