果胶酶高产菌的筛选及发酵条件的优化
果胶酶高产菌株的分离筛选及产酶条件优化
果胶酶高产菌株的分离筛选及产酶条件优化果胶酶是指分解果胶质的酶，是含有多种组分的复合酶。
果胶酶可裂解单糖之间的糖苷键，并脱去水分子，分解包裹在植物表皮的果胶，促使植物组织的分解。
这类酶广泛分布于高等植物和微生物中，在某些原生动物和昆虫中也有发现。
在微生物中，细菌、放线菌、酵母和霉菌都能代谢合成果胶酶。
果胶酶在工业生产领域是一种重要的新兴酶类。
据统计，目前果胶酶在全世界食品酶的销售额中占25%。
主要应用于食品工业的果汁加工和果汁果酒澄清、饲料工业以及造纸工业的纸浆脱胶和麻类加工。
1 材料与方法1．1 材料1．1．1 试验材料采集绵阳市采摘果园土壤及腐烂的苹果、梨、枣等水果的腐烂部分。
1．1．2培养基和试剂果胶酶初筛培养基: 果胶4 g，蛋白胨10 g，氯化钠0．5 g，刚果红0．15 g，琼脂20 g，定容至1 000mL，pH7．0，121 ℃灭菌20 min．2) 牛肉膏蛋白胨培养基: 牛肉膏3 g，NaCl 5 g，蛋白胨10 g，琼脂15 ～20 g，水1 000 mL，pH7．0 ～7．2，121 ℃灭菌20 min．3) PDA 培养基: 马铃薯200 g，蔗糖10 g，琼脂20 g，水1 000 mL，pH 值自然，121 ℃灭菌30 min．4) 发酵培养基: 桔皮粉10．0 g·L－1，( NH4)2SO420．0 g·L－1，KH2PO438 g·L－1，K2HPO4·3H2O2．0 g·L－1，pH5．5，121 ℃灭菌20 min．富集培养基：LB 培养基，蛋白胨 1.0 g，酵母膏0.5 g，NaCl 1.0 g，蒸馏水100 mL，灭菌。
筛选培养基：果胶1.0 g，（NH4）2SO40.2 g，KH2PO40.2 g，MgSO4·7H2O 0.02 g，调pH 至中性，琼脂2.0 g，蒸馏水100 mL，灭菌，倾倒平板。
果胶酶生产菌株的筛选过程
果胶酶生产菌株的筛选过程
果胶酶是一种水解果胶的酶，广泛应用于饮料、果汁、果酱等果蔬加工行业，因此具
有广阔的市场前景。
果胶酶的生产需要先筛选出高效的产酶菌株，这是整个生产链中的重
要环节之一。
本文将介绍果胶酶生产菌株的筛选过程。
一、菌株筛选的目的
菌株筛选的目的是选择能够高效稳定产生果胶酶的菌株，并进行进一步的优化。
其中，首先对原料的化学成分进行分析，确定产酶菌株种类；然后利用生物学方法进行初步筛选，筛选出具有较高产酶活力的菌株；最后通过构建适合产酶环境的基因工程菌株，提高果胶
酶产量及质量。
二、原料分析
果胶酶生产的原材料主要是果胶。
在根据应用对象的要求确定产酶菌株种类前，需要
对果胶的化学成分进行分析。
化学成分分析涉及果胶的多种指标，如果胶的含量、分子量、分枝度等。
三、生物学初筛
四、构建基因工程菌株
生物学初筛之后，还需要进一步构建基因工程菌株，进一步提高产酶能力。
通常采用
两种策略：一是通过原位突变构建高酶力突变菌株；二是将产酶基因转化到优良的生产菌
株中，形成高产酶菌株。
这两种策略的原理是一样的，都是通过改变产酶基因的表达水平，实现在原生菌株中快速构建高效产酶菌株的目的。
以上就是果胶酶生产菌株的筛选过程的详细介绍。
通过该过程的步骤，可以产生高效、稳定、可持续产酶的菌株，促进果胶酶的产业化发展。
产果胶酶菌株的筛选
产果胶酶菌株的筛选果胶是植物细胞壁的主要成分之一，它是一种高分子多糖，具有黏性和凝胶性。
果胶酶是一类能够水解果胶的酶，广泛应用于食品、医药、化妆品、纺织等行业。
因此，寻找高效产果胶酶的菌株成为了科研工作者的研究热点。
筛选方法1.土壤样品的采集首先需要采集一些土壤样品，这些土壤样品应当来源于果园、蔬菜园、花卉园等植物种植区域，这些地方的土壤中含有丰富的细菌和真菌。
采集土壤样品时，应当使用无菌的采样器具，并将样品放入无菌的袋子中保存。
2.菌落筛选将采集的土壤样品分别加入到含有果胶的培养基中，然后进行培养。
在培养的过程中，需要留意是否出现了产果胶酶的菌落。
产果胶酶的菌落通常呈现透明、半透明或者白色。
在筛选过程中，应当选择产酶量高、生长快速的菌落。
3.酶活筛选将筛选出来的菌株进行酶活测定，通过测定酶活量的大小来评估菌株的产酶能力。
酶活测定可以通过测定果胶酶在一定时间内水解果胶的产物的数量来进行。
酶活测定的结果可以帮助我们筛选出产酶量高、产酶速度快的菌株。
4.生理生化特性检测在酶活筛选的基础上，对菌株的生理生化特性进行检测。
包括菌株的生长速度、温度、pH值、产酸能力、氧气需求量、氧气耐受性、抗生素敏感性等。
这些检测可以帮助我们更全面地了解菌株的生长特性和产酶能力。
5.分子生物学检测分子生物学检测是一种更加精确的检测方法，可以帮助我们确定菌株的种属和亲缘关系。
包括菌株的16S rRNA基因序列测定、PCR扩增、电泳分析等。
这些检测可以帮助我们更加准确地确定产酶菌株的种属和亲缘关系。
结果和讨论通过以上筛选方法，我们可以筛选出高效产果胶酶的菌株。
