色谱分析基础PPT课件
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色谱分析法 ppt课件
热力学性质决定。 每个组份峰宽足够小：由组份在色谱柱中的传质和扩散决定，即由色谱过程
动力学性质决定。 因此，研究、解释色谱分离行为应从热力学和动力学两方面进行。
一、塔板理论
1. 分配系数(Distribution constant, K)：
2. 一定温度、压力下，组份在固定相和流动相间的分配达到平衡时的浓
色谱曲线的意义： ✓ 色谱峰数=样品中单组份的最少个数； ✓ 色谱保留值——定性依据； ✓ 色谱峰高或面积——定量依据； ✓ 色谱保留值或区域宽度——色谱柱分离效能评价指标； ✓ 色谱峰间距——固定相或流动相选择是否合适的依据。
12.2 色谱法基本原理 两组份峰间距足够远：由各组份在两相间的分配系数决定，即由色谱过程的
C C g C l [(0 1 .0 k k ) 2 1 2•D d p 2 g] [2 3•(1 k k )2•d D 2 fl]
Cg
组分分子
讨论： 减小填充颗粒直径dp；
流动相 采用分子量小的流动相，使Dg增加；
固液界面 减小液膜厚度df，Cl下降。但此时k又减小。
固定液
因此，当保持固定液含量不变时，可通过
H ABCu u
u 为流动相线速度； A，B，C为常数，其中
A—分别表示涡流扩散系数； B—分子扩散系数； C—传质阻力系数（包括液相和固相传质阻力系数）。 该式从动力学角度很好地解释了影响板高（柱效）的各种因素！任 何减少方程右边三项数值的方法，都可降低H，从而提高柱效。
1）涡流扩散项(Multipath term, A) 在填充柱中，由于受到固定相颗粒的阻碍，组份
度比，称为分配系数。
K
溶 溶
质 质
在 在
固 流
定 动
动力学性质决定。 因此，研究、解释色谱分离行为应从热力学和动力学两方面进行。
一、塔板理论
1. 分配系数(Distribution constant, K)：
2. 一定温度、压力下，组份在固定相和流动相间的分配达到平衡时的浓
色谱曲线的意义： ✓ 色谱峰数=样品中单组份的最少个数； ✓ 色谱保留值——定性依据； ✓ 色谱峰高或面积——定量依据； ✓ 色谱保留值或区域宽度——色谱柱分离效能评价指标； ✓ 色谱峰间距——固定相或流动相选择是否合适的依据。
12.2 色谱法基本原理 两组份峰间距足够远：由各组份在两相间的分配系数决定，即由色谱过程的
C C g C l [(0 1 .0 k k ) 2 1 2•D d p 2 g] [2 3•(1 k k )2•d D 2 fl]
Cg
组分分子
讨论： 减小填充颗粒直径dp；
流动相 采用分子量小的流动相，使Dg增加；
固液界面 减小液膜厚度df，Cl下降。但此时k又减小。
固定液
因此，当保持固定液含量不变时，可通过
H ABCu u
u 为流动相线速度； A，B，C为常数，其中
A—分别表示涡流扩散系数； B—分子扩散系数； C—传质阻力系数（包括液相和固相传质阻力系数）。 该式从动力学角度很好地解释了影响板高（柱效）的各种因素！任 何减少方程右边三项数值的方法，都可降低H，从而提高柱效。
1）涡流扩散项(Multipath term, A) 在填充柱中，由于受到固定相颗粒的阻碍，组份
度比，称为分配系数。
K
溶 溶
质 质
在 在
固 流
定 动
色谱分析技术 ppt课件
（1）吸附色谱 （2）分配色谱 （3）离子交换色谱 （4）分子排阻色谱（凝胶色谱法)
PPT课件
13
填充柱色谱法 GC 毛细管柱色谱法
色谱法
高效液相色谱法 柱色谱 经典液相色谱法
LC 薄层色谱法
平面色谱法 纸色谱
吸附柱色谱 分配柱色谱 离子交换色谱 凝胶色谱
CE 毛细管电泳色谱法
PPT课件
14
三、色谱过程
2、点样
（1）样品溶液的制备： 怎样选择溶剂？ 水可以用吗？
PPT课件
39
2、点样
（2）点样量： 与薄层板的关系 太多太少的影响
点样基线：距底边2.0cm 样点直径：2-4mm 点间距离：1.5-2.0cm
PPT课件
40
2、点样
（3）点样方法： 划线、样品记号点、点样
注：动作要轻， 毛细管或点样器不能混用， 斑点大小适当，可多次点样。
PPT课件
50
（二）杂质检查（杂质限量检查）
2、自身稀释对比法（杂质结构不明或无杂质对照品）
样品溶液稀释制成一定浓度的溶液 样品制成一定浓度溶液
按相同的点样量点样
展开后观察斑点颜色深浅和大小
如地西泮中有关物质的检查： 取本品的细粉适量（约相当于地西泮200mg），加丙酮5ml,振
摇，使地西泮溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；精密量取适量， 加丙酮稀释成每1ml中含地西泮0.20mg的溶液，作为对照溶液。点 样展开后，供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较， 不得更深。
PPT课件
48
四、结果计算和判断 （一）定性鉴别
判断依据：Rf值、Rs值 1、查找资料：影响Rf值的因素
