细菌鉴定的总体思路..

+/F
+
+
+
+ 0/f
+
+ F
+ O/-
+
-
+
-
+
+
f
F
+
+
莫 肠 拉 杆
fw- -
弯 曲
产 黄 莫 假 碱 色 拉 单 杆 杆 菌 胞 菌 菌 属 菌
巴 斯
弧 气 邻 不 菌 单 单 动
嗜ห้องสมุดไป่ตู้军 血 团
杆
菌 属
菌 菌 属 科
德
菌
属 胞 胞 杆 菌
杆 菌
菌 属
革兰阴性杆菌之—嗜血杆菌

嗜血杆菌为G-小杆菌，在巧克力平板上生长灰色、透 明的小菌落，似露滴状，有时呈球杆菌，有时呈丝状， 一般情况下在血平板上不生长。 氧化酶（弱+），在血平板和MH上同时做卫星试验， 两种平板上均阳性，为副流杆菌嗜血杆菌，血平板上 阳性、MH上阴性，为流感嗜血杆菌。 注：杜克嗜血杆菌是软性下疳的病原菌，72h后才生长 细小的菌落，阴道分泌物培养时要注意。
木糖
乳糖 山梨醇 丙二酸盐 鸟氨酸
+ +
+
+ +
+
+ + -
3种变形杆菌的鉴别
菌种
普通变形杆菌
吲哚
+
麦芽糖
+
鸟氨酸脱羧酶
-
奇异变形杆菌
潘氏变形杆菌
-
+
+
-
3种普罗威登斯菌的生化鉴别
菌种
雷极普罗威登斯菌 斯图普罗威登斯菌 产碱普罗威登斯菌
脲酶
+ -/+ -
甘露醇
+ -
侧金盏花醇
+ +
鼠李糖
+/-
摩根菌属
枸橼酸杆菌属的鉴别
菌种
弗劳地枸橼杆菌 异型枸橼酸杆菌 丙二酸盐阴性枸橼酸杆菌
硫化氢
+ -
吲哚
+ +
侧金盏花醇
+ -
丙二酸盐
-/+ + -
爱德华菌属
爱德华菌属有3个菌种，只有迟缓爱德 华菌有临床意义，可引起腹泻、伤口感 染和败血症。
生化特性是发酵葡萄糖产酸产气，不分 解甘露醇、乳糖，产硫化氢，IMViC为 ++--。动力+，赖氨酸、鸟氨酸+，精氨 酸 -。
G+c(动力、触酶、O/F)
-w/- F 气 球 菌 -+ 微 球 菌
O/-
-+
F
+/- 链 球 菌
F
葡 萄 球 菌
革兰阳性球菌 之葡萄球菌
一、革兰阳性球菌，排列成葡萄状，触酶（+） ：
首先做血浆凝固酶试验、甘露醇、尿素及对新 生霉素的敏感性，如果确定不了，再加做麦芽 糖、蔗糖、蕈糖、木糖、硝酸盐，同时结合菌 落颜色和溶血情况。

本菌染色多变，可以染成阴性，呈单个或成双、短链 排列。血板上35度培养24h形成较大的菌落，呈水滴 状，易融合生长，48h后菌落周围出现宽大的透明溶 血环，有自溶现象，类似肺炎链球菌的菌落。肉汤培 养中呈混浊生长，6.5%高盐肉汤中能生长。
生化反应：触酶-，氧化酶-，分解葡萄糖、果糖；不 分解乳、麦、菊、蔗、阿拉伯糖、甘露醇、卫矛醇； 七叶苷-，靛基质-。对青、氯霉素敏感，对丁胺卡那 耐药。
几种常见葡萄球菌的鉴定
金葡 中间 表皮 腐生 溶血
凝固酶 甘露醇 + + + + d
尿素 d + -
新生 S S S R S
革兰阳性球菌 之链球菌
二、革兰阳性球菌，排列成链状，触酶（-） ： 根据溶血情况， 先做①七叶苷 β溶血：
1、 ① - ②- ③沉淀生长，加做杆菌肽S为化脓性链球菌 2、 ① - ②- ③微混，加做CAMP+为B群链球菌（无乳链球菌） 3、 ①- ②- ③沉淀生长，加做杆菌肽R，为β溶血性链球 菌（非A、B） 4、 ①+ ② ③沉淀生长，加做杆菌肽R，为咽峡链球菌（草链中的一种）
肠杆菌科

