高效液相色谱!串联质谱法分析姜黄中微量的姜黄素类化合物

! 第"期 亦日趋活跃。
李 ! 伟， 等： 高效液相色谱 ! 串联质谱法分析姜黄中微量的姜黄素类化合物
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! $ $" 标准溶液的配制 ! ! 分 别 准 确 称 取 &+ ) <8 姜 黄 素、 去甲氧基姜黄 素、 二去甲氧基姜黄素标准品， 用乙腈溶解并定容至 )’ <$ 容量瓶 中， 配 制 成 ’+ ’) 8 * $ 混 合 标 准 溶 液， 于 ( ? 下保存。 ! $ %" 色谱条件 ! ! 色谱柱： ).15=6=5@ %#, 柱 （ &)’ << - (+ % << ， ) !<， 大连依利特 公 司 ） 。 流 动 相： , 相 为 ’+ # A 甲 酸， B 相为乙腈。样品的梯度洗 脱条件： ’ " () <.0 ， #’ A B "#’’ A B ； () ")’ <.0 ， #’’ A B 。 标准 品的等 度洗脱条件： ’ " , <.0 ， .’ A B 。 流 速 #+ ’ <$ * <.0 。 柱温 "’ ? ； 检测波长 &)( 0< ； 进样量 ) ! $ 。 ! $ &" 质谱条件 ! ! 电喷雾 离 子 源 （ &’( ） ； 正 离 子 扫 描； )+) 模 式 检测； 喷雾电压 (+ ) CD ； 毛细管 温 度 ")’ ? ； 吹扫气 压力 #".+ * C#/ ； 辅助气 流 速 #’ <$ * <.0 ； 质量扫描 范围 ! " # #’’ / # ’’’ ； 二级质谱碰撞能量 （ %(E ） ： &’ 2D 。 ! $ ’" 样品前处理 ! ! 准确取干燥粉碎的姜黄根茎 # 8 置于 )’ <$ 具 塞锥形瓶中， 加入 #’ <$ 无 水 乙 醇， 混 匀， 超声萃取 "’ <.0 ， 过滤。再次加 入 #’ <$ 无 水 乙 醇 重 复 萃 取 # 次。过滤后 合 并 滤 液， 以 无 水 乙 醇 定 容 于 &) <$ 容量瓶中， 以 ’+ && ! < 有机滤膜过滤， 滤液供分析。
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。姜黄素类化 合 物 为 * ， %, 二苯基庚烃类
（ "(** ） +(&%#$*# ，+,-".& ：&."/01- , 2.34’ "3’ 3/’ ! 通讯联系人：梁鑫淼，研究员，主要研究方向为中药的分离分析 ’ )*& ： 基金项目：国 家 杰 出 青 年 科 学 基 金 项 目 （ !"+!$$*+ ） 、 科技部国际合作项目 （ !""% 567&"$$" ） 、 辽宁省科技计划重大项目 （ !""’!!’""! ） 和大连市科技计划项目 （ !""% 8!& 89"&! ） ’ 收稿日期：!""# ,"& ,**
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（ 2.":#&G*4K"/%.2; ） 成 分， 其 中 以 姜 黄 素、 去甲氧基 姜黄素和二去甲氧基姜黄素最为常见。近年来国内 外许多文献相继 报 道 了 姜 黄 素 类 化 合 物 具 有 抗 癌、 抗氧化、 抗艾滋病、 抗老年痴呆、 抗炎、 降血脂和保肝 等广泛的药理活性［ ( 0 *" ］， 因此对这类化合物的研究
! ! 姜黄素类化合物的常用检测方法有高效液相色 谱法、 薄层扫描法、 分光光度法。但这些方法只能检 测上述 " 个 常 量 的 姜 黄 素 类 化 合 物
［ ## $ #% ］
。姜黄属
