高效液相色谱法样品预处理的自动化和衍生化的进展
生物样品的预处理技术研究进展
作者简介：尤斯涵，研究方向：网络药理学；Ｅ ｍａｉｌ：４７８０３２００８＠ｑｑ．ｃｏｍ通讯作者：郭春燕，教授，硕士生导师；研究方向：体内药物分析和靶向药物分析；Ｅ ｍａｉｌ：ｇｕｏｃｈｙ０３１１＠１６３．ｃｏｍ生物样品的预处理技术研究进展尤斯涵 殷宏艳 杨宋蕊 刘鑫淼 郭春燕河北北方学院药学院，河北省神经药理学重点实验室，张家口，０７５０００，中国【摘要】 基于生物样品具有药物种类繁多、理化性质各异、生物介质组分复杂的特点，生物样品的预处理产生了多种技术和方法。
基于以上背景，该文综述了近年来在体内药物分子中生物样品的预处理方法，以期为不同生物样品的预处理提供参考。
【关键词】 生物样品；预处理；体内药物分析【中图分类号】 Ｒ９６３ 【文献标识码】 Ａ 犇犗犐：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．２０９５ １３９６．２０２３．０５．０１０犃犱狏犪狀犮犲犻狀犘狉犲狋狉犲犪狋犿犲狀狋犜犲犮犺狀犻狇狌犲狊犳狅狉犅犻狅犾狅犵犻犮犪犾犛犪犿狆犾犲狊ＹＯＵＳｉ ｈａｎ，ＹＩＮＨｏｎｇ ｙａｎ，ＹＡＮＧＳｏｎｇ ｒｕｉ，ＬＩＵＸｉｎ ｍｉａｏ，ＧＵＯＣｈｕｎ ｙａｎＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＨｅｂｅｉＮｏｒｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＨｅｂｅｉＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｚｈａｎｇｊｉａｋ ｏｕ，０７５０００，Ｃｈｉｎａ【犃犅犛犜犚犃犆犜】 Ｄｕｅｔｏｔｈｅｄｉｖｅｒｓｅｔｙｐｅｓｏｆｄｒｕｇｓ，ｄｉｖｅｒｓｅｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，ａｎｄｃｏｍｐｌｅｘｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｍｅｄｉａｉｎｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓ，ｖａｒｉｏｕｓｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓａｎｄｍｅｔｈｏｄｓｈａｖｅｅｍｅｒｇｅｄｆｏｒｔｈｅｐｒｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓ．Ｂａｓｅｄｏｎｔｈｅａｂｏｖｅｂａｃｋ ｇｒｏｕｎｄ，ｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅｒｅｖｉｅｗｓｔｈｅｐｒｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｍｅｔｈｏｄｓｏｆｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓｉｎｖｉｖｏｄｒｕｇｍｏｌｅｃｕｌｅｓｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ｗｉｔｈｔｈｅａｉｍｏｆｐｒｏｖｉｄｉｎｇｒｅｆｅｒｅｎｃｅｆｏｒｔｈｅｐｒｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｄｉｆｆｅｒ ｅｎｔｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓ．【犓犈犢犠犗犚犇犛】 ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓａｍｐｌｅｓ；ｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔ；ｉｎｖｉｖｏｄｒｕｇａｎａｌｙｓｉｓ 体内药物分析主要指利用现代分析仪器及方法对人或动物血样、尿样及组织等生物样品中的药物进行定性、定量分析。
高效液相色谱法中样品预处理与柱温控制的优化方法
高效液相色谱法中样品预处理与柱温控制的优化方法高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）是一种用于分离和分析化合物的常见技术。
然而，样品的预处理和柱温控制是影响分析结果的重要因素。
本文将讨论如何优化样品预处理和柱温控制方法，以提高HPLC的效率和准确性。
一、样品预处理的优化方法样品预处理是HPLC分析的首要步骤，旨在去除干扰物和浓缩目标分析物。
