黄曲霉毒素中毒

病因：黄曲霉毒素中毒病是由曲霉所产生的毒素引起的一种中毒病。

可以发生于多种动物和禽类，在家禽中以鸭和火鸡易感。

不同品种和不同龄的鸭其敏感性亦不相同，例如麻鸭比京鸭敏感，雏鸭比成年鸭更为易感。

分布：黄曲霉毒素分布的范围广，凡是被黄曲霉污染了的粮食和饲料都有黄曲霉毒素存在的可能。

黄曲霉素有多种，其中以B1产生最多，毒性最。

产生黄曲霉毒素的必要条件是：有合适的培养基，诸如花生、大豆、玉米、麦、干草等；要有适宜的温度和湿度(最温度范围为24℃一30℃，最适相对湿度为80％以上)，以及适当的培养时间。

这在我国南方的自然条件较适合，故易发生黄曲霉毒素中毒病例。

鸭采食了含有黄曲霉毒素的饲料而发生，至于发病与否取决于采食毒素的量、鸭的日龄等多种因素。

病鸭最初症状为采食量减少，精神萎顿，衰弱无力，拱背和尾下垂，步态不稳(图141)，倒地后常不能站立，叫声嘶哑。

生长缓慢，羽毛脱落，腿和趾部可出现紫色出血斑点。

雏鸭于死前常有共济失调，抽搐，角弓反张。

剖检：皮下胶样浸润，眼和蹼皮下出血以及肝脏病变(图14． 2)。

1周龄左黄曲霉毒素中毒病患鸭拱背和尾下垂。

右的雏鸭，常见肝脏肿大，色发灰黄，肾苍白肿大，或有小点出血。

胸脏亦可能有出血点．3周龄以上的中鸭肝脏病变明显，肝苍白，萎缩与肝硬变。

在较大的鸭见肝肿大、发黄、质脆，此外，尚可见心包积液和腹水，肾肿胀出血与胰脏出血。

病程长者，则肝实质见有结节状增生- -肝癌(图14．3)。

防治：有效药物治疗，经验证明，一旦更换掉含有黄曲霉毒素的饲料后，很快即停止生病死亡．平时预防应注意加强粮食和饲料的保管工作，尤其在温暖
多雨季节更应注意防霉。

黄曲霉素中毒是一种常见的中毒病，发霉的玉米、花生、谷、豆饼、米糠中往往有大量的黄曲霉菌株生长繁殖，在使这些饲料发生霉变的同时产生了很多黄曲霉毒素。

1．症状不同年龄鸡吃入不同的毒素表现出不同的症状。

雏鸡中毒时往往未有明显的症状而突然死亡，病程稍长的则表现为食欲减退，精神委顿，贫血，衰弱，排血色粪便，最后衰竭死亡。

2．防治坚持不喂发霉的饲料，尤其是不喂发霉的玉米。

饲料仓库如果被黄曲霉毒素所污染，要用福尔马林熏蒸或用过氧乙酸喷雾，以消灭霉菌的孢子。

被黄曲霉毒素污染的用具可用2％次氯酸钠溶液消毒，或在浓石灰乳中浸泡消毒。

病鸡粪便含有毒素，要彻底清除，集中用漂白粉处理，以免污染地面和水源。

1. 病因
在温暖潮湿的地区或季节，玉米、花生、大米等被产毒黄曲霉污染，鸭、鹅吃了这种饲料即可发生中毒。

黄曲霉毒素有十几种，其中以黄曲霉毒素B1的毒性最大，家禽少量食入即可引起慢性肝损害；若食入量过大，可引起肝炎；若长期食入，则可引起肝癌。

雏鸭的敏感性高。

2. 症状
雏鸭、雏鹅中毒是多表现为急性发病，有时见不到明显症状即迅速死亡。

病程稍长的病雏，食欲废绝，鸣叫，掉毛，步态不稳，运动失调或跛行，脚、腿部皮下呈紫红色，并出现黄疸。

病雏死亡时头颈呈角弓反张，死亡率高。

成年鸭，鹅的急性中毒症状与雏禽相似，且饮水增加，腹泻，排绿色稀粪；慢性中毒的症状不明显，表现为食欲不振，消瘦，贫血，衰弱。

