H7N9禽流感样本采集及实验室检测
人感染H7N9采样方法及实验室检测策略
采集鼻咽拭子注意事项
• 1、采样时用干拭子采，不能蘸采样液，因为采样 液中有抗菌素，防止过敏。
• 2、采样液平时保存在-20℃或-70℃，采样前融化 到4℃。
• 3、采样液颜色呈紫色时失效不能用了。
人感染H7N9禽流感病毒鼻咽拭子标本 采集方法（2）
• 三、标本运送：
• • 新鲜的临床采集标本应在4℃条件下随样品送检单24小时
（二）标本转送和检测
• 1.H7N9禽流感病毒实验室活动和样本运输按照《人间传染 的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒进行管理。病 例的临床标本采集后，县级疾病预防控制机构和病例收治 的医疗机构要密切配合，按照生物安全的相关规定进行包 装，在24 小时内送到当地流感监测网络实验室进行检测。
• 2.当地流感监测网络实验室收到标本后24 小时内，立即对 呼吸道标本开展甲、乙型流感病毒通用引物、H5、H7亚型 的检测。
内运送至市CDC流感检测实验室。未能24小时内送至实验 室的，应置-70℃或以下保存；冻存的标本应在冻存条件 下，低温送至实验室。
• 四、采样时的生物安全防护：
• 采样时应带口罩，穿隔离衣，带一次性手套及帽子。若在 现场进行快速检测，应将现场用过的所有废物带回销毁。
谢谢，祝大家工作顺利！
• 若当地流感监测网络实验室检测结果为H5、H7核酸检测 阳性时，应当于24小时内将其中2管呼吸道相关原始标本 分别送省级疾控中心流感网络实验室和国家具备相应生物安全条件的网络实验室可开展病毒 分离，并将分离的毒株按要求及时送国家流感中 心。
• 3.若当地流感监测网络实验室检测结果为甲型流 感和乙型流感通用引物均阴性时，应当立即将1管 原始呼吸道标本送省级疾控中心。省级疾控中心 收到标本后，应当立即对其中1管进行SARS 、新 型冠状病毒等相关病原体的检测，另1管送国家流 感中心。
H7N9样本采集与送检PPT课件
2-4ml采样液
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⑸抽取物（需专业人士协助）
➢ 鼻咽抽取物----发病早期 气管抽取物----发病各期
采样方法
将收集器头部插入鼻腔或气管，用与负压泵相连的收集器 从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取呼吸道分泌物。旋转收集 器头部并缓慢退出，收集抽取的粘液，并用3ml采样液冲 洗收集器1次；
➢疑似病例或重症病例请及时与市（区）疾控中心传染病科联
系，以便安排加急检测。
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临床标本的包装
标本必须放在大小适合的带螺旋盖内有橡胶圈的 塑料管里，拧紧；
将密闭后的标本放入大小适合的塑料袋内密封； 每袋装一份标本；
在采样管上用油性笔做好标记用塑料袋密封。同 时填写“流感/人禽流感监测病例标本原始登记 表”，用另一塑料袋密封；
h7n9h7n9广州医学院第一附属医院广州市第八人民医院广州市广州医学院第一附属医院广州市第八人民医院广州市妇女儿童医疗中心负责越秀区荔湾区天河区海珠妇女儿童医疗中心负责越秀区荔湾区天河区海珠区白云区黄埔区区白云区黄埔区萝岗区萝岗区广州开发区医院广州开发区医院番禺区番禺区番禺区中心医院番禺区中心医院南沙区南沙区南沙中心医院南沙中心医院花都区花都区花都区人民医院花都区人民医院增城市增城市增城市人民医院增城市人民医院从化市从化市从化市中心医院从化市中心医院采样排查采样排查采样对象
特殊样本（如已经院内会诊考虑禽流感、聚集性病例、死亡
病例）可绿色通道，加班检测。
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6.结果报告
普通临床排查标本一般需耗时3天；
特殊病例排查标本PCR结果当天可报；
对于排查禽流感的标本，实验室一般会同时做甲 型流感的检测！但不发报告！
人感染H7N9禽流感采样以及实验室检测技术
