流式检测细胞周期protocol

PI染色检测细胞周期

1、HepG2细胞培养至70%左右，细胞铺板（60mm小皿），8万/皿，饥饿48小时，加药处理96h（加药组10万/皿）

2、收集培养基，2ml胰酶消化细胞，新培养基3ml重悬，收集细胞悬液，1000rpm，5min离心

3、弃去上清，加入1ml预冷的PBS充分重悬细胞，转移到1.5ml的EP管

4、混匀，4°，600g，5min离心

5、弃去上清，用250ul预冷的PBS重悬细胞，充分重悬，加入至750ul冰浴的无水乙醇，轻轻吹打混匀；

6、用封口膜封口，—20°，4h，最好过夜，可在—20°保存1w左右；

7、染色：

㈠、除去封口膜，加入500ulPBS重悬细胞，4°，600g，5min离心；

㈡、弃去上清，加入1ml预冷的PBS洗涤一次；

㈢、同上离心，弃去上清；

㈣、每管加入200ul PBS +2ul RnaseA（100µg/ml）溶液缓慢充分混匀后，室温，避光孵育30min, 再加2.5ul PI(250µg/ml)，室温避光15min；

㈤、24h内流式检测。

试剂：RnaseA，beyotime,10mg/ml,ST576

PI, beyotime,20 mg/ml,ST512