金莲花中荭草苷和牡荆苷对D-半乳糖致衰老小鼠肝、肾、脑组织的抗氧化作用

金莲花中荭草苷和牡荆苷对D-半乳糖致衰老小鼠肝、肾、脑组织的抗氧化作用

袁丹华

屈海琪

蒋伟杨国栋安芳王书华（河北北方学院药学系，河北张家口075000）

〔摘要〕目的

探讨金莲花黄酮单体荭草苷和牡荆苷对D-半乳糖（D-gal ）致衰老小鼠肝、肾、脑组织内抗氧化酶系及丙二醛（MDA ）的作用，

方法

采用D-gal 腹腔注射致亚急性衰老小鼠为模型，8w 造模成功后，分成模型组，正常组，维生素E 对照组，荭草苷和牡荆苷高、中、低各三个剂量

组，各治疗组从第9周开始每日上午分别口服灌胃给药，每日一次。给药8w 后，断头处死，用生理盐水制成10%的肾、肝、脑组织匀浆液，检测超氧化物歧化酶（SOD ）、过氧化氢酶（CAT ）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px ）及MDA 。结果与模型组相比，荭草苷和牡荆苷均能提高小鼠肾、肝、脑中

SOD 、CAT 、GSH-Px 的活性和降低肾、肝、脑中MDA 活性（P ＜0.05，P ＜0.01）。荭草苷中、低剂量组在提高组织中抗氧化酶系的活性以及降低组织MDA 活性上高于牡荆苷同等剂量组（P ＜0.05），荭草苷和牡荆苷高剂量组相比，无显著性差异。荭草苷和牡荆苷中、低剂量组在提高组织中抗氧化酶系的活性和降低组织中MDA 的活性上低于维生素E ，（P ＜0.05），荭草苷和牡荆苷高剂量组与维生素E 相比无显著性差异。结论金莲花黄酮单

体荭草苷和牡荆苷具有提高D-gal 致衰老小鼠组织中抗氧化酶系的活性以及降低组织中MDA 的作用，荭草苷中、低剂量组的抗氧化活性高于牡荆苷

同等剂量组，荭草苷和牡荆苷高剂量组抗氧化活性与维生素E 相当。

〔关键词〕金莲花；荭草苷；牡荆苷；D-gal ；抗氧化〔中图分类号〕R285

〔文献标识码〕A

〔文章编号〕1005-9202（2012）09-1875-03；doi ：10.3969/j.issn.1005-9202.2012.09.044基金项目：张家口市科技局（0711046D-9）通讯作者：王书华（1965-），女，教授，

硕士生导师，主要从事中药有效成分的提取及药理研究。

第一作者：袁丹华（1987-），女，硕士，

主要从事中药有效成分提取分离及药代学研究。

金莲花是毛茛科植物金莲花的干燥花及花蕾，有清热解毒，消肿明目的功效，临床上主要用于上呼吸道感染、扁桃体炎、急性肠炎、泌尿系统感染等。现代药理研究发现金莲花主

要有效成分为黄酮类化合物

〔1〕

，前期研究表明，金莲花黄酮中含量较高的是荭草苷和牡荆苷

〔2〕

，金莲花总黄酮及其单体荭草

苷和牡荆苷具有体外抗氧化、抑菌、抗肿瘤等作用〔3 6〕

，药代动

力学研究表明荭草苷与牡荆苷在不同种属动物组织的分布均

没有差异，肾脏中浓度最高，其次是肝，脑中含量最少

〔7，8〕

。有

关金莲花黄酮荭草苷和牡荆苷的体内抗氧化作用尚未见报道，通过比较荭草苷和牡荆苷的体内抗氧化作用，以期筛选出抗衰老作用最佳药物的构效关系，为抗衰老药物的研究提供新的动力

。

1材料与方法1.1

药品和试剂

野生金莲花采自河北省张家口沽源，经我

院药物研究所鉴定为短瓣金莲花；荭草苷和牡荆苷（自制，

经1

H －NMR 和HPLC 鉴定纯度98.9%）；D-半乳糖（D-gal ），分

析纯，

上海试一化学试剂有限公司；牛血清蛋白，分析纯，郑州益康有限公司；硫酸奎宁，分析纯，上海齐奥化工有限公司；5，5-双硫代对硝基苯甲酸，分析纯，上海试一化学试剂有限公司；还原性谷胱甘肽，纯度≥99%，国药集团化学试剂有限公司；磷酸钠，分析纯，天津化工有限公司；钼酸铵，分析纯，天津化工有限公司邻苯三酚，

分析纯，上海邦辰试剂有限公司；生理盐水，石家庄第四制药厂；超氧化物歧化酶（SOD ）、过氧化氢酶（CAT ）、谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px 、丙二醛（MDA ）测定试剂盒，均购买自南京建成生物工程研究所。1.2

动物

健康的昆明种小鼠120只（雌雄各半），河北北方

学院动物中心提供（许可证号：SCXK 京2004-0001），分笼饲养，室温18 25ħ。1.3

仪器

U-3900紫外可见分光光度计（日本）；ME235S 十

万分之一电子天平（日本）；DK-8型电热恒温水槽（上海精密实验设备有限公司）；低温高速离心机（赛多利斯公司）；HQ-60型旋涡混合器（北方同正生物技术发展公司）。1.4实验方法1.4.1

造模方法

采用D-gal 致亚急性衰老法，正常组注射等

体积生理盐水，造模时间为8w ，每天称重1次，依据末次称重的克数调整给药剂量。1.4.2

模型验证

造模第6周和第8周分别选取正常组和造

模组小鼠（备用）8只，

摘眼球采血，分离血清，测定总抗氧化能力（T-AOC ）、SOD 含量，以验证小鼠衰老情况。第8周末，造模组小鼠指标与正常组相比具有统计学意义，显示模型复制成功。1.4.3药物配制荭草苷和牡荆苷溶液的配制：N ，N-二甲基甲酰胺ʒ吐温-80ʒ生理盐水=1ʒ1ʒ20。1.4.4