肠杆菌科为一大群革兰阴性杆菌，氧化酶阴性. 多数菌种为周毛菌，能运动，少数无鞭毛，不能运动。
绝大多数菌种在普通营养琼脂上生长良好。
发酵葡萄糖，还原硝酸盐。 临床常见的10多个菌属，30多个种。
肠杆菌科与其他科细菌的区别
试验
葡萄糖发酵 氧化酶 形态 鞭毛
肠杆菌科
F 杆状 周毛或无
大肠埃希菌与其他3种埃希菌的鉴别
黄色素
大肠埃希菌 弗格森埃希菌 赫曼尼埃希菌 伤口埃希菌 + d
吲哚
+ + + -
乳糖
+ d -/+
山梨醇
+ -
戊五醇
+ -
志贺菌属的生化反应
试验 反应 试验 反应 葡萄糖产气 -* 吲哚 d 乳糖 -** 甲基红 + 蔗糖 VP 甘露醇 +/枸橼酸盐 卫矛醇 丙二酸盐 肌醇 KCN 水杨苷 明胶酶 硫化氢 赖氨酸 脲酶 动力 *福氏6型某些生物型、鲍氏志贺菌13、14型可产生少量气体。 **宋内志贺菌可迟缓发酵乳糖
+ -
+ + + + + + + + + +
+ + +/+ +/+ +/(+)/- + - (+)/+ -/+ + -
结肠
菌属 耶尔森菌 + -* + + -/+ +/+/-
葡萄糖酸盐阳性各菌属的鉴别
试验
动力 山梨醇 DNase 明胶酶
克雷伯菌属
+ -
肠杆菌属
+ +/-
沙雷菌属
+ + + +
哈夫尼亚菌属
+ -
苯丙氨酸阳性各菌属的鉴别
试验
硫化氢 枸橼酸盐 鸟氨酸
变形杆菌属
+ +/+/-
摩根菌属
+
普罗维登斯菌属
+/-

革兰阳性球菌之—马红球菌

马红球菌是马、猪和牛的致病菌，近来发现本菌也可 引起艾滋病、血液病和肾移植病人的肺部感染。
本菌为革兰阳性无动力杆菌，为多形态，有时呈杆状， 有时呈球状。在血平板上35℃ 24-48h，可长出淡桔红色 到粉红色的粘液样大菌落，不溶血。


生化反应：触酶+，氧化酶-，硝还+，靛基质-，枸盐-， 明胶酶-，脲酶不定，不分解糖类，可形成类CAMP样 反应。
志贺菌属的血清反应

本菌属仅有菌体（O）抗原，而无鞭毛（ H）抗原。某 些菌株在新分离时，有表面（K）抗原，可阻止O抗原 与相应诊断血清发生凝集反应。 K 抗原不耐热，加热 100℃60min即可破坏，而O抗原为多糖复合物，耐热， 加热后不被破坏，仍可与特异性抗血清凝集。
根据生化反应和O抗原之不同，可将志贺菌属分为四个 血清群。 A群 即痢疾志贺菌，均有K抗原，国内仅发现1、2型。 B群 福氏志贺菌， C群 鲍氏志贺菌， D群 宋内志贺菌，仅1个血清型。