病程长者，可发展为肝癌，最后衰竭死亡。

剖检时，急性病例的肝脏肿大，变软，无弹性，颜色变淡呈黄白色，有出血点。

肾脏苍白，稍肿大。

慢性病例的肝脏变黄，逐渐硬化，体积缩小，常分布白色点状或结节状病灶。

病程长者，常形成肝脏小肿瘤结节，心包腔或腹腔积水，小腿和蹼的皮下有出血点。

3.防治
预防本病的根本措施是不喂发霉的饲料，尤其是发霉的玉米，花生饼和稻谷。

用2%次氯酸钠溶液消毒环境，粪便用漂白粉处理。

仓库用福尔马林熏蒸消毒。

发现鸭、鹅有中毒症状时，应即检查饲料是否发霉，若饲料发霉，立即停喂，改用易消化的青绿饲料。

给病雏饮用5%葡萄糖水，饲料中补加维生素AD3粉，维生素B1、B2和维生素 C，或添加禽用多维素。

为避免继发细菌感染，可投喂土霉素，氟哌酸等抗菌药物。

黄曲霉毒素中毒是由于采食被黄曲霉等特定真菌所产生的代谢产物即黄曲霉毒素污染的饲料而引起的一种危害极大的中毒病。

主要破坏肝脏、血管和中枢神经，病畜表现全身出血、消化障碍和神经症状等。

各种动物均可发生，人也可发病，是一种严重的人畜共患病。

1 临床症状
临床上可分为急性、亚急性和慢性三种类型，其中亚急性较常见。

1.1 急性病例中毒多于食入毒素污染饲料l～2周左右发病，可在运动中发生死亡，或发病后2d内死亡。

1.2 亚急性病例病猪体温正常，精神沉郁，不吃，后躯无力，走路摇摆，粪便干燥，直肠出血，有时站立一隅或头抵墙下。

黏膜苍白或黄染，皮肤出血和充血。

以后出现间歇性抽搐，表现过度兴奋，角弓反张，消瘦，可视黏膜黄染，皮肤发白或发黄。

1.3慢性病例表现精神萎顿，走路僵硬。

出现异嗜癖者，喜吃稀食和青绿饲料，甚至啃食泥、瓦砾，常离群独处，头低垂，弓背，卷腹，粪便干燥。

亦有呈现兴奋不安，冲跳，狂躁。

体温正常，黏膜黄染，有的病猪眼、鼻周围皮肤发红，以后变蓝色。

1.4血液检查红细胞数显著减少，白细胞数增多，低蛋白血症，凝血时间延长。

急性病例，谷一草转氨酶、谷氨酸转移酶和凝血酶原性升高。

亚急性和慢性病例，碱性磷酸酶和异柠
檬酸脱氢酶活性升高，黄疸指数升高。

2 病理变化
2.1 急性病例，主要是充血和出血，胸腹腔大出血，常积有液体。

全身多处肌肉出血，常见、大腿前和肩胛下区的皮下肌肉。

胃肠黏膜可见出血斑点，肠内混血呈煤焦油状、肾脏有出
血斑点。

肝肿大，呈黄褐色，脆弱，表面有出血点。

胆囊扩张。

心内、外膜常有出血点。

2.2 慢性病例主要是肝硬变、黄色脂肪变性及胸腹腔积液，有时，结肠浆膜呈胶样浸润肾脏苍白、肿胀、淋巴结充血、水肿。

2.3 组织学变化，急性病例呈急性中毒性肝炎，从脂肪变性到肝小叶伴有胆管增生，肝细胞内往往见到透明样颗粒变性，结缔组织增生。

在肝小叶中的外周肝细胞往往呈现再生及肥大。

肾变性、萎缩，肾小管扩张。

3 诊断
若发现可疑症状，必须调查了解病史，并对现场饲料样品进行检查，发现霉饲料，才能做出初步诊断，确诊必须参考病理组织学特征变化及黄曲霉菌毒素测定的结果.还可进行霉菌病原的分离培养。

