乳酸菌分离
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感谢广西工学院生物与化学工程系给我们提供优越的实 验条件和良好的实验环境。多谢各位老师的培养、指导 ！谢谢你们！
谢谢！
2. 研究内容和试验过程
1、探索青贮饲料自然发酵液中的各种微生物分 离的技术，如：培养基的配制、pH值、培养温度和 培养时间。
2、微生物进行简单的鉴定，以确定微生物的分 类。由于时间关系，对于这些菌株的鉴定和他们之 间的关系将会在下一个试验环节给予解答。
3、微生物的分离纯化过程如图2-1：
样品
MRS 营养肉汤
青贮饲料微生物的分离纯化
姓名：梁树莉 专业：生物工程 指导老师：伍时华 易弋
答辩内容
1.课题的目的和意义 2. 研究内容和试验过程 3.试验结果 4.结论 5.致谢
1.课题的目的和意义
研究目的 ：本研究的目的是从自然发酵的优 质青贮饲料样品中分离乳酸菌和其他微生物，并 对其进行简单的鉴定，为筛选出性状优良的发酵 菌株，如乳酸菌株，制备优良的青贮饲料专用发 酵剂奠定基础。
放线菌载玻片制作:插片法、玻璃纸法和印片法，用来观 察菌丝生长状况及其孢子的着生方式。
（4） 酵母菌鉴定
根据微生物学中酵母菌鉴定的方法，从显微镜上 观察，可以很快地把供试的两种菌株C3、E3初步判 定为酵母菌类，然后可以按照酵母菌的鉴定方法进行 生理生化鉴定。酵母菌的菌落描述如下表4-1：
表4-1 酵母菌的菌落描述
（3）放线菌鉴定
供试4菌株的鉴定结果如表3-2。D1为革兰氏阳性葡 萄球菌，D3、D4、D5为革兰氏阳性杆菌。
表3-2 放线菌的鉴定结果
（3）放线菌鉴定
以上所分出的4株疑似放线菌的菌株，它们在菌落形态和 培养时间上都表现为放线菌。
挑取菌落，进行革兰氏镜检时，细胞（或菌丝，孢子）在 形态上，又表现为一般的细菌细胞形态。对于以上的这种现 象，我们将会在下一个试验环节中进行解决。
表5-1 霉菌的菌落鉴定结果
（5） 霉菌鉴定
试验在查氏培养基上没有分离得到霉菌，而在 YEPD培养基上，分离得到2株霉菌。在显微镜40倍和 100倍下镜检，取下合适的区域拍下相片如图3-5。这2 株菌株明显表现为的霉菌形态，分别为曲霉属E1，青 霉属E2。
YEPD培养基 40倍镜检E1
YEPD培养基 100倍镜检E1
24株微生物，只有E1、E2确定菌属，其他的20株微生物还 要进行生理生化试验和和糖发酵实验，甚至DNA测序才能确 定菌种分类。
致谢
经过毕业论文阶段的训练，我在大学期间所学的专业知 识得到进一步的巩固, 掌握了实验方案的设计、动手和 论文写作能力,综合素质能力得到了很大提高。
衷心的感谢易弋老师、黄翠姬老师、龚翌师姐对我实验 的帮助和支持。特别感谢我的实验搭档邹庆华同学，在 同甘共苦的半年里，我从他身上学到了很多知识。
（乳酸菌） （细菌）
高氏一号 YEPD 查氏
（放线菌） （酵母） （ 霉菌）
涂布分离
无单菌落 挑取单菌落
保藏
鉴定
划线分离
挑取单菌落
Leabharlann Baidu获得纯菌落
富集培养 重复2次
图2-1 微生物的分离纯化过程
3.试验结果
（1）乳酸菌鉴定
表1-1 乳酸菌的菌落描述
（1）乳酸菌鉴定
表1-2 乳酸菌初步鉴定结果
（1）乳酸菌鉴定
