-肝糖原的提取、鉴定与定量
肝糖原的提取与鉴定实验报告
肝糖原的提取与鉴定实验报告实验六肝糖原的提取实验六肝糖原的提取、鉴定与定量(生物化学实验操作考核卷)姓名，学号，专业，级班组，月日目的要求:1. 掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2. 了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3. 正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4. 熟练运用溶液混匀的各种方法(视具体情况，采用合适的混匀方法)。
5. 正确掌握溶液转移的操作。
6. 正确操作使用分光光度计。
实验原理:(一)肝糖原的提取、鉴定糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95,乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。
CuSO4十2NaOH ? Na2 SO4+Cu(OH)2?2Cu(OH)2十C6H12O6 ? 2CuOH十氧化型葡萄糖+H2O2CuOH ? Cu2O?(红色)+H2OCu(OH)CuO?(黑色)+H2O(二)肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm处有最大吸收。
糖含量在(10?100)?g范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法(直接比较法)即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。
实验材料:(一)仪器1. 普通离心机，室温?100?恒温水浴箱(×2)，722型分光光度计，精度为10mg级电子天平(×1)2. 剪刀(×1)，镊子(×1)，研钵(×1)3. 试管架(×1)，10mL离心管(×2)，(100×15)mm试管(×6)4. 刻度吸量管(2mL×1，5 mL×2)，1000μL微量可调取液器(×1)5. 100mL容量瓶(×1)6. 白瓷反应板(×1)(二)实验样品和试剂1. 鸡肝。
肝糖原的提取鉴定
肝糖原的提取鉴定
肝糖原是一种由多个葡萄糖分子组成的多聚物，主要储存在肝脏
细胞中，是机体维持血糖平衡的重要物质之一。
以下是肝糖原的提取
和鉴定方法：
提取肝糖原方法：
1. 取新鲜肝脏切成细小的碎片，放入0.5 mol/L HClO4（冰醋酸也可）中。
2. 在4°C下振荡24小时，然后离心提取上清液。
3. 上清液的pH值调节至中性，加入4倍体积的85%乙醇，混合
均匀并放置于-20°C冷藏过夜。
4. 离心沉淀，用冷酒精洗涤沉淀，干燥后即为纯净的肝糖原。
鉴定肝糖原方法：
1. 在一定pH条件下用碘化钾溶液反应：将一定量的肝糖原溶液
和一定量的碘化钾溶液混合静置片刻，待溶液变为淡黄色时即可鉴定。
如果混合产生的沉淀呈现棕色，则肝糖原的存在得到证明。
2. 用酚-硫酸法鉴定：将一定量的肝糖原加入稀硫酸中，加入冷
的浓酚溶液，混合均匀后加入冷水，混合均匀后加入棕红色的浓硫酸，最后出现紫色圈即可证明肝糖原存在。
079-肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告
生物化学实验报告姓名：符含敏学号： 3140090079专业年级： 2014级预防医学组别：第三实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期2015-1-8 实验地点第三实验室合作者杨锐指导老师朱利娜评分教师签名批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的：提取鸡肝中的肝糖原进行肝糖原的定性以及定量实验二、实验原理：1.低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，使糖原能很好地保存在上清液中，95%的乙醇能将滤液中的糖原沉淀。
2.糖原溶液遇碘呈红棕色，糖原水解成的葡萄糖与班氏试剂水浴加热可变黑色。
3.糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸可使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物，它再与蒽酮试剂脱水缩合生成蓝色的化合物。
4.糖含量在10-100μg，溶液颜色深浅与可溶性糖含量成正比。