这些菌株可以应用于食品、医药、化妆品等行业，为这些行业的发展提供了有力的支持。
此外，我们也可以通过深入研究这些菌株的生长特性和产酶机制，进一步提高产酶效率，为产业发展提供更大的推动力。
果胶酶高产菌株的激光选育及发酵条件的优化
果胶酶高产菌株的激光选育及发酵条件的优化朱宏莉;宋纪蓉;张嘉;黄洁;徐抗震【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2005(026)012【摘要】利用氦氖激光诱变原生质体筛选到了一株产果胶酶性能稳定且酶活明显提高的突变株ZH-2.其最适发酵条件为:以2%桔皮粉+1%乳糖作碳源,以1%(NH4)2SO4+0.3%酵母膏作氮源,在起始pH7.0,33℃摇床发酵32h左右达产酶高峰.分析ZH-2所产果胶酶的性质得出,酶作用最适条件为:pH6.5,50℃,以聚半乳糖醛酸为底物,酶的热稳定性实验显示,50℃保温60min后,酶活力基本不变.【总页数】5页(P160-164)【作者】朱宏莉;宋纪蓉;张嘉;黄洁;徐抗震【作者单位】西北大学生命科学学院,陕西,西安,710069;西北大学化工学院,陕西,西安,710069;西北大学化工学院,陕西,西安,710069;西北大学生命科学学院,陕西,西安,710069;西北大学化工学院,陕西,西安,710069;西北大学化工学院,陕西,西安,710069【正文语种】中文【中图分类】Q93【相关文献】1.高产果胶酶菌株选育及发酵产酶条件优化的研究进展 [J], 蒋红菊;杨加志;宋加妹;刘备备;刘晓丽;孙东平2.达托霉素高产菌株选育及发酵条件优化 [J], 王一芩;阎永贞;胡兵;廖锦秀;汤飞;周华;曹荣月3.γ-聚谷氨酸高产菌株选育及发酵条件优化 [J], 罗丽娟;王刚;万玉军;关统伟;李南臻;庹有朋;吴泽;苟红梅4.果胶酶高产菌株EIM－6的筛选鉴定及其液体发酵产酶条件优化 [J], 杨欣伟;林伟铃;田宝玉;柯崇榕;黄薇;黄建忠5.果胶酶高产菌株EIM-4的鉴定及其液体发酵条件优化 [J], 柯崇榕;田宝玉;杨欣伟;林伟铃;黄薇;黄建忠因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
果胶酶高产菌种的紫外诱变选育及其培养条件的响应面法优化
果胶酶高产菌种的紫外诱变选育及其培养条件的响应面法优化林伟铃;田宝玉;秦勇;吕睿瑞;王春香;强慧妮;黄建忠【期刊名称】《工业微生物》【年(卷),期】2010(040)002【摘要】以果胶酶产生菌黑曲霉EIM6为出发菌株,初始果胶酶活为14 539 U/mL,经紫外诱变反复处理,摇瓶复筛和遗传稳定性试验,最终获得一株果胶酶高产菌株EIMU2.EIMU2菌株的形态特征发生了明显的改变,相较于原出发菌株EIM6,孢子色泽更黑,孢子团也较出发菌株大,菌丝与孢子上凝结有更多的液珠.复筛后EIMU2酶活为32 161 U/mL,较原出发菌株提高了1.212倍.进一步通过响应面法对EIMU2菌株的液体发酵培养条件进行优化.优化后的培养条件为甜菜渣1.83%,花生饼粉1.69%,(NH4)2SO4 0.5%,K2HPO4 0.3%,CaCO3 0.2%,MgSO4 0.15% (w/v),接种量6% (v/v),装液量21.36 mL.优化的突变菌株产酶活性进一步提高至98 794.3 U/mL,提高了2.07倍.【总页数】5页(P5-9)【作者】林伟铃;田宝玉;秦勇;吕睿瑞;王春香;强慧妮;黄建忠【作者单位】福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院,福建省现代发酵技术工程研究中心,福州,350108;福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院,福建省现代发酵技术工程研究中心,福州,350108;福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院,福建省现代发酵技术工程研究中心,福州,350108;福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院,福建省现代发酵技术工程研究中心,福州,350108;福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院,福建省现代发酵技术工程研究中心,福州,350108;福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院,福建省现代发酵技术工程研究中心,福州,350108;福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,生命科学学院,福建省现代发酵技术工程研究中心,福州,350108【正文语种】中文【相关文献】1.紫外诱变黑曲霉筛选高产果胶酶菌种 [J], 佘秋生;杨海波;杨冠军;薛银磊;祝小龙;单林娜2.12C6+离子束诱变选育温度耐受螺旋藻高产藻株及其培养条件的优化 [J], 王丽娟; 郑天翔; 杨宋琪; 李欣; 罗光宏3.利用木糖高产谷胱甘肽酵母菌株的诱变选育及培养条件优化 [J], 王晓琼;陈叶福;梁音;杨旭;肖冬光4.复合诱变选育壳聚糖酶高产菌种及产酶条件优化 [J], 王俊芳;张震;申梦雨;王刚5.人参叶中高产皂苷菌种的筛选及培养条件优化 [J], 冯颖;陶亮;肖学爱;赵存朝;李畅;田洋因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