以下是几种常见的样品预处理优化方法：1. 萃取方法：对于固态样品，可以使用溶剂萃取或固相微萃取等方法。
选择合适的萃取方法可以提高分析物的浓度和纯度。
2. 过滤方法：使用微孔膜过滤器或固相萃取柱进行样品过滤，可以去除大颗粒和杂质，避免堵塞HPLC柱和仪器。
3. 衍生化方法：某些化合物在HPLC中难以分离和检测，可以使用化学衍生化方法将其转化为易于分析的衍生化物。
4. 离心浓缩法：对于稀溶液样品，可以通过离心浓缩法浓缩样品，提高分析物的浓度。
优化样品预处理方法可以提高样品的纯度和浓度，减少干扰物对分析物的影响，从而提高HPLC的分析准确性和灵敏度。
二、柱温控制的优化方法柱温控制是HPLC分析中的重要因素之一。
温度的变化可以影响色谱分离的选择性和速度。
以下是柱温控制的几种常见优化方法：1. 温度梯度方法：在柱温控制中使用温度梯度，可以提高分析物的分离度和分析速度。
通过逐渐增加或减少温度，可以优化分离效果。
2. 柱温控制参数的优化：调整柱温控制参数，比如温度斜率和保温时间，可以提高色谱分离的选择性和稳定性。
不同的分析物可能需要不同的柱温参数。
3. 列外循环冷却方法：使用列外循环冷却装置，可以在样品进入柱前将其冷却，避免柱内峰形变形和色谱峰的分散。
4. 优化冷却介质：选择合适的冷却介质，如冷却液或气体，可以提高柱温控制的效果。
需考虑介质的冷却速度、温度稳定性和对仪器的影响等因素。
通过优化柱温控制方法，可以提高分析物的分离度和分析速度，减少色谱峰的峰形变形，提高HPLC的分析效率和准确性。
高效液相色谱法应用论文
高效液相色谱法应用论文【摘要】目的：探究高效液相色谱法在药物分析中的实际应用。
方法：研究高效液相色谱法在药物分析中的特点及其在药物成分中的测定。
结果：高效液相色谱法在药物分析中的应用范围较广泛，取得了良好的效果。
结论：高效液相色谱法拥有灵敏度高、专属性强等优势特征，在药物分析领域内具有广阔的应用发展前景。
【关键词】高效液相色谱法；药物分析；应用；分离；药物成分高效液相色谱法是一种发展于上世纪70年代的快速、高效分析分离技术【1】。
该方法通常以液体溶剂充当流动相，并密切结合气相色谱法和液相色谱法分析分离的基本原理，具有见效快、高灵敏度、速度快等优势特征。
相较于气相色谱法，液相色谱法仅试剂制作成溶液即可，而忽略了气化过程，所以，并不受到试剂挥发作用的影响和制约。
该方法也用作分析分离沸点高、热稳定性能低、相对分子质量较大的有机物。
本文主要研究高效液相色谱法在药物分析中的特点及其在药物成分中的测定。
1高效液相色谱法在药物分析中的应用1.1抗生素分析抗生素通常是由微生物及其他办法所产生的一种化学物质，在高度稀释的条件下依然具备抑制及消灭微生物的基本功能。
对抗生素进行分析、分离及定量检测是药物分析中难度较大的领域，较普遍用到的办法为化学方法、分光光度法及微生物法等，然而，这三类方法的弊端在于耗费时间较长、专一性欠佳【2】。
目前运用在临床中的一类酯类抗生素——阿奇霉素具备较广泛的抗菌谱，有助于抑制流感嗜血杆菌、黏膜炎莫拉菌及肺炎链球菌等。
在酸性条件下，阿奇霉素的平稳性仍然较高，具备生物应用程度高、半衰期长及吸收性优良的特征。
据科学检测，PH值对分离阿奇霉素的影响较大，在PH11左右的环境中拥有较显著的分离效果。
高效液相色谱法具有分析时长较少、流动相耗费少及质谱联用的特征，在阿奇霉素的检测领域有着可靠的应用优势，通常所选的检测波长为215nm，在<5min 的时间段内即可使阿奇霉素完成基线分离，有效地节省了分析时间。
柱前衍生-反相高效液相色谱法
柱前衍生-反相高效液相色谱法1.引言1.1 概述概述部分的内容可以介绍柱前衍生-反相高效液相色谱法的背景和意义。
下面是一个概述的范例：正如我们所知，液相色谱法是一种常用的分离和检测分析技术，在化学、药学、环境科学等领域具有广泛的应用。
然而，传统的液相色谱法在某些情况下可能面临一些挑战，如分离效果不理想、分析时间较长等。
为了克服这些问题，柱前衍生-反相高效液相色谱法被提出并逐渐受到关注。
柱前衍生是指在样品处理中，在样品中引入适当的衍生试剂，通过与目标分析物发生化学反应，使其在色谱分析中具有更好的分离性能和检测灵敏度。
反相高效液相色谱法是基于分离样品中不同化学性质的分子在反相色谱柱上的亲水作用，达到分离和定量分析的目的。
柱前衍生-反相高效液相色谱法不仅可以提高色谱分析的分离效果，还能够提高检测灵敏度和减少分析时间。
这对于复杂样品的分析具有重要意义，例如药物代谢产物、环境污染物等。
通过引入适当的衍生试剂，可以有效地改善样品的分离性能，同时提高对目标分析物的响应，从而实现快速、灵敏的定量分析。
