细菌内毒素检查法凝胶法
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细菌内毒素检查 （凝胶法）
细菌内Βιβλιοθήκη Baidu素检查法
方法分类 方法特性
凝胶法 浊度法
光度法 显色基质法
重现性好 能定量 能控制药物的增强/抑制干扰 操作简便。节省时间
原理：
利用鲎血液中的变性细胞，经裂解液和机 械方式促使细胞破裂而提取到的一种细胞溶 解物，能与极微量的细菌内毒素形成特异凝 胶反应，反应的速度和凝胶的坚固程度与内 毒素浓度有关.
2、每一步稀释液所用的移液器不能反复、交 叉使用。
3、鲎试剂复溶时应将检查用水顺着瓶壁加入， 避免产生气泡。
4、操作时间的长短。环境温度变化都会影响 实验结果，故操作应尽量熟练、快速。
5、恒温器的温度变化应<1℃，鲎试剂与样品 混匀后应立即移入水浴槽，严格控制保温 时间在60±2min，保温期间不得移动试管 架，桌面保持平稳，周围不能有振颤因素。
若溶液A的两个平行管均为阴性，判定供试品符合 规定；若溶液A的两个平行管均为阳性，判定供试 品不符合规定。若溶液A的两个平行管中的一管为 阳性，另一管为阴性，需进行复试，复试时，溶液 A需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判定供 试品符合规定；否则判定供试品不符合规定
操作注意事项
试验前准备： 1、玻璃器具应规范化，便于除热原、计量准确、
鲎试剂 标准品 供试品
B 200ul
C 100ul 100ul
A 100ul
100ul
A 100ul
100ul
6、结果判定
将制备好的试剂用锡箔纸包裹好后放入电热恒温水 浴锅中， 37℃恒温水浴60min后观察结果（保证玻 璃瓶中溶液处于水面以下，并防止水进入瓶中）。 若阴性对照溶液B为阴性，阳性对照溶液C为阳性， 试验有效。
3、确定最大有效稀释倍数
（MVD）： MVD=cL/λ
式中L为供试品的细菌内毒素限值；c为供试 品溶液的浓度；λ为在凝胶法中鲎试剂的标示 灵敏度(EU/ml)。
3、鲎试剂灵敏度复核
按下表制备溶液A、B、C，使用稀释倍数为MVD的 供试品溶液来制备溶液A，按鲎试剂灵敏度复核试 验项下操作。
仪器与器具 电热恒温水浴锅、定时钟、去热源枪
头和小玻璃瓶、移液枪、试管架、剪刀、 锡箔纸。 试剂
细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素 检查用水、鲎试剂。
2、内毒素限值的确定
L=K/M 式中L为供试品的细菌内毒素限值，一般以
EU/ml、EU/mg或EU/U表示；K为人每千克 体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/ （kg·h）表示；M为人用每千克体重每小时 的最大供试品剂量，以ml/（kg·h）、mg/ （kg·h）或U/（kg·h）表示。一般由供试品 提供者直接提供内毒素限值如1000EU。
清洗操作方便。 2、用于内毒素检测的稀释试管最好用玻璃试管；
塑料用具只能为一次性且保证无内毒素。
实验环境：最好在洁净室或洁净工作台内进行， 保证环境温度、湿度及通风稳定。
实验人员：戴干净手套和口罩。
实验过程：
1、内毒素工作标准品应严格按要求低温保存； 工作标准品开封后尽快使用且应一次性用 完，不再保存。
细菌内毒素检测之凝胶法
实验程序 1、试验准备：试剂、仪器及用具 2、内毒素限值的确定 3、确定最大有效稀释倍数 4、凝胶限度试验 5、结果判定
要求
1、以最终产品为检测必要 （浓度超过0.5mg/ml） 2、检测样品PH应在6~8之间，不符应调整
1、试验准备：试剂、仪器及用具
结果判断：恒温结束后，取出试管或反应瓶 缓缓倒转180°，不从管壁脱落为阳性，不 能保持完整即使有部分脱落者也判为阴性。
细菌内Βιβλιοθήκη Baidu素检查法
方法分类 方法特性
凝胶法 浊度法
光度法 显色基质法
重现性好 能定量 能控制药物的增强/抑制干扰 操作简便。节省时间
原理：
利用鲎血液中的变性细胞，经裂解液和机 械方式促使细胞破裂而提取到的一种细胞溶 解物，能与极微量的细菌内毒素形成特异凝 胶反应，反应的速度和凝胶的坚固程度与内 毒素浓度有关.