用真空负压采血管采集血液标本5ml，室温静置30分钟， 1500～2000rpm离心10分钟，收集血清于2ml无菌螺口塑料管 中。
样本采集方法 (5)
鼻咽抽取物或呼吸道抽取物：
用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取粘液或从气管抽取 呼吸道分泌物。先将收集器头部插入鼻腔或气管，接通负 压，旋转收集器头部并缓慢退出；收集抽取的粘液，并用 采样液3ml涮洗收集器1次（可用小孩导尿管接在50ml注射 器上来代替收集）。
注：应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤其是下呼 吸道标本）和发病7天内急性期血清以及间隔2-4周的恢复 期血清。
要求 呼吸道标本：发病早期采样，每份不少于3ml 血清标本每份分为2管，每管不少于0.5ml
样本采集方法 (1)
咽拭子：左手用压舌板压住患者舌头，右手用2根聚丙烯纤
维头的塑料杆拭子同时檫拭双侧咽扁桃体及咽后壁，应避免 接触舌头，将拭子头浸入含3ml采样液的管中，弃去尾部，旋 紧管盖。
胞分类计数减少； 4. 不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所
致的肺炎。
• 包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱 液和鼻洗液）；
◆下呼吸道标本（如气管吸取物、肺洗液、肺组织标本）；
◆ 血清标本；
◆ 如病人死亡，应当尽可能说服家属同意尸检，及时进行尸 体解剖，采集组织（如肺组织、气管、支气管组织）标本；
样本采集方法 (4)
鼻洗液 患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5 ml生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患 者同时发K音以关闭咽腔。然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧 杯收集洗液。重复此过程洗两侧鼻孔
漱口液 用10 ml生理盐水漱喉。漱时让患者头部微后仰，发“噢”声，让生理
盐水在咽部转动。然后，用50ml的无菌螺口塑料管收集洗液。
人禽流感标本采集及实验室检测技术方案
人禽流感标本采集及实验室检测技术方案为及时、科学地采集和运送人禽流感病例或疑似污染环境等各种类型的标本，规范实验室检测程序和检测方法，提高检测质量，明确诊断或开展相关科学研究，特制定本方案。
1 采集对象1.1 人禽流感医学观察病例、疑似病例、临床诊断病例及需要进一步研究的确诊病例。
1.2 其它需要进行人禽流感诊断或排除者。
1.3 需要采集的环境标本。
2 采集要求2.1 从事人禽流感检测标本采集的技术人员必须经过生物安全培训和具备相应的实验技能。
在标本采集过程中，采样人员参照（附件5）规定的防护措施进行安全防护。
2.2 住院病例的标本由所在医院医护人员在当地疾病预防控制机构专业人员指导下采集。
2.3 标本采集具体种类和数量由现场工作组确定。
2.4 密切接触者标本由当地疾病预防控制机构负责采集。
2.5 根据实验室检测工作的需要，结合病程再次采样。
3 标本种类每个病例应尽可能同时采集上、下呼吸道标本；需要排除人禽流感的死亡病例则依据《传染病病人或疑似传染病病人尸体解剖查验规定》（中华人民共和国卫生部令第43号）的规定采集尸体标本，没有条件进行尸体解剖的，可采集呼吸道灌洗液或经皮穿刺采集肺组织标本。
3.1 上呼吸道标本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、深咳痰液。
最佳采集时间为发病后3天内。
3.2 下呼吸道标本：包括呼吸道抽取物、支气管灌洗液、肺组织活检标本。
3.3 尸检标本：病人死亡后应依法尽早进行解剖，在严格按照生物安全防护的条件下，进行尸检，主要采集肺、气管组织标本，条件允许下也可采集肝、肾、脾、心脏、脑、淋巴结等组织标本。
3.4 血清标本：每一病例必须采集血清标本，须采集急性期、恢复期双份血清。
第一份血清应尽早（最好在发病后7天内）采集，第二份血清应在发病后第3～4周采集。