果胶酶高产菌株EIM_4的鉴定及其液体发酵条件优化
业,2000,26(4):82-85.[3]Feron G,Du fosse L ,Pierard E ,et al.Production ,identification and toxicity of γ-decalactone and 4-hydroxyde -canoic acid from Sporidiobolus spp .[J ].Applied and E nvironmental Microbiology ,1996,62(8):2826-2831.[4]王建龙,施汉昌.聚乙烯醇包埋固定化微生物的研究及进展[J ].工业微生物,1998,28(2):35-39.[5]李峰,吕锡武.聚乙烯醇作为固定化细胞包埋剂的研究[J ].中国给水排水,2000,16(12):14-17.[6]牛红星,邱蔚然.用固定化啤酒酵母细胞合成胞嘧啶核苷二磷酸胆碱[J ].华东理工大学学报,2002,28(4):372-375.[7]W anikawa A.,H os oi K.,K ato T.C onversion of unsaturated fatty acids to precurs ors of γ-lactones by lactic acid bacteria during the production of maltwhisky[J ].Journal of the American Society of B rewing Chemists ,2000,58(2):51-56.[8]于伟,徐岩,喻晓蔚,等.生物法转化分离耦合制备γ-癸内酯[J ].化工进展,2007,26(8):1151-1154.[9]周瑾,李雪梅,吕春华,等.地霉属真菌和棒状杆菌属株协同发酵生产γ-癸内酯[J ].生物技术通讯,2003,14(1):39-41.[10]王聪,宋焕禄,吕跃钢.复合诱变选育γ-癸内酯生产菌株[J ].食品科学,2007,28(6):237-240.[11]李花子,王建龙,文湘华.聚乙烯醇-硼酸固定化方法的改进[J ].环境科学研究,2002,15(5):25-27.[12]Zhuge J.M odern Ferment M icroorganism Experimental T echnology [M ].Beijing :Chem ical Industry Press ,2005:223-225.果胶酶高产菌株EIM -4的鉴定及其液体发酵条件优化柯崇榕,田宝玉,杨欣伟,林伟铃,黄薇,黄建忠3(福建师范大学工业微生物教育部工程研究中心,福建福州350108)摘要:目的:通过了解高产果胶酶菌株EI M -4的背景信息及优化其最适的产酶条件,为下一步工业化生产提供依据。
果胶酶生产工艺
果胶酶生产工艺果胶酶是一种重要的工业酶，广泛应用于食品、制浆造纸、纺织、饲料、制药等领域。
果胶酶的生产工艺主要包括菌种选育、发酵、分离纯化和产品包装等步骤。
首先，果胶酶的生产需要选择优良的产菌菌种。
常用的产菌菌种有枯草杆菌、红霉菌等。
通过菌种选育，筛选出产酶效果好、产酶量高的菌种。
同时，为了提高果胶酶的产量和稳定性，还可以通过基因改造的方式对产菌菌种进行优化。
其次，果胶酶的生产主要依靠发酵技术。
发酵过程中需要控制好温度、pH、氧气供应和酶基质的添加等因素。
常用的发酵方式包括固体发酵和液体发酵。
固体发酵是将产菌菌种和固体底物（如玉米渣、苹果渣等）混合，进行发酵。
液体发酵是将产菌菌种和液体培养基（如葡萄糖、麦芽糊精等）放入发酵罐中，进行发酵。
发酵时间一般在24-48小时左右。
然后，果胶酶的生产需要进行分离纯化工艺。
首先要将发酵液进行澄清，去除其中的固体颗粒和胶体物质。
然后，通过离心、超滤、凝胶过滤等手段，将果胶酶从发酵液中分离出来。
最后，通过浓缩、冷冻干燥等操作，得到果胶酶的粉状或液状产品。
最后，果胶酶的产品还需要进行包装和质量控制。
果胶酶的包装一般采用塑料桶、塑料袋等容器进行封装，并在包装上标明产品名称、批号、生产日期等信息。
对于果胶酶的质量控制，需要检测其活力、纯度和稳定性等指标，保证产品的质量和安全。
综上所述，果胶酶的生产工艺包括菌种选育、发酵、分离纯化和产品包装等步骤。
通过科学的生产管理和工艺控制，可以提高果胶酶的产量和质量，满足市场需求。