4 防治
4.1 治疗发现本病后应立即停止饲喂发霉变质的饲料，用新鲜、含维生素丰富的饲料，本病无特效解毒疗法。

采取排除毒物，解毒保肝，止血，强心等措施。

应用维生素C葡萄糖、抗生素、维生素B、硫酸钠等药物.禁用磺胺类药物。

4.2 预防我国饲料卫生标准规定，黄曲霉毒素Bl在玉米和花生饼粕中的含量不得大于0.05mg／kg。

在配合饲料时要严格控制饲料原料的质量，坚决不用发霉的饲料原料，对可疑霉变原料应进行黄曲霉毒素B l含量测定。

严格执行饲料中黄曲霉毒素容许量标准。

我国饲料卫生标准规定，生长育肥猪配、混合饲料中黄曲霉毒素Bl的含量不得大于0.02mg/kg。

在生产配合饲料时要加防霉剂，防止饲料霉变。

霉菌是微生物世界的一个大家族，黄曲霉菌是这个大家族的一员。

黄曲霉菌本身是无毒的，但在其繁殖代谢的过程中可分泌出有毒的物质黄曲霉毒素。

黄曲毒素是一种剧毒物质，它损害动物的肝脏，引起肝细胞坏死、肝纤维化、肝硬化
等病变。

黄曲霉毒素是目前发现的最强的致癌物质之一。

1 主要可诱发肝痛，还能诱发胃癌、肾癌、直肠癌及乳腺、卵巢、小肠等部位的肿瘤
黄曲霉毒素对人体健康威胁很大。

目前已确定其化学结构，黄曲霉毒素B1、B2、C1、G2等17种，其中趴毒性最大。

食物中的花生、花生油、玉米、大米、棉籽等最容易污染上黄曲霉寿素，小麦，大麦也常被污染，豆类一般污染较轻，工业化生产的发酵制品如面酱。

咸肉、火腿、香肠等肉类食品，亦能受到黄曲霉菌的污染。

我国卫生标准规定，花生、花生油、玉米中，黄曲霉毒素含量不超过20微克/公斤；大米、食用油不得超过10微克/公斤；其它粮食、豆类、发酵食品不得超过5微克/公斤；婴儿食品中不得有黄曲毒素。

2 受黄曲霉菌污染的粮及食品不能食用
轻度污染的粮及其他食品，可以用一些简单的方法将毒素破坏掉或除去。

日常生活中可以用以下方法去毒：
2．1 剔除霉变粮粒因毒素主要集中在霉变的粮粒中，凡表面长有黄绿色霉菌，或破损皱缩、变色、变质的花生米和玉米，都有可能污染黄曲霉毒素。