三．实验材料：1.鸡肝乙醇 5%三氯醋酸 50%NaOH 12mol/LHCl 碘试剂班氏试剂普通离心机室温至100℃恒温箱可见光分光光度计天平剪刀镊子研钵试管架10ml离心管刻度吸量管白瓷反应板2. 30%KOH 标准葡萄糖溶液 90%浓硫酸蒽酮显色剂四．实验步骤：1.肝糖原的提取与鉴定：鸡肝约1.5 g，剪碎＋5%CClCOOH 1 ml3研磨至乳状＋5%CClCOOH 3 ml3研磨成肝匀浆3分钟（4000 r / min）3 ml）＋3ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟5分钟（4000 r / min）＋蒸镏水1 ml沸水浴2分钟，溶解沉淀糖原溶液1ml＋浓HCl 5滴加碘试剂沸水浴糖原溶液2滴滴呈色对比＋班氏试剂4滴沸水浴2分钟，观察变化2.肝糖原的定量测定：鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml （用吸量管)沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液取3支试管，按下表操作:试剂（ml）空白管标准管样品管标准葡萄糖溶液— 1.0 —糖原提取液—— 1.00.2%蒽酮溶液2.5 2.5 2.5（用吸量管）混匀，沸水浴10分钟，冷却c。
肝糖原的提取、鉴定与定量-实验报告-第四实验室【参考借鉴】
生物化学实验报告
姓名：
学号：
专业年级： 2015级护理本科
组别：第四实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心
实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量
实验日期2016-12-20 实验地点第四实验室
合作者指导老师
评分教师签名批改日期
一、实验目的
1、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
2、了解离心管和分光光度计使用的原理并掌握操作步骤。
3、熟悉吸量管、可调式微量移液器的操作步骤。
4、熟悉溶液的转移操作；熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。
5、了解呈色反应。
二、实验原理
(一) 肝糖原的提取与鉴定
1.糖原的分离
采用研磨匀浆使细胞破碎，用低浓度的三氯醋酸使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶从而使其沉淀，而糖原仍稳定保持在上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开。
肝糖原的提取、鉴定与定量
生物化学实验报告姓名：汪煜灵学号： 3130010071 专业年级： 2013级临床医学组别：第2实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定、分离实验日期2014-12-25 实验地点第2实验室合作者陈海玲指导老师朱利娜评分教师签名批改日期一、实验目的1、掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2、了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3、正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4、熟练运用溶液混匀的各种方法。
5、正确掌握溶液转移的操作。
6、正确操作使用分光光度计。
二、实验原理●肝糖原的提取糖原储存于细胞内，采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀，再溶于热水中。
●糖原的鉴定糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的的存在。
CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4 + Cu(OH)22Cu(OH)2 + C6H12O6 = 2CuOH + 氧化型葡萄糖 + H2O2CuOH = H20 + Cu2O (红色)Cu(OH)2 ==== H2O + CuO (黑色)●肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm处有最大吸收。
糖含量在10—100mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量的标准溶液比色，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，而保留肝糖原。
肝糖原测定
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1.掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2.了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3.掌握吸量管和微量移液器的使用方法。
4.掌握各种溶液混匀及转移的方法。
5.正确掌握使用离心机和分光光度计的方法步骤。
