ImageJ Western 量化 拿走不谢
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ImageJ实用技巧之Western blot量化
原创2016-05-26 李莫愁博士实验万事屋
ImageJ对医学生来讲最常用的功能是WesternBlot量化和细胞计数,又以前者最常见。
不是所有的WB都需要量化,看审稿人的要求,好了,今天内容比较枯燥,我们一步一步来学习image J量化Western blot的条带吧!
首先下载安装Image J,温馨提示软件在网上有下载。
安装完image J,打开一张要量化的图片如下图:
点击选择方形选框工具,按住左键,在图片上拖动,选择需要分析的条带区域,如图中黄色方框所示。
依次选择,如下图,Select First Lane选项后会出现以上对话框,直接点击Yes 即可:
当选区出现1表示选择成功:
然后选择,Analyze→Gels→Plot Lanes,就会弹出山峰样的图。
峰的面积即灰度值,但是这几个峰连在了一起要先把他们分开,点击直线工具,画直线。
点击选择魔棒工具,然后分别点击每个峰的下方区域,然后就会弹出各个峰面积的结果,分别与六个条带的灰度值相对应,表示六个条带所代表的目的蛋白的表达水平。
使用同样的方法也可以对beta-actin进行量化,最后通过标准化计算得到该Western Blot的量化结果,至于如何将量化结果变成审稿人要求的柱状图,就留给你们自己思考。