耐高渗酵母原生质体诱变育种的研究
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２ １ 年第 ２期 ００
６月 出 版
食 品 工 程
ＦＯＯＤ ＥＮＧＩ ＮＥＥＲＩ ＮＧ
３ ７
耐 高 渗 酵 母 原 生 质体 诱 变 育 种 的研 究
Ｒｅ ｅ ｒ ｈ ｏ ｕ ａ ｉ ｎ ｂ ｅ ｄ ｎ ｆ ｒ ｔ ｐａ ｔ ｆ ｓ ｐ ｉ ｅ ｓ ｓ ａ ｃ ｎ ｍ ｔ ｔ ｒ ｅ ｉ ｇ ｏ ｏ ｏ ｌ ｓ ｍｏ ｈｌ ｙ ａ ｔ ｏ ｐ ｏ ｏ ｉ ｃ
２Ｈ ｎｎｐｏｉｃ ｏ ｄ ｓｙ ｅｅｒｈｉｓｔ ｅ ｏ Ｌｄ Ｚ ｅ ｇｈｕ ５０ ３Ｃ ｉａ （ ｅａ ｒｖ ｅｏｄｉ ｕｔ ｓａｃ ｔｕ ． ｔ， ｈｎｚｏ ４ ０ ５ ， ｈｎ） ｎ ｆ ｎ ｒｒ ｎ ｉｔＣ ，
摘
要 以耐 高渗 酵母 为 出发 菌株 ，采 用 紫外 线 对
剂。
ｃ 完全 培养基 ：葡萄糖 ２ｇ １０ｇ ） ／ ０ ，蛋 白胨 ２ｇ ／ ０ ，酵母膏 ０５ｇ １０ｇ １０ｇ ． ／ ０ ，琼脂 ２ｇ １０ｇ 自然 ／ ０ ，
ｐ ； Ｈ
赤 藓糖 醇是 许 多微 生 物 的代谢 产 物 ，他 的工业 化 生 产是 以淀 粉为 原料 ，由耐 高 渗酵 母 经 发酵 而 成 的 。 日本在 克 服 以往 赤 藓 糖醇 发 酵研 究 中的菌 种 耐
刘 凤 珠
牛小明 ２
（ 郑州轻工业 学院 ， 郑州 ４ ００ ） （ ５ ０ ２ 河南省食 品工业科学研究所有限公 司 ， 郑州 ４ ０ ５ ） ５ ０ ３
ＬＩ Ｕ Ｆ ｎ －ｚ ＮＩ Ｘｉｏ ｍｉ ｇ ｅ ｇ ｈｕ ’ Ｕ ａ － ｎ ￣
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关键词
赤藓糖醇；原生质体诱变 ； 酵 发
藓糖醇优良菌株是生产 的关键。 本文以从 自然界分离筛选到 的产赤藓糖醇 的耐 高渗酵母为出发菌 ，经原生质体 紫外线诱变处理 ， 以期提高赤藓糖醇的发酵产量。
Ａｂ ｔ ａ ｔ Ｕ ｉ ｇ ａ ｓ ｐ ｉ ｃ ｙ ａ ｔ ａ ｈ ｒｇｎ ｌ ｓｒ ｃ ｓｎ ｎ ｏ ｍｏ ｈ ｌ ｅ ｓ ｉ ｓ ｔ ｅ ｏ ｉｉ ａ
１ ． 细胞 悬液 制备 ．１ ２ 自新 鲜 斜 面挑 取 酵母 菌一 环 接 种 于盛 有 ２ Ｌ ０ｍ
３ ８
２１ ０ ０年第 ２ 期 ６ 出版 月
发 酵培 养 基 的 ２０ｍＬ三 角 瓶 中 ，３ ０摇 床 震 荡培 ５ ２Ｃ 养 １ ～６ｈ ２ １ ，转 速 １０ｒ ｒｎ ｈ ５ ／ ｉ。取发 酵液 １ ａ ０ｍＬ ，３ ５０ｒ ｍｎ离 心 １ ｉ，沉 淀用 高 渗 缓 冲液 洗 涤 ２ ０ ／ ｉ ０ｍｎ 次 ，将菌 体悬 浮于 １ ０ｍＬ缓 冲液 中成 细胞悬 液 。取 ０５ｍ ． Ｌ用 无菌生 理盐 水适 当稀 释后 用平 板菌 落计 数
ｔｔ ｎ ａｉ ｏ
１１１ 菌 种 ．．
从自 然界分离的耐高渗酵母 ，编号为 Ｊ。 。
１１ 试剂 ．． ２
质 量 分数 ２ ％蜗 牛酶 溶 液 ，过 滤 除菌 Baidu Nhomakorabea高 渗 缓
赤 藓糖 醇是 一 种 四碳 糖 醇 ，又 名 １ ，３ 一 ，２ ，４
冲液 ：０８ｍ ｌ Ｌ甘露 醇 ；原生 质体 稳定 液 。 ． ｏ／
题 的情 况 下 ，率 先 实 现 了赤 藓糖 醇 的工 业 化 生 产 。 目前 ，国内这 方 面 的研 究 刚 刚起 步 ，因此 ，选 育赤