在食用前应仔细挑选，剔除霉变粒。

2．2 提高加工精度稻谷污染黄曲霉菌后，米中的毒素主要集中在米糠层，如果在稻谷加工时，将糙米碾得精一点，尽量除去米糠层，可降低大米中毒素的含量。

玉米中的黄曲霉毒素有54~72％集中在皮层和胚中，如在加工时提取胚，可除去大部分毒素。

用含黄曲霉毒素的玉米制成玉米淀粉，毒素的含量仅为原有含量的1％。

2．3 水洗去毒将污染上黄曲霉菌的大米用清水反复搓洗五六次，一直洗到水清时再煮饭，可除去大部分毒素。

2．4 加热去毒蒸煮、爆炒或油炸可减少一部分黄曲霉毒素。

轻度污染的花
生米，爆炒可使黄曲霉毒素B1、C1含量分别减少65％和62％；若用油炸，可使黄曲霉毒素Bl、Cl含量分别减少69％和67％。

大米煮成米饭，一般能破坏20％的黄曲霉毒素。

用高压锅煮米饭，去毒效果比普通锅煮饭好。

2．5 植物油中的去毒在含黄曲霉毒素的植物油中，加入活性白陶土或活性炭等吸附剂，搅拌后静置沉淀，取上层清油，毒素含量大为降低。

如在含毒花生油中加入1．5％的白陶土，可使含毒量从每公斤100微克降至10微克以下。

用含黄曲霉毒较低的植物油烹调食物时，先将油倒入锅内烧至冒微烟(约120℃时)，可除去油中90％以上的毒素。

如果菜肴中加葱、姜、蒜等辛香料，对除去黄曲霉毒素效果更为理想。

2．6 山苍子去毒用中药山苍子或山苍子胶丸均可，每百公斤粮食用十四五粒胶丸。

用法是先把胶丸剖开，放在小瓶中，用透气纱布扎住瓶口，然后连瓶埋人米缸中，盖上缸盖，让芳香油自然挥发，熏蒸粮食，即可消除黄曲霉毒素。

将山苍子野果或干果直接埋人粮食中，亦可收到良好的效果。

黄曲霉毒素
一, 概述
1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物,是一种毒性极强的剧毒物质.黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用,严重时,可导致肝癌甚至死亡.在天然污染的食品中以黄曲霉毒素B1最为多见,其毒性和致癌性也最强.
1,发现:上世纪60年代,在英国发生的十万只火鸡突发性死亡事件被确认与从巴西进口的花生粕有关.进一步的调研证明,这些花生粕被一种来自真菌的有毒物质污染,这些研究工作最终使人们发现了黄曲霉(Aspergillus.flavus)产生的有毒代谢物质,黄曲霉毒素(Aflatoxins).是黄曲霉和寄生曲霉的代谢产物,特曲霉也能产生黄曲霉毒素,但产量较少.产生的黄曲霉毒素主要有B1,B2 ,G1 ,G2 以及另外两种代谢产物M1 ,M2.其中M1 和M2是从牛奶中分离出来
的.B1,B2 ,G1 ,G2 ,M1 和M2的在分子结构上十分接近.
2,化学结构:黄曲霉毒素(Aflatoxins),是一组化学结构类似的化合物,目前已分离鉴定出12种,包括B1,B2,G1,G2,M1,M2,P1,Q,H1,GM,B2a和毒醇.黄曲霉毒素的的基本结构为二呋喃环和香豆素,B1是二氢呋喃氧杂萘邻酮的衍生物.即含有一个双呋喃环和一个氧杂萘邻酮(香豆素).前者为基本毒性结构,后者与致癌有关.M1是黄曲霉毒素B1在体内经过羟化而衍生成的代谢产物.黄曲霉毒素的主要分子型式含 B1,B2,G1,G2 ,M1,M2等.其中M1和M2 主要存在于牛奶中.B1为毒性及致癌性最强的物质.
《黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2,M1,M2化学结构式》
黄曲霉毒素B1
黄曲霉毒素B2
黄曲霉毒素G1
黄曲霉毒素 G2
黄曲霉毒素M1
黄曲霉毒素M2
3,理化特性:在紫外线下,黄曲霉毒素B1,B2发蓝色荧光,黄曲霉毒素G1,G2发绿色荧光.黄曲霉毒素的相对分子量为312-346.难溶于,易溶于油,甲醇,丙酮和氯仿等有机溶剂,但不溶于石油醚,己烷和乙醚中.一般在中性溶液中较稳定,但在强酸性溶液中稍有分解,在pH9-10的强酸溶液中分解迅速.其纯品为无色结晶,耐高温,黄曲霉毒素B1的分解温度为268℃紫外线对低浓度黄曲霉毒素有一定的破坏性.
二, 分布
黄曲霉毒素存在于土壤,动植物,各种坚果,特别是花生和核桃中.在大豆,稻谷,玉米,通心粉,调味品,牛奶,奶制品,食用油等制品中也经常发现黄曲霉毒素.一般在热带和亚热带地区,食品中黄曲霉毒素的检出率比较高,在我国,产生黄曲霉毒素的产毒菌种主要为黄曲霉,1980年测定了从17个省粮食中分离的黄曲霉1660株,广西地区的产毒黄曲霉最多,检出率为58%.总的分布情况为:华中,华南,华北产毒株多,产毒量也大,东北,西北地区较少.
黄曲霉毒素的体内分布与代谢
1. 分布与排泄：黄曲霉毒素进入机体后，在肝脏中的量较其他组织器官为高，
说明肝脏可能受黄曲霉毒素的影响最大。

