制药用水微生物限度检查

1．饮用水

⑴取样于500ml玻璃瓶中加入2毫升1.5%硫代硫酸钠溶液，加盖后高压蒸汽灭菌。（121℃，30分钟）。取样前，先用酒精灯将水龙头烧灼消毒，然后把水龙头完全打开，放水1～3分钟后取样。

⑵细菌数检查（不得过100个/ml）

①以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15ml 已融化并冷却至45℃左右的营养琼脂培养基，每个水样应倾注二个平皿，待培养基冷却后将平皿置于37℃恒温箱内培养24小时。

②菌落计数按微生物限度检查法菌落计数项进行计数。

③菌落计数的报告：菌落数在100以内时按实有数报告，大于100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。

⑶大肠菌群（不得检出）

①取10ml水样接种到10ml双料乳糖蛋白胨培养液中，取1ml水样接种到10ml单料乳糖蛋白胨培养液中，另取1ml水样注入到9ml灭菌生理盐水中，混匀后吸取1ml（即0.1ml 水样）注入到10ml单料乳糖蛋白胨培养液，每一稀释度接种5管。

对已处理过的出厂自来水，可直接种5份10ml水样双料培养基，每份接种10ml水样。

②分离培养将产酸产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上，于36℃±1℃培养箱内培养18h～24h，观察菌落形态，挑取符合下列特征的菌落作革兰氏染色，镜检和证实实验。

深紫黑色，具有金属光泽的菌落；

紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落；

淡紫红色，中心较深的菌落。

③证实实验

经上述染色镜检为革兰氏阴性无芽孢杆菌，同时接种乳糖蛋白胨培养液，置36℃±1℃培养箱中培养18h～24h，有产酸产气者，即证实有总大肠菌群存在。

④结果报告

根据证实为总大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100ml水样中的总大肠菌群最可能数（MPN）值。5管法结果见表

表2 用5份10ml水样时各种阳性和阴性结果组合时的最可能数（MPN）

2.纯化水

⑴测定：取供试品10ml，加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml，取10ml，照薄膜过滤法，过滤，取出滤膜，菌面朝上，分别贴于营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基平板上培养，每种培养基至少制备一张滤膜。滤膜贴于平板上时不得有空隙或气泡，否则影响微生物的生长。

⑵结果判定细菌、霉菌和酵母菌总数每1ml不得过100个。

3.注射用水

⑴测定：取供试品200ml，照薄膜过滤法，过滤，取出滤膜，菌面朝上，分别贴于营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基平板上培养，每种培养基至少制备一张滤膜。滤膜贴于平板上时不得有空隙或气泡，否则影响微生物的生长。

⑵结果判定细菌、霉菌和酵母菌总数每100ml不得过10个。