本文将对柱前衍生-反相高效液相色谱法的原理、方法和应用进行详细介绍。
首先，我们将阐述柱前衍生的基本原理和常用的衍生试剂。
然后，重点介绍反相高效液相色谱法的步骤和关键参数。
最后，我们将通过实例和应用案例来阐述柱前衍生-反相高效液相色谱法在药物分析、环境监测等领域的应用前景。
通过本文的阅读，读者将能够全面了解柱前衍生-反相高效液相色谱法的原理和实践，为他们的研究和实验工作提供参考和指导。
文章结构部分应包括以下内容：本文主要分为三个部分，即引言、正文和结论。
具体结构如下：1. 引言1.1 概述本部分将简要介绍柱前衍生-反相高效液相色谱法的研究背景和意义。
首先，说明柱前衍生技术在分析化学领域的重要性，该技术可以通过将样品与特定试剂反应生成易于分析的化合物，从而提高液相色谱分析的敏感性和选择性。
其次，介绍反相高效液相色谱法在分析化学中的广泛应用，包括药物分析、环境监测和食品安全等领域。
高效液相色谱法在药物分析中的研究进展
高效液相色谱法在药物分析中的研究进展摘要：高效液相色谱法作为药物分析的常规方法应用广泛，本文对其在药物含量测定及药代动力学研究上的应用进行综述。
关键词：高效液相色谱法；药物分析；研究；进展高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatogra phy，HPLC）是一项柱色谱分离技术，因分析速度快、分离效率高、检测灵敏度高、检测自动化、适用范围广、组分易回收、样品处理较简单等特点已广泛应用于各种药物及其制剂的分析测定。
随着与质谱、核磁共振波谱等的联用技术的发展，HPLC的应用将愈加广泛[1]。
一、高效液相色谱法作为药物分析的常规方法在药物分析中的应用高效液相色谱法作为药物分析中的最主要的分析方法，常被作为常规分析和检验方法[2]。
近年来这个方面的研究较多，陈英红等通过对人参糖肽注射液中多糖1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮柱前衍生化，采用高效液相色谱法进行组成糖分析，建立了人参糖肽注射液特征图谱。
该方法操作简便，分离度高，重复性及稳定性良好，可有效控制人参糖肽注射液的质量，同时可作为酸性杂多糖的测定方法。
陈金泉等建立抗艾滋病药物更昔洛韦、阿昔洛韦、喷昔洛韦和伐昔洛韦的HPLC快速检测方法。
采用同一色谱体系实现对四种药物的分析，该检测方法快速、简便，准确。
这些研究充分利用了高效液相色谱操作简单，灵敏度高，回收率高的特点。
二、高效液相色谱在药物分析测定中的研究进展高效液相色谱法是一种集分离和测定为一体的分析方法，其作为药物分析中药物鉴别、杂质检查及含量测定的重要方法。
（一）在鉴别中的应用。
HPLC用于药物鉴别时，一般规定按供试品含量测定项下的高效液相色谱条件进行实验。
要求供试品和对照品色谱峰的保留时间一致。
在HPLC法中，保留时间与组分的结构和性质有关，是定性的参数。
如头抱拉定、头孢噻酚钠等头孢类药物以及地西泮注射液、曲安奈德注射液等多种药物均采用HPLC法进行鉴别。
（二）在有关物质检查中的应用。
高效液相色谱样品预处理步骤
高效液相色谱样品预处理步骤1. 样品准备在准备高效液相色谱样品时，需要确保样品的稳定性，防止样品在分析过程中发生变化。
因此，在样品准备过程中需要注意以下几点：（1）选择合适的样品存储容器，避免样品被污染或发生变化；（2）确保样品在分析前达到室温，以避免样品在注射到色谱柱时产生气泡；（3）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载。
2. 样品过滤在进行高效液相色谱分析前，需要将样品通过过滤器进行过滤，以去除样品中的固体杂质或悬浮物，从而防止其对色谱柱的堵塞或损坏。
通常使用的过滤器有不同规格的筛网或滤膜。
3. 样品衍生化在一些情况下，需要对样品进行衍生化处理，以便更好地进行高效液相色谱分析。
衍生化处理可以将样品中的某些化合物转化为更易分析的形式，例如将某些极性化合物转化为非极性化合物，使其更适合用有机溶剂进行洗脱。
4. 样品稀释在某些情况下，需要将样品进行稀释，以便更好地进行高效液相色谱分析。
过浓的样品可能会导致色谱峰过宽或重叠，影响分析结果的准确性。
通常使用的的是溶剂或水进行稀释。
5. 样品进样在进行高效液相色谱分析时，需要将样品通过进样针注入到色谱柱中。
在进行进样时，需要注意以下几点：（1）注射适量的样品，以避免色谱柱被过度磨损或样品过载；（2）确保进样针的清洁和干燥，以避免对分析结果产生干扰。
6. 样品分离在将样品注入到色谱柱后，需要对其进行分离。
通常使用的的是高压泵将流动相通过色谱柱，将样品中的各个化合物进行分离。