摩根菌属只有一个菌种，即摩根摩根菌，

生化反应不活泼，发酵葡萄糖产酸，脲 酶阳性，IMViC++--，苯丙、鸟氨酸+， 赖氨酸、精氨酸-。
非发酵菌的初步鉴定
1、氧化酶试验 2、葡萄糖发酵试验 3、动力及鞭毛 4、色素 5、还原硝酸盐及产N2
几种非发酵菌与弧菌科菌的鉴别
血平板 氧化酶 克氏 葡糖 甘 动力 靛 枸 硝 七 乙 明胶
革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验
2、氧化酶+
全套生化 克氏双糖、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼 酸盐、硝酸盐、七叶苷、乙酰胺。 可疑气单胞菌 克氏双糖、葡萄糖、甘露醇、靛基质、 枸 橼 酸盐、 硝 酸盐、 七 叶苷、 赖 氨 酸、蔗 糖、 VP（ 25℃）。 可疑弧菌 。 同气单胞菌生化试验，另加不同浓度的NaCl
肠杆菌属
沙雷菌属 哈夫尼亚菌属 变形杆菌属 摩根菌属 普罗维登斯菌属
—
— — + + +
+
+ + — — —
苯丙氨酸、葡萄糖酸盐阴性各菌属的鉴别
枸橼酸 爱德华
试验 埃希菌属 动力 +/硫化氢 靛基质 + 枸橼酸盐 脲酶 赖氨酸 +/*25-30℃培养动力+ 志贺菌属 沙门菌属 杆菌属 + + +/+/-/+ -/+ +/+ -/+ +/-

沙门菌属的生化反应
试验 反应 试验 反应
葡萄糖产气
乳糖 蔗糖
+*
-
吲哚
甲基红 VP
+ -
甘露醇
麦芽糖 鼠李糖 水杨苷 硫化氢
+
+ + +***
枸橼酸盐
丙二酸盐 KCN 明胶酶 赖氨酸 动力
+/+*** +**
脲酶 *伤寒沙门菌不产气
**鸡沙门菌和雏沙门菌无动力
***甲型副伤寒沙门菌赖氨酸、硫化氢均为阴性。
革兰阳性球菌
如D群链球菌和肠球菌要进一步鉴定：
D群链球菌
肠球菌 山梨醇
乳糖
+ -
+ 棉子糖
甘露醇
牛链 马肠链
+
-
+
屎肠球
坚忍肠球
粪肠球 禽肠球
革兰阳性球菌之—绿色气球菌

绿色气球菌是一种条件致病菌，它可引创面感染、败血症等。 绿色气球菌在血平板上生长灰色、光滑、有α 溶血的菌落。革兰染色为 G+C，排列呈四联状。 绿色气球菌生化反应
G-c(触酶、氧化酶、 O/F)
+ + o 脑膜炎奈瑟氏菌 淋病奈瑟氏菌 其他奈瑟菌 布兰汉菌属 金黄色奈瑟菌
革兰阴性双球菌

氧化酶+ 脑膜炎 双球菌 + + 卡他布 兰汉菌 + + 淋病 奈瑟菌 + -
葡萄糖 麦芽糖 硝还 DNA酶
G-b(动力、氧化酶、触酶、O/F)
+ + + + + + + + + + + -
铜绿 嗜麦芽 腐败 恶臭 荧光 洋葱 产碱 不动 莫拉 黄杆菌 黄单胞 气单胞 邻单胞
灰绿，溶血 + -/- （O） 灰黄色 -/- （O） 红棕色 + -/-H2S （O） 灰白色 + -/- （O） 灰色 + -/- （O） 黄色（多B R）（+)/- -/- （O） 灰色，α 溶血 + -/- （O)/灰白色 -/- （O)/灰色 + -/黄色 + -/- （F)/黄色 + -/- （O)/暗灰绿，溶血 + -/+ F 灰白或灰色 + -/+ F O：氧化型；
②6.5%NaCl
③肉汤。
革兰阳性球菌之—链球菌
α 溶血：
1、 ① -或+ ②- ③沉淀生长，为草链 2、 ① - ②- ③混浊生长，加做胆汁溶菌试验+，菊糖+，
Optochin S，为肺炎链球菌
不溶血或α 溶血：
1、 ① + ②- ③混浊生长，为D群链球菌
2、 ① + ②+ ③混浊生长，为肠球菌
解鸟氨酸克雷伯菌 + 植生克雷伯菌 -/+
土生克雷伯菌
-
d
+
d
+
-/+
-
+
4种肠杆菌种间生化反应鉴别
菌种
阴沟肠杆菌 产气肠杆菌 格高菲肠杆菌 坂崎肠杆菌
山梨醇
+ + -
脲酶
+/+ -
赖氨酸
+ + -
精氨酸
+ +
3种沙雷菌的生化鉴别
试验 阿拉伯糖 棉子糖 粘质沙雷菌 液化沙雷菌 + + 深红色沙雷菌 + +


