红曲霉的分离纯化

红曲霉的分离纯化

傅慧华

摘要：红曲霉属真菌门（Eumycophyta）、子囊菌纲（Ascomycetes）、真子囊菌亚纲（Euascomycetes）、红曲霉属（Monascus）。红曲霉是腐生真菌，生长的最适pH为3．5～5，能耐pH3．5，尤嗜乳酸。生长温度为26～42℃最适温度32℃～35℃，能耐10%乙醇。红曲霉以其能产大量的天然红色素而受到关注。长期以来，国内外微生物工作者对红曲霉的研究大多集中在传统的酿酒、制醋、着色剂以及进行关于生产淀粉酶、糖化酶等的研究与探讨。而对于药用及其他用途仅停留在《本草纲目》、《兽医本草》中的记载：红曲主治消食活血，健脾燥胃等。从上世纪80年代前后，国内外微生物学家才开始对其药用价值进行研究与探讨，近年来，对红曲霉中功能因子的分子结构和安全性等方面进行了广泛的研究。

关键词：红曲米；红曲霉；酵母菌；分纯；

1.菌种分离

1 实验材料

1.1 红曲米：取自广西武宣地区，是居民制作红糟酸所用的发酵剂。

1.2 培养基：①孟加拉红培养基②PDA培养基③营养琼脂④营养肉汤

1.3无菌生理盐水

1.4其他实验用品

试管，三角烧瓶，量筒，玻棒，高压蒸汽灭菌锅，PH试纸（PH5.5-9.0）牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等

2.实验步骤

2.1培养基的配制

按实际用量计算后，按配方称取药品放入三角瓶中，其中营养肉汤1.8g,营养琼脂0.33g,孟加拉红3.16g加水100ml加热溶解并不断搅拌至完全溶解后包扎，于115℃高压灭菌20分钟（由于当时疏忽导致灭菌温度没有达到121℃）

2.2生理盐水的配制称取Nacl0.85g加水100ml后加热溶解，包扎于115℃下灭菌20分钟,

2.3其他工具灭菌移液枪头，移液管等

2.4无菌检查将无菌的营养肉汤，营养琼脂培养基放入37℃恒温箱中，孟加拉红培养基放入28℃恒温箱中培养24-28h,无菌生长即可

3细菌分离

将无菌培养基加热溶解后于超净工作台倒平板，每皿厚度应为15-20mm,待冷却凝固后取2-3颗红曲米，采用点植法将之放入培养基中培养，贴上标签，其中孟加拉红6皿，PDA3皿放入28℃恒温箱中培养，其余放入37℃恒温箱中，培养24-28h观察结果

4观察结果

72个小时后观察的现象 28℃ PDA3皿生长正常，孟加拉红6皿生长；37℃PDA3皿较28℃生长得快，营养琼脂6皿生长较慢或基本不生长，营养肉汤两个三角瓶其中一个产气泡，都有浑浊现象

5酵母菌的观察及分离培养

接种一周后发现有类似酵母菌生长，经显微镜观察后初步确定为酵母菌。于超净工作台将孟加拉红培养基中得酵母菌接种于PDA斜面培养基，于37℃恒温箱中培养24-48h后观察，生长状况良好

6红曲霉的分离纯化

接种2周后于超净工作台取未染杂菌的红曲霉采用平板划线法接种于PDA培养基后于28℃恒温箱中培养24-48h后观察，红曲霉基本不生长