番红O-固绿染色在关节组织学应用的改进

ｐ ｒ ｘ ｄ ｒ ａｃ ｈｏｉ ｏ ｉ ｍ ｙ ｒ ｘｄ ｎ ｔ ｍｍｕ ｏ ｙ ｏ ｈ ｍｉ ｌ ｅ ｏ ｉ ｅ ｏ ｌｏ ｌ ｓ ｄ ｕ ｈ ｄ ｏ ｅ Ｏ ｈｅ ｉ ｃ ｉ ｎ ｃ ｔｃ ｅ ｃ ａ
ｄｔｃｏ ｆ ｒｗ ｈｈｒ ｎ ｎ ｒｌ ｔ ｆ ｒ ｓ ｕ ｆ ａｉ ］ ｅ ｔｎｏ ｏ ｔ ｏｍｏ ｅ ｄｐｏａ ｉ ａ ｅ ｍｉｍ ｘｔ ｎＥ ．Ｊ ｅｉ ｇ ａ ｃｎ ｔ ｏ ｉ ｏ Ｊ
９ ９９ ９ ５ ６ ．
本研 究 采 用 了一 种 改 良 的 免 疫 细 胞 化 学 方 法 ， 在 树 脂 包 即 埋 的切 片 上 进 行 增殖 和 凋 亡 相 关 蛋 白 的 定 位 表 达 ， 通 过 原 位 并 末 端 标 记 法 检 测 凋亡 细胞 。此 免 疫 细胞 化 学 方 法 的采 用 最 初 是
白的同时 ， 展示 了保存 良好 的组织结构 。
本研究采用 Ｋ ＯＨ 来 蚀 刻 树 脂 切 片 ， ＫＯＨ 蚀 刻 树 脂 切 片 比 Ｎａ 的 效 果好 。在 进 行 Ｂ ｌ 、Ｐ ｘ和 Ｔ ＯＨ ｃ２ ａ 一 ＵＮＥ Ｌ染 色 时 ， 者 笔 分 别 采 用 了 ３ ｎ和 ６ｍｉ 蚀 刻 环 氧 树 脂 ， 片 上 都 能 出 、４ｍｉ ｎ去 切
结构。
３ 讨 论
方 法 的优 点 是 明 显 的 ， 是 对 某 些 抗 原 的 表 达 还 有 一 定 的局 限 但
性 ， 要进一步的研究 。 需
参 考 文 献
Ｋｅ ｌｎｂ ｒ ｅ Ｅ， Ｄｉ ｒ ｎ ｅ ｇｅ Ｍ ， Ｖｉ ｉ ｒ ｌｅ ｅ ｇ ｒ ｉ ｅｂ ｒ ｒ ｒ ｌ ｇｅ Ｗ ， ｅ ａ ． Ｔｈ ｌ ｔ １ ｅ
［ ［ ［
Ｍ ａ ｗｅｌＭ Ｈ ． ＴＷＯ ａ ｉ ａ ｄ ｉ ｐｅ ｘ ｌ ｒ ｐｄ ｎ ｓｍ ｌ ｍｅｈ ｄ ｕ ｅ ｆｒ ｈ ｔｏ ｓ ｓ ｄ ｏ ｔ ｅ
ｒｍｏ ａ ｏ ｅｉｓｆｏ ｌ ０ｍｉ ｏ ｈｃ ｐ ｘ ｅｔ ｎ Ｊ ． Ｊ ｅ ｖｌ ｆ ｓ ｒｍ ＿ ｃ ｎ ｔｉ ｅｏ ｙ Ｓｃｉ ｓ［ ］ ｒ ｎ ｒ ｋ ｏ
ｅ ｐｅｓｄｉ ｅｅ ｄｎ ｈｎ ｌ ｓｏ ｈ ｒ ｌｏ ｅｈｏ ｓＬ ］ ｘ ｒｓｅ ｄｓｎ ｉｇｔｉ ｉ ｆｓｏｔｏ ｐｎ ｐ ｒｎ Ｊ ．Ｊ ｎ ｍｂ —
Ａｍ ｏ ｐ ｏ ，２ ０ １ （ １ ： ９３ ９ ４ Ｓ ｃ Ｎｅ ｈｒ ｌ ０ ７， ８ １ ） ２ ７ ２ ４ ．
Ｍ ｏ ｇ ｎ Ｊ Ｍ ， Ｎａ ａ ｉＨ ，Ｓｃ ｍｉ Ｗ ，ｅ １ Ｐｏ ｓｂｅ ｒ ｌ ｆ ｒａ ｖ ｂ ｈ ｄ Ｋ ｔａ． ｓｉｌ ｏｅ ｏ
ｔ ｓ ｅｂ ｕ ｄ ａｃｕ ｉ ｕ － ｏ ｎ ｃ ｌｉ ｍ ｉ ｎｓ ｎ ｉｒ ｔ － ｄ ａ ｅ ｈ ｇ ｅ ｅ ａ ｕ ｅ ｓ ｏ ｉ ｃｔ ａ ｅ ｍｅ ｉｔ ｄ ｉ ｈ ｔ ｍｐ ｒ ｔ ｒ