吸附剂种类、活度、颗粒大小；展开剂纯度和极性； 薄层厚度；点样量；展开方式、温湿度；展开槽中的预饱 和状态等。 2、对照品比较法：常用。
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13
填充柱色谱法 GC 毛细管柱色谱法
色谱法
高效液相色谱法 柱色谱 经典液相色谱法
LC 薄层色谱法
平面色谱法 纸色谱
吸附柱色谱 分配柱色谱 离子交换色谱 凝胶色谱
CE 毛细管电泳色谱法
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14
三、色谱过程
2、点样
（1）样品溶液的制备： 怎样选择溶剂？ 水可以用吗？
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39
2、点样
（2）点样量： 与薄层板的关系 太多太少的影响
点样基线：距底边2.0cm 样点直径：2-4mm 点间距离：1.5-2.0cm
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40
2、点样
（3）点样方法： 划线、样品记号点、点样
注：动作要轻， 毛细管或点样器不能混用， 斑点大小适当，可多次点样。
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50
（二）杂质检查（杂质限量检查）
2、自身稀释对比法（杂质结构不明或无杂质对照品）
样品溶液稀释制成一定浓度的溶液 样品制成一定浓度溶液
按相同的点样量点样
展开后观察斑点颜色深浅和大小
如地西泮中有关物质的检查： 取本品的细粉适量（约相当于地西泮200mg），加丙酮5ml,振
摇，使地西泮溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液；精密量取适量， 加丙酮稀释成每1ml中含地西泮0.20mg的溶液，作为对照溶液。点 样展开后，供试品溶液如显杂质斑点，与对照溶液的主斑点比较， 不得更深。
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48
四、结果计算和判断 （一）定性鉴别
判断依据：Rf值、Rs值 1、查找资料：影响Rf值的因素
吸附剂种类、活度、颗粒大小；展开剂纯度和极性； 薄层厚度；点样量；展开方式、温湿度；展开槽中的预饱 和状态等。 2、对照品比较法：常用。
《色谱分析法》PPT课件
死时间tm：不被固定相溶解或吸附的组分的保留时 间（即组分在流动相中的所消耗的时间），或流动 相充满柱内空隙体积占据的空间所需要的时间，又 称流动相保留时间
调整保留时间tR’：组分的保留时间与死时间之差值， 即组分在固定相中滞留的时间
tR' tR tm
或t
' R
tR
t0
保留体积VR：从进样开始到组分出现浓度极大点时 所消耗的流动相的体积
16(
t
' R
)2
W
5.54( tR' )2 W1 2
H eff L / neff
讨论：neff 和H eff 扣除了死时间，更能真实的反映柱效 k ，neff n理
小结
塔板理论的贡献：从热力学角度Hale Waihona Puke 提出了评价柱效高低的n和H的计算式
塔板数 n是色谱柱的特征参数。当色谱柱长度一定时，
2. 纵向扩散项（分子扩散项）：B/u
产生原因： 峰在固定相中被流动相推动向前、展开 →两边浓度差
纵向扩散系数 B 2 Dg
— 弯曲因子（ 1） 填充柱 1 空心毛细管柱 1
Dg — 组分在载气中的扩散系数（常数）
影响因素： B u tR ，B Dg
Dg
T
一般分类 液相色谱LC
分离方法
L-L分离
固定相
吸附在固定相表面的液体
液相-固定相 固定相表面键合的有机相
液固或吸附
离子交换
尺寸排阻
气 相 色 谱 GC （流动相为气 体）
气、液 气-键相 气-固定体
超临界流体色 谱 SFC （ 流 动 相超临界流体）
固体 离子交换树脂 聚合物中间隙 吸附在固定相表面的液体 固体表面键合的有机物 固体 固体表面键合的有机物
调整保留时间tR’：组分的保留时间与死时间之差值， 即组分在固定相中滞留的时间
tR' tR tm
或t
' R
tR
t0
保留体积VR：从进样开始到组分出现浓度极大点时 所消耗的流动相的体积
16(
t
' R
)2
W
5.54( tR' )2 W1 2
H eff L / neff
讨论：neff 和H eff 扣除了死时间，更能真实的反映柱效 k ，neff n理
小结
塔板理论的贡献：从热力学角度Hale Waihona Puke 提出了评价柱效高低的n和H的计算式
塔板数 n是色谱柱的特征参数。当色谱柱长度一定时，
2. 纵向扩散项（分子扩散项）：B/u
产生原因： 峰在固定相中被流动相推动向前、展开 →两边浓度差
纵向扩散系数 B 2 Dg
— 弯曲因子（ 1） 填充柱 1 空心毛细管柱 1
Dg — 组分在载气中的扩散系数（常数）
影响因素： B u tR ，B Dg
Dg
T
一般分类 液相色谱LC
分离方法
L-L分离
固定相
吸附在固定相表面的液体