给药与分组

造模成功后，实验分为模型组、正常组、

维生素E 对照组、荭草苷和牡荆苷高、中、低各三个剂量组，各治疗组从第9周开始每日上午分别口服灌胃给药，

模型组和正常组给等体积的生理盐水，每日一次。确定荭草苷和牡荆苷高、中、低剂量分别为40、20、10mg /kg ，维生素E 对照组每日

20mg /kg 。每日称重一次，依据小鼠每次的体重调整给药剂量，给药时间8w 。1.5观察指标与方法1.5.1

小鼠一般状态的观察

观察各组小鼠一般状态，如摄

食、饮水情况、体重、活动度、毛色、光泽度变化等方面，并相互进行比较。1.5.2

小鼠组织中SOD 、

CAT 、GSH-Px 、MDA 的测定给药

8w 后小鼠断头处死，冰浴条件下迅速取出肾、肝、脑组织，精确称量，用生理盐水制成10%的组织匀浆液，离心得上清液。取1.0ml 的上清液，加入1.0ml 乙醇-氯仿混合液，震荡2min ，4000r /min 离心5min 以除去蛋白质，取上清液按试剂盒说明操作，测定SOD 、CAT 、GSH-Px 的活性及MDA 。1.6

统计学处理

数据以x ʃs 表示，用SPSS 16.0统计分析

软件进行t 检验。2结

果

2.1

金莲花中荭草苷和牡荆苷对D-gal 致衰老小鼠一般形态的影响

正常组小鼠饮食正常，活泼好动、毛发光亮、浓密，皮

肤弹性良好。模型组小鼠在造模后，

逐渐表现出少动，行动迟缓，喜蜷缩，毛色发黄，尤其是腹部毛发逐渐变得无光泽、稀疏并渐有脱毛现象，皮肤松弛，弹性下降。而各治疗组在服用相应的药物后，总体状态好于模型组。2.2

荭草苷和牡荆苷对D-gal 致衰老小鼠肾肝脑组织中SOD 、CAT 、GSH-Px 、MDA 的影响结果

见表1、表2。与正常组相比，

模型组小鼠肾、肝、脑组织中SOD 、CAT 、GSH-Px 含量明显降低，MDA 明显升高，具有显著性差异（P ＜0.01）。与模型组相比，荭草苷和牡荆苷各治疗组均具有提高小鼠组织SOD 、CAT 、GSH-Px 的作用和降低MDA 的作用，具有显著性差异（P ＜0.05，P ＜0.01）。与维生素E 对照组相比，荭草苷和牡荆苷中、低剂量组提高小鼠肝、脑、肾组织SOD 、CAT 、GSH-Px 的作用和降低MDA 的作用较弱，具有显著性差异（P ＜0.05），高剂量组与维生素E 组相比无显著性差异。荭草苷中、

低剂量组提高小鼠肾、肝、脑组织中SOD 、CAT 、GSH-Px 的作用和降低MDA 的作用高于牡荆苷中、

低剂量组，具有显著性差异（P ＜0.05），荭草苷与牡荆苷的高剂量组无显著性差异。

表1

各组肝、肾、脑组织SOD 、

CAT 水平（x ʃs ，n =10）组别SOD （U /ml ）

肾肝脑CAT （U /ml ）

肾肝脑正常组104.08ʃ9.1592.17ʃ8.26110.24ʃ9.088.208ʃ0.915 6.625ʃ0.826 6.025ʃ0.908模型组45.21ʃ7.0534.40ʃ7.5941.02ʃ6.07 4.521ʃ0.705 2.940ʃ0.759 2.802ʃ0.607维生素E 组80.36ʃ6.681）68.36ʃ8.241）88.36ʃ6.971）7.236ʃ0.6681） 6.136ʃ8.241） 5.736ʃ0.6971）荭草甘高剂量组89.76ʃ6.021）2）71.24ʃ7.821）67.36ʃ7.121）7.476ʃ0.6021）2） 6.204ʃ0.7821） 5.836ʃ0.7121）荭草甘中剂量组80.36ʃ7.591）60.23ʃ7.061）2）54.36ʃ7.041）2） 6.236ʃ0.7591） 5.230ʃ0.7061）2） 4.936ʃ0.7041）2）荭草甘低剂量组68.32ʃ6.341）2）50.14ʃ8.071）2）43.36ʃ6.891）2） 5.132ʃ0.6341）2） 3.714ʃ0.8071）2） 4.160ʃ0.6891）2）牡荆苷高剂量组72.24ʃ6.861）2）64.01ʃ7.721）2）58.36ʃ8.011）2）7.024ʃ0.6861）2） 5.9181ʃ0.6721）2） 5.536ʃ0.8011）2）牡荆苷中剂量组66.36ʃ7.061）2）3）56.68ʃ7.911）2）3）48.36ʃ5.981）2）3） 5.236ʃ0.7061）2）3） 4.068ʃ0.7911）2）3） 4.436ʃ0.5981）2）3）牡荆苷低剂量组

60.36ʃ6.591）2）4）

42.68ʃ8.121）2）4）

43.36ʃ6.131）2）

3.836ʃ0.6591）2）4）

3.268ʃ0.8121）2）4）

3.636ʃ0.6131）2）

与模型组比较：1）P ＜0.01，与维生素E 组比较：2）P ＜0.05；与荭草甘中剂量组比较：3）P ＜0.05；与荭草甘低剂量组比较：4）P ＜0.05，下表同

·6781·中国老年学杂志2012年5月第32卷