响了。 肾节段 和细 胞 确 定 的 可 能性 。 本 实验 所 采 用 的 抗 体 即 包 括 在 核 内表 达 的 蛋 白 （ ６ ） 也 Ｋｉ７ ，
Ｚｈ ｉ Ｙ ，Ｆ ｎ ｏ ，Ａｎ ｅ ｓｎ Ａ ，ｅ １ Ａｑ ａ ｏ ｉ ｉ ｎｏ ａ Ｘ ｅ ｔｎＲ Ａ ｄｒａ ｅ ｔａ． ｕ ｐ ｒｎ １ ｓ ｔ
Ｈｉｔ ｃ ｅ Ｃｙ ｏ ｈ ｍ ，１ ７ ， ７ ９ ： ２ ０ １ ９ ． ｓ ｏ ｈ ｍ ｔ ｃ ｅ ９ ９ ２ （ ） １ ９ —２ ２ Ｖｉ ａ ｄ ｌ Ｓ，Ｌｏ ｂ ｒ ｒ ，Ｓ ｎ ｈｅ ｍ ａ ｄｅ ｏ Ｍ ａ ｃ ｚ Ｐ，ｅ １ Ａｎ ｅ ｓ ｅ ｈ ｄ ｆ ｒ ｔａ ． ａｙ ｍ ｔ ｏ ｏ ｔ ｅ ｒ ｍ ｏ ａ ｏｆＥｐ ｎ ｒ ｓ ｎ ｆ ｏ ｓ ｍ ｉ ｈ ｎ ｓ ｃ ｉ ｎ ． Ａｐ ｌ ａ ｉ ｆ ｈ ｅ ｖ ｏ ｅ ｉ ｒ ｍ ｅ — ｉ ｅ ｔ ｓ ｔ ｏ ｐｉ ｔ ｃ ｏｎ ｏ
（ 二 军 医大 学 ，１ 剖学 教 研 室 ， 第 解 ２组 织 学 与胚 胎 学 教 研 室 ， 海 ２ ０ ３ ） 上 ０４ ３
关 节 软 骨 为 覆 盖 关 节 面 的 海 绵 状 透 明 软 骨 ， 少 量 细 胞 除
外 ， 富 的细 胞 外 基 质 ， 括 胶 原 纤 维 、 白聚 糖 和 水 ， 成 了软 丰 包 蛋 构 骨 的主 要 成 。在 涉 及关 节 软 骨 及 软 骨 下 骨 的形 态 学 研 究
树 脂 包 埋 的 组 织 可 视化 其 抗 原 并 进 行 免 疫 组 织 化 学 显 染 。此 种
经 Ｔ Ｎ Ｌ染色 后 ， 亡 的 细 胞 核 被 染 成 棕 褐 色 ， 未 凋 亡 Ｕ Ｅ 凋 而 的细 胞核 经 苏木 精 轻 度 复 染 呈 蓝 色 。皮 质 区 的 凋 亡 细 胞 以 肾小 管细胞为主 ， 肾小 体 和 髓 质 乳 头 区 内 的凋 亡 细 胞 较 少 ， 放 线 的 髓 凋 亡 细胞 较 多 （ ２ ２ ， 底 ） 图 Ｂ， Ｃ 封 。树脂 切 片 的表 达 与石 蜡 切 片 一 致， 而且 ， 石 蜡 切 片 相 比 ， 脂 切 片 展 示 了 更 为 良 好 的 组 织 与 树
Ｃ ＮＥ Ｅ Ｊ ＨＩ Ｓ ＯＵＲ ＮＡＬ Ｏ Ｆ ＡＮＡＴ ＯＭＹ Ｖｏ． ４Ｎ ． ０ １ １３ ｏ ５２ １
解剖学杂志
２ １ 年 第 ３ 第 ５期 ０１ ４卷
较 少 。髓 质 内的 阳 性表 达 主 要 定 位 在 放 射 状 小 管 内 （ ２ 封 图 Ａ，
出现 在石 蜡 切 片上 。对 于 这 些 蛋 白在 石 蜡 和 树 脂 切 片上 表达 的
ｏ ｏ ｓｍ ｉｎｙＥ］ ｄ ｅ ｎ ，２ ０ ，８ ４ ：５ ３１３ ． ｐ ｓｕ ｋｄ ｅ Ｊ ．Ｋｉｎ ｙＩｔ ０ ０ ５ （ ） １２—５ ３