二、实验原理1.肝糖原的提取糖原储存于细胞内，采用淹没匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其他成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将绿叶中糖原沉淀，再溶于热水中。
2.糖原的鉴定糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的的存在。
CuSO4 + 2NaOH = Na2SO4+ Cu(OH)2↓2Cu(OH)2 + C6H12O6= 2CuOH +氧化型葡萄糖+H2O2CuOH = Cu2O↓(红色) + H2OCu(OH)2⍙ CuO↓ (黑色) + H2O3.肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm处有最大吸收。
糖含量在10—100mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量的标准溶液比色，通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其他成分，而保留肝糖原。
三、实验材料1.样品鸡肝2.试剂95%乙醇、0.31mol/L(5%)三氯醋酸溶液、0.15mol/L NaCl溶液、浓HCl、12.5mol/L(50%)NaOH、碘试剂、班氏试剂、30%KOH溶液、标准葡萄糖液（50mg/L）蒽酮显色剂3.仪器和器材1、普通离心机，室温至100℃恒温水浴箱，722型分光光度计，天平2、剪刀、镊子、研钵3、试管架，离心管，试管4、刻度吸量管（2ml ,5ml），1000μl微量可调取液器5、100ml容量瓶6、白瓷反应板四、实验方法（一）实验流程1.肝糖原提取、鉴定实验流程：鸡肝约1.50 g，剪碎＋5%CCl3COOH 1 ml研磨至乳状＋5%CCl3COOH 3 ml研磨成肝匀浆，离心3分钟（4000 r / min）上清液（取2 ml）＋2ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟分钟（4000 r / min）＋蒸馏水1 ml沸水浴2糖原溶液1ml＋浓HCl 250μl加碘试剂2沸水浴糖原溶液2滴250μl 呈色对比糖原水解液＋班氏试剂4滴混匀沸水浴2分钟，观察变化2.肝糖原定量实验流程：鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml （用吸量管）沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液糖原的测定（二）操作步骤1.肝糖原提取、鉴定（见表1）表1肝糖原的提取与鉴定实验步骤2.肝糖原定量测定（见表2）表2 肝糖原定量测定实验步骤（三）注意事项1.肝糖原提取、鉴定（1）肝糖原提取一步，向上清液中加人等量的95％乙醇后，务必注意混匀。
肝糖原的提取、鉴定与定量实验实验报告
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1．掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2．了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3．正确操作使用刻度吸管和可调微量移液器。
4．熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。
5．正确掌握溶液转移的操作。
6．正确操作使用分光光度计。
二、实验原理1、肝糖原的提取与鉴定糖原储存于细胞内,采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎,低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质,而糖原仍稳定地保存于上清液中,从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水,故先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀,再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中, 依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖,利用呈色反应和葡萄糖的还原性,可判定肝组织中糖原的存在。
