抗精子抗体检测

蛋白质印迹法
提取精子抗原进行聚丙烯酰氨凝胶电泳SDS-PAGE，然后将膜
抗原转移到醋酸纤维膜上进行电转移，在电场作用下，蛋白 子进入醋酸纤维膜而固化，随后与待检标本（一抗）温育， 再与结合有辣根过氧化酶的兔抗人IgG（二抗）温育洗涤后， 加入酶底物显色处理，其醋酸纤维膜经扫描分析，即可检测
抗精子抗体量。
生物素-亲合素酶联免疫吸附法（BA-ELISA）
（BA-ELISA）是在常规ELISA基础上发展起来的新一代 定量检测法，其敏感法性、特异性超过常规法。但很难购到交理想 的试剂盒，通常试剂盒难尽人意思，结果不太稳定，假阳性太多。
4. 间接免疫荧光法测定抗精子抗体：
原理：将正常人精子充分洗涤后，包被于载玻片上，依次 加待测血清河异硫氰酸荧光素标记得抗人IgG、IgA、IgM 多价或单价抗体，反应后洗涤，置荧光显微镜下观察。 评价：试验中需要甲醇固定，致使精子膜损伤，内部抗原 外露，而内部抗原的抗体在常人中普遍存在，故假阳性多， 无临床实用价值。 改进：作液相培养，试验过程中无需固定，又重新确定了 本法的使用价值。此法灵敏度高，可作抗原定位，但重复 性差。
5. 免疫珠试验测定抗精子抗体：
免疫珠试验是WHO推荐用于检测精子表面IgG、IgA、IgM类抗 精子抗体的一种方法。
利用兔抗人免疫球蛋白抗体（抗人IgG、抗人IgA、抗人IgM） 包被的聚丙烯酰胺微珠能结合于结合了精子表面的精子抗 体，在显微镜下可看到免疫珠随精子运行。 结果：若结合一个或多个免疫珠的精子比例≥10%，为阳性。 评价：此法可确定抗体的部位、类型及结合精子的比例， 能测出活精子表面结合的抗体。敏感性、特异性及重复性 较好，操作稍繁琐，检测所需样本少，可用于宫颈粘液、 输卵管液等微量样本检测。
6、酶系统，能降解精子抗原
（二）、女性抗精子抗体的产生原因
1、 独特型抗体和抗独特型抗体网络功能紊乱
2、酶系统缺陷
3、对精子过敏与感染有关 4、生殖道病毒和细菌感染 5、生殖道创伤及炎症至生理屏障破坏 致使进入的精子抗原得以保持完整，而作为同种异体 抗原刺激女性免疫系统产生抗精子抗体影响生育。
（三）、抗精子抗体分类
2. 精子制动试验测定抗精子抗体：
原理：在补体存在的条件下，精子制动抗体与精子表面抗原 反应，使补体活化，导致精子失去活动能力。
结果：若为制动抗体，使精子失去活力，制动值≥2为阳性。 评价：此法仅能检测作用于精子尾干的抗体，特异性强，敏 感性差，假阴性率较高。 精子制动试验阳性者的妊娠率明显低于低于精子凝集试验阳 性者。
1、根据抗体存在的部位：循环抗体，局部抗体 2、根据球蛋白类型：IgG、IgM、 IgA 3、根据作用部位：头部、顶体、体部、尾部
4、根据抗原性质：不同的精子抗原成分产生相应的
不同抗体，主要百度文库一下几种：
（1）精子特异抗原：7种抗原：3种特异性，4种精浆交叉抗 原 （2）精子膜抗原来自精囊液
（3）精子酶：LDHx透明质酸酶
1. 试管－玻片凝集试验（TSAT）测定抗精子抗体：
原理：精子悬液与待测血清在缓冲盐水中反应，待测血清中的AsAb 与精子表面抗原结合，使精子出现头对头，尾对尾或头对尾的凝集 现象。 结果：≥10%凝集为阳性。 评价：此法最易检测头对头精子凝集，主要用于分析女性血清，方 法简便，但可受多种因素干扰，如微生物、组织碎片、血中雄激素 升高，均可发生非特异性凝集。 每次试验应设对照组。
抗精子抗体的检验诊断
攀枝花中西医结合医院检验科：周丽
在男性：
抗精子抗体（antispermatozoa antibody, AsAb）属于自身抗体， 它通过影响精液的质量而降低生育能力。
在女性：
抗精子抗体属于同种异体抗体，是女性免疫性不孕的重要原
因。
（一）、男性抗精子抗体的产生
男性产生的主要机制是血睾屏障因疾病或创伤受损，使隐蔽的精子
评价：可检测微量或极微量低效价的抗精子抗体，尤其适合 体外受精系统检测抗精子抗体量，并可分析抗精子抗体在受
精卵结合中的生物学活性，有助于从分子水平研究免疫性不
孕不育的机制。
不育症患者血清中抗精子抗体检出率为20%-30%，而梗阻性 无精症病人中，检出率可达60%。
不育症患者血清中抗精子抗体通常以IgG、IgM为主，而精浆
（4）组织交叉抗原：精子表面有脑、肾上腺、甲状腺等组织 的交叉抗原 （5）血型抗原：A、B血型抗原 （6）组织相容性抗原HLA-A、HLA-OR-H-Y抗原
（7）细菌交叉抗原
（四）、抗体导致不孕的机制
影响精子运动 抑制精子活动 AsAb的Fc段与宫颈粘蛋白结合
补体参与使精子死亡
抗体调理作用促进精子被吞噬 补体参与受精卵死亡
（五）、抗精子抗体的检验方法
抗精子抗体按对精子的作用分为凝集性、制动性、和结合型 三类。据这些特点设计了多种方法，目前常用的方法有： 1. 试管－玻片凝集试验测定抗精子抗体： 2.精子制动试验测定抗精子抗体：
3.ELISA法测抗体：
4.间接免疫荧光法测定抗精子抗体： 5.免疫珠试验测定抗精子抗体：
3. ELISA法测抗体：
原理：以特异性精子可溶性抗原包被反应板微孔，待测血清 中如存在AsAb，则可与之结合，再加入酶标抗人IgG抗体和 酶底物/色原溶液，出现呈色反应。呈色强度可反应AsAb的 水平。 结果：显色深浅与抗精子抗体的量成正比。 评价：结果客观准确。由于完整精子包被易致非特异性吸附， 因此若以可溶性精子膜抗原包被，则本法敏感、特异、客观、 定量能确定抗体类型，且易操作。
或其可溶性膜抗原溢出，刺激机体免疫系统产生抗精子自身抗体。 抗精子抗体的产生可以抑制精子的活动和受精，造成男性不育。
（二）、女性抗精子抗体的产生
精子抗原对女性属同种异体，正常情况下并不产生精子抗原 产生精子的免疫反应。 原因：
1、精子膜不表达经典MHC-I类抗原
2、阴道上皮是复层鳞状上皮 3、精浆中存在抑制精子抗原表达的免疫抑制物质 4、性交后，进入输卵管精子数目少 5、独特型抗体和抗独特型抗体网络，控制着体内免疫反应
中以IgG、 IgA出现较多。
鉴于抗精子抗体的异质性以及很多抗精子抗体针对的靶抗原
与生育并不相关，因此，对抗精子抗体阳性结果必须结合临 床加以考虑。