植物中还含有许多 微 量 的 姜 黄 素 类 化 合 物， 许多研 究表明这些微量成分与 " 个常量成分有着相似甚 至 因此分析检测这些微量 姜 黄 更好的药理活性［ #% $ &’ ］， 素类化合物对发掘先导化合物和扩大药源有重要的 意义。在姜黄属植 物 中， 姜黄的根茎中姜黄素类化 合物的含量最高， 故本研究拟对其中的微量成分进 行挖 掘。 高 效 液 相 色 谱 ! 电 喷 雾 串 联 质 谱 （ "#$%! &’(!)’ * )’ ） 具有灵敏度高、 抗 干 扰 能 力 强、 样品前 处理简单的优点， 是分析、 鉴定中药复杂体系中化学 成分的首选方法。 但 对 于 微 量 成 分， 在缺乏对照品 的情况下， 很难通过几次常规的 $%!)’ 实验 就 能 完 成分离与检测； 而且一些微量成分由于含量太低， 以 常规的全扫描方法很难检测得到。本文利用多反应 监测 （ )+) ） 扫描方式的选择性和特异性， 建立了 一 种高灵敏的微量姜黄 素类化合物 的 "#$%!&’(!)’ * )’ 分析方法。并 以 这 种 方 法 首 次 在 姜 黄 中 发 现 " 个微 量 姜 黄 素 类 成 分 （ 见图 # 中的化合物 (， )， %） 。 本文中所检测的 % 个姜黄素类化合物的结构式如 图 # 所示。
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$" 结果与讨论
$ $ !" 色谱分离条件的优化 ! ! 姜黄素类化合 物 是 中 等 极 性 的 化 合 物， 适合以 反相 液 相 色 谱 模 式 分 离。 本 实 验 采 用 ).15=6=5@ %#, 柱分离， 考察 了 不 同 组 成 的 流 动 相 对 目 标 化 合 物的色谱行为和离子化效率的影响。首先比较了乙
图 ! " # 个姜黄素类化合物的结构式 !"#$ ! " %&’()&(’*+ ,- +". )(’)(/"0,"1+
腈 ! 水和甲醇 ! 水体 系 的 分 离 效 果， 结 果 表 明 乙 腈!水 为流动相时， 目标 化 合 物 的 分 离 度 和 质 谱 信 号 响 应 都优于甲 醇 ! 水 体 系。 由 于 姜 黄 素 类 化 合 物 的 分 子 结构中含有酚羟基 基 团， 因此为了抑制色谱峰拖尾 和改善峰形， 需 要 在 流 动 相 中 添 加 有 机 酸。 考 察 了 在乙 腈 ! 水 流 动 相 中 分 别 添 加 不 同 比 例 的 甲 酸 （ ’+ ’) A ， ’+ # A ， ’+ & A ） 或乙酸 （ ’+ & A ， ’+ ) A ， #A ） 对 色谱峰形和 质 谱 响 应 的 影 响， 结 果 表 明 添 加 ’+ # A 甲酸时目标分析物获得了最优的色谱分离效果和质 谱信号响 应。 故 本 文 选 用 乙 腈 ! 水 （ 含 ’+ # A 甲 酸 ） 为流动相体系。图 & 为在优化条件下得到的姜黄 提 取物的色谱图。 $ $ $" 质谱条件的优化 ! ! 首先对 ’+ ’) 8 * $ 的 姜 黄 素 （#） 、 去甲氧基姜黄 素 （&） 和二 去 甲 氧 基 姜 黄 素 （"） 混合标准溶液在正
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高效液相色谱 !串联质谱法分析姜黄中微量的姜黄素类化合物
!! 李 - 伟* ， - 肖红斌 * ， - 王龙星 * ， - 梁鑫淼 * ，
（ * ’ 中国科学院大连化学物理研究所，辽宁 大连 **’"!& ；! ’ 华东理工大学药学院，上海 !""!&% ） 摘要： 建立了同时检测中药姜黄中 & 种微量的姜黄素类化合物的高效液相色谱 , 电喷雾串联质谱分析方法。姜黄根 茎经乙醇超声提取后， 无需其他处理可直接进样分析。以 !.3:%;%:< 7*+ 色谱柱 （ !$" -- . (/ ’ -- ， $ !- ） 分 离， 乙腈和 "/ * = 甲酸水梯度洗脱， 在多反应监测模式 （ !>! ） 下 对 目 标 成 分 进 行 定 性 分 析。 利 用 质 谱 碎 裂 规 律， 分别 首次从姜黄中发现了 & 个微量的姜黄素类化合 对每个目标成分同时监测 + 个母离子 ? 特征子离子对 的 反 应 过 程， 物成分。一次性完成了目标成分的同时定性， 方法的检出限为 "/ ! ! 0 ? @ 。结果表明， 该方法具有简便、 快 速、 准 确、 灵敏度高的优点， 适用于中药复杂体系中姜黄素类化合物的分析检测。 多反应监测模式； 姜黄素类化合物； 微量成分； 姜黄 关键词： 高效液相色谱 , 串联质谱法； 中图分类号： A’$+- - 文献标识码： B - - 文章编号： *""" ,+%*& （ !""# ） "& ,"!’( ,"’- - 栏目类别： 研究论文