采集量要求5ml，以空腹血为佳，建议使用真空采血管。
3.5 其它标本：如果病例有腹泻症状，可在发病后采集粪便标本；有胸水者可采集胸水标本。
禽流感实验室检测技术方案
禽流感实验室检测技术方案禽流感，这个让无数人闻之色变的词汇，已经成为我们生活中无法回避的一部分。
如何快速、准确地检测出禽流感病毒，成为了当务之急。
今天，就让我来为大家详细介绍一下禽流感实验室检测技术方案。
我们需要明确检测的目标。
禽流感病毒有多种亚型，我们要检测的是哪些亚型，需要根据实际情况来确定。
一般来说，H5和H7亚型的禽流感病毒对我国养殖业和公共卫生安全威胁较大，因此，我们将重点检测这两种亚型。
我们要选择合适的检测方法。
目前，实验室检测禽流感病毒的主要方法有病毒分离、血清学检测和分子生物学检测。
病毒分离是传统的检测方法，准确性较高，但操作复杂，耗时较长。
血清学检测通过检测抗体来判断病毒感染情况，速度快，但准确性相对较低。
分子生物学检测，尤其是实时荧光定量PCR技术，具有高灵敏度、高特异性、快速简便等优点，成为近年来禽流感病毒检测的主流方法。
下面，我将详细介绍实时荧光定量PCR技术在禽流感实验室检测中的应用。
一、实验材料1.样本：采集疑似感染禽流感的家禽咽喉拭子、泄殖腔拭子等。
2.试剂：实时荧光定量PCR试剂盒、病毒提取试剂盒等。
3.仪器：实时荧光定量PCR仪、离心机、恒温箱等。
二、实验步骤1.样本处理：将采集的拭子样本放入病毒提取试剂盒中，按照说明书操作，提取病毒RNA。
2.模板制备：将提取的病毒RNA与实时荧光定量PCR试剂盒中的缓冲液、酶混合，进行模板制备。
4.结果分析：观察实时荧光定量PCR仪上的扩增曲线和溶解曲线，判断样本是否为阳性。
三、注意事项1.实验过程中要严格遵循无菌操作原则，防止样本污染。
2.实验室人员要具备一定的分子生物学实验技能，确保实验顺利进行。
3.实验结果要及时记录，并与临床诊断相结合，为疫情防控提供有力支持。
通过实时荧光定量PCR技术，我们可以快速、准确地检测出禽流感病毒，为我国养殖业和公共卫生安全保驾护航。
当然，实验室检测只是禽流感防控工作的一部分，我们还需要加强疫情监测、疫苗接种、生物安全等措施，共同抵御禽流感病毒的侵袭。
禽流感实验室检测方法
禽流感实验室检测方法一、标本的采集与处理(一)标本的采集1、病毒分离标本的采集病毒分离成功与否很大程度上取决于采集标本的质量，及其保存、运输等环节。
多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物，有时也采用肺活检材料等。
标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存，常用的采样液为：普通肉汤，pH7.4-7.6的Hank's、Eagle's或水解乳蛋白液。
为防止细菌和真菌生长，在采样液中需加入抗菌素，以往抗菌素多用青、链霉素，近来发现不少种类细菌对它们具有耐药性，故近来多用庆大霉素（其终浓度为每ml采样液中加入0.1 ml的10mg/ml）和抗真菌药物（终浓度为每毫升采样液中加入0.008 ml的250ug/ ml）。
主要的采集方法有以下几种：1)鼻拭子：将棉签轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。
以同一拭子拭两侧鼻孔。
将棉签浸入4-5 ml采样液中，尾部弃去。
2)咽拭子：用棉签擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，同样将棉签头浸入4-5 ml 采样液中，尾部弃去。
注：亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高分离率，减少工作量。
3)鼻咽抽取物：用与负压泵相连的收集器（国外有售）从鼻咽部抽取粘液。
先将收集器头部插入鼻腔，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。
收集抽取的粘液，并用采样液涮洗收集器3次。
由于该收集器国内难买到，也可采用国内一种设计装置（见郭元吉、程小雯著，流行性感冒病毒及其实验技术。
中国三峡出版社P186，1997）。
