组织制片技术概述ppt课件

二、取材的步骤
1. 选择动物 2. 选择取材部位 3. 选择切面方向
应根据实验工作的目的和经济能力选择实验动 物
肝脏—猪肝 卵巢—猫 胃—狗 运动终板—爬虫类动物 肥大细胞—大、小白鼠 的皮下组织 间皮和内皮—蛙的肠系
根据器官组织的结构特点选择取材部位
胰腺—胰尾部
腰膨大处
脊髓的运动神经元—颈膨大和
组织制片技术的概述 组织制片技术的方法 组织制片技术的基本程序 苏木精—伊红染色
组织制片技术的发展史
从16世纪60年代Hook发明显微镜，开始 观察和描述软木塞中的细胞至今，组织制片技术随 着生命科学的发展而不断进步。
组织制片技术的发展史
在19世纪中期，随着生物、物理和化学等 学科的飞速发展，以及显微镜和切片机的逐步完善， 组织学也建立起一整套完整科学的组织制片技术。
的血管标本。 ②将有色物质注射进血管后，经一
系列制片技术处理后封固于载玻片上供显微镜下观
察的标本。
组织切片法
利用化学试剂将组织经过一系列的固定、 脱水、透明后，再利用石蜡、火棉胶或者明胶等 支持物渗透进组织内部，使组织保持一定的硬度， 并包埋成块，然后依靠切片机将包埋好的组织块 切成以微米计的薄片，再根据需要进行各种染色 得到的供显微镜下观察的标本的方法。
活体标本
将所采的观察标本加生理盐水后
直接滴于载玻片上在显微镜下观察：微生物运动
整装标本
①将胚胎或小动物经前期固定后
整体封藏于盛满固定剂的透明容器中 。②将发育
至某一阶段的鸡胚整体取出，经固定、染色、脱水、
透明后封固于载玻片上的标本。
血管注射标本
①将有色物质注射进血管，
用酸或硷将血管周围的组织腐蚀后做成的整体封藏
固定和固定后处理
一、固定的目的 ：
固定剂使细胞的成分凝固，防止组织细胞 自溶和腐败，保持细胞生活时的状态。
固定剂的酶染作用使细胞各成分易于被染 料着色。
使组织适度硬化，利于制作薄片。
二、固定的方法：
1. 直接固定：最常用。 2. 蒸汽固定：1－2％锇酸或者甲醛挥发 的蒸汽，多用于涂片固定。 3.灌注固定：（必须进行后固定）
局部灌注固定：肺、肾脏、眼球、 肝脏
全身灌注固定：神经系统
三、固定的注意事项：
1. 固定剂的用量 一般为组织块体积的15倍左右
2. 固定剂的配制 现配现用
3. 预固定 4. 固定的时间 一般过夜或者24小时可达到固
定要求。
四、常用固定剂
单纯固定剂 甲醛、乙醇、冰乙酸、升汞、苦味酸、
重铬酸钾、丙酮、 铬酸、四氧化锇 固定组织时，只单用某一种试剂尚难对各种
• 铺片：将需要观察的薄片组织用手工的方法直接 铺于载玻片上，然后经过固定、染色等程序制成。 例如蛙的肠系膜铺片，大白鼠的皮下组织铺片等。
磨片：对于骨，牙齿等组织，不经脱钙和切片， 直接在磨石上用手工磨成大约50微米左右的薄片， 然后再进行染色封固在载玻片上。
消化分离标本：先将组织分离成小块，然后利用 相应的化学物质将细胞间质消化溶解，再用机械 分离的方法，如水的震荡冲击力，使小块组织分 离成单个而又完整的细胞，经染色后涂于载玻片 上进行封固。例如平滑肌分离标本，脊髓的运动 神经细胞等。
组织切片法的种类
冰冻切片 石蜡切片、火棉胶切片、明胶切片
冰冻切片
• 将所取材的新鲜组织， 经快速冷冻后再切片，以 保持组织内所含的脂类或 某些酶类的活性。 • 为观察急待结果的组织， 如临床手术所取组织
石蜡组织切片标本制作的基本程序:
1. 取材 → 2. 固定和固定后处理 → 3. 脱水→ 4. 透明 → 5. 浸蜡与包埋 → 6. 切片 → 7. 染色→ 8. 封固
组织制片技术的Baidu Nhomakorabea展史
特别是20世纪50年代以来，由于组织化 学、免疫组织化学等新技术和新仪器的出现，使组 织制片技术的应用领域进入了一个崭新的时期。
组织制片的意义和目的
利用组织制片技术的方法所制出的标本， 显示了组织细胞的结构和形态、组织细胞之间的 相互连接及组织细胞中的某些化学成分的种类和 含量。 组织制片是研究医学和生物学的一个最基本的手 段。
肺 —肺门
胃—胃底部
根据器官组织的结构特点选择取材时切面的方 向
肾脏—肾门处作纵切
头皮—顺毛根的方向纵切
大小肠的环行皱襞—纵切
气管和食管—横切
三、取材时应注意的问题 ：
• 组织新鲜：取材动作快捷，迅速投入固定液 • 注意环境温度的影响：冰上取材或者冷固定 • 材料应小而薄： 不超过1.5×1.5 × 0.5cm3 • 固定液会造成组织收缩，注意保持组织原有形 态 • 取材手术器械锋利规范操作，防止组织损害 • 注意取材环境和器械干净，防止组织污染
•固定时间：
12小时—24小时
•固定后处理： 流水冲洗12小时—24小时
•配制方法： 90ml
甲醛10ml + 生理盐水/蒸溜水
特性： 甲醛放置时间过长易产生白色沉淀“三聚 甲醛”，氧化后变为甲酸，使溶液变为酸性，严重 时可影响到细胞着色。
乙醇(Ethyl alcohol) •固定浓度： •固定时间： •固定后处理： •配制方法：
组织制片技术的方法
非组织切片法 组织切片法
非组织切片法
组织不经过切片制成观察标本的方法。
非组织切片法的种类
涂片、压片、铺片、磨片、消化分离标本、 活体标本、整装标本、血管注射标本。
• 涂片
将所采的血液、骨髓或者脱落细胞涂
抹于载玻片上经瑞氏、姬姆萨染色、常规HE染色。
• 压片 先将组织处理成小块物质，然后用化学 药品进行软化和染色，再用盖玻片压封于载玻片 上。例如运动终板和寄生虫标本等。
取 材
一、动物的处死
手法迅速、快捷。 常用方法： 1. 麻醉法：吸入麻醉（乙醚）和注射麻醉（乌拉坦或 者戊巴比妥）。
2. 空气栓塞法：耳静脉，20－30ml空气 3. 击头法：重物猛击，迅速致死。 4. 颈椎脱臼法：小白鼠 5. 破坏脑和脊髓：金属探针，蛙 6. 股动脉放血：麻醉后放血使大动物迅速死亡。
组织成分有较理想的固定作用。因此，常加入其它 试剂，根据对组织的作用与反应，配成混合固定剂， 以求得补偿某试剂对组织所致的缺陷。 混合固定剂
4%多聚甲醛液、乙醇—甲醛液、 Bouin氏 液、 苦味酸—硫酸液 、Carnoy氏液 、Helly氏液
甲醛(Formeldedhyde)
•固定浓度：
4%甲醛溶液