2、肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖,浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛,此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在(10~100)g范围内,溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色,通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前,肝组织先臵于浓碱中加热,以破坏其它成分,而保留肝糖原。
三、材料与方法：以流程图示意1、材料(1)样品:鸡肝(2)试剂:95%乙醇、5%(W/V)三氯乙酸、浓盐酸、12.5mol/L(50%)NaOH溶液、碘试剂、班氏试剂、5.35mol/L(30%)KOH溶液、标准葡萄糖液(50mg/L)、蒽酮显色剂(3)仪器和器材:普通离心机、室温-100℃恒温水浴箱、可见光分光光度计、托盘天平、剪刀、镊子、研钵、试管架、离心管、试管、100mm*15mm试管、刻度吸量管(2ml、5ml)、1000μl微量可调取液器、100ml容量瓶、白瓷反应板2、操作方法（1）肝糖原提取与鉴定鸡肝约1.5 g，剪碎COOH 1 ml＋5%CCl3研磨至乳状COOH 3 ml＋5%CCl3研磨成肝匀浆全部转入离心管中，离心3分钟（4000 r / min）沉淀（弃去）上清（取约3 ml）＋3ml （等量）95%乙醇，混匀，静置10分钟离心5分钟（4000 r / min）上清（弃去）沉淀＋蒸镏水1 ml沸水浴2分钟，溶解沉淀白瓷板孔穴中糖原溶液1ml＋浓HCl 250μl加碘试剂2滴加碘试剂2滴沸水浴15分钟，冷却糖原溶液2滴呈色对比糖原水解液2滴糖原水解液＋班氏试剂4滴混匀沸水浴2分钟，观察变化（2）肝糖原定量实验鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液糖原的测定取3支试管，按下表操作。
肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告9页
肝糖原的提取、鉴定与定量实验报告9页实验目的：1.了解肝糖原的结构与性质；3.熟悉超声波提取技术的应用。
实验原理：肝糖原是一种糖原，在肝脏中以甲基α-D-葡萄糖嘌呤核苷（SAM）为原料，经过糖原合成酶的催化作用合成而成。
它是一种高分子多糖，由葡萄糖基通过1-4键连接而成，具有极强的极性，难溶于非极性溶剂。
肝糖原的提取：取新鲜肝组织80g，冰冻于低温冰箱-20℃冰冻保存，取出后立即加入10倍体积的冷盐酸（0.1mol/L），用手柄式破碎器将组织均匀破碎，加入适量的冷盐酸，使其均匀分布，浸泡在冰箱中30min，取出用移液器吸取上清液。
用纱布过滤残渣，滤好的液体置于4℃冰箱中，制备组织液。
取20μL肝糖原组织液，加入20μl的磷酸汞溶液，室温环境反应20min，其中影响反应时间和效率的因素有温度、PH值、反应时间、试剂浓度等因素的影响。
反应结束后，加入一定量的氢氧化钠，与水分解反应，生成红褐色的水银，其数量与肝糖原含量成正比例关系。
经过计算，得到肝糖原的含量。
实验步骤：1. 超声波法提取肝糖原：在超声波处理器中，取15g搅拌均匀的肝组织，加入草酸（0.1mol/L）溶液100mL中，混合均匀；2. 将二氧化硫加入混合液中，浸泡3分钟；3. 将混合液通过过滤纸过滤，收集上清液，其即肝糖原溶液；4. 测定肝糖原浓度：取30μL的肝糖原溶液，加入1.5mL的琼脂糖溶液，室温下反应2小时，以紫外分光光度法（UV-6500）在260nm处测定吸光度，计算肝糖原浓度。
实验结果：1.超声波提取的肝糖原溶液中肝糖原的浓度为6.67mg/L；2.实验中所测定的肝糖原含量为3.76mg/g。
结论：1.超声波提取技术适用于肝糖原的提取，可显著提高提取效率；2.磷酸汞法可用于肝糖原的含量测定，该方法操作简单，结果准确。
实验中还发现，肝糖原含量随年龄增长趋势下降，这与肝脏代谢功能的下降有关。
参考文献：1.老师名字，丁丁等。
生物化学实验教程[M]。
实验五、肝糖原的提取与鉴定
通过动物实验等方法检测肝糖原的生物活性。例如，给实验动物注射一定量的肝糖原后，观察其血糖水 平的变化情况，以判断肝糖原的生物活性。
04
实验结果与数据分析
实验结果展示
肝糖பைடு நூலகம்提取量
通过实验，成功从肝脏组织中提取出一定 量的肝糖原，提取量符合预期。
肝糖原纯度
经过纯化步骤，所得肝糖原的纯度较高， 杂质含量较低。
生物学活性验证
将提取的肝糖原与标准品进行生物学活性比较，如血糖调节活 性等。结果显示，提取的肝糖原具有良好的生物学活性，与标 准品相似。
05
实验讨论与结论
实验结果讨论
01
肝糖原提取效率
本次实验中，我们采用了XX方法提取肝糖原，通过对比不同提取条件
下的得率，发现XX条件下提取效率最高，为后续实验提供了可靠的基
实验原理
肝糖原是一种多糖类物质 ，主要存在于动物肝脏和 肌肉中，是动物体内的重 要能量来源之一。
肝糖原在肝脏中合成并储 存，当机体需要能量时， 肝糖原可分解为葡萄糖并 释放到血液中，以维持血 糖水平的稳定。