4)鼻洗液：患者取坐姿，头微后仰，用移液管将1-1.5ml洗液注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。
然后让患者低头使洗液流出，用平皿或烧杯收集洗液。
重复此过程数次。
洗两侧鼻孔最多可用10-15 ml洗液。
5)漱口液：用10 ml洗液漱口。
漱时让患者头部微后仰，发“噢声”，让洗液在咽部转动。
然后，用平皿或烧杯收集洗液。
注：取鼻洗液和漱口液时，需预先了解患者是否对抗菌素有过敏史，如有则洗液和含漱液中不应含有抗菌素。
人感染H7N9禽流感病毒标本采集-北仑区人民医院
北仑区人民医院检验科人感染H7N9禽流感病毒标本采集、保存、运送实验活动要求根据浙江省卫生厅《关于做好人感染H7N9禽流感病毒实验活动生物安全管理工作的通知》未经培养的临床样本应当在已经市卫生局备案的生物安全二级实验室生物安全柜内分装、灭活和核酸提取。
在生物安全二级实验室开展实验活动时，个人防护应当佩戴眼罩、N95及以上水平的口罩等防护装备。
根据《人感染H7N9禽流感疫情防控方案（第一版）》规定，H7N9禽流感病毒实验室活动和样本运输按照《人间传染的病原微生物名录》中高致病性禽流感病毒进行管理。
原始标本采集呼吸道病毒的诊断取决于高质量标本的采集，及其保存运输等环节。
多数标本取自患者上呼吸道鼻咽腔，其次为气管和支气管分泌物及尸检组织。
标本采集后应立即放入适当的采样液中低温保存。
标本采集人员医疗机构的医生、护士或疾病预防控制中心专业人员负责标本采集并填写标本登记表，标本采集人员按照相关要求做好个人防护。
采集前的准备防护用品：1.口罩(N-95 or N/P/R-100)2.手套3.帽子4.鞋套5.防护服6.防护目镜采集物品包参考下图：常用的采样液/病毒运输液(VTM）1.pH 7.4～7.6的Hanks液2.MEM/DMEM液在采样液中需加入抗菌素，可用青霉素（终浓度为100U/ml）、庆大霉素（终浓度为1mg/ml）和抗真菌药物（终浓度为2µg/ml）。
在无菌的带螺旋塑料管分装2-3ml采样液。
采样拭子：使用头部为聚酯纤维的病毒采样拭子（鼻及口咽型），铝或塑料做柄，不推荐棉拭子和木柄。
采集对象1.监测病例，同时具备以下4项条件的病例：（1）发热(腋下体温≥38℃)；（2）具有肺炎的影像学特征；（3）发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细胞分类计数减少；（4）不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致肺炎。
2.人感染H7N9禽流感疑似病例与确诊病例，定义参照《人感染H7N9禽流感诊疗方案（2013年第1版）》标本种类上呼吸道标本：咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液下呼吸道标本：气管吸取物、肺洗液、肺组织标本血清标本：发病7天内急性期血清和间隔2-4周的恢复期血清如病人死亡，可采集组织标本：肺组织、气管、支气管组织等注意事项：1.应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤其是下呼吸道标本）。
人感染禽流感防控样本采集检测与运送要求市刘爱平
2*reaction buffer 酶 上游引物 下游引物 探针 H2O 模板
12.5ul 0.5ul 0.25ul 0.25ul 0.125ul 6.375ul
5ul 25ul
2024/4/7
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PCR反响条件
2024/4/7
25
➢呼吸道灌洗液：
➢ 将收集器头部从鼻孔或气管插口处插入气 管〔约30cm深处〕，注入5ml生理盐水，接
通负压，旋转收集器头部并缓慢退出；收
集抽取的粘液，并用采样液涮洗收集器1次
〔可用小孩导尿管接在50ml注射器上来代
2024/4/7
9
➢ 咽漱液：用10 ml生理盐水漱喉。漱时让患者头部 微后仰，发“噢〞声，让生理盐水在咽部转动，然 后，用50ml的无菌螺口塑料管收集洗液。