在进行分离时，需要注意以下几点：（1）选择合适的流动相，以便将样品中的各个化合物进行分离；（2）调整流动相的流速和比例，以便获得更好的分离效果。
7. 检测器检测在分离后的各个化合物通过色谱柱流出时，需要使用检测器进行检测。
常见的检测器有紫外可见光检测器、电导检测器、荧光检测器等。
检测器可以提供样品的信号，并记录下各个化合物的在色谱图中的保留时间。
8. 数据处理在检测器检测完成后，需要对数据进行处理。
衍生化
衍生化试剂很多,简单的说:它能帮你将不能分析的样品通过衍生化试剂反应转化为可分析的化合物.衍生化试剂比如有:烷基化试剂、硅烷化试剂、酰化试剂类、荧光衍生化试剂、紫外衍生化试剂、苯甲酰氯为衍生化试剂、羟基衍生化试剂、手性衍生化试剂、氨基衍生化试剂、气相色谱和液相色谱中常用的柱前衍生化方法、、固相化学衍生化法.高效液相色谱法有甲醛与2，4－二硝基苯肼（DNPH）反应生成腙，衍生化产物醛腙用有机溶剂萃取富集后，在一定温度下蒸发、浓缩，再以甲醇或乙腈溶解或稀释，最后进行色谱测定。
衍生化使用色谱分离原理检测化学成分，当被检测目标成分的理化性质（如沸点、极性、吸光性）不便分离检测时，经常采用衍生化技术，改变其理化性状，达到可以使用色谱仪检测的目的。
化学衍生法指借助化学反应将待测组份接上某种特定基团，从而改善其检测灵敏度和分离效果的方法。
利用化学衍生反应达到改变化合物特性的目的，使其更适合于特定分析的过程，在仪器分析中被广泛应用。
气相色谱中应用化学衍生反应是为了增加样品的挥发度或提高检测灵敏度，而高效液相色谱的化学衍生法是指在一定条件下利用某种试剂(通称化学衍生试剂或标记试剂)与样品组份进行化学反应，反应的产物有利于色谱检测或分离。
一般化学衍生法主要有以下几个目的：提高样品检测的灵敏度；改善样品混合物的分离度；适合于进一步做结构鉴定，如质谱、红外或核磁共振等。
进行化学衍生反应应该满足如下要求：对反应条件要求不苛刻，且能迅速、定量地进行；对样品中的某个组份只生成一种衍生物，反应副产物及过量的衍生试剂不于扰被测样品的分离和检测；化学衍生试剂方便易得，通用性好[3 7]。
衍生化常用的反应有酯化、酰化、烷基化、硅烷化、硼烷化、环化和离子化等。
虽然气相色谱已有许多衍生化方法，但它有一个致命的缺点是不能用于热不稳定化合物。
此外，对于一些有复杂基质的实际样品，除分离上的困难外，还容易污染进样器和损坏柱子。
衍生化反应从是否形成共价键来说，可分为两种：标记和非标记反应。
综述-高效液相色谱-质谱联用技术在代谢组学中的应用进展
高效液相色谱-质谱联用技术在代谢组学中的应用进展摘要：代谢组学是对一个生物系统的细胞在给定时间和条件下所有小分子代谢物质的定性定量分析, 从而定量描述生物内源性代谢物质的整体及其对内因和外因变化应答规律的科学。
而高效液相色谱-质谱联用法（HPLC-MS）作为代谢组学中一种重要的分离检测方法，在代谢组学中有着方方面面的应用。
本文介绍代谢组学中的高效液相色谱-质谱联用技术，并从药物分析、生理病理代谢、临床诊断标志物和细胞鉴定等方面介绍高效色谱-质谱联用技术在代谢组学中的应用。
关键词：高效液相色谱-质谱联用技术；代谢组学代谢组学的研究目的就是从尿液、血浆、血清、唾液和胆汁等生物体终端样本中检测代谢物，或跟踪代谢水平整体的动态变化，提取“组学”信息，以此来反映生物体在外源刺激作用下的体内生物学过程变化情况。
代谢组学研究的基本流程包括样品采集、预处理、代谢组分析、数据分析以及研究结果的解释与应用等。
1.检测工具其中的样品采集分离与分析离不开分离检测工具。
常用的分离检测工具包括色谱(Chromatography)、质谱(Mass Spectrometry，MS)、核磁共振(Nuclear Magnetic Resonance，NMR)等。
【1】1.1核磁共振（NMR）NMR快速、选择性好,其样品处理简单且不造成破坏,只要含氢的代谢物都可以被检测,即可以对所有的分析对象达到无歧视分析。
对样品无损伤且重复性好,能够广泛应用于药物工业和病人的尿、血样分析。
样本制备简单且易自动化。
但是复杂混合物的NMR谱的解析非常困难。
对全面的代谢谱图分析, NMR最大的缺陷是灵敏度相对较低, 从而使得它不适合分析大量的低浓度代谢物。
【2】所需硬件投资也比较大1.2色谱（Chromatography）气相色谱(Gas Chromatography，GC)广泛用于微量、痕量组分的分析。
但是，气相色谱受组分挥发性和热稳定性的限制，需对样品进行衍生化处理。
氨基酸分析检测方法的研究进展
氨基酸分析检测方法的研究进展一、本文概述氨基酸作为生命活动的基本组成单位，其检测分析在生命科学、医学、食品科学、农业科学等领域中具有至关重要的作用。