同时，还可以通过技术创新和优化，提高果胶酶的生产效率和降低生产成本，推动果胶酶产业的发展。
产原果胶酶菌株的筛选及其产酶条件优化
Screening of strain producing protopectinase and optimizing the fermentation conditions
TIAN Ya-hong
(College of Life Science, Hebei United University, Tangshan 063000)
从土样中分离得到4株对底物有作用活性的 产酶菌株，各菌株的产酶情况如图1所示。编号为 WJ-2的原果胶酶活性明显高于其他菌株，所以选 用此菌株作为原果胶酶的实验菌株。观察菌落特 征，如图2所示。
䚢≧߇ 6N-
鲜甘薯渣为实验室提取淀粉和甘薯蛋白后剩 余残渣，于60 ℃烘干，备用。 豆粕粉：市售；原果胶：六偏磷酸钠洗涤法 制备[2]；其他化学试剂均为分析纯。 1.2 主要仪器 台式电热干燥箱、电子天平：天津泰斯特仪 器有限公司；YXJ-1离心机：江苏市金坛中大仪 器厂；TDA-8002电热恒温水浴锅：余姚市东方电 工仪器厂。 1.3 培养基 菌种筛选培养基：察氏培养基；产酶培养 基：豆粕粉1 g，K2HPO4 3.8 g，KH2PO4 0.2 g，水 100 mL，pH5.0~6.0，160 r/min。 1.4 菌种的分离及筛选 1.4.1 菌种来源 自唐山市水果批发市场一长期倾 倒腐烂水果的土壤中分离纯化得到。 1.4.2 菌种的分离及筛选 经稀释分离法筛选出 单菌株，进一步分离纯化后，接种发酵后测其原 果胶酶酶活。选取高酶活性的菌株接至察氏平板 内，观察菌落特征。 1.5 1 方法 粗酶液制备 将发酵液于常温下4000 r/
收稿日期：2011-10-19 基金项目：河北省唐山市科技局项目(10120201c)。 作者简介：田亚红(1979—)，女，河北无极人，硕士，讲师，主要从事发酵工艺优化的研究工作。
产果胶酶菌株的筛选
产果胶酶菌株的筛选胶质是一类广泛存在于植物细胞壁中的高分子化合物，其中果胶是一种重要的胶质成分。
果胶具有极强的黏附性和保水性，对于植物的生长和发育起着重要的作用。
同时，果胶也是一种重要的食品添加剂，在食品工业中广泛应用。
因此，寻找高效的产果胶酶菌株具有重要的理论意义和实际应用价值。
一、果胶酶的作用和应用果胶酶是一种能够水解果胶的酶，它可以降解果胶分子，使得果胶变得更容易溶解和吸收。
在植物细胞壁降解过程中，果胶酶是一种非常重要的酶类，它能够降低植物细胞壁的黏度，促进植物细胞壁的脱落和细胞的分裂。
同时，果胶酶也被广泛应用于食品工业中，用于制造果汁、果酱、果醋、葡萄糖浆等产品。
通过添加果胶酶，可以降低果汁的浑浊度，提高果汁的透明度和口感，并且能够增加果汁的产量和提高果汁的品质。
二、果胶酶的产生果胶酶是一种外源酶，它不能够在人或者动物体内产生，只能够通过微生物发酵的方式得到。
微生物是一种能够产生大量酶类的生物体，其中一些微生物能够产生高效的果胶酶。
通过筛选和培养这些微生物，可以得到高效的果胶酶产生菌株，为果胶酶的工业化生产提供了可靠的来源。
三、果胶酶菌株的筛选果胶酶菌株的筛选是一种寻找高效果胶酶产生菌株的过程。
目前，常用的筛选方法有以下几种：1、传统的筛选方法。
传统的筛选方法是通过对微生物菌株进行培养和筛选，选择产酶量高的菌株，然后通过多次的发酵和培养，得到高效的产果胶酶菌株。
这种方法虽然简单易行，但是需要耗费大量的时间和精力，并且效果不稳定，不能够满足工业化生产的需要。
2、分子筛选法。
分子筛选法是一种利用DNA技术筛选菌株的方法。
通过对微生物菌株的基因组进行分析，可以找到产果胶酶的基因，然后将这些基因克隆到高效的宿主菌株中，得到高效的果胶酶产生菌株。
这种方法虽然效率较高，但是需要较高的技术水平和设备支持。
3、基因工程法。
基因工程法是一种将外源基因导入到微生物菌株中的方法。
通过将产果胶酶的基因导入到高效的宿主菌株中，可以得到高效的果胶酶产生菌株。
一种果胶酶生产菌株的分离及其产酶条件优化
株， 并将 分离得到的菌株在摇瓶发酵 培养 、 测定其酶活力 ， 其发酵 培养基 的初始 ｐ 最适 温度 、 Ｈ、 最适接 种量及
发酵周期进行初步研究． 结果表 明 ： 经过筛选得到 的产果胶 酶菌株在发 酵培养基 的初 始 ｐ Ｈ为 ７ ０ 培养 温度 ．、
为３ ３℃ 、 接种量为 ３ ％ 、 ０ 发酵周期为 ５ ６ｈ时， 此菌株产酶的酶活力最 高 ， 化后 的条件 大大提高 了菌株的产 优
蛋 白胨 质 量 分 数 １ ， 化 钠 质 量 分 数 ０ ５ ； ％ 氯 ． ％ 发 酵 培养基 ： 胶质 量 分 数 ０ ５ ， 白胨 质 量 分数 果 ．％ 蛋
１ ， 化钠 质量分 数 ０ ５ ％ 氯 ． ％．
１２ 方法 ．
尽管 自然 界 中天 然果 胶 酶 广泛 存 在 于 动植 物
第３ ４卷第 ４期
２１年 ０ ０２ ４月
武
汉
工
程
大
学