根据文献(凌代文，1999；中国科学院微生物研究所细菌分类组 )介 ，1978；杜连祥，1992；敖敦格日勒，2001a、2001b；贺银凤，2002 绍，凡是革兰氏阳性、过氧化氢酶试验阴性的菌 株初步确定为乳酸菌，然后进行乳酸菌属的鉴定 试验。
供试11株菌株鉴定结果都是革兰氏阳性、过氧化氢阴 性和产酸，因此初步判定这11株菌株为乳酸菌；全部来自 于MRS培养基，其中产酸最多的B6、A1。
（4）酵母菌鉴定
供试的的2株菌株经过镜检结果，如下图4-1。在100 倍镜检的条件下，表现为椭圆形，细胞个体粗大直径约为 细菌的10倍。
C3
E3
图4-1酵母菌100倍镜检
（5）霉菌鉴定
根据微生物学中霉菌的方法，主要从显微 镜上观察，可以很快地把菌E1、E2初步判定 为霉菌。霉菌的菌落描述如下表5-1：
（2）细菌鉴定
表2-1 细菌菌落描述
（2）细菌鉴定
供试5株菌株的属种鉴定结果如下表2-2。这5株细 菌，初步判断为一般细菌，其中除D2是革兰氏阴性杆 菌外，其他的都是革兰氏阳性杆菌，H2O2试验都是为 阳性；B5可能为醋酸杆菌属。
表2-2 细菌分离鉴定结果
（3）放线菌鉴定
表3-1 放线菌菌落形态描述
研究意义：据测定，青绿饲料在自然条件下晒制 成干草，营养物质损失70%左右；制成青贮饲料，可保 存90%的营养物质。而且可以防止水份蒸发，保持青绿 饲料鲜嫩多汁的特点。
青贮饲料作为草食家畜饲料，对充分利用农作物 秸秆，促进畜牧业的科学发展，扩大饲料资源、降低 饲料成本，提高农民增收等一系列民生民计都有着巨 大的现实意义。
YEPD培养基 40倍镜检E2
图5-1 霉菌镜检结果
YEPD培养基 100倍镜检E2
4.结论
从试验结果看，采用营养肉汤、MRS、高氏一号、YEPD、查 氏培养基可以分离到大多数所需要的微生物。
分离出的24株微生物，已经确定11株为乳酸菌，5株细菌， 有4株怀疑为放线菌，有2株确定为酵母菌；有2株确定为霉 菌，它们是曲霉属，青霉属。
谢谢！
2. 研究内容和试验过程
1、探索青贮饲料自然发酵液中的各种微生物分 离的技术，如：培养基的配制、pH值、培养温度和 培养时间。
2、微生物进行简单的鉴定，以确定微生物的分 类。由于时间关系，对于这些菌株的鉴定和他们之 间的关系将会在下一个试验环节给予解答。
3、微生物的分离纯化过程如图2-1：
样品
MRS 营养肉汤
青贮饲料微生物的分离纯化
姓名：梁树莉 专业：生物工程 指导老师：伍时华 易弋
答辩内容
1.课题的目的和意义 2. 研究内容和试验过程 3.试验结果 4.结论 5.致谢
1.课题的目的和意义
研究目的 ：本研究的目的是从自然发酵的优 质青贮饲料样品中分离乳酸菌和其他微生物，并 对其进行简单的鉴定，为筛选出性状优良的发酵 菌株，如乳酸菌株，制备优良的青贮饲料专用发 酵剂奠定基础。
放线菌载玻片制作:插片法、玻璃纸法和印片法，用来观 察菌丝生长状况及其孢子的着生方式。
（4） 酵母菌鉴定
根据微生物学中酵母菌鉴定的方法，从显微镜上 观察，可以很快地把供试的两种菌株C3、E3初步判 定为酵母菌类，然后可以按照酵母菌的鉴定方法进行 生理生化鉴定。酵母菌的菌落描述如下表4-1：
表4-1 酵母菌的菌落描述
（3）放线菌鉴定
供试4菌株的鉴定结果如表3-2。D1为革兰氏阳性葡 萄球菌，D3、D4、D5为革兰氏阳性杆菌。
表3-2 放线菌的鉴定结果
（3）放线菌鉴定
以上所分出的4株疑似放线菌的菌株，它们在菌落形态和 培养时间上都表现为放线菌。