肾脏、脾脏和肾上腺也可检出，肌肉中一般不能检出。

黄曲霉毒素如不连续摄入，一般不在体内积蓄。

一次摄入后约1周即经呼吸、尿、粪等将大部分排出。

2. 代谢：AFB1在动物体内经细胞内质网微粒体混合功能氧化酶系代谢，在微粒体混合功能氧化酶系的作用下AFB1发生脱甲基、羟化及环氧化反应主要代谢产物为AFM1、AFP1、AFQ1和AFB1-2，3-环氧化物。

三, 黄曲霉毒素中毒及其对人畜的危害
黄曲霉毒素对人和动物健康的危害均与黄曲霉毒素抑制蛋白质的合成有关.黄曲霉毒素分子中的双呋喃环结构,是产生毒性的重要结构.研究表明,黄曲霉毒素的细胞毒作用,是干扰信息RNA和DNA的合成,进而干扰细胞蛋白质的合成,导致动物全身性损害(Nibbelink,1988).黄光琪等(1993)研究指出,黄曲霉毒素B1能与tRNA结合形成加成物,黄曲霉毒素-tRNA加成物能抑制tRNA与某些氨基酸结合的活性,对蛋白质生物合成中的必需氨基酸,如赖氨酸,亮氨酸,精氨酸和甘氨酸与tRNA的结合,均有不同的抑制作用,从而在翻译水平上干扰了蛋白质生物合成,影响细胞代谢..
1,黄曲霉毒素与动物疾病
黄曲霉毒素中毒(Aflatoxicosis)主要对动物肝脏的伤害,受伤害的个体因动物种类,年龄,性别和营养状态而异.研究结果表明,黄曲霉毒素可导致肝功能下降,降低牛奶产量和产蛋率.并使动物的免疫力降低,易受有害微生物的感染.此外,
长期食用含低浓度黄曲霉毒素的饲料也可导致胚胎内中毒.通常年幼的动物对黄曲霉毒素更敏感.黄曲霉毒素的临床表现为消化系统功能紊乱,降低生育能力.降低饲料利用率,贫血等.黄曲霉毒素不仅能够使奶牛的产奶量下降,而且还使牛奶中含有转型的黄曲霉毒素M1和M2.据美国农业经济学家统计,由于食用黄曲霉毒素污染的饲料,每年至少要使美国畜牧业遭受10%的经济损失.在我国,由此而带来的畜牧业损失可能会更大.
2,黄曲霉毒素与人类的健康
人类健康受黄曲霉毒素的危害主要是由于人们食用被黄曲霉毒素污染的食物.对于这一污染的预防是非常困难的,其原因是由于真菌在食物或食品原料中的存在是很普遍的.国家卫生部门禁止企业使用被严重污染的粮食进行食品加工生产,并制定相关的标准监督企业执行.但对于含黄曲霉毒素浓度较低的粮食和食品无法进行控制.在发展中国家,食用被黄曲霉毒素污染的食物与癌症的发病率呈正相关性.亚洲和非洲的疾病研究机构的研究工作表明,食物中黄曲霉毒素与肝细胞癌变 (Liver Cell Cancer,LCC) 呈正相关性.长时间食用含低浓度黄曲霉毒素的食物被认为是导致肝癌,胃癌,肠癌等疾病的主要原因.1988年国际肿瘤研究机构(International Agency for Research on Cancer,IARC) 将黄曲霉毒素B1列为人类致癌物.除此以外,黄曲霉毒素与其它致病因素(如肝炎病毒)等对人类疾病的诱发具有叠加效应.
黄曲霉毒素Bl的半数致死量为0.36毫克/公斤体重,属特剧毒的毒物范围(动物半数致死量<10毫克/公斤=它的毒性比氰化钾大10倍,比砒霜大68倍).它引起人的中毒主要是损害肝脏,发生肝炎,肝硬化, 肝坏死等.临床表现有胃部不适,