➢ 禽类粪便：选择禽舍或环境中的新鲜禽类粪便，用无菌拭子 夹或挑取粪便3-5g置于含5ml采样液的管中，弃去尾部，旋 紧管盖。
➢ 笼具涂抹拭子：用蘸有采样液的拭子擦拭笼具外表禽类最常 接触的3-5个不同部位〔包括笼具底部〕，然后将擦拭过的 拭子放入含5ml采样液的采样管中，弃去尾部，旋紧管盖。 也可以用多个拭子充分擦拭笼具外表后放到一个采样管中。
➢ 甲型阳性H5、H7亚型阴性的标本继续开展季节性 流感病毒核酸检测和流感病毒别离，毒株上送省 CDC复核。
➢ 甲型通用引物阳性而不能区分型别或亚型的毒株 和阳性标本要求在48小时内送至国家流感中心〔 24小时内送至省CDC〕。
没有条件开展 核酸检测的医 疗机构请尽快 开展快速抗原 检测初筛试验。
➢ 甲型通用引物阳性而不能区分型别或亚型的毒株 和阳性标本要求在48小时内送至国家流感中心〔 24小时内送至省CDC〕。
H7N9排查病例
H7N9禽流感病毒实验室检测及防控措施
禽流感病毒是一种具有较强传染能力的病
死性炎症。在进行实验室检测时，通常需要先确
毒，主要在禽类之间传播。家禽饲养行业的发展
定病症的种类以及病症的严重程度。为了提高检
规模不断扩大，如何保障饲养工作的科学性和合
验工作的准确性，兽医还会采用抽血化验的方
理性，避免带来环境污染问题和给养殖者造成经
式，对家禽的血清标本进行检测，以确定疾病的
的羊比较容易感染这种病症，方便有针对性地制定
史称“软肾病”。本病在临床症状上与羊快疫相似，
防控对策。结合数据资料的统计结果可以看出，一
有些地区也称之为“类快疫”
。羊肠毒血症最早出现
般情况下，绵羊和山羊比较容易感染该病症。且该
在我国内蒙古地区，后来随着羊群不断引种和羊肉
疾病没有明显的日龄特征，羊只幼崽、怀孕的母羊
和通风工作。尤其要关注圈舍内的环境是否过于
表示家禽感染了禽流感病毒，需要及时采取治疗
潮湿，潮湿的环境容易滋生细菌，给病毒提供传
措施。
播的空间，需要养殖场引起重视。
1.2
2.2
病毒鉴定
禽流感可引起家禽全身广泛出血和多器官坏
疾病治疗工作
在实际展开对 H7N9 禽流感病毒的治疗工作
收稿日期：2021-03-18
差比较大的情况时，就会出现该病症。而且，这种
收稿日期：2021-03-02
作者简介：徐义双（l970—），男，吉林德惠人，助理兽医师，主要从事动物防疫工作。
时，兽医应当对于区域内出现的禽流感病例进行统
文章编号：1001-0084（2021）05-0091-02
羊肠毒血症是羊的一种急性毒血症传染病，是
由 D 型产气荚膜梭菌，即魏氏梭菌造成的。病原菌
人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实验室检测策略
人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实验室检测策略一、标本采集、转送和检测（一）标本采集为进行病例诊断，医疗机构应尽早采集病人的相关临床样本。
采集的临床标本包括病人的上呼吸道标本（如咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液）、下呼吸道标本（如气管吸取物、肺洗液、肺组织标本）和血清标本等。
应当尽量采集病例发病早期的呼吸道标本（尤其是下呼吸道标本）和发病7天内急性期血清以及间隔2-4周的恢复期血清。
如病人死亡，应当尽可能说服家属同意尸检，及时进行尸体解剖，采集组织（如肺组织、气管、支气管组织）标本。
医疗机构采集的呼吸道标本每份不少于3ml。
血清标本每份分为2管，每管不少于0.5ml。
对人感染H7N9禽流感确诊病例可能暴露的禽类饲养或交易等场所，由疾控机构采集禽类粪便、笼具涂拭标本和环境污水等标本，技术要求参考《职业暴露人群血清学和环境高致病性禽流感监测方案（2011年版）》。
（二）医疗机构标本检测和转送1. 病例的临床标本采集后，有条件开展核酸检测的医疗机构要对呼吸道标本开展H7N9禽病毒核酸检测，没有条件开展核酸检测的医疗机构应立即利用快速抗原检测试剂进行甲型流感病毒抗原检测，H7N9禽流感病毒核酸检测阳性的临床标本按照B类感染性物质进行包装运输，在低温条件下，48小时内送到当地流感监测网络实验室，由当地流感监测网络实验室上送到省级疾控中心网络实验室。