液相-固定相 固定相表面键合的有机相
液固或吸附
离子交换
尺寸排阻
气 相 色 谱 GC （流动相为气 体）
气、液 气-键相 气-固定体
超临界流体色 谱 SFC （ 流 动 相超临界流体）
固体 离子交换树脂 聚合物中间隙 吸附在固定相表面的液体 固体表面键合的有机物 固体 固体表面键合的有机物
《色谱分析基础》课件
薄层色谱法：利用薄层色谱技术， 分离和分析液体和固体混合物
色谱分析的原理
色谱分析是一种分离和鉴定混合物的方法 原理：利用不同物质在固定相和流动相中的分配系数不同，实现分离 色谱分析包括气相色谱和液相色谱两种类型 气相色谱适用于分析挥发性物质，液相色谱适用于分析非挥发性物质
色谱柱的选择和使用
色谱柱类型： 填充柱、毛细 管柱、微板柱
法
样品保存：选 择合适的保存 方法和保存条
件
样品预处理： 包括样品的粉 碎、研磨、过
筛等
样品提取：选 择合适的提取 方法和提取条
件
样品净化：去 除样品中的杂 质和干扰物质
样品浓缩：将 提取液浓缩至 适宜的浓度进
行色谱分析
进样技术
进样方式：手动进样、自动进样 进样量：根据样品浓度和检测需求确定 进样时间：根据仪器性能和样品性质确定 进样温度：根据样品性质和检测需求确定
检测：选择合适的检 测器，如紫外检测器、 荧光检测器等，检测 样品的响应信号
添加标题
数据处理：对检测信 号进行数据处理，如 峰面积、保留时间等， 得到样品的定性和定 量结果
实验结果和数据分析
实验结果：色谱图中的峰高、峰面积、保留时间等参数 数据分析：通过峰高、峰面积、保留时间等参数进行定性和定量分析 结果解释：根据分析结果，对样品进行定性和定量分析 数据处理：对实验数据进行处理，如平滑、基线校正等 结果报告：撰写实验报告，包括实验方法、结果、讨论和结论等
施
实验结束后， 及时清理实验 现场，确保实
验室整洁
仪器设备安全防范措施
确保仪器设备接地良好，避免静电 干扰
操作仪器设备时，应佩戴防护眼镜 和手套等防护用品
添加标题
添加标题
色谱分析ppt课件
➢ 利用组分在固定液（固定相）中溶解度不同而达到分离的方法称 为分配色谱法。
➢ 利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达到分 离的方法，称为离子交换色谱法。
➢ 利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离的方 法，称为凝胶色谱法或尺寸排阻色谱法。
最近，又有一种新分离技术，利用不同组分与固定相（固定化分子） 的高专属性亲和力进行分离的技术称为亲和色谱法，常用于蛋白 质的分离。
色谱过程
吸附→解吸→再吸附→再解吸
两种组分的理化性质原本存在着微小 的差异，经过反复多次地吸附→解吸→再 吸附→再解吸的过程使微小差异累积起来， 结果使吸附能力弱的组分先流出色谱柱， 吸附能力强的组分后流出色谱柱，从而使 各个组分得到了分离。
检
测
1
2
3
器
色 谱 柱 （ 固 定 相 ）
样品组分 1＋2＋3
➢ 液体为流动相的色谱称液相色谱（LC） 同理液相色谱亦可分为液固色谱（LSC）和液液色谱（LLC）。 ➢ 超临界流体为流动相的色谱为超临界流体色谱（SFC）。
随着色谱工作的发展，通过化学反应将固定液键合到载体表面，这 种化学键合固定相的色谱又称化学键合相色谱（CBPC）。
2.按分离机理分类
➢ 利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附能力强弱不同而得以分离 的方法，称为吸附色谱法。
在色谱法中，将填入玻璃管或不锈钢管内静止不动的一相（固体或 液体）称为固定相 ； 自上而下运动的一相（一般是气体或液体）称为流动相 ； 装有固定相的管子（玻璃管或不锈钢管）称为色谱柱 。
• 色谱分离中的两相是指系统具有一个有大比表面积 的固定相（stationary phase）（可以是固体或以某种 方式固定了的液体）和一个能携带待分离混合物流 过固定相的所谓流动相（mobile phase）（可以是气 体或液体）。
➢ 利用组分在离子交换剂（固定相）上的亲和力大小不同而达到分 离的方法，称为离子交换色谱法。
➢ 利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透而达到分离的方 法，称为凝胶色谱法或尺寸排阻色谱法。
最近，又有一种新分离技术，利用不同组分与固定相（固定化分子） 的高专属性亲和力进行分离的技术称为亲和色谱法，常用于蛋白 质的分离。
色谱过程
吸附→解吸→再吸附→再解吸
两种组分的理化性质原本存在着微小 的差异，经过反复多次地吸附→解吸→再 吸附→再解吸的过程使微小差异累积起来， 结果使吸附能力弱的组分先流出色谱柱， 吸附能力强的组分后流出色谱柱，从而使 各个组分得到了分离。
检
测
1
2
3
器
色 谱 柱 （ 固 定 相 ）
样品组分 1＋2＋3
➢ 液体为流动相的色谱称液相色谱（LC） 同理液相色谱亦可分为液固色谱（LSC）和液液色谱（LLC）。 ➢ 超临界流体为流动相的色谱为超临界流体色谱（SFC）。