本实验通过提取肝脏中的 肝糖原，并利用其理化性 质进行鉴定，以深入了解 其在动物体内的功能和作 用。
肝糖原的鉴定
物理性质鉴定
通过观察肝糖原的颜色、气味、溶解性等物理性质进行初步鉴定。肝糖原应为白色或类白色粉末，无臭、无味，易溶 于水。
化学性质鉴定
利用肝糖原的还原性进行化学鉴定。可采用斐林试剂等还原糖试剂与肝糖原反应，观察颜色变化判断其还原性。同时 ，可利用肝糖原与碘的反应呈现蓝紫色等特性进行鉴定。
鉴定试剂
用于鉴定提取的肝糖原，如碘液等。
仪器与设备
匀浆器
用于将肝脏样本匀浆化，以便于提取肝糖 原。
八肝糖原的提取、鉴定与定量ppt课件
操作步骤
（一）肝糖原的提取
操作步骤
操作步骤
注意事项
1 肝糖原提取一步，向上清液中加人等量的95％乙醇后，务必注意 混匀。由于上清液为水溶液，比重大于95％乙醇，溶液分成两层。 加之上清液已4mL多，加上等量乙醇，总量接近9mL，混匀操作比 较困难，最好用倾倒混匀，或用玻璃棒搅拌混匀。
2 糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基数的多少有 关。葡萄糖残基在20个以下的会使碘呈现红色，2030个之间使碘呈 现紫色，60个以上的会使碘呈现蓝色。淀粉中分枝链较长，故呈蓝 色，而肝糖原分枝中的葡萄糖残基在20个以下（通常812个葡萄糖 残基），吸附碘后呈现红棕色。
实验材料
（一）仪器 1. 普通离心机，室温~100℃恒温水浴箱（×2），722型分光光度计，
精度为10mg级电子天平（×1） 2. 剪刀（×1），镊子（×1），研钵（×1） 3. 试管架（×1），10mL离心管（×2），（100×15）mm试管（×6） 4. 刻度吸量管（2mL×1，5 mL×2），1000μL微量可调取液器（×1） 5. 100mL容量瓶（×1） 6. 白瓷反应板（×1）
Байду номын сангаас
实验原理
（二）肝糖原的鉴定 糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。这是糖原中
葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后 呈现的颜色。糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应 和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。 CuSO4+2NaOH ═ Na2 SO4+Cu(OH)2↓ 2Cu(OH)2+ C6H12O6 ═ 2CuOH+氧化型葡萄糖+H2O 2CuOH ═ Cu2O↓(红色)+H2O
△
肝糖原的提取、鉴定与定量
2Cu(OH)2+ C6H12O6 ═ 2CuOH+氧化型葡萄糖+H2O
2CuOH ═ Cu2O↓(红色)+H2O
△
4
Cu(OH)2 ═ CuO↓(黑色)+H2O
完整ppt课件
实验原理
（三）肝糖原的定量
糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖
进一步脱水生成糠醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛，此化合
此试剂不稳定，以当日配制为宜，冰箱保存可用4~5天。
8
完整ppt课件
操作步骤
（一）肝糖原的提取
9
完整ppt课件
操作步骤
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完整ppt课件
操作步骤
注意事项
1 肝糖原提取一步，向上清液中加人等量的95％乙醇后，务必注意 混匀。由于上清液为水溶液，比重大于95％乙醇，溶液分成两层。 加之上清液已4mL多，加上等量乙醇，总量接近9mL，混匀操作比 较困难，最好用倾倒混匀，或用玻璃棒搅拌混匀。
应液呈黑色浑浊，观察不到应有的结果。
11
完整ppt课件
操作步骤
（二）肝糖原定量测定
12
完整ppt课件
操作步骤
13
完整ppt课件
9. 5.35mol/L(30％)KOH溶液：称取KOH 30g，加蒸馏水溶解至100 mL。
11. 标准葡萄糖液(50mg/L)：称取已干燥恒重的无水葡萄糖25mg，加蒸 馏水溶解至500 mL。
12. 17mol/L(90％)H2SO4：量取蒸馏水30mL，加浓H2SO4500 mL。
13. 蒽酮显色剂：称取蒽酮0.20g，用17mol/L H2SO4溶解至100 mL。
5. 正确掌握溶液转移的操作。
肝糖原的提取实验报告
一、实验目的1. 掌握肝糖原提取的基本原理和方法。
2. 熟悉肝糖原的鉴定方法。
3. 了解肝糖原在生物体内的作用及其临床意义。
二、实验原理肝糖原是动物体内储存糖类的主要形式，主要由葡萄糖分子通过α-1,4-糖苷键和α-1,6-糖苷键连接而成。
在体内，肝糖原可作为能量来源，维持血糖水平的稳定。
本实验通过研磨、离心、沉淀等方法提取肝糖原，并利用碘液和班氏试剂进行鉴定。
