烟草中游离氨基酸的测定

烟草中游离氨基酸的测定

王娟,张华,郭国宁,李琳

(湖北中烟工业有限责任公司技术中心,湖北武汉430051)

摘要 [目的]探讨用氨基酸自动分析仪建立一种测定烟草中游离氨基酸的方法。[方法]用氨基酸分析仪法测定烟叶中的游离氨基酸并对这些游离氨基酸分别定性定量检测。[结果]氨基酸分析仪法能够分离检测烟叶中的23种游离氨基酸(除了蛋氨酸),其回收率均在78.86%~101.46%,标准偏差均在8%以内,具有较好的重现性和回收率。最优的氨基酸提取方法是:样品过60目筛,用0.005mol/L 的盐酸超声萃取30m i n 。对不同的烟叶样品进行检测,发现不同种类烟叶所含有的氨基酸具有一定的规律性。烤烟和香料烟中所含的游离氨基酸以Pro 为主,而白肋烟以Asn 为主;只有白肋烟中含有氨基酸Tau ,而烤烟和香料烟里面几乎检测不到。[结论]氨基酸分析仪法是测定烟叶中游离氨基酸较好的方法。关键词 烟草;游离氨基酸;氨基酸分析仪

中图分类号 S572 文献标识码 A 文章编号 0517-6611(2008)26-11413-04

Detectio n of Free Amino Aci ds i n Tobacco WANG Juan et al (Ch i na Tobacco H ube i Industr i a lCo .lt d .R &D Center ,W uhan ,H ube i 430051)Abstract [Objecti ve]A method establi shed f or t he de t ecti on of free a m i no ac i ds i n t obacco usi ng a m i no aci d ana l yzer was discussed .[M e t hod]The free a m i no aci ds in tobacco were de t ected using t he a m i no aci d analyzer and t hese free a m i no aci dswere detected qualitati vel y and quantit a ti ve l y resp .[R es u lt ]23ki nds of free a m i no aci ds exceptm et hioni ne i n t obacco l eaves were separated and detected by the a m i no aci d anal y z er m et hod ,t he reproduci b ilit y were bet w een 78.86%and 101.46%,and the standard dev i ati on va l uesw ere bel ow 8%.The me t h od had better reproduc i bility and recovery .The optm i u m ex traction m et hod o f a m i no aci d w as as f o ll ows :t he sa mples w ere sieved by 60m e s hes trea t m ent and treated by u l trasonic extracti on w it h 0.005mo l/L hydroch l oride for 30m i n .The contents o f a m i no aci ds i n different varie ti es of tobacco leaves s ho w ed s ome l a w after t he det ecti ng tobacco sa mples .The f ree a m i no aci d cont a i ned i n flue cured tobacco and orient a l tobacco w asma i nl y pro li ne ,while t hat i n bur l ey tobacco was ma i nl y as paragine .The tauri ne was onl y cont a i ned i n burley tobacco and itw as nearl y not detected i n fl ue cured tobacco and orient a l tobacco .[Conc l usion]The a m i no aci d ana l yzerm et hod was t he bett er me t hod for detec ti ng t he free am i no aci ds i n t obacco l eaves .K ey words Tobacco ;F ree a m i no ac i d ;Am i no ac i d analyzer

基金项目 国家烟草专卖局资助项目。

作者简介 王娟(1979-),女,湖北武汉人,硕士,工程师,从事天然植

物烟用研究。

收稿日期 2008 06 20

烟草中的氨基酸是重要的致香前体物质,在烟草调制、醇化或发酵、加工乃至燃烧过程中,游离氨基酸与还原糖之间可发生酶催化及非酶催化的棕色化反应,生成多种具有蒸煮、烤香、爆米花等不同香味特征的杂环化合物[1-2]

。某些氨基酸如苯丙氨酸还可自身分解成香味化合物(如苯甲醇、苯乙醇等)。氨基酸在烟草生长和加工(如调制、陈化、发酵、加料等)的不同阶段也会发生不同的变化,从而对烟草的品质产生较大影响。一般说来,适量的氨基酸有助于提高烟气劲头和增加丰满度。若氨基酸含量太高,烟气辛辣、味苦、刺激性强烈,这是由于在燃烧过程中氨基酸通常生成NH 3等含氮化合物,个别氨基酸还产生H CN 等危害健康的烟气成分;若氨基酸含量太低,烟气则平淡无味缺少丰满度

[3-5]。因此

对不同时期氨基酸含量及其变化情况的分析,可为卷烟配

方、烟叶加料、调制、发酵程度等提供理论指导。建立准确可靠的烟叶中游离氨基酸的分析方法,无疑是一项非常有意义且十分必要的工作。

氨基酸分析,按分离方法可分为纸色谱法、离子交换法、反相高效液相色谱法、气相色谱法等;按检测方法可分为化学分析法、电化学方法(包括电导检测、安培检测)、分光光度法(包括可见光分光光度法、紫外分光光度法和荧光分光光度法)等;按衍生反应的先后,可分为柱前衍生和柱后衍生法。目前,文献上报道较多的测定烟草中氨基酸的方法主要

是分光光度法[6]和柱前衍生反相高效液相色谱法[4,7-8]

。分光光度法只能测定烟草中游离氨基酸的总量;高效液相色谱

法虽然能够对不同种类的氨基酸定性定量,但是所测定的氨基酸的种类最多只有15~17种,且无法将H i s 和G l y 分开[4]

。笔者用氨基酸自动分析仪建立了一种测定烟草中游离氨基酸的方法,该方法能够对烟草中所含有的23种游离氨基酸分别定性定量检测。1 材料与方法1.1 试验材料

1.1.1 仪器。旋风式样品磨(60目);万分之一天平(德国赛多利斯);移液器(吉尔森);超声波(上海弘兴);试管浓缩仪(东京理化器械株式会社);氨基酸自动分析仪(德国S YKAM );0.45 m 滤膜(上海安谱)。

1.1.2 试剂。去离子水;盐酸(分析纯,上海);样品稀释液(德国SYKA M );不同p H 和离子强度的洗脱液(德国S YKAM );茚三酮溶液(德国S YKA M );混合氨基酸标准溶液(德国SYK AM )。1.2 试验方法 将烟叶置于40 下干燥2h ,粉碎过筛,混合均匀后,密封保存备用。称取1g 样品(精确至0.0001g)于100m l 磨口三角瓶中,加入50.0m l 一定浓度的盐酸溶液,塞上塞子、超声、过滤。准确移取2m l 滤液浓缩蒸干(温度不超过60 ),加入1m l 样品稀释液,摇匀。溶液经0.45 m 滤膜过滤后上机分析。用外标法测定样品溶液中各游离氨基酸的含量。其中脯氨酸在440nm 波长下检测,其他氨基酸在570n m 波长下检测。

1.3 仪器条件 分析柱温度:37 ;反应管温度:130 ;进样量:50 ;l 缓冲溶液:不同p H 值的柠檬酸锂缓冲溶液。2 结果与分析

2.1 氨基酸色谱图 图1、2分别是混合氨基酸标样以及样品溶液的氨基酸分析色谱图。用氨基酸自动分析仪分析标

安徽农业科学,Jou r n al ofAnhu iAgr.i Sc.i 2008,36(26):11413-11416责任编辑 罗芸 责任校对 李洪