随着色谱工作的发展，通过化学反应将固定液键合到载体表面，这 种化学键合固定相的色谱又称化学键合相色谱（CBPC）。
2.按分离机理分类
➢ 利用组分在吸附剂（固定相）上的吸附能力强弱不同而得以分离 的方法，称为吸附色谱法。
在色谱法中，将填入玻璃管或不锈钢管内静止不动的一相（固体或 液体）称为固定相 ； 自上而下运动的一相（一般是气体或液体）称为流动相 ； 装有固定相的管子（玻璃管或不锈钢管）称为色谱柱 。
• 色谱分离中的两相是指系统具有一个有大比表面积 的固定相（stationary phase）（可以是固体或以某种 方式固定了的液体）和一个能携带待分离混合物流 过固定相的所谓流动相（mobile phase）（可以是气 体或液体）。
色谱分析(气相)PPT课件
在进行实验之前，应仔细阅读实验指导手 册，了解实验步骤、注意事项和可能的风 险。
使用正确的实验器材
注意实验室通风
确保使用与实验要求相符的器材，如色谱 柱、进样针、检测器等，避免因器材不当 导致实验失败或安全事故。
在实验过程中，应确保实验室通风良好， 避免有害气体积聚。
废弃物处理及环保要求
分类收集废弃物
型。
根据分离要求选择
根据所需的分离度、分析时间 、峰形等要求选择合适的色谱 柱类型和规格。
根据仪器条件选择
根据仪器的型号、规格、操作 条件等选择合适的色谱柱类型 和规格。
根据经验和实践选择
根据实验室经验和实践，选择 常用的、性能稳定的色谱柱类
型和规格。
05
实验操作过程及注意事项
仪器启动与关闭流程
色谱分析(气相)PPT课件
目 录
• 色谱分析概述 • 气相色谱仪器组成及工作原理 • 样品前处理与进样技术 • 色谱柱类型与选择依据 • 实验操作过程及注意事项 • 结果评价与质量控制方法 • 实验安全规范与环保意识培养
01
色谱分析概述
色谱法定义与原理
定义
色谱法是一种物理分离技术，利用物质在固定相和流动相之间的分配平衡，实 现对复杂样品中各组分的分离与纯化。
鼓励使用可再生资源和可降解材料，减少对环境的负担。同时，实验 室也应积极推广循环经济和资源回收利用的理念。
THANK YOU
数据处理
对采集的数据进行定性定量分析，包括峰识 别、积分、校正等步骤。
注意事项
在数据采集和处理过程中要确保数据的准确 性和可靠性，避免误差的产生。
06
结果评价与质量控制方法
定性分析方法
保留时间定性
《色谱分析基础 》课件
缺点
分离效果相对较差，灵敏度较低。
04 色谱分析实验技术
实验设计
实验目的
明确实验的目标和意义，确保实验具有 实际应用价值。
实验步骤
详细列出实验操作步骤，包括样品处 理、色谱柱选择、进样、洗脱等，确
保实验过程规范、准确。
实验原理
阐述色谱分析的基本原理和实验操作 流程，确保实验的合理性和科学性。
实验安全
数据处理与分析
数据采集
记录实验过程中的各项数据，包 括色谱图、峰高、峰面积等，确 保数据的完整性和准确性。
数据处理
采用适当的数学方法对原始数据 进行处理，如平滑、基线校正、 归一化等，以提高数据的可靠性 和可比性。
结果分析
根据处理后的数据，进行结果分 析和解释，得出实验结论，为实 际应用提供科学依据。
优点
分离效果好、分析速度快、灵 敏度高。
缺点
对于高分子量和热稳定性差的 化合物不太适用。
液相色谱法
原理
利用液体作为流动相，将样品中的各 组分在固定相和流动相之间进行分离 ，再通过检测器进行检测。
应用范围
主要用于分析高分子量、热稳定性差 、不易挥发的有机化合物，如蛋白质 、核酸等生物大分子。
优点
分离效果好、分析速度快、灵敏度高 ，适用于复杂样品的分析。
色谱分析具有高效、高分辨率和高灵敏度等特点，广泛应用于化学、生物、医学 和环境等领域。
色谱分析的原理
分离原理
色谱分析基于不同组分在两相之间的吸附或溶解性能差异进行分离。在流动相 的带动下，各组分在固定相和流动相之间反复分配，最终达到分离。
检测原理
通过检测器对分离后的组分进行检测，将组分的浓度或质量转化为电信号，以 便进行定量和定性分析。常见的检测器有紫外-可见吸收光谱、荧光光谱、质谱 等。
分离效果相对较差，灵敏度较低。
04 色谱分析实验技术
实验设计
实验目的
明确实验的目标和意义，确保实验具有 实际应用价值。
实验步骤
详细列出实验操作步骤，包括样品处 理、色谱柱选择、进样、洗脱等，确
保实验过程规范、准确。
实验原理
阐述色谱分析的基本原理和实验操作 流程，确保实验的合理性和科学性。
实验安全
数据处理与分析
数据采集
记录实验过程中的各项数据，包 括色谱图、峰高、峰面积等，确 保数据的完整性和准确性。
数据处理
采用适当的数学方法对原始数据 进行处理，如平滑、基线校正、 归一化等，以提高数据的可靠性 和可比性。
结果分析
根据处理后的数据，进行结果分 析和解释，得出实验结论，为实 际应用提供科学依据。
优点
分离效果好、分析速度快、灵 敏度高。
缺点
对于高分子量和热稳定性差的 化合物不太适用。
液相色谱法
原理
利用液体作为流动相，将样品中的各 组分在固定相和流动相之间进行分离 ，再通过检测器进行检测。
应用范围
主要用于分析高分子量、热稳定性差 、不易挥发的有机化合物，如蛋白质 、核酸等生物大分子。
优点