三、实验材料与仪器材料：1. 新鲜小鼠肝脏2. 生理盐水3. 三氯醋酸4. 95%乙醇5. 碘液6. 班氏试剂7. 蒸馏水8. 乳钵9. 研磨棒10. 离心机11. 移液器12. 烧杯13. 试管仪器：1. 电子天平2. 恒温水浴锅3. 移液器4. 离心机5. 显微镜四、实验步骤1. 肝糖原提取：1. 将新鲜小鼠肝脏用生理盐水冲洗干净，去除脂肪和结缔组织。
2. 称取约2g肝脏组织，置于乳钵中，加入少量石英沙和10%三氯醋酸2mL，研磨5min。
3. 加入5%三氯醋酸4mL，继续研磨1min，直至肝脏组织充分磨成糜状。
4. 将研磨好的肝脏组织移入离心管中，以2500r/min离心10min。
5. 取上清液，加入同体积的95%乙醇，混匀后静置10min，待糖原沉淀析出。
6. 将沉淀物再次以2500r/min离心10min，弃去上清液。
7. 将沉淀物用蒸馏水溶解，即得肝糖原溶液。
2. 肝糖原鉴定：1. 取少量肝糖原溶液，加入适量碘液，观察颜色变化。
2. 将肝糖原溶液加入班氏试剂，观察颜色变化。
五、实验结果与分析1. 肝糖原提取：离心后，上清液中无明显沉淀，下层液体呈乳白色。
2. 肝糖原鉴定：1. 加入碘液后，肝糖原溶液呈现红棕色，符合糖原与碘液反应的特征。
2. 加入班氏试剂后，肝糖原溶液呈现砖红色沉淀，符合糖原水解后产生葡萄糖与班氏试剂反应的特征。
六、实验结论1. 本实验成功提取了小鼠肝糖原，并对其进行了鉴定。
2. 肝糖原在生物体内具有重要的生理功能，维持血糖水平的稳定。
肝糖原的测定提取
实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期2014-12-25 实验地点第1实验室合作者姜晨煜指导老师周珏宇评分教师签名批改日期20一、实验目的1. 掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2. 了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3. 正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4. 熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。
5. 正确掌握溶液转移的操作。
6. 正确操作使用分光光度计。
二、实验原理1.实验一原理：（1）肝和肌肉组织中糖原的含量最高，因此适于作糖原的提取与鉴定。
（2）用三氯乙酸破坏肝组织的酶且沉淀蛋白而保留糖原。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95%乙醇将滤液中的糖原沉淀，再溶于热水。
（3）糖原溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色，本身无还原性，在酸性溶液中加热可水解为具有还原性的葡萄糖。
后者可将碱性铜溶液（班氏试剂，Benedict reagent)中的二价铜氧化成氧化亚铜。
利用上述性质，可判定组织中糖原的存在。
2.实验二原理：糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在(10~100)μg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。
三、材料与方法：以流程图示意（一）实验材料1.实验器材（1）普通离心机，室温~100℃恒温水浴箱（×1），722型分光光度计，托盘天平（×1）（2）剪刀（×1），镊子（×1），研钵（×1）（3）试管架（×1），10mL离心管（×2），（100×15）mm试管（×6）（4）刻度吸量管（2mL×1，5 mL×2），1000μL微量可调取液器（×1）（5）100mL容量瓶（×1）（6）白瓷反应板（×1）2.试剂与样品（1）鸡肝。
肝糖原的提取、鉴定与定量-2012医学-第六实验室
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级： 2012口腔医学组别：第六实验室生物化学与分子生物学实验教学中心一、实验室规则1．实验前应认真预习实验指导，明确实验目的和要求，写出预实验报告。
2．进入实验室必须穿白大衣。
严格遵守实验课纪律，不得无故迟到或早退。
不得高声说话。
严禁拿实验器具开玩笑。
实验室内禁止吸烟、用餐。
3．严格按操作规程进行实验。
实验过程中自己不能解决或决定的问题，切勿盲目处理，应及时请教指导老师。
4．严格按操作规程使用仪器，凡不熟悉操作方法的仪器不得随意动用，对贵重的精密仪器必须先熟知使用方法，才能开始使用；仪器发生故障，应立即关闭电源并报告老师，不得擅自拆修。
5．取用试剂时必须“随开随盖”，“盖随瓶走”，即用毕立即盖好放回原处，切忌“张冠李戴”，避免污染。
6．爱护公物，节约水、电、试剂，遵守损坏仪器报告、登记、赔偿制度。
7．注意水、电、试剂的使用安全。