2、每一步稀释液所用的移液器不能反复、交 叉使用。
3、鲎试剂复溶时应将检查用水顺着瓶壁加入， 避免产生气泡。
4、操作时间的长短。环境温度变化都会影响 实验结果，故操作应尽量熟练、快速。
5、恒温器的温度变化应<1℃，鲎试剂与样品 混匀后应立即移入水浴槽，严格控制保温 时间在60±2min，保温期间不得移动试管 架，桌面保持平稳，周围不能有振颤因素。
若溶液A的两个平行管均为阴性，判定供试品符合 规定；若溶液A的两个平行管均为阳性，判定供试 品不符合规定。若溶液A的两个平行管中的一管为 阳性，另一管为阴性，需进行复试，复试时，溶液 A需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判定供 试品符合规定；否则判定供试品不符合规定
操作注意事项
试验前准备： 1、玻璃器具应规范化，便于除热原、计量准确、
鲎试剂 标准品 供试品
B 200ul
C 100ul 100ul
A 100ul
100ul
A 100ul
100ul
6、结果判定
将制备好的试剂用锡箔纸包裹好后放入电热恒温水 浴锅中， 37℃恒温水浴60min后观察结果（保证玻 璃瓶中溶液处于水面以下，并防止水进入瓶中）。 若阴性对照溶液B为阴性，阳性对照溶液C为阳性， 试验有效。
3、确定最大有效稀释倍数
（MVD）： MVD=cL/λ
式中L为供试品的细菌内毒素限值；c为供试 品溶液的浓度；λ为在凝胶法中鲎试剂的标示 灵敏度(EU/ml)。
3、鲎试剂灵敏度复核
按下表制备溶液A、B、C，使用稀释倍数为MVD的 供试品溶液来制备溶液A，按鲎试剂灵敏度复核试 验项下操作。
仪器与器具 电热恒温水浴锅、定时钟、去热源枪
头和小玻璃瓶、移液枪、试管架、剪刀、 锡箔纸。 试剂
细菌内毒素工作标准品、细菌内毒素 检查用水、鲎试剂。
2、内毒素限值的确定
L=K/M 式中L为供试品的细菌内毒素限值，一般以
EU/ml、EU/mg或EU/U表示；K为人每千克 体重每小时最大可接受的内毒素剂量，以EU/ （kg·h）表示；M为人用每千克体重每小时 的最大供试品剂量，以ml/（kg·h）、mg/ （kg·h）或U/（kg·h）表示。一般由供试品 提供者直接提供内毒素限值如1000EU。
清洗操作方便。 2、用于内毒素检测的稀释试管最好用玻璃试管；
塑料用具只能为一次性且保证无内毒素。
实验环境：最好在洁净室或洁净工作台内进行， 保证环境温度、湿度及通风稳定。
实验人员：戴干净手套和口罩。
实验过程：
1、内毒素工作标准品应严格按要求低温保存； 工作标准品开封后尽快使用且应一次性用 完，不再保存。
细菌内毒素检测之凝胶法
实验程序 1、试验准备：试剂、仪器及用具 2、内毒素限值的确定 3、确定最大有效稀释倍数 4、凝胶限度试验 5、结果判定
要求
1、以最终产品为检测必要 （浓度超过0.5mg/ml） 2、检测样品PH应在6~8之间，不符应调整
1、试验准备：试剂、仪器及用具
结果判断：恒温结束后，取出试管或反应瓶 缓缓倒转180°，不从管壁脱落为阳性，不 能保持完整即使有部分脱落者也判为阴性。