分离效果好、分析速度快、灵敏度高 ，适用于复杂样品的分析。
色谱分析具有高效、高分辨率和高灵敏度等特点，广泛应用于化学、生物、医学 和环境等领域。
色谱分析的原理
分离原理
色谱分析基于不同组分在两相之间的吸附或溶解性能差异进行分离。在流动相 的带动下，各组分在固定相和流动相之间反复分配，最终达到分离。
检测原理
通过检测器对分离后的组分进行检测，将组分的浓度或质量转化为电信号，以 便进行定量和定性分析。常见的检测器有紫外-可见吸收光谱、荧光光谱、质谱 等。
《分析化学》课件——10 色谱分析法
选择：
“相似相溶”原则选择适当固定液。
常用固定液
相对极性：
麦氏常数： 5个值代表 各种作用力。
固定液 名称
1、 角鲨烷 （异三十烷）
2、阿皮松 L
商品牌号 SQ
使用温度 （最高）
℃
150
溶剂 乙醚
APL
300
苯
3、硅油
OV-101 350
丙酮
4、 苯基 10%
OV-3
350
甲基聚硅氧烷
5、 苯基（20%）
载气流速的选择
作图求最佳流速。 实际流速稍大于最佳流速，缩短时间。
三、气相色谱检测器
浓度型检测器：热导池检测器
电子俘获检测器
测量的是载气中通过检测器组分浓度瞬间 变化，检测信号值与组分的浓度成正比。
质量型检测器：氢火焰离子化检测器
火焰光度检测器
测量的是载气中某组分进入检测器的速度 变化，即检测信号值与单位时间内进入检 测器组分的质量成正比。
检测器性能评价指标
在一定范围内，信号E与进入检测器的 物质质量m成正比：
保留时间 tR（retention time）
时间 死时间 t0 (dead time)
tR'= tR － t0
调整保留时间 tR'（adjusted retention time）
保留体积VR（retention volume） 体积 死体积 V0 (dead volume) VR'= VR － V0
Sample
D A
C
B
Sample
HEWLETT PACKARD
5890
Gas Chromatograph (GC)
B A CD
“相似相溶”原则选择适当固定液。
常用固定液
相对极性：
麦氏常数： 5个值代表 各种作用力。
固定液 名称
1、 角鲨烷 （异三十烷）
2、阿皮松 L
商品牌号 SQ
使用温度 （最高）
℃
150
溶剂 乙醚
APL
300
苯
3、硅油
OV-101 350
丙酮
4、 苯基 10%
OV-3
350
甲基聚硅氧烷
5、 苯基（20%）
载气流速的选择
作图求最佳流速。 实际流速稍大于最佳流速，缩短时间。
三、气相色谱检测器
浓度型检测器：热导池检测器
电子俘获检测器
测量的是载气中通过检测器组分浓度瞬间 变化，检测信号值与组分的浓度成正比。
质量型检测器：氢火焰离子化检测器
火焰光度检测器
测量的是载气中某组分进入检测器的速度 变化，即检测信号值与单位时间内进入检 测器组分的质量成正比。
检测器性能评价指标
在一定范围内，信号E与进入检测器的 物质质量m成正比：
保留时间 tR（retention time）
时间 死时间 t0 (dead time)
tR'= tR － t0
调整保留时间 tR'（adjusted retention time）
保留体积VR（retention volume） 体积 死体积 V0 (dead volume) VR'= VR － V0
Sample
D A
C
B
Sample
HEWLETT PACKARD
5890
Gas Chromatograph (GC)
B A CD
色谱分析课件
用GF254板 -------显色剂显色,破坏性检出方法
通用显色剂
定性分析
1. 与标准对照品在三种不同的展开剂中展开 (加熔点)；
2. 制备TLC，将待定性化合物分离后，刮下、 洗脱，再波谱分析；
3. TLC与其它技术联用
定量分析
1. 间接定量（洗脱测定法）； 2. 直接定量（薄层扫描法）
薄层扫描法：以一定波长的光照射展开后 的薄层色谱板上被分离组分的斑点，测定 斑点对光的吸收强度或所发出的荧光强度， 进行定量分析的方法。 薄层吸收扫描法 薄层荧光扫描法
色谱法的特点
（1）分离效率高 复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。
（2） 灵敏度高 可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量。
（3） 分析速度快 一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。
（4） 应用范围广 气相色谱：沸点低于400℃的各种有机或无机试样的分析。 液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。
GC的特点
1. 分离效率高（填充柱上千块塔板；开管柱 106块塔板）
2. 分析速度快 3. 样品用量少（检测限低，高灵敏检测器） 4. 缺点：（约20%样品适用） A. 样品须能气化（350度下有一定的挥发性） B. 热稳定性要好 C. 定性困难
第二节 气相色谱术语、理论