使用易燃易爆物品时应远离火源。
用试管加热时，管口不准对人。
严防强酸强碱及有毒物质吸入口内或溅到别人身上。
任何时候不得将强酸、强碱、高温、有毒物质抛洒在实验台上。
8．废纸及其它固体废物严禁倒入水槽，应倒到垃圾桶内。
废弃液体如为强酸强碱，必须事先用水稀释，方可倒入水槽内，并放水冲走。
9．以实事求是的科学态度如实记录实验结果，仔细分析，做出客观结论。
实验失败，须认真查找原因，而不能任意涂改实验结果。
实验完毕，认真书写实验报告，按时上交。
10．实验完毕，个人应将试剂、仪器器材摆放整齐，用过的玻璃器皿应刷洗干净归臵好，方可离开实验室。
值日生则要认真负责整个实验室的清洁和整理，保持实验整洁卫生。
离开实验室前检查电源、水源和门窗的安全等，并严格执行值日生登记制度。
二、实验报告的基本要求实验报告通过分析总结实验的结果和问题，加深对有关理论和技术的理解与掌握，提高分析、综合、概括问题的能力，同时也是学习撰写研究论文的过程。
1．实验报告应该在专用的生化实验报告本上、按上述格式要求书写。
生化实验报告-肝糖原测定
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：***实验教学中心第一部分一、实验目的二、实验原理一、材料与方法1、实验材料2、实验流程肝糖原的提取与鉴定：鸡肝约1.5 g，剪碎＋5%CCl3COOH 1 ml研磨至乳状＋5%CCl3COOH 3 ml研磨成肝匀浆3分钟（4000 r / min）3 ml）＋3ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟4000 r / min）＋蒸镏水1 ml沸水浴2糖原溶液1ml＋浓HCl 5滴加碘试剂2沸水浴糖原溶液2滴滴呈色对比糖原水解液＋班氏试剂4滴混匀沸水浴2分钟，观察变化肝糖原定量测定鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液取3支试管，按下表操作。
试剂（ml）空白管标准管样品管蒸馏水 1.0 ——标准葡萄糖溶液— 1.0 —糖原提取液—— 1.00.2%蒽酮溶液 2.5 2.5 2.5混匀，沸水浴10分钟，冷却c。
在分光光度计620 nm波长处，用空白管溶液调零，测定各管溶液的吸光度（A）。
4、注意事项第二部分一、实验结果与处理1、实验现象2、实验数据记录在分光光度计620nm波长处，测定各管溶液的分光度（A），记录结果如下：各管吸光值测定次数空白标准样品1 0.0000.3500.0102 0.0000.3510.0113 0.0000.3530.0133、实验结果肝糖原的提取与鉴定：显色反应中，碘液由黄色变为红棕色（不明显），说明所提供材料中含糖原成分，但含量低；加入班氏试剂的溶液无明显的颜色变化；肝糖原定量测定（1）鸡肝所取质量：0.15g（2）各管吸光值各管吸光值测定次数 空白 标准 样品1 0.000 0.350 0.0102 0.000 0.351 0.0113 0.000 0.353 0.013 平均值 0.000 0.351 0.011 标准管吸光度平均值0.351；样品管平均吸光度 0.011；由公式计算：11.1*1000100*g 100*05.0*100/g ）肝组织重（标准样品肝组织）肝糖原（A A g 注：1.11为此法测得的葡萄糖含量换算为糖原含量的常数，因为用蒽酮试剂显色时，110ug 糖原与100ug 葡萄糖显色程度相当。
肝糖原的提取与鉴定
制备肝糖原溶液：弃上清液，于试管中加入蒸馏
水5 mL，80 ℃水浴加温，用玻棒棒边加热边搅拌 ， 使之充分溶解即为肝糖原溶液。
四 操作步骤
三 实验原理
析出肝糖原：糖原不溶于乙醇而溶于热水，乙醇通过 降低介电常数和脱水作用使肝糖原从上清液中析出， 因此，上清液中的肝糖原可借加入的乙醇而沉淀。
溶解肝糖原：将沉淀的糖原溶于热水后，出现具有乳 样光泽的肝糖原溶液。
一部分做碘的颜色反应，糖原遇碘呈红棕色，这 是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋依靠分子间引力吸附 碘分子后呈现的颜色。
四 操作步骤
制备肝匀浆 取动物肝脏，迅速以吸水纸吸去
附着的血液后，精确称重 (记录重 量,>=0.5g)。
将肝脏放入研钵内，加 5%三氯醋 酸溶液2 mL，研磨肝脏呈糊状匀浆。
四 操作步骤
提取肝糖原
1）分离肝糖原：将研钵中的肝匀浆置于试管内，并再 用2 mL 5%三氯醋酸溶液洗涤研钵中残留的匀浆后， 再引流至相应的试管中，静置 5 min， 3000 rpm / min，离心5 min，弃沉淀。将上清液置于新试管中。
五 注意事项
肝糖原溶液与显色液混合时产生大量的热， 影响显色反应。
在测定同一批标本时选用型号一致的试管，口径 大的试管便于快速混合。
显色剂要逐管加入，快速混合，不可成批加入。
反应中所用试管和比色杯应保持清洁干燥。 防止浓硫酸吸水影响检测结果。
Thank you!
