抗体工程制药PPT课件

抗原刺激的第一至三周，IgM生成；抗原再 刺激后， IgＧ将取代IgM
动物血清中产生抗体的时间示意图
抗体研究的发展阶段：
①以1890年Behring发现白喉抗毒素为代表,用 抗原免疫动物来获得多克隆抗体。
②以1975年Milstein & Kohler创建杂交瘤技
术制备单克隆抗体(McAb)为代表。 ③以1994年Winter,创建了噬菌体抗体库
4.免疫方法: 体外免疫法；体内免疫法
体内免疫法 ---- 颗粒性抗原(如细菌、细胞)
的免疫原性强,可不加佐剂,可溶性抗原则按每 只小鼠10-100ug抗原与弗氏完全佐剂等量混 合后注入腹腔内.
弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant,FCA）: 由矿物油（如降脂烷或
第七章 抗体工程制药
一.概述
抗体(工程)制药—生物技术制药领 域的重要组成部分
抗 原(antigen,Ag)
---是指那些能够刺激和/或诱导机体免疫 系统发生免疫应答、产生抗体和/或致敏 （效应）淋巴细胞，同时又能与免疫应 答产物在体内外特异性结合，发生免疫 反应的物质。
如：病原微生物、免疫血清、药物、疫苗 对机体来说，抗原相当于一个国家已知
二. 单克隆抗体的制备
McAb（Monoclonal antibody，单克隆抗体）：
将在体外不能长期传代的抗体产生细胞（如 Balb/C小鼠的免疫脾细胞）与在体外能迅速增殖并带 有抗药标记的骨髓瘤细胞（如小鼠的NS-1或SP2/0）在 聚乙二醇（PEG）作用下融合，然后利用抗药性标记 和经稀释法选出单个产生抗体的杂交瘤细胞，再用血 清学方法证实其与抗原结合的特异性和亲和力。这样 的杂交瘤细胞能长期（第二代抗体）。
的或潜在的、外部的或内部的“敌人”
。
免疫原性：指能刺激机体产生抗体和/或致 敏淋巴细胞的性能。
反应原性：能与相应的抗体和/或淋巴细胞 发生特异性结合，发生反应的性能。
4
完全抗原：既具有免疫原性，又具有反应原性的抗原。
如微生物、异种血清
半抗原：又称不完全抗原。是指其本身只有反应原性，
但没有免疫原性的简单小分子的抗原物质。如 某些药物（青霉素，等）、多糖、类脂。
5
目前，在中草药中发现广泛存在半抗原，如 小檗碱、茶碱、丹参酮等，具有生化活性 基因的化学成分都有可能成为半抗原，这 些半抗原可与体内蛋白质结合成完全抗原 ，造成一些过敏反应。
6
抗原的特异性既表现在免疫原性上，也表现 在反应原性上。
大 肠 杆 菌
沙 门 氏 杆 菌
结合
抗大肠杆菌的抗体
结合
抗沙门氏杆菌的抗体
由一个抗原决定簇刺激的、单一的B 细胞和骨髓瘤细胞融合增殖后所产生的、 高度均一的抗体。
多克隆抗体和单克隆抗体
Antigen 31 2 4 Immunization
12 3
Adapted from Milstein (1980) Scientific American, Oct. p.58
1 3
2 4
(repertoire of antibodies displayed on phages)技术,以基因工程方法制备抗体为代 表。在此基础上发展成抗体工程。
• 多克隆抗体:
31 24
一种抗原具有多个抗原决定簇,每个
抗原决定簇都能刺激一个B细胞产生一种
抗体。这样所获得的免疫血清是多种抗
体的混和物。
• 单克隆抗体(Monoclonal antibody McAb):
• IgG在血清中含量最高，达75~80%,是抗感染
的主要抗体;
• IgM是五类免疫球蛋白中分子量最大的，为
五聚体,是对一个抗原作出反应时产生的
第一个抗体；
• IgA在黏膜表面、乳腺、泪腺形成，主要参
与局部的免疫反应;
免疫球蛋白
• IgD在血清中含量很低;
• IgE在血清含量最少。 IgG IgM IgA IgD IgE
二.单克隆抗体的制备
单 克 隆 抗 体 制 备 过 程 图 解
单 克 隆 抗 体 制 备 过 程 图 解
一.抗原与动物免疫
1.抗原选择 — 完整细胞(肿瘤细胞)；可溶 性蛋白质或多肽;
2.免疫动物 — 小鼠(Balb/C,鼠龄6-8周)或 大鼠 (Lou);
3.常用的骨髓瘤细胞系— SP2/0，P3.653细 胞，都是次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (HGPRT)的缺乏株。
7
抗体：能与相应抗原特异性结合的具有
免疫功能的球蛋白。
免疫球蛋白的结构
抗体的产生过程：
机体免疫系统受抗原
物质刺激后，B淋巴 细胞被激活，增殖和
分化为浆细胞，由浆 细胞合成和分泌的球 蛋白。
免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)分子量范
围从150,000到950,000道尔顿。分五类：
m m
m m
Spleen cells
B cell
1
+ Myeloma
4
23 4
Cell fusion
x
31 24
12 34
Antiseum
A mixture of all Ab
Monoclonal antibodies
Pure single Ab
If a single B cell was picked up and cultured, then it will prod uce only one kind of antibody. BIfAECuBfaottecncBhrveceilBmlenislmtclioecfunallnsanpiezlrndaaoontdwitotuiissntchue,errtmsvhuiomeyvneemillsoywomoteuhnlaslee,lolaimdnnysit,gibBwhothcdbeiiceelhlsscbppuirrnltooudddrsuuetccoeinidgd atnsbdssyppBereocccdiifefuiicclclsaeanfnartotinibgmtoiebdsnoip.edlsye.en. Each hybridoma line can produce pure single antibody, called mon oclonal antibody.