《微量铁的测定》PPT课件

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吸收光谱(吸收曲线)
6
标准曲线
A = KLC
A = K’C
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可见分光光度法: 是对于能吸收可见光的有色溶液的测定 方法，对于许多不吸收可见光的无色
物 质可以用显色反应使之变成有色物质。
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1 显色反应及其条 件因素：试剂与溶剂、酸碱度、时间、温度及其 它 操作时，必须在平行原则的条件下进行 2 测定方法：标准曲线
微量铁的测定
可见分光光度 法
1
OBJECTIVE
1 掌握分光光度法的基本原理 2 学会光度法测定物质的含量 3 学习可见分光光度计的使用方法
2
PRINCIPLE
有色物质对光的吸收具有选择性， 溶液的不同颜色是由于溶液中有色 物质选择地吸收各种颜色的光引起 的。有色溶液的颜色实质上是它所 选择吸收的光的互补色.
波长425nm下，以空白溶液为参比溶液，分别由稀至浓 测定一系列标准溶液的吸光度．以Fe3+含量为横坐标， 吸光度为纵坐标绘制标准曲线．
编号 4 56 Fe3+含量(mg/ml) 吸光度(A) 波长
空白 1 2
3
425nm
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可见分光光度计操作：
1 接通电源，预热30min 2 打开样品室盖，按 △ / 0% 键, 使 T 显示 000.0
法(空白溶液作对照)：消除溶剂或其它物质对入射光吸收等 因素
溶剂空白：显色剂及制备试液的其它试剂均无色；可用 溶剂作空白
溶液
试剂空白：显色剂有色；按显色反应相同条件下加入各 种试剂和溶
剂(不加试样溶液) 试样空白：试样基体有色，显色剂无色；不加显色剂但 9 按显色反应
相同条件进行操作
实验条件：
显色剂：磺基水杨酸
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PROCEDURE
1 系列标准溶液和待测溶液的配制
编号
空白
知
标准溶液(ml)
0.00
(待测液)
10%磺基水杨酸(ml)
HOAc-NaOAc缓冲液(ml)
蒸馏水
1 0.50
2
3
4
1.00 1.50 2.00
5.00 10 稀释至50.00ml
5 2.50
6 3.00
未 1.00
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2 标准曲线的制作
3 试样注入比色皿，插入试样槽 调节波长至 425nm 盖上样品室盖，将空白试样移入光路 按 A / T / C / F 键，切换至 A 明亮 按 △ / 100% 键，使A值显示为 0.000 (即置空白试样为0.00
0) 推或拉SAMPLE 依次测试标准系列溶液 A值
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3 未知铁盐溶液中Fe3+含量的测定
相同条件下，测定未知溶液的吸光度，然后从标准曲线上 查出Fe3+的含量.
A
A样品
0
C样品
C
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DATA
Fra Baidu bibliotek
表1 微量铁含量测定结果
编号
空白
Fe3+标准溶液(ml) 0.00
测液)
10%磺基水杨酸(ml)
HOAc-NaOAc缓冲液(ml)
蒸馏水
波
长
Fe3+ 含量(mg/ml)
吸光度(A)
1 0.50
2
3
4
1.00 1.50 2.00
5.00 10 稀释至50.00ml 425nm
5 2.50
6
未知
3.00 1.00(待
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QUESTION & DISCUSSION
1 本实验中的空白溶液能不能用蒸馏水代替？为什么？ 2 为什么加入试剂的量、顺序和时间要一致？
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rptivity) L: 液层厚度 度 T: 透光率(transmitance)
K: 吸光系数 (abso C: 溶液组成量
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Beer-Lamber ：物质对单色光吸收的强弱与吸光物质浓度和厚度关系的定律
Beer：
吸光与浓度的关系
Lamber：
吸光与厚度间的关系
I 透光率(transmitance, T) I0 A=-lgT 吸光度 (absorbance) E 吸光系数 (absorptivity)
当一束白光通过铁黄色络离子溶液时， 兰色光大部分被吸收，其它色光透过.
3
Beer-Lamber:当一束单色光通过有色溶液时部分吸 收，部分透过，有色物质对光的吸收度(吸光度A)与 有色物质的组成量度(C)和液层厚度(L)的乘积成正比.
L
A = KLC =- lgT = - lgII0
I0
C
I
A: 吸光度 (absorbance)
H
Fe3+ + 3 HO HOOC
O
SO3H
Fe
OOC
SO3-
pH 1.8~2.5 淡紫色
3 3- +6H+
沉淀
4.0~8.0 Fe(C橙7H红4O色6S)+
8.0~11.5 Fe(C黄7H色4O6S)2-
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Fe(C7H4O6S)33-
Fe(OH)3
吸收波长：380~480nm范围内，选择最大吸收波长λmax(42 5nm)