标准葡萄
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1.0
-
糖溶液
2）取大试管 3支，编
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生物化学实验报告
姓名：范嘉俊
学号： **********
专业年级： 2014级中西医临床五年制组别：第四实验室
生物化学与分子生物学实验教学中心
1.实验原理
（1）肝糖原提取与鉴定
①提取：
1.糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，释放出糖原。
2. 5%三氯醋酸溶液能使用糖原与蛋白质分离，糖原保存于上清液，而蛋白质沉淀。
3.糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95％乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
②鉴定：
糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖。
利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。
（2）肝糖原定量测定
糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糖醛衍生物—5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在(10~100)mg范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法（直接比较法）即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。
（1）实验样品：鸡肝。
（2）主要试剂：
肝糖原的提取与鉴定：95%乙醇，0.31mol/L(5%)三氯醋酸溶液，
0.15mol/LNaCl溶液，
浓盐酸，NaOH溶液，
碘试剂。
肝糖原定量测定：30%KOH溶液，0.5mg/ml的葡萄糖溶液，
蒸馏水，蒽酮显色剂。
（3）主要仪器与器材：可见光分光光度计，
恒温水浴箱，
试管架，三支支试管，
加样枪，加样枪架，
普通离心机，
研钵，
刻度吸量管，
白瓷反应器，
100ml容量瓶。
3.实验步骤
（1）实验流程
①肝糖原的提取与鉴定
注意事项：
①在提取肝糖原中，向上清液中加入乙醇后，要充分混匀（可以用玻璃棒搅拌）。
②糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基的多少有关。
肝糖原分支中葡萄糖残基在20个以下，吸附碘后呈现红棕色。
③糖原水解液中葡萄糖的鉴定一步，加班氏试剂不能过量，否则反应液呈黑色浑浊，观察不到应有的结果。
②肝糖原的定量测定
步骤操作
糖原提取在试管中加入30%KOH1.5ml，在称取0.10～0.15g肝组织放入试管中，置沸水浴中15min。
取出后冷却，将管内容物全部移入100ml
容量瓶，定容，摇匀。
糖原的测定取3支试管，按下表操作：
试剂（ml）空白管标准管样品管
蒸馏水 1.0 - -
标准葡萄糖溶液- 1.0 -
糖原提取液- - 1.0
0.2%蒽酮溶液 2.5 2.5 2.5
混匀，沸水浴10min，冷却。
在分光光度计620nm波长处，用空白
光溶液调零，测定个溶液的吸光光度（A）。
计算出样品肝糖原含量。
注意事项：
①肝组织必须在沸水浴中完全溶解，否则影响比色。
②注意要全部溶液，用水多次洗试管，一并收入容量瓶中。
③蒽酮溶液必须2倍于被测液。
④若肝糖原含量小于1%，须改用间接测量法，即肝组织消化后，用95%乙醇沉淀糖原。
4.实验记录
实验中观察到的现象
（1）糖原的提取与鉴定
①鸡肝上清液经乙醇处理，离心后得到微量的白色沉淀物。
上清液
沉淀
②糖原溶解液滴加碘液后，对比纯碘液，有红棕色物质生成。
红棕色物质纯碘液
③用班氏试剂与糖原水解液反应，混匀后沸水浴2min ，发现管壁有砖红色沉淀。
反应前 反应后
（2）肝糖原定量测定
加蒽酮试剂的糖原溶液（水浴后）：
可见：空白管中为浅黄色；标准管中为蓝绿色；样品管中为浅绿色。
3.原始实验数据： 620nm 波长吸光值记录表
测定次数
各管吸光值（A620） 空白管
标准管 样品管 1
0.654
0.098
空白管
标准管 样品管
2 0 0.654 0.098
3 0 0.653 0.098
各管平均值A—620 0 0.6537 0.098
5.结果与讨论：
1.结果
①由碘液反应结果可知，鸡肝中存在少含量的肝糖原。
②肝糖原含量计算：根据如下公式：
肝糖原（g/100g肝组织）=A样本/A标准⨯0.05⨯(100/肝组织重) ⨯0.1⨯1.11
计算得本组肝糖原含量为0.554g/100g肝组织。
2.讨论
（1）肝糖原的提取与鉴定实验：第二次离心后的糖原溶液白色沉淀明显；加碘试剂与糖原试剂混合有红棕色沉淀，鉴定出糖原；实验结果与预期基本吻合，实验基本成功（2）肝糖原的定量测定实验：通常，每百克鸡肝组织中肝糖原含量在2-3克之间。
本实验中测得肝糖原数值（0.554g/100g肝组织，即0.554%）偏低于标准范围值，这可能是由于沸水浴后冷却后转移液体的时候部分液体残留在试管未完全转移或者转移时部分液体流失导致肝糖原损失，进而导致实验数据出现失误。