革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验
涂片为革兰阴性杆菌，做氧化酶试验。
1、氧化酶-
做全套生化
克氏双糖、尿素、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、 葡萄糖、甘露醇、IMViC、硝酸盐
革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验
致病性大肠埃希菌 克氏双糖、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、 甘露醇、IMViC、山梨醇。 迁徙生长，可能为变形杆菌 克氏双糖、尿素、苯丙氨 酸、葡萄糖酸盐、甘露醇、靛基质、麦芽糖。 灰凸的菌落，染色为典型的阴性球杆菌 克氏双糖、葡 萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝酸盐、丙二酸盐 、42℃。 灰黄色菌落 生化试验。 可能为嗜麦芽窄食假单胞菌 同氧化酶+
弧菌科
F + 弧形或杆状态 单毛
非发酵菌
O/+* 杆状 单毛、丛毛、 周毛或无
* 不动杆菌和嗜麦芽窄食假单胞菌除外。
肠杆菌科的初步分类
肠杆菌科初步分类
菌属 埃希菌属 志贺菌属 沙门菌属 苯丙氨酸 — — — 葡萄糖酸盐 — — —
枸橼酸杆菌属
爱德华菌属 耶尔森菌属 克雷伯菌属
—
— — —
—
— — +
临床常见细菌鉴定的思路
检验科 张诗海
细菌鉴定的指南
一、培养特性 1、温度 2、气体 3、营养要求 4、PH 5、湿度
细菌鉴定的指南
二、生长特性 1、生长速度 2、菌落特征 3、液体培养基的生长特性 三、细菌的形态与染色 四、生理及生化特性 五、血清学诊断 六、致病性试验：动物接种
细菌的分类及鉴定步骤

细菌的分类单位 由高到低 分7个层次， 界 门 纲 目 科 属 种
有的种还分血清型（如沙门菌及志贺菌 等）和生物型（如流感、副流感嗜血杆 菌1-8生物型等）还有噬菌体分型（如伤 寒沙门菌、铜绿等）。

细菌鉴定步骤
1、首先必须分离有单个菌落的纯培养 2、革兰氏染色，先确定是G-b，G+b， G+c，G-c 3、如为G-b，G-c先做氧化酶试验，如为 G+c或G+b先做触酶，根据结果，选择 最少几项关键性鉴定试验。
试验 +% 触酶* 0 硝还* 0 七叶苷 * 100 6.5%NaCl * 100 葡萄糖* 100 甘露醇* 86
*为确诊试验
试验 麦芽糖 蔗糖 乳糖 果糖 蕈糖 水杨苷
+% 100 100 90 100 90 76
试验 阿拉伯糖 棉子糖 木糖 山梨醇
+% 48 19 10 0
革兰阳性球菌之—溶血孪生球菌
耶尔森菌属
耶尔森菌属包括11个菌种，其中最重要的为3个菌种。
3种耶尔森菌的生化鉴别
菌种 鼠疫耶尔森菌 动力 25℃35℃假结核耶尔森菌 25℃d 35℃小肠结肠炎耶尔森菌 25℃+ 35℃VP +/d +/+ + + 吲哚 脲酶 d 山梨醇 鸟氨酸 -
7种克雷伯菌属种间的主要鉴别
菌种 肺炎克雷伯菌 产酸克雷伯菌 臭鼻克雷伯菌 鼻硬结克雷伯菌 吲哚 甲基红 VP 枸盐 丙二 鸟氨酸 42℃ + -/+ + + + + + + +/+ + + -/+ + + + + + + + + + + + + + + 4℃ + +