其 原 生质体 进行 诱 变 育种 ，筛选 出一株 突 变株 ，其
赤 藓糖 醇的 产 量 比诱 变前 提 高 了 １． ４４ ％。经 多次传
代遗 传性能稳 定 。
０ ５ ｇ／１ ０ ｇ， ｐＨ６． ． ０ ０；
丁四醇，在 自然界 中分布十分广泛。赤藓糖醇是一 种 低 热 值 的甜 味 剂 ，甜 度 为 蔗 糖 的 ６ ％～ ０ ，具 ０ ７％ 有 其他 多元 醇 所有 的保 健 特性 ，如 防龋 齿 、适 宜糖
尿病 患者使 用 等 ，由于这 些特 点 ，赤藓 糖 醇可 用作 佐 餐及 低热 清 凉 的各 式 糖 果 、糕 点 、饮料 等 的甜 味
１１ 培养基 ．． ３ ａ 固体 培 养基 ：葡 萄糖 ２ １ ０ｇ ） ０ｇ／ ０ ，酵 母 膏 ０５ｇ １ ０ ，琼脂 ２ｇ １ ０ｇ Ｈ６ ； ． ／０ ｇ ／ ０ ，ｐ ． ０ ｂ 发 酵 培 养 基 ：葡 萄糖 ２ １ ０ｇ ） ０ｇ／ ０ ，酵 母 膏
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ｄ ）再生培养基 ：完全培养基中加入 Ｏ ｏ／ ．ｍ ｌ Ｌ ８
的甘 露醇 。 １２ 方法 ＿
糖性差 、发泡性强 、发酵产率低 以及副产品多等问
・刘 凤珠 。 ，９ ３年 出 生 ，９５年毕 业 于华 东 理 工 大 学 生 物 女 １６ １８
工程专业 ， 硕士 ， 副教授。
收 稿 日期 ：２ １— ３ ０ ００ ０—２
１ 材料与方法
１１ 材料 ．
ｅ ｙ ｈ ｉ ｌ ａ ｅ ｎｓａ ｌ ． ｒ ｔ ｒ ｏ ｓ ｂ ｅ ｂ ｅ ｔ ｈ ｔ Ｋｅ ｗｏ ｄ ｅ ｙｈ ｉ ｌ ｐ ｏｏ ｌ ｔｍｕ ａｉ ｎ ｆ ｒ ｎ ｙ ｒｓ ｒ ｔ ｒ ｏ ； ｒ ｔ ｐ ａ ｔｔ ； ｅ ｍｅ － ｔ ｓ ｏ
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食 品 工 程
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３ ７
耐 高 渗 酵 母 原 生 质体 诱 变 育 种 的研 究
Ｒｅ ｅ ｒ ｈ ｏ ｕ ａ ｉ ｎ ｂ ｅ ｄ ｎ ｆ ｒ ｔ ｐａ ｔ ｆ ｓ ｐ ｉ ｅ ｓ ｓ ａ ｃ ｎ ｍ ｔ ｔ ｒ ｅ ｉ ｇ ｏ ｏ ｏ ｌ ｓ ｍｏ ｈｌ ｙ ａ ｔ ｏ ｐ ｏ ｏ ｉ ｃ
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摘
要 以耐 高渗 酵母 为 出发 菌株 ，采 用 紫外 线 对
剂。
ｃ 完全 培养基 ：葡萄糖 ２ｇ １０ｇ ） ／ ０ ，蛋 白胨 ２ｇ ／ ０ ，酵母膏 ０５ｇ １０ｇ １０ｇ ． ／ ０ ，琼脂 ２ｇ １０ｇ 自然 ／ ０ ，
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赤 藓糖 醇是 许 多微 生 物 的代谢 产 物 ，他 的工业 化 生 产是 以淀 粉为 原料 ，由耐 高 渗酵 母 经 发酵 而 成 的 。 日本在 克 服 以往 赤 藓 糖醇 发 酵研 究 中的菌 种 耐
刘 凤 珠
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（ 郑州轻工业 学院 ， 郑州 ４ ００ ） （ ５ ０ ２ 河南省食 品工业科学研究所有限公 司 ， 郑州 ４ ０ ５ ） ５ ０ ３