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报
Ｖｏ． ４ Ｎｏ ４ １３ ． Ａｐ ． ２ １ ｒ ０２
Ｊ Ｗ ｕ ａ Ｉｓ． Ｔ ｅ ． ． ｈ ｎ ｎｔ ｅ ｈ
文章 编 号 ：６４— ８ ９ ２ １ ）４— ０ ５ ４ １７ ２ ６ （ ０２ ０ ０ １ —０
污 水处 理池采 集 土样． １ １２ 试 剂与 仪 器 ．．
产 ）Ｄ Ｓｐ 计 ， ， Ｎ ，Ｈ 电子天 平 ，０ １型振 荡愠 温 培 养 ２０
收 稿 日期 ：０２— ３—１ ２１ ０ ５
１２ １ 筛选路 线 ．． 菌 种保 存 ． １２２ 筛选方 法 ．．
采 样 土样 一 富集 培养 一 初
筛 培养 一复 筛培 养一 种 子罐 培 养一 发 酵罐 培 养一 ａ ．富集 培养 ： 将采 集 到 的土
果胶酶高产菌株筛选发酵条件优化以及酶学性质的研究
果胶酶高产菌株筛选发酵条件优化以及酶学性质的研究果胶酶是一种重要的工业酶，具有广泛的应用前景。
为了提高果胶酶的产量，本研究旨在筛选果胶酶高产菌株，并优化其发酵条件，同时对其酶学性质进行研究。
首先，我们从自然环境中采集了一系列样品，包括土壤和水体样品。
然后，将这些样品进行稀释并接种到含有果胶为唯一碳源的培养基中。
经过连续传代和筛选，最终从中获得了一株具有较高果胶酶活性的菌株A。
接下来，为了优化菌株A的发酵条件，我们设计了一系列实验。
首先是培养基的优化。
我们通过改变碳源、氮源和矿物盐等成分的浓度和组合，最终确定了一种最适合菌株A生长和果胶酶产量的培养基配方。
然后，对于菌株A的培养条件进行了进一步的优化。
我们调整了温度、pH值、培养时间和初始菌体浓度等参数，并通过检测果胶酶活性来评估不同条件下的产酶效果。
最终，找到了最适宜的发酵条件，菌株A在这种条件下果胶酶的产量显著提高。
接下来，我们对菌株A产生的果胶酶进行了酶学性质的研究。
首先是酶活温度和酶活pH的测定。
我们利用不同温度和不同pH值下的底物降解实验，确定了菌株A产生的果胶酶的最适活性温度和最适活性pH。
然后，对菌株A产生的果胶酶进行了酶动力学性质的研究。
我们通过测定果胶酶对果胶的降解效果，建立了不同底物浓度下果胶酶的反应速率曲线，并利用Michaelis-Menten方程对其进行了分析。
最后，我们对菌株A产生果胶酶的产酶机制进行了初步探究。
通过基因组测序和蛋白质组学技术的应用，我们发现菌株A产生果胶酶的基因和调控机制，为进一步提高果胶酶产量和改良菌株奠定了基础。
总结而言，本研究通过筛选果胶酶高产菌株并优化发酵条件，成功提高了果胶酶的产量。
同时，对果胶酶的酶学性质进行了深入研究，探究了其最适工作温度、pH值以及底物浓度对酶活性的影响。
通过对产酶机制的初步探究，为今后果胶酶的应用及菌株改良提供了一定的参考依据综上所述，本研究通过对菌株A产生的果胶酶进行了全面的酶学性质和酶动力学性质的研究，同时对其产酶机制进行了初步探究。
黑曲霉液态发酵橘子皮产果胶酶工艺条件优化
黑曲霉液态发酵橘子皮产果胶酶工艺条件优化引言果胶酶（pectinase）是一种重要的酶类，在食品、饲料、纺织等工业中广泛应用。
黑曲霉（Aspergillus niger）作为一种产果胶酶的常见微生物菌株，已成为工业生产果胶酶的重要源。
本研究旨在优化黑曲霉液态发酵橘子皮产果胶酶的工艺条件，以提高果胶酶的产量和活性。
优化前的工艺条件在黑曲霉液态发酵橘子皮产果胶酶的传统工艺中，一般采用以下条件： 1. 发酵时间：48小时 2. 温度：30℃ 3. 初始pH：5.0 4. 容器容积：250 mL 5. 橘子皮浓度：5% 6. 静置转速：150 rpm优化工艺条件的步骤第一步：发酵时间的优化1.设置不同时间点的发酵时间，如24小时、36小时、48小时和72小时。
2.分别在以上时间点采集发酵液，检测果胶酶的产量和活性。
3.对不同时间点的结果进行比较，选择产量和活性最高的时间点。
第二步：温度的优化1.设置不同温度的发酵条件，如25℃、30℃、35℃和40℃。
2.在不同温度下进行发酵，采集发酵液，检测果胶酶的产量和活性。
3.对不同温度的结果进行比较，选择产量和活性最高的温度。
第三步：初始pH的优化1.设置不同初始pH的发酵条件，如4.0、5.0、6.0和7.0。
2.在不同初始pH下进行发酵，采集发酵液，检测果胶酶的产量和活性。
3.对不同初始pH的结果进行比较，选择产量和活性最高的初始pH值。
第四步：容器容积的优化1.设置不同容器容积的发酵条件，如100 mL、250 mL、500 mL和1000 mL。
2.在不同容器容积下进行发酵，采集发酵液，检测果胶酶的产量和活性。
3.对不同容器容积的结果进行比较，选择产量和活性最高的容器容积。
第五步：橘子皮浓度的优化1.设置不同橘子皮浓度的发酵条件，如2%、5%、8%和10%。
2.在不同浓度下进行发酵，采集发酵液，检测果胶酶的产量和活性。
3.对不同橘子皮浓度的结果进行比较，选择产量和活性最高的浓度。