氨基酸分析检测方法的研究进展不仅关乎理论科学的发展，更直接影响到实践应用中的质量控制、疾病诊断、营养评估等多个方面。
本文旨在综述近年来氨基酸分析检测方法的研究进展，包括传统方法的优化以及新兴技术的开发和应用，以期为推动氨基酸分析领域的持续进步提供参考。
我们将首先回顾氨基酸分析的传统方法，如色谱法、电泳法等，分析它们的优缺点及适用范围。
随后，将重点关注新兴技术在氨基酸分析中的应用，如质谱技术、光谱技术、生物传感器等，探讨这些技术在提高检测灵敏度、准确性和效率方面的优势。
我们还将讨论氨基酸分析在各个领域中的实际应用案例，以及面临的挑战和未来的发展趋势。
通过本文的综述，我们期望能够为读者提供一个全面而深入的视角，了解氨基酸分析检测方法的最新研究进展，以及这些方法在实际应用中的潜力和局限性。
我们也希望借此机会激发更多科研工作者对氨基酸分析领域的兴趣和热情，共同推动该领域的创新和发展。
二、传统氨基酸分析检测方法传统氨基酸分析检测方法主要包括色谱法、电泳法、化学分析法等。
这些方法在过去的几十年中得到了广泛的应用，为氨基酸的分析检测提供了重要的手段。
色谱法是最常用的氨基酸分析方法之一，其中主要包括离子交换色谱、氨基酸专用高效液相色谱（HPLC）和气相色谱（GC）等。
离子交换色谱基于氨基酸在离子交换剂上的吸附和解吸附作用，可以对氨基酸进行定性和定量分析。
HPLC具有高分辨率和高灵敏度，是分析复杂样品中氨基酸的有效方法。
GC则通过与衍生化试剂反应，将氨基酸转化为挥发性衍生物后进行分析。
电泳法是一种基于氨基酸在电场作用下的迁移速度差异进行分离的方法。
其中，薄层电泳和毛细管电泳是常用的电泳技术。
薄层电泳通过将氨基酸在支持介质上进行分离，可以用于简单样品的分析。
毛细管电泳则具有更高的分辨率和灵敏度，适用于复杂样品的分析。
高效液相色谱仪分析样品时常见的预处理方法
高效液相色谱仪分析样品时常见的预处理方法高效液相色谱仪分析样品的预处理方法有过滤、离心、加速溶剂萃取、超临界流体萃取、固相萃取、固相微萃取、液相微萃取和衍生化等。
一、过滤常用的滤膜材质有纤维素、聚四氟乙烯和聚酰胺。
其中聚酰胺应用最广，是亲水材料，适合水溶液的过滤，不被HPLC常用溶剂所腐蚀，不含添加剂。
加速溶剂萃取1、原理：加速溶剂萃取是在提高温度（50～200℃）和压力（10.3～20.6MPa）下，用溶剂萃取固体或半固体样品。
2、特点：与传统萃取方式相比，加速溶剂萃取具有溶剂用量少、快速、对不同基体可用相同的萃取条件、萃取效率高、选择性好、使用方便、安全性好和自动化程度高等特点。
二、超临界流体萃取超临界流体萃取是利用超临界流体对物质的特殊溶解性能原理而建立的萃取方法。
超临界二氧化碳作为常用的萃取剂已被广泛应用于天然药物中非极性和弱极性有效成分的提取。
三、固相萃取1、原理：固相萃取是通过采用选择性吸附和选择性洗脱对样品进行富集、分离和净化，可以将其近似地看作一种简单的液固色谱过程。
2、固相萃取方法：（1）使液体样品溶液通过吸附剂，保留其中被测物质，然后选用适当强度溶剂冲去杂质，再用少量溶剂迅速洗脱被测物质，从而达到快速分离净化和浓缩的目的。
（2）可选择性吸附干扰杂质，让被测物质流出。
（3）可同时吸附杂质和被测物质，再使用合适的溶剂选择性洗脱被测物质。
四、固相微萃取1、原理：固相微萃取是基于涂敷在纤维上的高分子涂层或吸附剂和样品之间的吸附－解吸平衡原理，集采样、萃取、浓缩和进样于一体的无溶剂的样品微萃取方法。
2、常用固相微萃取方法：（1）直接固相微萃取：适用于气体基质和干净的水基质。
（2）顶空固相微萃取：适用于任何基质，尤其是直接固相微萃取无法处理的脏水、油脂、血液、污泥和土壤等。
（3）膜固相微萃取：通过选择性高分子渗透膜将样品与萃取头分离，进行间接萃取。
渗透膜的作用是使萃取头不被基质污染，提高萃取的选择性。
HPLC色谱样品预处理
毛细管固相微萃取 毛细管固相微萃取是将气体或液体样品通过 内壁键合了萃取剂的石英毛细管，使欲分离组分 从萃取剂中解析下来，进行分析。 毛细管固相微萃取可获得比使用固相微萃取 时萃取体积大十倍以上的萃取体积，使萃取的富 集倍数大大提高，另外可以加速萃取平衡，可比 SPME萃取头的使用寿命更长10倍以上。
SPE-HPLC在线联用
五 发展方向
样品的微量化 在线联用 经济快速
自动化
减少有机溶剂的使用
环境友好
谢谢！！！
液相微萃取 1996年首次提出液相微萃取第一个模型即Drop in Drop模型。该技术是在液-液萃取(LLE)的基础上发 展起来的，主要是基于相平衡的原理，该技术集采 样、萃取和浓缩于一体，所需有机溶剂只需要几或 几十微升，是一项环境友好的新型样品前处理技术， 其特别适合于环境样品中痕量、超痕量污染物的测 定。 如今发展出了单滴溶剂微萃、取直接液相微萃 取(DI．LPME)、顶空液相微萃取(HS．LPME)、中空 纤维液相微萃取(HF．LPME)和分散液相微萃取 (DLLME)。