（ 辑： 编 叶 文 ）
番 红 。 固 绿 染 色 在 关 节 组 织 学 应 用 的 改 进 一
姬瑞娟 孙 爱 军 施 丽英 熊绍虎 △
底） 。在 树脂 切 片上 却 没 有 出 现 Ｋｉ ６ 阳性 表 达 。 ７的
２ ２ 树 脂切 片上 Ｂ ｌ ． ｃ ２和 Ｂ ｘ免 疫 荧光 双 标 显 色 － ａ
差 异 可 能 是 因 为树 脂 切 片 采 用 戊 二 醛 和 锇 酸 固 定 ， 些 醛 类 固 这 定 剂 可 以 和组 织 抗 原 交 联 ， 时 包 埋 剂 环 氧 树 脂 也 掩 盖 了抗 原 同
Ｍ ｉｒ ｃ ９ ８， １ （ ）： ５［ ２ ５ ｃｏｓ ，１［ １ ２ ２ ２ ３ ５ ． ７ —
４ ５
［ ［ ［
为 了 肾连 续 半 薄 切 片并 三 维 重 建 发 育 肾 小 管 的 ， 能 充 分 暴 露 它
］ ］
１
２
３
］
６
７
不 同 可 以 采取 不 同 的蚀 刻 时 间 ， 以最 大 程 度 的 优 化 抗 原 。同 样 地 ， 原 修 复 的 方 式 和 持 续 时 间 也 要 随着 每 个 抗 原 的 特 征 而 改 抗 变 。树 脂蚀 刻和 抗 原 暴 露 是 实 验 中非 常 重 要 的步 骤 。 树 脂 切 片 和石 蜡 切 片 Ｂ ｌ 、 ｘ和 Ｔ ｃ２ Ｐ 一 ａ ＵＮＥ Ｌ的 阳 性 表 达 一 致 。然 而树 脂 切 片 保 存 良好 的细 胞 形 态 学 结 构 可 以更 容 易 区 分
现 这 些 蛋 白的 阳性 表 达 。 因 此 ， 着 切 片 的 厚 度 和 抗 原 种 类 的 随
ｔｅａｉｉ—ｉｔ ｅｈ ｉｕ ［ ］ Ｈｉ ｏｈ ｍ ， １９ ， ７（ ） ｈ ｖ ｎｂｏｉ ｔｃｎｑ ｅ Ｊ ． ｓ ｅｅ Ｊ ９ ５ ２ ３ ： ｄ ｎ ｔ
２ ４ ２ ９ ０ ０ ．
表达 。
２ ３ ＴＵＮＥＬ染 色 ．
比对 核 膜 的限 制 作 用 要 小 得 多 ， 此 核 表 达 的蛋 白在 树 脂 切 片 因
上 很 难 出现 阳性 表 达 ， 而在 细 胞 膜 或 细 胞 质 表 达 的 蛋 白在 树 脂 切 片 上 则 较 易 出 现 阳性 表 达 。
本 研 究 提 供 了 一种 简 单 的 方 法 ， 戊 二 醛 和 锇 酸 双 固 定 并 对
ｅｆｃｅ ｃ ｏ ｉ ｆｉｉｎ ｙ ｆ ｍｍｕ ｏ ａ ｅ ｏ ｌｗｉｒ ｌ ｓｃｉｎ ｃ ｍｐ ｒ ｄ ｔ ｎ ｌｂ ｌ ｎ ｏ ｃｙ ｅ ｔ ｓ ｏ ａｅ Ｏ ｏ
ｔｅ ｒｔ ａ ｐｅｉ ｉｎ Ｊ ． ｓｏｈｍ ｔｃ ｅ ，１８ ，５ ２ ： ｈ ｏｅｉ ｌ ｒｄｃ ｏ ｓｌ］ ＪＨｉ ｃｅ Ｃｙｏ ｈｍ ９ ７ ３ （ ） ｃ ｔ ｔ
第 ｌ 者 Ｅｍａ ： ｒ ９ ９ １ ６ ｃｒ 作 ｉ ｊ５ ０ ＠ ２ ．ｏ ｌ ｉ０ ｎ 通讯 作 者 ， － ｉ ｌｘｈ ｔｍ．ｏ Ｅｍａ ： ｓ＠ ｏ ｃｒ ｌｎ ｎ