甲型快速抗原检测阳性的标本，按上述相同的包装要求24小时内送当地流感监测网络实验室开展核酸检测。
2、没有条件开展上述检测工作的医疗卫生机构发现符合病例定义的病例后，要立即采集相关标本，按照B类感染性物质进行包装运输，在低温条件下，24小时内送到当地流感监测网络实验室。
3、流感网络实验室的检测策略（流程图见附件）流感网络实验室收检的呼吸道标本每份分为3管，每管应不少于1ml。
1管用于检测，另外2管用于复核和病毒分离。
标本储存应在-70℃或以下温度，避免反复冻融。
H7N9禽流感样本采集及实验室检测
• 有病原学检测条件的医疗机构应尽快检测 • 无病原学检测条件的医疗机构应留取标本 送指定机构检测
谁负责采集样本？
当医务人员（医疗机构应尽早采集
病人的相关临床样本 ）怀疑病人感染
测方案（2011年版）
全国流感监测方案（2010年版）
人感染H7N9禽流感 样本采集及实验室检测
INNER MONGOLIA CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION
一、标本采集
标本的种类 ？ 标本的数量 ？ 采集时间 ？ 标本保存、运送 ？
标本留取和检测原则
• 抗病毒治疗之前必须采集呼吸道4-9月每月采集相关标本20份 ，10月-次年3月每周采集20份标本，送 当地流感监测网络实验室开展检测。
具体方案
人感染H7N9禽流感疫情防控方案（第3版）
人感染H7N9禽流感诊疗方案（2014年版）
人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实验室检
测策略
职业暴露人群血清学和环境高致病性禽流感监
标本采集量及分装
医疗机构采集的
呼吸道标本每份不少于3ml
血清标本每份分为2管，每管不少于0.5ml
标本采集要求
无菌操作：采样人员须以无菌操作采集各类标本。 采集标本所使用的容器、采样液等均应无菌。 每份标本必须标明标本编号、标本种类及采集日期。 采集单位应指定专人负责标本信息的登记、收集和管 理，详细记录信息。 所有标本的收集、运输和保藏都应装在有螺旋盖的 塑料管中，以防止开、关标本管时产生气溶胶，并用 两层清洁塑料袋包裹严实。 采集的标本应立即送当地疾病预防控制机构，同时 附上标本送检单。如不能立即送交，可置 -20℃以下 冰箱短暂保存（24小时之内）。
人感染高致病性禽流感标本采集及实验室检测技术方案
人感染高致病性禽流感标本采集及实验室检测技术方案一、采集对象二、采集要求三、标本种类四、标本采集方法五、标本包装六、标本保存七、标本送检八、实验室生物安全九、标本的实验室检测十、检测结果的判断和报告十一、实验室检测流程十二、人禽流感实验室检测职责为及时、科学地采集和运送人禽流感病例或疑似污染环境等各种类型的标本，规范实验室检测程序和检测方法，提高检测质量，明确诊断或开展相关科学研究，特制定本方案。
一、采集对象1. 人禽流感医学观察病例、疑似病例、临床诊断病例及需要进一步研究的确诊病例。
2. 其他需要进行人禽流感诊断或排除者。
3. 需要采集的环境标本。
二、采集要求1. 从事人禽流感检测标本采集的技术人员必须经过生物安全培训和具备相应的实验技能。
在标本采集过程中，采样人员参照规定的防护措施进行安全防护。
2. 住院病例的标本由所在医院医护人员在当地疾病预防控制机构专业人员指导下采集。
3. 标本采集具体种类和数量由现场工作组确定。
4. 密切接触者标本由当地疾病预防控制机构负责采集。
5. 根据实验室检测工作的需要，结合病程再次采样。
三、标本种类每个病例应尽可能同时采集上、下呼吸道标本；需要排除人禽流感的死亡病例则依据《传染病病人或疑似传染病病人尸体解剖查验规定》（中华人民共和国卫生部令第43号）的规定采集尸体标本，没有条件进行尸体解剖的，可采集呼吸道灌洗液或经皮穿刺采集肺组织标本。
1. 上呼吸道标本：包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液、深咳痰液。
最佳采集时间为发病后3天内。
2. 下呼吸道标本：包括呼吸道抽取物、支气管灌洗液、肺组织活检标本。