HPLC色谱样品预处理
一、概述
HPLC已成为当今分析化学领域应用最广泛 的一种分析测试手段，应用范围涉及医药、环 保、生命科学、石油化工等几乎所有基础和研 究领域。由于HPLC常常用于各种复杂的基体以 及低含量组分的分析，因此，对样品进行前处 理变得非常重要。
二、样品处理的目的
将待测物质有效地从样品基质中释放出来 出去杂质，纯化样品，使得色谱柱的分辨率和 使用寿命得到保护 富集浓缩样品或进行衍生化
用于液相色谱分析的样品溶液必须均匀而无 颗粒，有颗粒会损坏进样器并堵塞柱头。 HPLC常用的滤膜孔径为滤膜的成分为纤维素、 聚四氟乙烯或聚酰胺，聚酰胺应用最广，它是 亲水材料，适合于水溶液的滤过，也不被HPLC 常用溶剂所腐蚀，不含添加剂，不会将杂质带 进样品中。
高效液相色谱分析技术的发展和应用
高效液相色谱分析技术的发展和应用作为化学分析的一种重要技术手段，色谱分析技术在现代化学领域发挥着不可替代的作用。
其中，高效液相色谱分析技术是一种比较新的领域，具有快速、灵敏、准确等优点，因此在分析化学领域得到了广泛的应用。
这篇文章将介绍高效液相色谱分析技术的发展历程、基本原理和应用领域等方面的内容。
一、高效液相色谱分析技术的发展高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）分析技术是指在固定相中，以流动相为介质，通过对生物样品、化学品等成分分离、检测和定量分析的过程。
它是在气相色谱分析技术迅速发展之后逐渐兴起的。
HPLC技术起源于20世纪60年代初期，当时主要是采用传统的柱层析法。
随着科学技术的不断发展，HPLC技术逐渐往高效化、自动化和信息化方向发展。
其中，随着毛细管电泳和质谱联用技术的兴起，该技术的分析速度不断加快，并且对于微量化、高灵敏度和分析精度等方面的要求也不断提高。
二、高效液相色谱分析技术的基本原理1. 色谱柱高效液相色谱分析必不可少的就是色谱柱。
色谱柱的选择决定了整个分析过程中的分离和检测效果。
2. 固定相借助色谱柱内填充的固定相，样品被分离出来的原理实质上是基于样品中成分在固定相上吸附、分配和扩散等不同作用力的平衡。
因此，固定相的选择对分析结果也有着不可忽视的影响。
3. 流动相流动相是指在样品分离过程中，以流体为载体进行的移动相。
不同的样品需要不同的流动相，并且流动相的选择也对分析精度有一定的影响。
与气相色谱不同，高效液相色谱其中一种重要特点在于它的流动相可以是液体。
4. 检测器检测器是分离出来的组分检测和定量的重要工具，不同的检测器都有着自己的优缺点。
例如，紫外检测器能够测出大部分有色、近紫外和紫外区的物质，而荧光检测器可以通过脱羧机制测定不含色团的化合物等。
三、高效液相色谱分析技术的应用领域高效液相色谱分析技术逐渐走向提高灵敏度和分辨率方向，因此在有机化学、医药化学、农药检测等众多领域都得到了广泛的应用。
液相衍生化技术及其应用-1
（包括过量的衍生试剂）不应干扰目标物的分
离与检测。 3、化学衍生试剂方便易得，通用性好。
HPLC化学衍生化分类 1
柱前衍生化 在色谱分离前，预先将样品制成适当的衍生物，然后再进入
色谱柱进行分离检测。
柱后衍生化
柱前衍生和柱后衍生两者的主 要差别在于：前者是根据衍生 物的性质不同而进行色谱分离 的，后者则是先分离样品混合 物，再进行衍生。
重氮甲烷基类 ADAM 其它类
9-蒽重氮甲烷
4-氨甲基-6，7-二甲基香豆素 (ADMC)
9-(2-羟乙基)-吖啶酮 HEA
液相衍生化技术在环境监测中的应用实例
• 水中草甘膦的检测
• 水和土壤中氨基甲酸酯类农药的测定
• 空气和废气中醛酮类的测定
水中草甘膦的检测
草甘膦( Glyphosate，PMG) ，化学名为N-膦羧基甲基甘氨 酸，是一种广谱、非选择性、内吸传导性强的除草剂。
控制标准
• 目前新西兰规定饮用水中呋喃丹的最大残留量为8μg/L。
• 美国规定饮用水中呋喃丹最大残留量为40μg/L。
• 我国《生活饮用水卫生标准》（GB5749-2006）规定呋喃 丹标准限值为7μg/L，《地表水环境质量标准》（GB38382002）规定甲萘威的标准限值为0.05mg/L。 • 欧盟饮用水水质草案98/83/CE 规定饮用水中氨基甲酸酯农
药最高允许浓度为0.1μg/L。
方法标准
EPA Method 8318: N-methylcarbamates by high performace liquid chromatography.