挑取菌落，进行革兰氏镜检时，细胞（或菌丝，孢子）在 形态上，又表现为一般的细菌细胞形态。对于以上的这种现 象，我们将会在下一个试验环节中进行解决。
表5-1 霉菌的菌落鉴定结果
（5） 霉菌鉴定
试验在查氏培养基上没有分离得到霉菌，而在 YEPD培养基上，分离得到2株霉菌。在显微镜40倍和 100倍下镜检，取下合适的区域拍下相片如图3-5。这2 株菌株明显表现为的霉菌形态，分别为曲霉属E1，青 霉属E2。
YEPD培养基 40倍镜检E1
YEPD培养基 100倍镜检E1
24株微生物，只有E1、E2确定菌属，其他的20株微生物还 要进行生理生化试验和和糖发酵实验，甚至DNA测序才能确 定菌种分类。
致谢
经过毕业论文阶段的训练，我在大学期间所学的专业知 识得到进一步的巩固, 掌握了实验方案的设计、动手和 论文写作能力,综合素质能力得到了很大提高。
衷心的感谢易弋老师、黄翠姬老师、龚翌师姐对我实验 的帮助和支持。特别感谢我的实验搭档邹庆华同学，在 同甘共苦的半年里，我从他身上学到了很多知识。
（乳酸菌） （细菌）
高氏一号 YEPD 查氏
（放线菌） （酵母） （ 霉菌）
涂布分离
无单菌落 挑取单菌落
保藏
鉴定
划线分离
挑取单菌落
Leabharlann Baidu获得纯菌落
富集培养 重复2次
图2-1 微生物的分离纯化过程
3.试验结果
（1）乳酸菌鉴定
表1-1 乳酸菌的菌落描述
（1）乳酸菌鉴定
表1-2 乳酸菌初步鉴定结果
（1）乳酸菌鉴定
根据文献(凌代文，1999；中国科学院微生物研究所细菌分类组 )介 ，1978；杜连祥，1992；敖敦格日勒，2001a、2001b；贺银凤，2002 绍，凡是革兰氏阳性、过氧化氢酶试验阴性的菌 株初步确定为乳酸菌，然后进行乳酸菌属的鉴定 试验。
供试11株菌株鉴定结果都是革兰氏阳性、过氧化氢阴 性和产酸，因此初步判定这11株菌株为乳酸菌；全部来自 于MRS培养基，其中产酸最多的B6、A1。
（4）酵母菌鉴定
供试的的2株菌株经过镜检结果，如下图4-1。在100 倍镜检的条件下，表现为椭圆形，细胞个体粗大直径约为 细菌的10倍。
C3
E3
图4-1酵母菌100倍镜检
（5）霉菌鉴定
根据微生物学中霉菌的方法，主要从显微 镜上观察，可以很快地把菌E1、E2初步判定 为霉菌。霉菌的菌落描述如下表5-1：
（2）细菌鉴定
表2-1 细菌菌落描述
（2）细菌鉴定
供试5株菌株的属种鉴定结果如下表2-2。这5株细 菌，初步判断为一般细菌，其中除D2是革兰氏阴性杆 菌外，其他的都是革兰氏阳性杆菌，H2O2试验都是为 阳性；B5可能为醋酸杆菌属。
表2-2 细菌分离鉴定结果
（3）放线菌鉴定
表3-1 放线菌菌落形态描述
研究意义：据测定，青绿饲料在自然条件下晒制 成干草，营养物质损失70%左右；制成青贮饲料，可保 存90%的营养物质。而且可以防止水份蒸发，保持青绿 饲料鲜嫩多汁的特点。
青贮饲料作为草食家畜饲料，对充分利用农作物 秸秆，促进畜牧业的科学发展，扩大饲料资源、降低 饲料成本，提高农民增收等一系列民生民计都有着巨 大的现实意义。
YEPD培养基 40倍镜检E2
图5-1 霉菌镜检结果
YEPD培养基 100倍镜检E2
4.结论
从试验结果看，采用营养肉汤、MRS、高氏一号、YEPD、查 氏培养基可以分离到大多数所需要的微生物。
分离出的24株微生物，已经确定11株为乳酸菌，5株细菌， 有4株怀疑为放线菌，有2株确定为酵母菌；有2株确定为霉 菌，它们是曲霉属，青霉属。