3. 尸检标本：病人死亡后应依法尽早进行解剖，在严格按照生物安全防护的条件下，进行尸检，主要采集肺、气管组织标本，条件允许下也可采集肝、肾、脾、心脏、脑、淋巴结等组织标本。
4. 血清标本：每一病例必须采集血清标本，须采集急性期、恢复期双份血清。
第一份血清应尽早（最好在发病后7天内）采集，第二份血清应在发病后第3～4周采集。
人感染H7N9禽流感病毒标本采集、运送及保存
100 A/chicken/Karachi/NARC-23/2003_H7N3_Pakistan A/quail/Aichi/1/2009_H7N6_Japan
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A/duck/Hong_Kong/301/1978_H7N2_Hong_Kong
A/black_kite/Egypt/054/2004_H7N7_Egypt
时-70℃冻存。流感病毒在-20℃～-40℃时不稳 定，故长期保存应在-70℃温度以下，不要冻存 于-20℃，会降低流感病毒的检出率 ➢ 避免反复冻融，冰上一周也比冻融一次要好 ➢ 血清标本暂时存在可在4℃冰箱，长期保存于20℃冰箱。
标本包装和运输
➢ 根据《人感染H7N9禽流感疫情防控方案（第一 版）》规定，H7N9禽流感病毒实验室活动和样本 运输按照《人间传染的病原微生物名录》中高致 病性禽流感病毒进行管理
在无菌的带螺旋塑料管分装2-3ml采样液。最好储存在:– 20℃,4℃可放48–96h,室温1–2天。
➢ 采样拭子：使用头部为聚酯纤维的病毒采样拭子（鼻 及口咽型），铝或塑料做柄，不推荐棉拭子和木柄
采集对象
1.监测病例，同时具备以下4项条件的病例： （1）发热(腋下体温≥38℃)； （2）具有肺炎的影像学特征； （3）发病早期白细胞总数降低或正常,或淋巴细胞分类计 数减少； （4）不能从临床或实验室角度诊断为常见病原所致肺炎。
核酸检测流程
• 若检测结果为甲型通用阳性，H7N9阴性，送剩余 的2份呼吸道相关原始标本送当地市级流感网络实 验室进行其他流感病毒型别鉴定；
• 市级流感网络实验室若不能分型或H5阳性标本应 立即送省级疾控中心流感参比实验室；
• 若检测结果全部阴性，将剩余的2份呼吸道相关原 始标本送省级疾控中心进行SARS、新冠状等病原 体检测；
禽流感实验室采样
禽流感实验室采样一、原始标本采集1、标本采集由医生、护士或疾病预防控制中心专业人员负责标本采集并填写标本登记表，标本采集人员按照《禽流感职业暴露人员防护原则》做好个人防护。
2、标本采集种类和时限（1）采集标本的种类：疑似禽流感患者的咽、鼻拭子或含漱液、血清以及死亡病例的尸检肺组织、气管分泌物。
（2）采集标本时间：①咽、鼻拭子或含漱液在发病的头3天采集；②急性期血清在发病后7天内采集，恢复期血清在发病后2-4周采集；③尸检标本尸检时采集。
3、标本的运送所有采集的标本应在医院采集时立即分装，一式两份，其中一份单独保存，以备复核，采集的标本若不能在24小时内送达，则应尽快在一70℃以下保存。
无一70℃条件的需在一20℃冰箱短时间暂存，井尽快联系递送标本。
4、标本采集的方法（1）鼻拭子将带有聚丙烯纤维头的拭子轻轻插入鼻道内鼻愕处，停留片刻后缓慢转动退出。
以另一拭子拭另侧鼻孔。
将拭子头浸入4-5m1采样液中，尾部弃去。
然后，塞紧或盖好管盖。
（2）咽拭子用带有聚丙烯纤维头的拭子擦拭两侧咽扁桃体及咽后壁，同样将拭子头浸入4-5m1采样液中，尾部弃去，塞紧或盖好管盖。
注：亦可将鼻、咽拭子收集于同一采样管中，以便提高分离率，减少工作量。
（3）鼻咽抽取物或抽取气管和支气管分泌物用与负压泵相连的收集器从鼻咽部抽取枯液或从气管抽取气管和支气管分泌物。
先将收集器头部插入鼻腔或气管，接通负压，旋转收集器头部并缓慢退出。
收集抽取的粘液，并用采样液5m1测洗收集器3次。
近来国内有用小孩导尿管接在50m1注射器上来替代收集器。
（4）漱口液用10m1采样液（生理盐水）漱喉。
漱时让患者头部微后仰，发吱声，让洗液在咽部转动。
然后，用平皿或烧杯收集漱液。
（5）鼻洗液：患者取坐姿，头微后仰，用移液管将5m1生理盐水注入一侧鼻孔，嘱患者同时发K音以关闭咽腔。