果胶酶产生菌的筛选及其条件优化2
实验序号实验7 实验名称特定产物工业生产菌种发酵及应用性质研究（一）实验时间2011.11.15--12.15 实验室118一、实验目的：1、掌握菌种选育、菌种发酵条件的优化和微生物酶制剂酶活测定的基本方法；2、掌握从土壤中分离酶产生菌的方法，学会运用微生物生态知识分离产酶微生物；3、掌握果胶酶活性测定的原理，学会果胶酶活性的测定方法；4、了解酶学性质的研究。
二、实验原理1、果胶质：果胶是植物中的一种酸性多糖物质，它通常为白色至淡黄色粉末，稍带酸味，具有水溶性，工业上即可分离，其分子量约5万——30万，主要存在于植物的细胞壁和细胞内层，为内部细胞的支撑物质。
果胶质是一类高分子碳水化合物，普遍存在与高等植物的细胞壁及细胞壁间作为结构物质。
2、果胶酶：分解果胶的一个多酶复合物，通常包括原果胶酶、果胶甲酯水解酶、果胶酸酶。
通过它们的联合作用使果胶质得以完全分解。
天然的果胶质在原果胶酶作用下，转化成水可溶性的果胶；果胶被果胶甲酯水解酶催化去掉甲酯基团，生成果胶酸；果胶酸经果胶酸水解酶类和果胶酸裂合酶类降解生成半乳糖醛酸。
细菌、放线菌、酵母菌和霉菌都可以发酵产生果胶酶，但是目前商品果胶酶主要来自于霉菌。
果胶酶主要用于果胶的分解，在水果的加工、葡萄酒的生产、麻类脱胶和饲料方面。
3、果胶酶的酶活测定方法：①、粘度降低法：利用粘度计测量一定温度、酶浓度和一定反应时间内，标准果胶溶液的粘度降低值。
②、脱胶作用时间法：以脱胶作用的时间来测定果胶酶的酶活力。
③、次亚碘酸法：用滴定法定量测定半乳糖醛酸的生成量，以表示果胶酶的活力。
④、还原糖法（DNS法）：测定在一定反应时间内，水解果胶产生的还原糖的量。
根据果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸，半乳糖醛酸是一种还原糖，与3，5-二硝基水杨酸共热后被还原成棕红色的氨基化合物，在一定的范围内，还原糖的量和反应液的颜色呈比例关系，可利用比色法在540nm进行测定。
4、影响微生物发酵的因素有很多；①、培养基的成分（营养物质及其浓度）例如：碳源的种类、氮源的种类、碳源的浓度、氮源的浓度、无机盐、水含量等；②、菌种接种的量；③、发酵条件：温度、PH、溶解氧等；④、附加条件：诱导物、表面活性剂等（5）、酶催化反应的进行也受到多方面因素的影响：底物浓度、酶浓度、温度、PH、激活剂、抑制剂。
黑曲霉液态发酵橘子皮产果胶酶工艺条件优化
黑曲霉液态发酵橘子皮产果胶酶工艺条件优化
黑曲霉液态发酵橘子皮产果胶酶的工艺条件优化主要包括以下几个方面：
1. 发酵培养基的优化：选择合适的碳源、氮源以及其他辅助营养物质，如钙离子、锌离子等。
橘子皮中富含果胶，可作为碳源，大豆粉等可作为氮源，发酵培养基的配方需要根据黑曲霉的需求进行优化。
2. 发酵条件的优化：包括温度、pH值、发酵时间以及搅拌速
率等参数。
黑曲霉对温度和pH值均有一定的适应性，一般发
酵温度在25-30℃，pH值在5.5-6.5左右较为适宜。
发酵时间
一般为48-72小时，搅拌速率需要根据发酵器和菌种的要求进
行调节。
3. 抗泡剂的添加：由于果胶酶在发酵过程中容易产生大量气泡，影响发酵效果，因此可以适量添加抗泡剂，如聚乙烯醇等，以减少气泡产生。
4. 发酵过程的控制：包括发酵器的选择与控制，采用合适的发酵器进行发酵，通过调节参数如温度、pH值、气体流速等来
控制发酵过程。
5. 静态发酵与摇瓶发酵的对比：静态发酵和摇瓶发酵各有优劣，一般情况下摇瓶发酵较为适合小规模试验，而静态发酵适合大规模产酶。
通过以上工艺条件的优化，可以提高黑曲霉液态发酵橘子皮产果胶酶的产量和活力，提高生产效果。
果胶酶产生菌的分离及其产酶条件优1
果胶酶产生菌的分离及其产酶条件优1 果胶酶产生菌的分离及其产酶条件优化摘要:通过野外采集样品，从中筛选出两株产酶相对较高的菌株，并对其酶学性质进行初步研究，探索其最适生长时间，生长的环境温度，最适ph，以及最适接种量，并设计实验方案。
第一部分前言果胶酶是一类分解果胶物质的多种酶的总称，主要包括原果胶酶，果胶脂酶，果胶裂解酶及多聚半乳糖醛酸酶四大类，因其能有效的分解果肉组织中的果胶物质,而广泛应用于食品加工、酿酒工业等方面。
此外，果胶酶在生物制药，生物污染防治，农产品加工，饲料等其他生物大规模产业也用途广泛，因而需求量也是日益增加，由于自然界中天然果胶酶广泛存在于动、植物体内，因产量较低而难以作为大规模提取，因此，寻求高效的果胶酶生产方法也更加重要，现阶段，采用微生物发酵，并从其代谢产物中提取果胶酶方法，已应用的日加成熟，各种高产、高效的菌株纷纷被筛选出来，而广泛应用于发酵生产。
一、果胶酶产生菌(一)果胶酶产生菌的选育据报到，在自然界中，已知的果胶酶产生菌多达40余种，其中多数为细菌和霉菌，还有少数的放线菌、酵母菌。
1.材料和方法:1.1实验材料:采集果园土壤及腐烂的柑橘、桔子、甜瓜等水果腐烂的部分。
1.2培养基:1.2.1富集培养基: 5%的葡萄糖，0.3%酵母膏，0.5%蛋白栋。