针对水样、土样、油样或其他固废中涕灭威、涕灭威砜、甲萘威、克百威、
简述高效液相色谱的分析流程
简述高效液相色谱的分析流程下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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高效液相色谱法
《现代分离科学》课堂讨论
1. 简介
高效液相色谱法 （HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速 液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高 效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用 高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合 溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成 分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。 该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领 域中重要的分离分析技术。HPLC在国内和国外的药物分析领域 的应用范围很广，发展速度也很快，尤其在我国，近十几年来 HPLC方法越来越受到重视。尤其在药物分析应用方面，高效液 相色谱法有着不可替代的作用，它对于药物的鉴别、分离、定 量测定都有着较高的准确度，本文对高效液相色谱法在药物分 析的各方面进行了简单的综述。
兽药饲料.2016(502):169-171.
《现代分离科学》课堂讨论
3.2 临床治疗药物的监测
HPLC法不需要对样品进行高温汽化，一般不必进行
衍生化处理；并且其固定相种类较多，流动相通过改变
其组成成分及比例，可以对绝大多数有机化合物药物进
行分离测定。因此，HPLC法是一种比较成熟的，临床药
物监测方法。
效学。同时随着药物分析技术的不断进步和发展，可对人体和
动物体内（体液、组织和血中）药物及其代谢物的浓度进行定 量分析，它对药品的评价、指导临床合理用药和药代动力学研 究均具有重要的意义和现实需要。
《现代分离科学》课堂讨论
冯素香等建立芦荟大黄素在大鼠血浆中的固相萃取-高效液相 色谱分析方法,研究大鼠体内的药代动力学过程。SD大鼠,按50和 20mg.kg-1剂量灌胃给药,不同时间点尾静脉取血,以SPE处理血浆样 品,用HPLC内标法测定血药浓度,甲醇-0.1%磷酸水(70∶30)为流动 相,柱温为30℃,检测波长254 nm,以DAS2.0软件计算药代动力学参 数。结果:血浆中芦荟大黄素在0.016～19.53μ g.mL-1(r=0.998 1) 范围内线性关系良好,提取回收率为88.7%～94.6%,最低检测限为 0.008μ g.mL-1,定量限为0.016μ g.mL-1,日内和日间精密度RSD均 <6%.建立的测定大鼠体内芦荟大黄素含量的方法具有良好的准确 度、精密度以及专属性,适用于芦荟大黄素在大鼠体内的药代动力 学研究。
柱前衍生高效液相色谱法
柱前衍生高效液相色谱法（Pre-column derivatization HPLC）是一种色谱分析方法，主要用于对样品中的化合物进行衍生化处理，以提高其在色谱柱上的分离效果和检测灵敏度。
在柱前衍生高效液相色谱法中，样品首先与衍生化试剂反应，生成易于色谱柱上分离和检测的衍生物。
衍生化反应通常涉及样品中的官能团（如羟基、羧基、氨基等）与衍生化试剂的反应。
反应后的衍生物再通过色谱柱进行分离，最后用检测器（如紫外检测器、荧光检测器等）进行检测。
柱前衍生高效液相色谱法的优点包括：
1. 提高分离效果：衍生化处理可以改变样品中化合物的性质，使其在色谱柱上分离得更完全。
2. 提高检测灵敏度：衍生化处理可以增加化合物在检测器上的响应信号，从而提高检测灵敏度。
3. 增加选择性：通过选择合适的衍生化试剂，可以使某些难以分离的化合物产生不同的衍生物，从而实现选择性检测。
4. 扩大应用范围：柱前衍生高效液相色谱法适用于许多不同类型的样品，包括生物样品、食品、环境样品等。
柱前衍生高效液相色谱法在药物分析、生物分析、环境监测等领域得到了广泛应用。