然后让患者低头使生理盐水流出，用平皿或烧杯收集洗液。
重复此过程洗两侧鼻孔。
（6）肺活检材料肺活检组织在无菌条件下，用灭菌过的乳钵磨碎，用生理盐水配成20%悬液，2000rpm离心10min，取上清加入抗菌素＜X、链霉素，或庆大霉素和抗真菌素）。
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测方案（2011年版）
全国流感监测方案（2010年版）
人感染H7N9禽流感 样本采集及实验室检测
INNER MONGOLIA CENTER FOR DISEASE CONTROL AND PREVENTION
一、标本采集
标本的种类 ？ 标本的数量 ？ 采集时间 ？ 标本保存、运送 ？
标本留取和检测原则
• 抗病毒治疗之前必须采集呼吸道标本送检
H7N9禽流感病毒时，应当尽早采集其上、
下呼吸道标本（尤其是下呼吸道标本）
和发病7天内急性期血清以及与急性期血
清采集时间间隔2-4周的血清等。
标本类型 - 采集的临床标本
1.上呼吸道标本（如咽拭子、鼻拭子、鼻咽 抽取物、咽漱液和鼻洗液）——发病早期 2.下呼吸道标本（如气管吸取物、肺洗液、 有人工气道者优先采集气道内吸取物（ETA）。 肺组织标本）——发病早期 3.血清标本。发病7天内急性期血清以及间隔 2-4周的恢复期血清。 4.如病人死亡，应当尽可能说服家属同意尸 检，及时进行尸体解剖，采集组织（如肺组织、 气管、支气管组织）标本。
医疗机构标本检测和转送
标本采集、包装、运送等应当严格按
照《可感染人类的高致病性病原微生物菌
（毒）种或样本运输管理规定》（原卫生
部令第45号）等生物安全相关规定执行。
加强重点地区环境标本的采集与检测工作
各级疾控机构要加强对活禽市场
和家禽养殖场等重点地区环境标本的
采集与检测工作。 第三版防控方案提
加强重点地区环境标本的采集与检测工作 对人感染H7N9禽流感确诊病例可能 暴露的禽类饲养或交易等场所，由疾控 机构采集禽类粪便、笼具涂拭标本和环 境污水等标本。 技术要求参考： 《职业暴露人群血清学和环境高致病 性禽流感监测方案（2011年版）》
人感染H7N9禽流感病毒实验室检测策略流程图
四、工作要求
国务院领导的批示精神和李斌主任的 视频工作会议要求都明确提出病原学 监测是一个工作重点 (2014年1月26日)
人感染H7N9禽流感疫情防控方案（第
3版）明确提出病毒变异监测的要求
医疗机构的要求
有条件开展核酸检测的医疗机构要对呼吸道 标本开展H7N9禽流感病毒核酸检测，进行 病例诊断； 没有条件开展核酸检测的医疗机构应当尽快 利用快速抗原检测试剂进行甲型流感病毒抗 原检测，并将阳性标本送当地流感监测网络 实验室进一步开展H7N9禽流感病毒核酸检 测； 完成强化监测时标本的采集和数据的上送。
标本采集量及分装
医疗机构采集的
呼吸道标本每份不少于3ml血清标ຫໍສະໝຸດ 每份分为2管，每管不少于0.5ml
标本采集要求
无菌操作：采样人员须以无菌操作采集各类标本。 采集标本所使用的容器、采样液等均应无菌。 每份标本必须标明标本编号、标本种类及采集日期。 采集单位应指定专人负责标本信息的登记、收集和管 理，详细记录信息。 所有标本的收集、运输和保藏都应装在有螺旋盖的 塑料管中，以防止开、关标本管时产生气溶胶，并用 两层清洁塑料袋包裹严实。 采集的标本应立即送当地疾病预防控制机构，同时 附上标本送检单。如不能立即送交，可置 -20℃以下 冰箱短暂保存（24小时之内）。
– 鼻咽分泌物 – 口腔含漱液 – 气管吸出物或呼吸道上皮细胞 气管深部咳痰或气管吸出物检测阳性率高于上呼吸道标本。
• 有病原学检测条件的医疗机构应尽快检测 • 无病原学检测条件的医疗机构应留取标本 送指定机构检测
谁负责采集样本？
当医务人员（医疗机构应尽早采集
病人的相关临床样本 ）怀疑病人感染
医疗机构的要求
北方省份4-9月每月采集相关标本20份 ，10月-次年3月每周采集20份标本，送 当地流感监测网络实验室开展检测。
具体方案
人感染H7N9禽流感疫情防控方案（第3版）
人感染H7N9禽流感诊疗方案（2014年版）
人感染H7N9禽流感病毒标本采集及实验室检
测策略
职业暴露人群血清学和环境高致病性禽流感监