1.2.2选择培养基: 磷酸氢二钾0.01g，硫酸镁0.05g，硝酸钠0.3g，硫酸亚铁0.001g，果胶0.5g，琼脂2.5g，水100ml，ph自然。
1.2.3液体培养基: 磷酸氢二钾0.01g，硫酸镁0.05g，硝酸钠0.3g，硫酸亚铁0.001g，庶糖0.5g，水100ml，ph自然。
1.2.4土豆斜面培养基:20%土豆，20%葡萄糖，2%琼脂，ph自然1.3菌株筛选方法1.3.1筛选路线:采样增殖初筛复筛保存1.3.2筛选方法(1)增殖培养:将采集得的土壤及水果腐烂部分用无菌水稀释，搅拌充分后，静置5分钟，取上清液10ml至于50ml富集培养液中，30?,150r/min培养2-3天。
产果胶酶菌株的筛选
产果胶酶菌株的筛选摘要：果胶酶是一种重要的酶类，广泛应用于食品、制浆造纸、医药、化学等领域。
本文介绍了产果胶酶菌株的筛选方法及其应用前景。
关键词：果胶酶；菌株；筛选；应用一、引言果胶酶是一种能够降解植物细胞壁中的果胶的酶类。
果胶是一种多糖，广泛存在于植物细胞壁中，是植物细胞壁的重要组成部分。
果胶酶的应用十分广泛，主要用于食品、制浆造纸、医药、化学等领域。
因此，寻找高效的产果胶酶菌株具有重要的实际意义。
二、产果胶酶菌株的筛选方法1. 筛选方法（1）传统筛选法传统筛选法是指利用传统的细菌学方法，通过对不同来源的微生物进行筛选，从中筛选出能够产生果胶酶的菌株。
传统筛选法的优点是简单易行，但是其效率较低，需要大量的时间和人力。
（2）分子筛选法分子筛选法是指利用分子生物学技术，通过对微生物基因组中的果胶酶基因进行克隆和表达，从中筛选出高效的果胶酶菌株。
分子筛选法的优点是高效、快速、准确，但是其需要较高的技术水平和设备支持。
2. 筛选指标（1）酶活力酶活力是评价果胶酶菌株筛选效果的重要指标。
通常采用荧光素-果胶酸钠法或3,5-二硝基水杨酸法测定果胶酶的活力。
（2）生长速度生长速度是评价果胶酶菌株筛选效果的另一个重要指标。
生长速度快的菌株能够更快地产生果胶酶，具有更高的产酶效率。
三、产果胶酶菌株的应用前景1. 食品工业果胶酶在食品工业中的应用主要是用于果汁饮料、果酱、果冻、果脯等制品的生产中，能够使果汁饮料更加清澈、口感更佳，使果酱、果冻、果脯等制品更加美味可口。
2. 制浆造纸工业果胶酶在制浆造纸工业中的应用主要是用于浆料的预处理中，能够有效地降解浆料中的果胶，减少浆料的黏度，提高浆料的流动性和过滤性，从而提高纸张的质量和产量。
3. 医药工业果胶酶在医药工业中的应用主要是用于治疗炎症、消肿、解毒等方面，能够有效地降低血液黏度、改善血液循环，从而达到治疗和预防心血管疾病的目的。
4. 化学工业果胶酶在化学工业中的应用主要是用于生产高分子化合物、生物燃料等方面，能够有效地降解植物细胞壁中的果胶，提取出高分子化合物和生物燃料。
橘皮果胶酶高产菌株的筛选与产酶条件的优化
约产 生 ４ ０ ～５ Ｏ 的皮渣 ， 橘子 皮 除 极 少数 用 来
ｐ Ｈ ６ ． ０ 。（ ３ ） 对 照培 养基 ： 牛 肉膏 ２ ． ５ ｇ ・ Ｌ ～ ， 蛋 白 胨 ］ ０ 。０ ｇ・ Ｉ ～， Ｎａ Ｃ ｌ ５ ．０ ｇ・Ｌ ～， Ｋ２ ＨＰ Ｏ ４ １ ． ０ ｇ ・ Ｌ ～， ＫＨ２ Ｐ Ｏ ０ ． ３ ｇ・ Ｌ 一， 琼脂 １ ５ ． ０ ｇ ・ Ｌ 一， ｐ Ｈ ６ ． ０ 。（ ４ ） 选择培养基： Ｋ２ ＨＰ Ｏ １ ． ０ ｇ ・ Ｉ ～，
供试 培养 基 （ １ ） 增 殖培 养基 ： 土豆 １ ０ ０ ｇ ， 蔗糖
１ ０ ｇ ， 水 ５ ０ ０ ｇ ， 琼脂 １ ５ ． ０ ｇ ・ Ｌ 一 ， ｐ Ｈ 自然 。 （ ２ ） 初
提取 、 果 胶澄 清 和植 物 纤 维 分 解 等 口 ］ ， 其 广 泛 存 在 于动植 物 和微 生物 中 ， 但 动植 物来 源 的果 胶 酶
果胶 酶 （ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｎ ａ ｓ ｅ ） ， 又称 多 聚半 乳糖 醛 酸 酶 ， 是水 解组 成 果胶 的 Ｄ 一 聚半 乳糖 醛 酸 ａ 一 （ １ ， ４ ） 糖 苷 键 的酶 。果 胶酶 在食 品 工业方 面 主要 应用 于 果汁
果胶内切酶产生菌的筛选及其发酵条件
果胶内切酶产生菌的筛选及其发酵条件
彭彩红;张春枝;金凤燮
【期刊名称】《大连工业大学学报》
【年(卷),期】2004(023)001
【摘要】果胶内切酶普遍存在于植物和微生物中,但天然来源的果胶内切酶分泌量低且提取困难,因而不能满足生产和实验的需要.以腐烂水果、果园泥土、大曲等为分离材料,筛选得到了果胶内切酶高产菌株GJ-1.对菌株GJ-1进行发酵培养,并通过正交实验确定了适宜菌株GJ-1产酶的最佳培养基组成:ρ(麸皮)=30
g/L,ρ(NH4)2SO4]=10 g/L,ρ(玉米粉)=20 g/L.菌株GJ-1的最适产酶条件为:初始pH值7.0,温度30℃,时间36 h.