Ｚｈ ｉ ａ Ｘ Ｙ ， Ｎｉ ｌｅ Ｒ ， Ｂｉｎ ｅｓ ｎ ｒ Ｈ ， ｅ ａ ． Ｃｕ ｉ ｎ ａ ｄ ｔ １ ｂ ｌ ｎ ｍｅ ａ ｉ ｉ ｇ ｌｎ ｍｅ ｉ ｔ ｄ ｕ ｔ ｋ ｆ ａ ｂ ｍｉ ｎ ｃ ｌｕ ｅ ｒ ｘ ｍａ ｔ ｕ ｅ ｃ ｌ ｆ ｄ ａ ｅ ｐ ａ ｅ ｏ ｌ ｕ ｎ ｉ ｕ ｔ ｒ ｄ ｐ ｏ ｉ ｌ ｕｂ ｌ ｅ ｌ ｏ ｓ
ａ ｔ ｅ ｅｒ ｖｌＥ］ ａｈ ｌ ９４ ７ （ ） ３ １３ ７ ｎｉ ｎｒｔｉ ａ Ｊ．ＪＰ ｔｏ，１ ９ ，１ ４ ４ ：０ ０． ｇ ｅ
Ｚ ａ Ｙ ，Ｋｒ ｔ ｆｅ ｓ ｎ Ｉ Ｂ，Ｃ ｉｔ ｎ ｅ Ｉ ｈｌ Ｘ ｉ ｏ ｆ ｒｅ ｓ ｈｒ ｅ ｓ ｎ Ｅ Ｌ ｍｍｕ ｏ ｙ ｏ ｈ ｍｉ ｔｙ ｓ ｎ ｃ ｔ ｃ ｅ ｓｒ
ｏ ｅａ ｍｅｌｒ ｅｐｏｅ ｓｏ ｐ ｘ ｅｔ ｎ ［ ］ Ｋｉｎ ｙ Ｉｔ ｆ ｎｌ ｌｂａ ｒｔｉ ｎ ｅ ｏ ｙ ｓｃｉ ｓ Ｊ ． ｄ ｅ ｎ ， ｒ Ｔ ｎ ｎ ｏ
２ ０ ７ （ ）： ３ ３ ． ０ ７， ２ ６ ７ １ ７ ５
肾小管的亚 细胞结构 的不同 。因此 ， 组织保 存的质量 极大地 影
８
Байду номын сангаас
］ ］ ］ Ｂ ｓ ｉ Ｇ］， Ｅ ｌｎ ｓｎ Ｓ Ｌ， Ｐ ｒｏ ｓＪ ａ ｋｎ Ｄ ｒａ ｄ ｅ ］ ａ ｓｎ Ａ Ｉｆｕｎ ｅ ｏ ｙ ｒｇ ｎ ｎ ｌｅｃ ｆｈ ｄ ｏ ｅ
与 固定 剂 交 叉结 合 并 被 树 脂 覆 盖 的 抗 原 ， 通 过 抗 原 修 复 提 高 并 其抗 原 性 一 。此 方 法 与石 蜡 切 片 相 比 ， 特 异 性 地 显 示 免 疫 蛋 在
的共 价 键 ， 而且 醛 类 固定 剂 对 细 胞 膜 脂 质 双 分 子 层 的 限 制 作 用
免 疫 荧 光 双标 显 色 可 见 ， ｃ ２和 Ｂ ｘ的表 达 位 于 皮 质 全 层 Ｂｌ ａ 的近 端 小 管 内 ， 分 小 管 细胞 Ｐ ｘ 图 ３ 封 底 ） Ｂ ｌ （ ３ 部 ａ（ Ａ， 和 ｃ ２ 图 Ｂ， 一 封底 ） 达重 叠 呈 现 黄 色 （ ３ 封 底 ） 部 分 小 管 细胞 只有 Ｂ ｌ 表 图 Ｃ， ， ｃ一 ２
包括在细胞质 内表 达的蛋 白（ ｃ ２ ａ Ｂ ｌ ，Ｂ ｘ和 Ｔ 一 ＵＮＥ ） Ｌ 。细胞 质
内表 达 的蛋 白在 石 蜡 切 片 和 树 脂 切 片 出 现 了 一 致 的 阳 性 表 达 ， 同时 膜 上 表 达 的 蛋 白 （ ＱＰ １ Ａ － ，ＡＱ Ｐ ２和 ｍｅ ａｎ 在 石 蜡 切 片 ｇｌ ） ｉ 和 树脂 切 片 上 也 出现 了 一 敛 的 表 达 ［ 。而 核 蛋 白 的 表 达 却 只 ７