1. 气相色谱流出曲线 2. 分配系数与容量因子 3. 塔板理论 4. 速率理论 5. 分离度 6. 基本分离方程
• 添加剂
荧光指示剂
硝酸银溶液
制板、活化
点样
1.溶剂对样品的溶解度适中； 2.溶剂沸点适中； 3.样品浓度适中； 4.原点位置应在展开剂液面上； 5.定性分析:内径0.5mm管口平整的毛细管
通用显色剂
定性分析
1. 与标准对照品在三种不同的展开剂中展开 (加熔点)；
2. 制备TLC，将待定性化合物分离后，刮下、 洗脱，再波谱分析；
3. TLC与其它技术联用
定量分析
1. 间接定量（洗脱测定法）； 2. 直接定量（薄层扫描法）
薄层扫描法：以一定波长的光照射展开后 的薄层色谱板上被分离组分的斑点，测定 斑点对光的吸收强度或所发出的荧光强度， 进行定量分析的方法。 薄层吸收扫描法 薄层荧光扫描法
色谱法的特点
（1）分离效率高 复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。
（2） 灵敏度高 可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量。
（3） 分析速度快 一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。
（4） 应用范围广 气相色谱：沸点低于400℃的各种有机或无机试样的分析。 液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。
GC的特点
1. 分离效率高（填充柱上千块塔板；开管柱 106块塔板）
2. 分析速度快 3. 样品用量少（检测限低，高灵敏检测器） 4. 缺点：（约20%样品适用） A. 样品须能气化（350度下有一定的挥发性） B. 热稳定性要好 C. 定性困难
第二节 气相色谱术语、理论
1. 气相色谱流出曲线 2. 分配系数与容量因子 3. 塔板理论 4. 速率理论 5. 分离度 6. 基本分离方程
• 添加剂
荧光指示剂
硝酸银溶液
制板、活化
点样
1.溶剂对样品的溶解度适中； 2.溶剂沸点适中； 3.样品浓度适中； 4.原点位置应在展开剂液面上； 5.定性分析:内径0.5mm管口平整的毛细管
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2020/3/25
3.分配比 (partion radio)k
在实际工作中，也常用分配比来表征色谱分配 平衡过程。分配比是指，在一定温度下，组分在两 相间分配达到平衡时的质量比：
k
分配比也称：
组分在固定相中的质量 组分在流动相中的质量
ms mM
容量因子(capacity factor)；容量比(capacity factor)；
V R＇ = VR －VM
2020/3/25
3. 相对保留值r21
组分2与组分1调整保留值之比：
r21 = t´R2 / t´R1= V´R2 / V´R1
相对保留值只与柱温 和固定相性质有关，与其 他色谱操作条件无关，它 表示了固定相对这两种组 分的选择性。
2020谱峰宽度的参 数，有三种表示方法：
1. 分配系数与分配比都是与组分及固定相的热力学性质
有关的常数，随分离柱温度、柱压的改变而变化。
2.分配系数与分配比都是衡量色谱柱对组分保留能力的
(1)标准偏差()：即0.607倍峰高
处色谱峰宽度的一半。 (2)半峰宽(Y1/2)：色谱峰高一半
处的宽度 Y1/2 =2.354 (3)峰底宽(Y)：Y=4
2020/3/25
四、色谱分离过程
色谱分离过程是在色谱柱内完成的。 填充柱色谱:气固(液固)色谱和气液(液液)色谱，两者的分 离机理不同。 气固(液固)色谱的固定相:多孔性的固体吸附剂颗粒。 固体吸附剂对试样中各组分的吸附能力的不同。 气液(液液)色谱的固定相: 由担体和固定液所组成。 固定液对试样中各组分的溶解能力的不同。 气固色谱的分离机理: 吸附与脱附的不断重复过程； 气液色谱的分离机理： 气液(液液)两相间的反复多次分配过程。
液相色谱
(2)液相色谱：流动相为液体(也称为淋洗液)。 按固定相的不同分为：液固色谱和液液色谱。 离子色谱：液相色谱的一种，以特制的离子交换树脂
为固定相，不同pH值的水溶液为流动相。
2020/3/25
(3)其他色谱方法
薄层色谱和纸色谱： 比较简单的色谱方法
凝胶色谱法：测聚合物分子 量分布。
高效毛细管电泳: 九十年代快速发展、特
(4) 应用范围广 气相色谱：沸点低于400℃的各种有机或无机试样的分析。 液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。
不足之处： 被分离组分的定性较为困难。
2020/3/25
二、气相色谱结构流程
1-载气钢瓶；2-减压阀；
3-净化干燥管；4-针形 阀；5-流量计;6-压力 表；4-针形阀；5-流量 计;6-压力表；
分配系数是色谱分离的依据。
2020/3/25
分配系数 K 的讨论
组分在固定相中的浓度 K 组分在流动相中的浓度