【总页数】3页(P39-41)
【作者】彭彩红;张春枝;金凤燮
【作者单位】大连轻工业学院,生物与食品工程学院,辽宁,大连,116034;大连轻工业学院,生物与食品工程学院,辽宁,大连,116034;大连轻工业学院,生物与食品工程学院,辽宁,大连,116034
【正文语种】中文
【中图分类】TQ925.3
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酶 的总称 ， 同来 源 的果 胶酶其 特点也 不 同 ， 中微 不 其
生物来 源 的果 胶酶 主要有 聚半乳 糖醛 酸酶 （ Ｇ） 聚 Ｐ 、
半乳糖 醛酸裂 解酶 （ ＧＬ 、 甲基半 乳 糖 醛酸 裂 解 Ｐ ）聚
酶 （ ＭＧＬ 和 果胶 酯酶 （ Ｅ ｃ 果 胶 酶 的应用 十 分 Ｐ ） Ｐ ） ．
果胶 酶 （ ｅｔ ａｅ ） 指 能分 解 果 胶质 的多 种 ｐ ｃｉ ｓｓ 是 ｎ
பைடு நூலகம்
和 Ｆ ｓｒｕ ｎｌ ｏｍｅ进行 混合培 养 ， 生 的果 ｕａｉｍ ｍｏ ｉｆ ｙ ｉ 产
胶 酶 的活性可 以达到 １０ １ ６Ｕ ・ ， 单独 培养 ４ ． ｇ 是 Ａｓ ｅｇ ｌｕ ｉ ｅ ｐ ｒ ｉ ｓ ｇ ｒ活性 的 １ ７ ． ｌ ｎ ．倍 近年来 ， 随着 我 国果 汁和果酒 行业 的迅猛 发展 ， 对果胶 酶 的需求 日益 增 长 ， 胶 酶 制剂 的产 量和 质 果
．
ｐ ｏ ｕ ｅ ｙ ｔ ｅ ｓ ｒ ｉ ｎ ｅ ｈ ｐ ｉ ｕ ｃ ｎ ｉ ｏ ｅ ｃ ｅ ０ ７ ８ Ｕ ・ｍＬ ｒ ｄ ｃ ｄ ｂ ｈ ｔ ａ ｎ ｕ ｄ ｒｔ ｅ ｏ ｔ ｍ ｍ ｏ ｄ ｔ ｎ ｒ ａ ｈ ｄ １ ５ ｉ
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中 图分 类 号 ： Ｑ ２ ． Ｔ ９５ ３ 文献标识码 ： Ａ 文章 编 号 ：１０ —３５ ２ １ ）３０ １—５ ０ ３４ １ （０ ０ ０ —１ ７０
Ｓｃ ｅ ｎ ｎ ｆｐ ｃ ｉ ａ ｅ ｐ ｏ ｃｎ ｔ ａｎｓａ ｄ ｏ ｔｍ ｉｉ ｇ ｒ ｅ ｉ ｇ ｏ ｅ ｔｎ ｓ ｒ ｄｕ ｉ ｇ ｓ ｒ ｉ ｎ ｐ ｉ ｚｎ ｏ ｔ ｅ ｍ ｅ ｔ ｔｏ ｏ ｄ ｔｏ ｆｉｓ ｆ ｒ ｎ ａ ｉ ｎ ｃ ｎ ｉｉ ｎ
２１ ０ ０年 ６ 月 第 ３ １７ １１ 期 １ ～ ２
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学
学
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第 ４５卷 双 月 刊
Ｊ ＯＵＲＮＡＬ ＧＡＮＳ ＡＧＲＩ ＯＦ Ｕ ＣＵＩＴＵＲＡ１ ＵＮＩ ＶＥＲＳ ＴＹ Ｉ
果 胶酶 高 产菌 的筛 选 及 发 酵条 件 的优 化
王 媛 ， 舜愈 ， 霞 ， 玉梅 ， 文军 韩 祝 蒋 盛
Ｗ ＡＮ Ｙ ａ ， Ｇ ｕ ｎ ＨＡＮ Ｓ ｕ —ｕ Ｚ ｈ ｎｙ ， ＨＵ Ｘｉ，Ｉ ａ ＪＡＮＧ Ｙｕｍｅ， ＨＥ ｅ － ｎ — ｉＳ ＮＧ Ｗ ｎｊ ｕ
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（ 甘肃农业大学食品科学与工程学 院，甘肃 兰州 ７ ０ ７ ） ３０ ０
摘要： 采用平板分离法从腐烂的大枣 中筛选 出果胶酶的高产菌 株 ， 通过 Ｌｓ４ ）Ｅ （ ／ 交试验对该 菌种的深层液体
发酵条件进行优化． 结果表明 ： 该菌种深层液体发 酵最适 的发酵条件为葡萄糖添加量 １ ， 白胨 ０ ５ ， 蛋 ． 吐温 ６ ０ 添加量 ００ ０发酵培养基初始 ｐ ．３Ｖ ， Ｈ值 ４５ 发酵温度 ４ ．， Ｏ℃ ， 在此条件下菌株的产酶能力可以达到 １ ５ Ｈ ． ０７８Ｕ・ 关键词 ： 果胶酶 ， 筛选 ， 深层液态发酵 ， 酵条件优化 发
广泛 ， 主要 应 用 于 食 品 工 业 以及 饲 料 工 业 等 领 域
量 已经 远远不 能满 足食 品工业 的需 要． 目前 ， 国内发
酵生产 的 果 胶 酶 活 性 普 遍 较 低 ，导 致 生 产 成 本 增
加， 也在 一定程度 上 限制 了该 酶 的广 泛应用 ． 筛选果
中［］ 田英华 等［选 育 了 １ 高产果 胶酶 的黑 曲霉 。． 。 ］ 株