食品中苯甲酸的测定

食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定

高效液相色谱法

2.1原理

不同样品经提取后，将提取液过滤，经反相高效液相色谱分离测定，根据保留时间定性，外标峰面积定量。

2.2试剂和材料

除另有说明外，所用试剂均为分析纯，实验用水符合GB/T 6682要求。

2.2.1 甲醇：色谱纯。

2.2.2 乙酸铵溶液：称取1.54g乙酸铵，加水溶解并稀释至1000mL，经微孔滤膜过滤。

2.2.3 亚铁氰化钾溶液：称取106g亚铁氰化钾[K

4Fe(CN)

6

·3H

2

O]加水至1000mL。

2.2.4 乙酸锌溶液：称取220g乙酸锌[Zn(CH

3COO)

2

·2H

2

O]溶于少量水中，加入

30mL冰醋酸，加水稀释至1000mL。

2.2.5 氨水（1+1）：氨水与水等体积混合。

2.2.6 正己烷。

2.2.7 pH4.4乙酸盐缓冲溶液：

a）乙酸钠溶液：称取6.80g乙酸钠（CH

3COONa·3H

2

O）,用水溶解后定容至1000mL。

b）乙酸溶液：称取4.3mL冰乙酸，用水稀释至1000mL。

将上述两种溶液按体积比37:63混合，即得pH4.4乙酸盐缓冲溶液。

2.2.8 pH7.2磷酸盐缓冲溶液：

a）称取23.88g磷酸氢二钠（Na

2HPO

4

·12H

2

O）,用水溶解后定容至1000mL。

b）称取9.07g磷酸二氢钾（KH

2PO

4

），用水溶解后定容至1000mL。

将上述两种磷酸盐溶液按体积比7:3混合，即得pH7.2磷酸盐缓冲液。

2.2.9 标准溶液的配制：

a）苯甲酸标准储备液：准确称取0.2360g苯甲酸钠，加水溶解并定容至200mL。此溶液每毫升相当于含苯甲酸1.00mg。

b）山梨酸标准储备液：准确称取0.2680g山梨酸钾，加水溶解并定容至200mL。此溶液每毫升相当于含山梨酸1.00mg。

c）糖精钠标准储备液：准确称取0.1702g糖精钠（C

6H

4

CONNaSO

2

）(120℃烘

干4h)，加水溶解并定容至200mL。此溶液中糖精钠的含量为1.00g/mL。

d）混合标准使用液：分别准确吸取不同体积苯甲酸、山梨酸和糖精钠标准储备溶液，将其稀释成苯甲酸、山梨酸和糖精钠含量分别为0.000mg/mL、0.020mg/mL、0.040mg/mL、0.080mg/mL、0.160mg/mL、0.320mg/mL的混合标准使用液。

2.2.10 微孔滤膜：0.45μm，水相。

2.3仪器与设备

2.3.1 高效液相色谱仪：配有紫外检测器。

2.3.2 离心机：转速不低于4000r/min

2.3.3 超声波水浴振荡器。

2.3.4 食品粉碎机。

2.3.5 旋涡混合器。

2.3.6 pH计。

2.3.7 天平：分度值为0.01g和0.1mg。

2.4分析步骤

2.4.1样品处理

2.4.1.1液体样品

①碳酸饮料、果酒、葡萄酒等液体样品：称取10g样品（精确至0.001g）（如含有乙醇需水浴加热除去乙醇后再用水定容至原体积）于25mL容量瓶中，用氨水（1+1）调节pH至近中性，用水定容至刻度，混匀，经微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。

②乳饮料、植物蛋白饮料等含蛋白质较多的样品：称取10g样品（精确至0.001g）于25mL容量瓶中，加入2mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入2mL乙酸锌溶液摇匀，以沉淀蛋白质，加水定容至刻度，4000r/min离心10min，取上清液，经微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。

2.4.1.2半固体样品

①含有胶基的果冻样品：称取0.5g～1g样品（精确至0.001g），加水适量，转移至25mL容量瓶中，再加水至约20mL，置60℃～70℃水浴中加热片刻，加塞，剧烈振摇使其分散均匀后，加氨水（1+1）调节pH至近中性，加塞，剧烈振摇，

使样品在水中分散均匀，置60℃～70℃水浴锅中加热30min，取出后趁热超声5min，冷却后用水定容至刻度，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。

②油脂、奶油类样品：称取2g～3g样品（精确至0.001g）于50mL具塞离心管中，加入10mL正己烷，用旋涡混合器使其充分溶解，4000r/min离心3min，吸出正己烷提取液转移至250mL分液漏斗中，再向50mL具塞离心管中加入10mL 正己烷重复上述步骤，合并正己烷提取液于250mL分液漏斗中。于分液漏斗中加入20mLpH4.4乙酸盐缓冲溶液加塞后剧烈振摇分液漏斗约30s，静置分层后，将水层转移至50mL容量瓶中，再加入20mLpH4.4乙酸盐缓冲溶液，重复上述步骤，合并水层并用乙酸盐缓冲溶液定容至刻度，经微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。

2.4.1.3固体样品

①肉制品、饼干、糕点：称取粉碎均匀样品2g～3g（精确至0.001g）于小烧杯中，用20mL水分数次清洗小烧杯将样品移入25mL容量瓶中，超声振荡提取5min，取出后加2mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入2mL乙酸锌溶液，摇匀，用水定容至刻度，移入离心管中，4000r/min离心5min，吸出上清液，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。

②油脂含量高的火锅底料、调料等样品：称取样品2g～3g（精确至0.001g）于50mL具塞离心管中，加入10mL磷酸盐缓冲液，用旋涡混合器充分混合，然后于4000r/min离心5min，小心吸出水层转移到25mL容量瓶中，再加入10mL磷酸盐缓冲液于具塞离心管中，重复上述步骤，合并两次水层液，用磷酸盐缓冲液定容至刻度，混匀，用微孔滤膜过滤，滤液待上机分析。

③凝胶糖果、胶基糖果：按半固体样品2.4.1.2含有胶基的果冻样品处理。

2.4.2色谱条件

a）色谱柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm，或性能相当者；

b）流动相：甲醇（2.2.1）+乙酸铵溶液（2.2.2）（5+95）；

c）流速：1mL/min；

d）检测波长：230nm；

e）进样量：10μL。

2.4.3测定

取处理液和混合标准使用液各10μL注入高兴液相色谱仪进行分离，以其标准