免疫组化试题(有答案)

免疫组织化学试题参考答案

一、名词解释：

1.PAS 反应：即过碘酸--雪夫反应显示糖原，简称证。

PAS 反应。其原理是通过利用过碘酸的氧化作用，7.诱发荧光：组织细胞中的某些物质本身不发荧

使糖分子中的二醇基氧化为二醛基，释放出醛基，光，但在经过一定的化学反应后可以转变成荧光分与碱性品红反应，生成紫红色化合物沉淀。子。此技术目前主要应用在生物胺的显示中。其中2.Feulgen 法：即福尔根反应显示DNA 法。其原最重要的是甲醛和乙醛酸诱发多巴胺、去甲肾上腺

理是组织用1NHCl 60℃水解，将DNA分子中脱氧素、肾上腺素和5—羟色胺荧光，以及邻苯二醛诱

核糖核酸与嘌呤间的连链打开，使之释放出醛基与发组织胺荧光的反应。

碱性品红发生反应，生成紫红色化合物沉淀。8.定量分析：定量判断是结果判断中最重要也是具3.PAP 法：即过氧化物酶一抗过氧化物酶法，该技有意义的判断，其判断结果有助于统计学的分析处

术原理与其他免疫定位技术相同，即通过抗体使标理。组织细胞化学结果的定量分析又称定量组织细记分子（抗辣根过氧化物酶）定位于抗原附件。其胞化学，指在组织细胞化学阳性结果的基础上，对不同点为三步法，且有放大作用，反应完全依赖于阳性结果（最终阳性产物）进行测量，以数值反应免疫学结合，不需要标记任何抗体，反应灵敏度高，被检测物质的含量。此法是阳性结果的进一步检测背景低。注意一抗与复合物中的抗体必须来源于同和分析，更加直观地反应实验结果，更有力地说明一种动物，且二抗必须过剩。实验结果。常用有人工定量分析与仪器定量分析两4.核酸探针：指能与特定核酸序列发生特异性互补类。

的已知标记的核酸片段，可检测待测样品中特定的9.固定：为了更好的保持细胞和组织原有的形态结基因序列。无标记的探针称裸探针。构，防止组织自溶，有必要对细胞和组织进行固定，5.核酸分子杂交：指具有互补序列的两条核酸单链其作用不仅是使细胞内蛋白质凝固，终止或抵制外在一定条件下按碱基配对原则形成双链的过程。杂源性和内源性酶活性，更重要的是最大限度的保存交的双方分别为待测的核酸序列和已知核酸序列，细胞和组织的抗原性，使水溶性抗原转变为非水溶后者通常用核素或非核素示踪标记，称为探针性抗原，防止抗原弥散。

（probe），杂交后形成的异源双链分子称为杂交分10.组织化学：指在形态学基础上研究组织或细胞子。中物质的化学成分和活性，并进行定性、定位、定6.质量控制：指组织化学反应各环节中获得最佳效量及其代谢状态的学科。其目的是联系形态、化学果的技术把握，是组织化学的关键环节，是取得满万分和功能来了解组织或细胞的代谢变化。

意效果的必要条件，是提高结果可信度的根本保11. ABC 法：即亲和素-生物素-过氧化物酶复合物

法，其基本原理是在抗生物素和生物素之间形成共适的第二抗体。

价和不可逆的结合，通过抗生物素在辣根过氧化物12.细胞骨架：指细胞内的结构网架，由一些细丝酶和第二抗体之间建立生物素桥联，使酶定位于所成分组成，包括微丝、微管、中间丝和微梁网格。需测定的特异性抗体周围。其优点在于易于找到合

二、问答题

1.简述酶组织化学的基本原理。⑶杂交后处理①冲洗：用一系列浓度不同的和温度答：在酶组织细胞化学方法中，从原理上讲，可分不等的平衡盐液冲洗（一般原则是盐液的浓度由高为两在类型。一类是酶是活性——酶组织细胞化学到低，温度由低到高），并在冲洗的过程中防止切方法，属于一般组织细胞化学方法。一类是酶蛋白片干燥；②RNA 酶消化处理：仅使用于RNA 杂交。质的存在及存在的部位——免疫酶组织细胞化学⑷显示/杂交体的检测：①同位素标记者：用放射方法，属于免疫组织细胞化学的内容。目前，通常自显影技术显示。②非同位素标记者：应选择相应是将两者结合起来，即显示酶活性，又酶蛋白的存的方式显示。⑸对照实验：根据核酸探针和靶核苷在、分布及代谢情况。酸的种类在现有可能条件下选定。

2.用箭头表示免疫电镜技术（包埋前法）的过程。 4.组织化学质量控制有哪些方法？

答：包埋前法实用于酶标法和PAP 法。具体过程答：组织化学质量控制的方法有：⑴实验过程的质

如下：取材→→固定→→冰冻切片（40~150μm）量控制：①试剂的质量控制，包括：试剂的特异性

→→免疫染色（同酶标法和PAP 法）→→选择和敏感性；最佳的稀释度；在已知阳性和阴性的标

阳性部位，在解剖显微镜下，取下阳性部位，裱于本上，观察其染色结果的复合情况；要确定染色的盖玻片上→→1%的锇酸固定，1~1.5h→→脱水温度和时间；保存的时间和有效期的时间。②操作

→→平板包埋聚合→→修块、超薄切片步骤的质量控制，包括：组织标本制备的质量控制；（50~80nm）、裱于铜网→→重金属盐双重染色→操作过程各环节的质量控制a. 各种溶液的浓度、

→电镜观察、记录、照片。成分、PH 值的控制，容器的质量标准。b. 特殊试3.简述核酸分子原位杂交组织化学的过程。剂的配制：c. 步骤中间环节的控制；⑵背景染色答：此过程包括：⑴杂交前准备：取材和固定→玻的控制①疏水作用②离子作用—电荷作用③内原片及盖片的处理（粘附剂的使用）→器皿处理和溶性酶活性作用④抗体污染或/抗体纯度不高⑤内原液配制容器的处理→增加组织的通透性和核酸探性抗生物素/生物素蛋白结合活性⑥抗原的扩散⑦针的穿透性→减低背景染色→防止RNA 酶的污交差反应⑧其它原因。

染；⑵杂交过程（杂交反应）：包括变性与杂交； 5.比较PA P法和ABC 法的异同。

PAP ABC

灵敏性低（1 倍）高（20 倍）

特异性高更高

背景一般有背景一般很少或无背景

复合物特点P AP 复合物

只用于PAP 法，且抗体与一抗的种族相同

A BC 复合物

用途广，可通用，用生物素标记的均可

用途免疫组织化学（IHC）IHC、ELISA、原位杂交