西农兽医微生物实习沙门氏菌分离鉴定

沙门氏菌的分离鉴别及药敏试验

姓名：张跃

班级：动医123

学号：2012010120

指导教师：邢福珊

日期：2014 / 6 / 29

前言

沙门氏菌，革兰氏阴性，是细菌性食物中毒的重要致病菌。血清型种类繁多，目前已分离出2523 个血清型，我国已发现216个。与人类疾病有关的血清型主要集中于A~E 群，包括伤寒沙门氏菌、（甲、乙、丙型）副伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌等，其中以鼠伤寒沙门氏菌、肠炎沙门氏菌及猪霍乱沙门氏菌最为常见。它不仅能导致鸡白痢、鸡伤寒、副伤寒、仔猪副伤寒等动物疾病，还能使人类发生伤寒、副伤寒、败血症、胃肠炎和食物中毒。

沙门氏菌经口进入体内以后，在肠道内大量繁殖，经淋巴系统进入血液，造成一过性菌血症，即感染过程。随后，沙门氏菌在肠道和血液中受到机体的抵抗而被裂解、破坏，释放大量内毒素，使机体中毒，出现中毒症状。

1材料

1.1 病料

肝、脾提取液，来源于杨凌某养殖场发病仔猪的肝、脾。

1.2 仪器

1.3培养基

普通琼脂平板，普通肉汤，葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖发酵试验管，三糖铁琼脂斜面，柠檬酸盐斜面

1.4试剂

1.5实验动物

小白鼠由西北农林科技大学实验动物中心提供1.6药敏纸片

2方法

2.1培养基的制备

2.1.1普通肉汤培养基

牛肉浸膏0.5g，蛋白胨1.0g，NaCl 0.5g，KH2PO4 0.1g，蒸馏水100mL

2.1.2普通琼脂平板、普通琼脂斜面

普通肉汤+琼脂1.1g

2.1.3葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖发酵试验管

相应的糖+蛋白胨水（蛋白胨1g，NaCl 0.5g，蒸馏水100mL，加热溶解后用NaOH 调pH为7.2左右，加入指示剂溴甲酚紫）

2.1.4糖铁琼脂斜面，柠檬酸盐斜面

由西北农林科技大学兽医微生物实验室提供

2.2细菌分离

取病样，在普通琼脂板上用四区划线法分离细菌，在琼脂斜面上用“Z”字型划线法分离细菌。

2.3细菌纯培养

划完线的培养基、斜面置于37℃温箱中培养24h后，分离单个菌落的一半进行镜检。

2.4细菌生化试验

类分解发酵试验：

琼脂斜面培养物用接种针挑取另一半单个菌落穿刺接种于糖发酵管深部（勿穿到管底！），标记并放入37℃温箱中培养24h。

三糖铁琼脂利用试验：

将被检菌的另一半单个菌落划线于柠檬酸钠琼脂斜面并在37℃温箱中培养24h。

檬酸盐斜面利用试验：

将被检菌的另一半单个菌落划线并穿刺于柠檬酸钠琼脂斜面，然后在37℃温箱中培养24h。

2.5动物致病实验

用注射器吸取已接种细菌并温室培养24h的普通肉汤0.2mL，注入小鼠腹腔内，标记。

2.6动物剖检

致死小鼠用大头针固定于解剖板上，用镊子挑起腹部皮肤，用手术剪剪开，钝性撕开，暴露腹腔胸腔，找到脾脏，分离出一个薄层置于玻璃板，革兰氏染色，镜检。

2.7药敏试验

将含有菌的普通肉汤试管中，插入一个棉签沿管壁滚动，挤去多余液体。用含菌棉签从平板中央开始涂抹，然后再转90°涂布，使整个平板表面涂布上菌。再用灭菌镊子将含抗生素纸片放入平板内并压实，每个平板上放四个纸片。温箱培养24h。

3结果

3.1各种培养基的制备

各培养基透明洁净，硬度湿度适中，经检测，符合实验要求。

3.2细菌分离

分离方法和划线方法正确，分离成功，培养出单个菌落。

3.3细菌纯培养

普通斜面培养基生长表现（37°C培养17小时）：生长不良。

普通肉汤培养基（37°C培养17小时）：肉汤均匀浑浊，底部有沉淀，振荡后称絮状升起，液面有薄层菌膜。

麦康凯琼脂斜面：斜面上细菌生长良好，形成灰白色菌落。

3.4细菌生化试验

○+：产酸产气。-：无反应+：产酸不产气

+:反应阳性；-：反应阴性

3.5动物致病实验

接种的五只小鼠均患病并死亡。

3.6动物剖检

显微镜观察到脾细胞周围充满沙门氏菌。

3.7药敏试验

4结论

起引起仔猪慢食，早期体温正常后期升高，拉泻粪便有恶臭，黑色粘液及血液，皮肤发紫，消瘦，抗菌素治疗症状减轻，但有反复发烧症状的细菌是沙门氏菌。

沙门氏菌对左氟沙星、氧氟沙星、多粘菌素S敏感；对环丙沙星、头孢西丁、万古霉素中等敏感；对红霉素、复方新诺明、青霉素G、氨苄西林、头孢哌酮、苯唑西林、克拉霉素、头孢噻肟、头孢呋辛耐药。

5感谢

这篇文章是在邢福珊老师的指导下完成的。老师用他渊博的专业知识和严谨的教学态度使我树立了远大的学术目标、掌握了基本的研究方法，还使我明白了许多待人接物与人处事的道路。

感谢张耀相老师，他曾经细心指导我们的研究，在此，我要向张耀祥老师深深鞠上一躬。

此外，还要感谢我的同学们，是你们在实验过程中一起探讨问题并解决问题，没有大家的合作此次实验不能顺利的完成，在此，表示深深的谢意。