抗精子抗体检测

蛋白质印迹法
提取精子抗原进行聚丙烯酰氨凝胶电泳SDS-PAGE，然后将膜
抗原转移到醋酸纤维膜上进行电转移，在电场作用下，蛋白 子进入醋酸纤维膜而固化，随后与待检标本（一抗）温育， 再与结合有辣根过氧化酶的兔抗人IgG（二抗）温育洗涤后， 加入酶底物显色处理，抗体量。
评价：可检测微量或极微量低效价的抗精子抗体，尤其适合 体外受精系统检测抗精子抗体量，并可分析抗精子抗体在受
精卵结合中的生物学活性，有助于从分子水平研究免疫性不
孕不育的机制。
不育症患者血清中抗精子抗体检出率为20%-30%，而梗阻性 无精症病人中，检出率可达60%。
不育症患者血清中抗精子抗体通常以IgG、IgM为主，而精浆
1. 试管－玻片凝集试验（TSAT）测定抗精子抗体：
原理：精子悬液与待测血清在缓冲盐水中反应，待测血清中的AsAb 与精子表面抗原结合，使精子出现头对头，尾对尾或头对尾的凝集 现象。 结果：≥10%凝集为阳性。 评价：此法最易检测头对头精子凝集，主要用于分析女性血清，方 法简便，但可受多种因素干扰，如微生物、组织碎片、血中雄激素 升高，均可发生非特异性凝集。 每次试验应设对照组。
（五）、抗精子抗体的检验方法
抗精子抗体按对精子的作用分为凝集性、制动性、和结合型 三类。据这些特点设计了多种方法，目前常用的方法有： 1. 试管－玻片凝集试验测定抗精子抗体： 2.精子制动试验测定抗精子抗体：
3.ELISA法测抗体：
4.间接免疫荧光法测定抗精子抗体： 5.免疫珠试验测定抗精子抗体：
生物素-亲合素酶联免疫吸附法（BA-ELISA）
（BA-ELISA）是在常规ELISA基础上发展起来的新一代 定量检测法，其敏感法性、特异性超过常规法。但很难购到交理想 的试剂盒，通常试剂盒难尽人意思，结果不太稳定，假阳性太多。
4. 间接免疫荧光法测定抗精子抗体：
原理：将正常人精子充分洗涤后，包被于载玻片上，依次 加待测血清河异硫氰酸荧光素标记得抗人IgG、IgA、IgM 多价或单价抗体，反应后洗涤，置荧光显微镜下观察。 评价：试验中需要甲醇固定，致使精子膜损伤，内部抗原 外露，而内部抗原的抗体在常人中普遍存在，故假阳性多， 无临床实用价值。 改进：作液相培养，试验过程中无需固定，又重新确定了 本法的使用价值。此法灵敏度高，可作抗原定位，但重复 性差。
2. 精子制动试验测定抗精子抗体：
原理：在补体存在的条件下，精子制动抗体与精子表面抗原 反应，使补体活化，导致精子失去活动能力。
结果：若为制动抗体，使精子失去活力，制动值≥2为阳性。 评价：此法仅能检测作用于精子尾干的抗体，特异性强，敏 感性差，假阴性率较高。 精子制动试验阳性者的妊娠率明显低于低于精子凝集试验阳 性者。
（4）组织交叉抗原：精子表面有脑、肾上腺、甲状腺等组织 的交叉抗原 （5）血型抗原：A、B血型抗原 （6）组织相容性抗原HLA-A、HLA-OR-H-Y抗原
（7）细菌交叉抗原
（四）、抗体导致不孕的机制
影响精子运动 抑制精子活动 AsAb的Fc段与宫颈粘蛋白结合
补体参与使精子死亡
抗体调理作用促进精子被吞噬 补体参与受精卵死亡
中以IgG、 IgA出现较多。
鉴于抗精子抗体的异质性以及很多抗精子抗体针对的靶抗原
与生育并不相关，因此，对抗精子抗体阳性结果必须结合临 床加以考虑。
6、酶系统，能降解精子抗原
（二）、女性抗精子抗体的产生原因
1、 独特型抗体和抗独特型抗体网络功能紊乱
2、酶系统缺陷
3、对精子过敏与感染有关 4、生殖道病毒和细菌感染 5、生殖道创伤及炎症至生理屏障破坏 致使进入的精子抗原得以保持完整，而作为同种异体 抗原刺激女性免疫系统产生抗精子抗体影响生育。
（三）、抗精子抗体分类
5. 免疫珠试验测定抗精子抗体：
免疫珠试验是WHO推荐用于检测精子表面IgG、IgA、IgM类抗 精子抗体的一种方法。
利用兔抗人免疫球蛋白抗体（抗人IgG、抗人IgA、抗人IgM） 包被的聚丙烯酰胺微珠能结合于结合了精子表面的精子抗 体，在显微镜下可看到免疫珠随精子运行。 结果：若结合一个或多个免疫珠的精子比例≥10%，为阳性。 评价：此法可确定抗体的部位、类型及结合精子的比例， 能测出活精子表面结合的抗体。敏感性、特异性及重复性 较好，操作稍繁琐，检测所需样本少，可用于宫颈粘液、 输卵管液等微量样本检测。
抗精子抗体的检验诊断
攀枝花中西医结合医院检验科：周丽
在男性：
抗精子抗体（antispermatozoa antibody, AsAb）属于自身抗体， 它通过影响精液的质量而降低生育能力。
在女性：
抗精子抗体属于同种异体抗体，是女性免疫性不孕的重要原
因。
（一）、男性抗精子抗体的产生
男性产生的主要机制是血睾屏障因疾病或创伤受损，使隐蔽的精子
1、根据抗体存在的部位：循环抗体，局部抗体 2、根据球蛋白类型：IgG、IgM、 IgA 3、根据作用部位：头部、顶体、体部、尾部
4、根据抗原性质：不同的精子抗原成分产生相应的
不同抗体，主要有一下几种：
（1）精子特异抗原：7种抗原：3种特异性，4种精浆交叉抗 原 （2）精子膜抗原来自精囊液
（3）精子酶：LDHx透明质酸酶
或其可溶性膜抗原溢出，刺激机体免疫系统产生抗精子自身抗体。 抗精子抗体的产生可以抑制精子的活动和受精，造成男性不育。
（二）、女性抗精子抗体的产生
精子抗原对女性属同种异体，正常情况下并不产生精子抗原 产生精子的免疫反应。 原因：
1、精子膜不表达经典MHC-I类抗原
2、阴道上皮是复层鳞状上皮 3、精浆中存在抑制精子抗原表达的免疫抑制物质 4、性交后，进入输卵管精子数目少 5、独特型抗体和抗独特型抗体网络，控制着体内免疫反应
3. ELISA法测抗体：
原理：以特异性精子可溶性抗原包被反应板微孔，待测血清 中如存在AsAb，则可与之结合，再加入酶标抗人IgG抗体和 酶底物/色原溶液，出现呈色反应。呈色强度可反应AsAb的 水平。 结果：显色深浅与抗精子抗体的量成正比。 评价：结果客观准确。由于完整精子包被易致非特异性吸附， 因此若以可溶性精子膜抗原包被，则本法敏感、特异、客观、 定量能确定抗体类型，且易操作。