然而，这种方法也存在一定的局限性，如衍生化反应可能受到反应条件、试剂纯度等因素的影响，因此需要仔细优化实验条件以确保分析结果的准确性。
高效液相色谱法测定水中硫化物实验报告
高效液相色谱法测定水中硫化物实验报告一、实验目的本实验旨在建立一种高效液相色谱法（HPLC）用于测定水中硫化物的含量，为水质监测和环境保护提供准确可靠的分析方法。
二、实验原理硫化物在酸性条件下与对氨基二甲基苯胺盐酸盐反应生成亚甲基蓝，然后通过高效液相色谱进行分离和定量分析。
三、实验仪器与试剂（一）仪器1、高效液相色谱仪（配备紫外检测器）2、色谱柱（C18 柱，250mm×46mm，5μm）3、超声波清洗器4、离心机5、移液器6、容量瓶（100mL、50mL、25mL）7、具塞比色管（50mL）（二）试剂1、硫化钠标准储备液（1000mg/L）2、对氨基二甲基苯胺盐酸盐溶液3、硫酸铁铵溶液4、乙酸锌乙酸钠溶液5、盐酸溶液（1+1）6、甲醇（色谱纯）7、超纯水四、实验步骤（一）标准溶液的配制1、准确吸取一定量的硫化钠标准储备液，用超纯水逐级稀释，配制浓度分别为 01mg/L、05mg/L、10mg/L、20mg/L、50mg/L 的硫化物标准工作溶液。
（二）样品预处理1、量取 500mL 水样于具塞比色管中，加入 10mL 乙酸锌乙酸钠溶液，摇匀。
2、加入 10mL 盐酸溶液（1+1），摇匀，放置 10min。
3、用离心机以 3000r/min 离心 5min，取上清液备用。
（三）衍生化反应1、吸取 100mL 预处理后的水样或标准工作溶液于 25mL 容量瓶中。
2、加入 10mL 对氨基二甲基苯胺盐酸盐溶液，摇匀。
3、加入 10mL 硫酸铁铵溶液，用超纯水定容至刻度，摇匀。
4、放置 15min 进行衍生化反应。
（四）色谱条件1、流动相：甲醇水（60:40，V/V）2、流速：10mL/min3、检测波长：665nm4、柱温：30℃5、进样量：20μL（五）测定1、待色谱仪稳定后，依次进样标准工作溶液和样品溶液，记录色谱峰面积。
五、实验结果与数据分析（一）标准曲线的绘制以硫化物的浓度为横坐标，对应的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
《样品前处理技术与ICP-MS联用检测环境中的痕量金属元素》
《样品前处理技术与ICP-MS联用检测环境中的痕量金属元素》一、引言随着工业化和城市化的快速发展，环境中的痕量金属元素污染问题日益突出。
为了准确、快速地检测环境样品中的痕量金属元素，科学家们不断探索新的分析技术。
其中，样品前处理技术与ICP-MS（电感耦合等离子体质谱）联用技术因其高灵敏度、高分辨率和高通量等优点，在环境监测领域得到了广泛应用。
本文将详细介绍样品前处理技术及其与ICP-MS联用的方法，并探讨其在检测环境中的痕量金属元素中的应用。
二、样品前处理技术样品前处理是分析化学中一个至关重要的步骤，它直接影响到分析结果的准确性和可靠性。
针对环境样品中的痕量金属元素检测，样品前处理技术主要包括以下几个方面：1. 样品采集与保存：根据不同的环境类型和检测目的，选择合适的采样方法和采样设备，确保样品的完整性和代表性。
同时，要采取适当的措施防止样品在采集、运输和保存过程中受到污染。
2. 样品破碎与研磨：将采集的样品破碎成粉末状，以便进行后续的化学处理。
同时，研磨过程中要避免样品的损失和污染。
3. 酸浸提法：将破碎后的样品与酸进行混合，使金属元素从固相中解离出来。
选择合适的酸种类和浓度对提高金属元素的提取率具有重要意义。
4. 净化与富集：通过一系列的化学处理步骤，如共沉淀、离子交换、吸附等，去除干扰物质，富集目标金属元素。
这可以提高分析的灵敏度和准确性。
三、ICP-MS技术ICP-MS是一种基于电感耦合等离子体的高灵敏度质谱技术，具有高分辨率、高灵敏度和高通量等特点。
它可以将离子化后的金属元素以质谱的形式进行检测，具有很高的分析精度和可靠性。
ICP-MS技术主要包括以下几个步骤：1. 样品引入：将经过前处理的样品引入到ICP-MS系统中。
通常采用微注射器或喷雾器等设备将样品溶液引入到等离子体中。
2. 离子化：在电感耦合等离子体的作用下，样品中的金属元素被离子化成为带电的离子。
3. 质谱分析：离子化的金属元素经过质量分析器进行分离和检测，得到各元素的质谱图。