一定温度下，组分的分配系数K越大，出峰越慢； 试样一定时，K主要取决于固定相性质； 每个组份在各种固定相上的分配系数K不同； 选择适宜的固定相可改善分离效果； 试样中的各组分具有不同的K值是分离的基础； 某组分的K = 0时，即不被固定相保留，最先流出。
别适合生物试样分析分离的 高效分析仪器。
2020/3/25
3.色谱法的特点
(1)分离效率高 复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。
(2) 灵敏度高 可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量。
(3) 分析速度快 一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。
大值时所需的时间；
死时间(tM)：不与固定相作用的气体(如空气)的保留时间
；
调整保留时间(tR ＇)：tR＇= tR－tM
[动画]
2020/3/25
(2)用体积表示的保留值
保留体积(VR)： VR = tR×F0
F0为柱出口处的载气流量， 单位：m L / min。
死体积(VM)：
VM = tM ×F0 调整保留体积(VR＇)：
[动画]
2020/3/25
色谱法
当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发 生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异， 与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相 的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各 组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中 流出。
9-热导检测器；10-放 大器；11-温度控制器； 12-记录仪；
载气系统
进样系统
色谱柱
检测系统
2020/3/25
温控系统
结构流程
2020/3/25
三、色谱流出曲线与术语
1.基线
无试样通过检测器时，
检测到的信号即为基线。
2.保留值
(1)时间表示的保留值 保留时间(tR)：组分
从进样到柱后出现浓度极
色谱分析基础
2020/3/25
一、 色谱法的特点、分类和作用
1.概述
混合物最有效的分离、分析方法。 俄国植物学家茨维特在1906年使用的装置→ 色谱分离原型装置，如右图。 色谱法是一种分离技术， 试样混合物的分离过程也就是试样中各组分 在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分 配过程。 其中的一相固定不动，称为固定相； 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流 体(气体或液体)，称为流动相。
2020/3/25
1. 气相色谱分离过程
当试样由载气携带进入色谱
柱与固定相接触时，被固定相
溶解或吸附;
随着载气的不断通入，被溶
解或吸附的组分又从固定相中
挥发或脱附;
挥发或脱附下的组分随着载
气向前移动时又再次被固定相
溶解或吸附;
随着载气的流动，溶解、挥
发，或吸附、脱附的过程反复
地进行。
[动画]
与适当的柱后检测方
法结合，实现混合物中各
组分的分离与检测。 两相及两相的相对运 动构成了色谱法的基础
[动画1]
[动画2]
2020/3/25
2.色谱法分类
(1)气相色谱：流动相为气体(称为载气)。 按分离柱不同可分为：填充柱色谱和毛细管柱色谱； 按固定相的不同又分为：气固色谱和气液色谱
2020/3/25
2020/3/25
2. 分配系数( partion factor) K
组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、 挥发的过程叫做分配过程。在一定温度下，组分在两相间 分配达到平衡时的浓度(单位：g / mL)比，称为分配系数， 用K 表示，即：
K
组分在固定相中的浓度 组分在流动相中的浓度
cs cM
3.分配比 (partion radio)k
在实际工作中，也常用分配比来表征色谱分配 平衡过程。分配比是指，在一定温度下，组分在两 相间分配达到平衡时的质量比：
k
分配比也称：
组分在固定相中的质量 组分在流动相中的质量
ms mM
容量因子(capacity factor)；容量比(capacity factor)；
V R＇ = VR －VM
2020/3/25
3. 相对保留值r21
组分2与组分1调整保留值之比：
r21 = t´R2 / t´R1= V´R2 / V´R1
相对保留值只与柱温 和固定相性质有关，与其 他色谱操作条件无关，它 表示了固定相对这两种组 分的选择性。
2020谱峰宽度的参 数，有三种表示方法：
1. 分配系数与分配比都是与组分及固定相的热力学性质
有关的常数，随分离柱温度、柱压的改变而变化。
2.分配系数与分配比都是衡量色谱柱对组分保留能力的
(1)标准偏差()：即0.607倍峰高
处色谱峰宽度的一半。 (2)半峰宽(Y1/2)：色谱峰高一半
