补体依赖的细胞毒实验 ppt课件

需要收回的
剪刀、镊子、 玻璃培养皿。
实验目的
1
细胞毒实验的原理
2
补体依赖细胞毒实 验的原理及基本操 作步骤
3
补体依赖细胞毒实 验的应用
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实验原理
抗原与抗体结合
+ 补体
台盼蓝染液
操作步骤
一、小鼠胸腺细胞悬 液的制备
4~6周龄小鼠断颈 处死，取出胸腺放至含 有3 mL RPMI 1640培 养液的平皿中，以剪刀 和镊子将组织处理成单 细胞悬液，利用移液器 取出后放入试管内备用。
结果观察
台盼蓝染色：如 果细胞膜不完整、破 裂，台盼蓝染料进入 细胞，细胞变蓝。 如 果细胞膜完整，细胞 不为台盼蓝染色，则 为正常细胞或凋亡细 胞。此方法对反映细 胞膜的完整性，区别 坏死细胞有意义。
A A. 对照组
B B. 实验组
注意事项： 台盼蓝染色后放置时间不能太长，否则出现假阳性。
本次实验目的
注意事项： 台盼蓝染色后放置时间不能太长，5min之内观察结果，否则出 现假阳性，需要重新染色。 www.themegallery.com LOGO
补体依赖细胞毒实验的应 用

检查细胞膜抗原
鉴定抗体的特异性 微量淋巴细胞毒试验 检测人体的组织相容性



选择性地去除某一细胞亚群
补体依赖的细胞毒实验
Complement-dependent cytotoxicity
补体的作用和激活途 径

补体的作用
溶菌和溶细胞 促进中和溶解病毒 调理吞噬 炎症介质

补体的激活途径
经典途径
旁路途径
MBL途径
实验主要材料
实验材料
1. 小鼠 2. 抗血清（Ab ） 3. 补体 新鲜豚鼠 血（补) 4. RPMI 1640培 养液，载玻片 、盖玻片、一 次性试管 5. 台盼蓝染色液
1
掌握细胞毒实验 的原理
2
补体依赖细胞毒实 验基本操作步骤
3
了解补体依赖细胞 毒实验的应用
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实验原理
抗原与抗体结合
+ 补体
台盼蓝染液
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实验主要材料
实验材料
1. 小鼠 2. 抗血清（Ab） 3. 补体 新鲜豚 鼠血（补） 4. PBS缓冲液， 载玻片、盖玻 片、一次性试 管 5. 台盼蓝染色液
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操作步骤
二、细胞毒实验：
按下表加样
PBS
振荡混匀，置37C水浴箱，10min
Ag+Ab
振荡混匀，置37C水浴箱，20min 各加100 ul 0.4%台盼蓝，混匀，室温2min
complement
振荡混匀，滴片加盖玻片，镜检
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胸腺
注意事项： 小鼠断颈要迅速、彻底，以防小鼠挣扎过程中出血过多，也可事 先摘眼球放血。
操作步骤
二、细胞毒实验：
按下表加样
振荡混匀，置37C水浴箱，10min
Ag+Ab
振荡混匀，置37C水浴箱，20min 0.4%台盼蓝 各管加1滴，混匀，室温2min
+ complement
振荡混匀，滴片加盖玻片，镜检
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结果观察
台盼蓝染色：如果细 胞膜不完整、破裂，台盼 蓝染料进入细胞，细胞变 蓝。 如果细胞膜完整，细 胞不为台盼蓝染色，则为 正常细胞或凋亡细胞。此 方法对反映细胞膜的完整 性，区别坏死细胞有意义。 计算杀伤率： 在高倍镜下计数200个细胞中死细胞的 百分率
A A. 对照组
B B. 实验组
需要收回的
剪刀、镊子、铜网 玻璃培养皿。
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操作步骤
一、小鼠胸腺细胞悬 液的制备
4~6周龄小鼠断颈 处死，取出胸腺放至含 有3 mL RPMI 1640培 养液的平皿中，以剪刀 和镊子将组织处理成单 细胞悬液，利用移液器 取出后放入试管内备用。
胸腺
注意事项： 小鼠断颈要迅速、彻底，以防小鼠挣扎过程中出血过多，也可事 先摘眼球放血。