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关键词
赤藓糖醇；原生质体诱变 ； 酵 发
藓糖醇优良菌株是生产 的关键。 本文以从 自然界分离筛选到 的产赤藓糖醇 的耐 高渗酵母为出发菌 ，经原生质体 紫外线诱变处理 ， 以期提高赤藓糖醇的发酵产量。
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１ ． 细胞 悬液 制备 ．１ ２ 自新 鲜 斜 面挑 取 酵母 菌一 环 接 种 于盛 有 ２ Ｌ ０ｍ
３ ８
２１ ０ ０年第 ２ 期 ６ 出版 月
发 酵培 养 基 的 ２０ｍＬ三 角 瓶 中 ，３ ０摇 床 震 荡培 ５ ２Ｃ 养 １ ～６ｈ ２ １ ，转 速 １０ｒ ｒｎ ｈ ５ ／ ｉ。取发 酵液 １ ａ ０ｍＬ ，３ ５０ｒ ｍｎ离 心 １ ｉ，沉 淀用 高 渗 缓 冲液 洗 涤 ２ ０ ／ ｉ ０ｍｎ 次 ，将菌 体悬 浮于 １ ０ｍＬ缓 冲液 中成 细胞悬 液 。取 ０５ｍ ． Ｌ用 无菌生 理盐 水适 当稀 释后 用平 板菌 落计 数
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从自 然界分离的耐高渗酵母 ，编号为 Ｊ。 。
１１ 试剂 ．． ２
质 量 分数 ２ ％蜗 牛酶 溶 液 ，过 滤 除菌 Baidu Nhomakorabea高 渗 缓
赤 藓糖 醇是 一 种 四碳 糖 醇 ，又 名 １ ，３ 一 ，２ ，４
冲液 ：０８ｍ ｌ Ｌ甘露 醇 ；原生 质体 稳定 液 。 ． ｏ／
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其 原 生质体 进行 诱 变 育种 ，筛选 出一株 突 变株 ，其
赤 藓糖 醇的 产 量 比诱 变前 提 高 了 １． ４４ ％。经 多次传
代遗 传性能稳 定 。
０ ５ ｇ／１ ０ ｇ， ｐＨ６． ． ０ ０；
丁四醇，在 自然界 中分布十分广泛。赤藓糖醇是一 种 低 热 值 的甜 味 剂 ，甜 度 为 蔗 糖 的 ６ ％～ ０ ，具 ０ ７％ 有 其他 多元 醇 所有 的保 健 特性 ，如 防龋 齿 、适 宜糖
尿病 患者使 用 等 ，由于这 些特 点 ，赤藓 糖 醇可 用作 佐 餐及 低热 清 凉 的各 式 糖 果 、糕 点 、饮料 等 的甜 味
１１ 培养基 ．． ３ ａ 固体 培 养基 ：葡 萄糖 ２ １ ０ｇ ） ０ｇ／ ０ ，酵 母 膏 ０５ｇ １ ０ ，琼脂 ２ｇ １ ０ｇ Ｈ６ ； ． ／０ ｇ ／ ０ ，ｐ ． ０ ｂ 发 酵 培 养 基 ：葡 萄糖 ２ １ ０ｇ ） ０ｇ／ ０ ，酵 母 膏
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糖性差 、发泡性强 、发酵产率低 以及副产品多等问
・刘 凤珠 。 ，９ ３年 出 生 ，９５年毕 业 于华 东 理 工 大 学 生 物 女 １６ １８
工程专业 ， 硕士 ， 副教授。
收 稿 日期 ：２ １— ３ ０ ００ ０—２
１ 材料与方法
１１ 材料 ．
ｅ ｙ ｈ ｉ ｌ ａ ｅ ｎｓａ ｌ ． ｒ ｔ ｒ ｏ ｓ ｂ ｅ ｂ ｅ ｔ ｈ ｔ Ｋｅ ｗｏ ｄ ｅ ｙｈ ｉ ｌ ｐ ｏｏ ｌ ｔｍｕ ａｉ ｎ ｆ ｒ ｎ ｙ ｒｓ ｒ ｔ ｒ ｏ ； ｒ ｔ ｐ ａ ｔｔ ； ｅ ｍｅ － ｔ ｓ ｏ