处的宽度 Y1/2 =2.354 (3)峰底宽(Y)：Y=4
2020/3/25
四、色谱分离过程
色谱分离过程是在色谱柱内完成的。 填充柱色谱:气固(液固)色谱和气液(液液)色谱，两者的分 离机理不同。 气固(液固)色谱的固定相:多孔性的固体吸附剂颗粒。 固体吸附剂对试样中各组分的吸附能力的不同。 气液(液液)色谱的固定相: 由担体和固定液所组成。 固定液对试样中各组分的溶解能力的不同。 气固色谱的分离机理: 吸附与脱附的不断重复过程； 气液色谱的分离机理： 气液(液液)两相间的反复多次分配过程。
液相色谱
(2)液相色谱：流动相为液体(也称为淋洗液)。 按固定相的不同分为：液固色谱和液液色谱。 离子色谱：液相色谱的一种，以特制的离子交换树脂
为固定相，不同pH值的水溶液为流动相。
2020/3/25
(3)其他色谱方法
薄层色谱和纸色谱： 比较简单的色谱方法
凝胶色谱法：测聚合物分子 量分布。
高效毛细管电泳: 九十年代快速发展、特
(4) 应用范围广 气相色谱：沸点低于400℃的各种有机或无机试样的分析。 液相色谱：高沸点、热不稳定、生物试样的分离分析。
不足之处： 被分离组分的定性较为困难。
2020/3/25
二、气相色谱结构流程
1-载气钢瓶；2-减压阀；
3-净化干燥管；4-针形 阀；5-流量计;6-压力 表；4-针形阀；5-流量 计;6-压力表；
分配系数是色谱分离的依据。
2020/3/25
分配系数 K 的讨论
组分在固定相中的浓度 K 组分在流动相中的浓度
一定温度下，组分的分配系数K越大，出峰越慢； 试样一定时，K主要取决于固定相性质； 每个组份在各种固定相上的分配系数K不同； 选择适宜的固定相可改善分离效果； 试样中的各组分具有不同的K值是分离的基础； 某组分的K = 0时，即不被固定相保留，最先流出。
别适合生物试样分析分离的 高效分析仪器。
2020/3/25
3.色谱法的特点
(1)分离效率高 复杂混合物，有机同系物、异构体。手性异构体。
(2) 灵敏度高 可以检测出μg.g-1(10-6)级甚至ng.g-1(10-9)级的物质量。
(3) 分析速度快 一般在几分钟或几十分钟内可以完成一个试样的分析。
大值时所需的时间；
死时间(tM)：不与固定相作用的气体(如空气)的保留时间
；
调整保留时间(tR ＇)：tR＇= tR－tM
[动画]
2020/3/25
(2)用体积表示的保留值
保留体积(VR)： VR = tR×F0
F0为柱出口处的载气流量， 单位：m L / min。
死体积(VM)：
VM = tM ×F0 调整保留体积(VR＇)：
[动画]
2020/3/25
色谱法
当流动相中携带的混合物流经固定相时，其与固定相发 生相互作用。由于混合物中各组分在性质和结构上的差异， 与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相 的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各 组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中 流出。
9-热导检测器；10-放 大器；11-温度控制器； 12-记录仪；
载气系统
进样系统
色谱柱
检测系统
2020/3/25
温控系统
结构流程
2020/3/25
三、色谱流出曲线与术语
1.基线
无试样通过检测器时，
检测到的信号即为基线。
2.保留值
(1)时间表示的保留值 保留时间(tR)：组分
从进样到柱后出现浓度极
色谱分析基础
2020/3/25
一、 色谱法的特点、分类和作用
1.概述
混合物最有效的分离、分析方法。 俄国植物学家茨维特在1906年使用的装置→ 色谱分离原型装置，如右图。 色谱法是一种分离技术， 试样混合物的分离过程也就是试样中各组分 在称之为色谱分离柱中的两相间不断进行着的分 配过程。 其中的一相固定不动，称为固定相； 另一相是携带试样混合物流过此固定相的流 体(气体或液体)，称为流动相。
2020/3/25
1. 气相色谱分离过程
当试样由载气携带进入色谱
柱与固定相接触时，被固定相
溶解或吸附;
随着载气的不断通入，被溶
解或吸附的组分又从固定相中
挥发或脱附;
挥发或脱附下的组分随着载
气向前移动时又再次被固定相
溶解或吸附;
随着载气的流动，溶解、挥
发，或吸附、脱附的过程反复
地进行。
[动画]
与适当的柱后检测方
法结合，实现混合物中各
组分的分离与检测。 两相及两相的相对运 动构成了色谱法的基础
[动画1]
[动画2]
2020/3/25
2.色谱法分类
(1)气相色谱：流动相为气体(称为载气)。 按分离柱不同可分为：填充柱色谱和毛细管柱色谱； 按固定相的不同又分为：气固色谱和气液色谱
2020/3/25
2020/3/25
2. 分配系数( partion factor) K
组分在固定相和流动相间发生的吸附、脱附，或溶解、 挥发的过程叫做分配过程。在一定温度下，组分在两相间 分配达到平衡时的浓度(单位：g / mL)比，称为分配系数， 用K 表示，即：
K
组分在固定相中的浓度 组分在流动相中的浓度
cs cM