食欲减退,恶心,呕吐,腹胀及肝区触痛等;严重者出现水肿,昏迷,以至抽搐而死.黄曲霉毒素是目前发现的最强的致癌物质.其致癌力是奶油黄的900倍,比二甲基亚硝胺诱发肝癌的能力大75倍,比3,4苯并芘大4000倍.它主要诱使动物发生肝癌,也能诱发胃癌,肾癌,直肠癌及乳腺,卵巢,小肠等部位的癌症.
四,检验检疫:
(一)部分国家检验检疫要求:
● 1995年,世界卫生组织制定的食品黄曲霉毒素最高允许浓度为15ug/kg.
● 我国政府对各种食物中黄曲霉毒素的最高允许量见表2.
表2 中国对食品中黄曲霉毒素的最高允许含量
食物名称
最高允许含量/(ug/kg)
玉米,花生,花生油,坚果和干果(核桃,杏仁)
玉米,花生仁制品(按原料折算)
大米,其他食用油(香油,菜籽油,大豆油,葵花油,胡麻油,茶油,麻油,玉米胚芽
油,米糠油,棉籽油)
其他粮食(麦类,面粉,薯干),发酵食品(酱油,食用醋,豆豉,腐乳制品),淀粉类制品(糕点,饼干,面包,裱花蛋糕)
牛乳及其制品(消毒牛奶,新鲜生牛乳,全脂牛奶粉,淡炼乳,甜炼乳,奶油),黄油,新鲜猪组织(肝,肾,血,瘦肉)
20(黄曲霉毒素B1)
20(黄曲霉毒素B1)
10(黄曲霉毒素B1)
5黄曲霉毒素B1)
0.5(黄曲霉毒素M1)
● 美国联邦政府有关法律规定人类消费食品和奶牛饲料中的黄曲霉毒含量(指B1+B2+G1+G2的总量)不能超过15ug/kg.人类消费的牛奶中的含量不能超过
0.5ug/kg,其他动物饲料中的含量不能300ug/kg.
● 而欧盟国家规定更加严格,要求人类生活消费品中的黄曲霉毒素B1的含量不能超过0.05ug/kg.
(二)检验检疫方法:
1,薄层层析法
薄层层析(Thin-Layer Chromatography,TLC)是在黄曲霉毒素研究方面应用最广的分离技术.自1990年,它被列为AOAC (Association of Official Agricultural Chemists)标准方法,该方法同时具有定性和定量分析黄曲霉毒素的功能.
2,液相色谱法
液相色谱(Liquid Chromatography,LC)与薄层层析在许多方面具有相似性,二者互相补充.通常用TLC进行前期的条件设定,选择适宜的分离条件后,再用LC进行黄曲霉毒素的定量测定.
3,免疫化学分析方法
利用具有高度专一性的单克隆抗体或多克隆抗体设计的黄曲霉毒素的免疫分析方法,也是最常用的黄曲霉毒素检测方法.这类方法通常包括放射免疫分析方法(Radioimmunoassay,RIA),酶联免疫法(Enzyme-linked of Immunosorbent Assay,ELISA)和免疫层析法(Immunoaflinity Column Assay,ICA).它们均可以对黄曲霉毒素进行定量测定.
(1) 免疫亲和柱-荧光分光光度法和免疫亲和术-HPLC法
免疫亲和柱法和酶联免疫吸附法虽然都可达到速简便效果,但酶联免疫吸附法仅能检测单一毒素(如黄曲霉毒素B1)含量,而且易出现假阳性结果,难以控制.免疫亲和柱法(包括荧光光度法和HPLC法)却能达到既定量准确又快速简便的要求.
免疫亲和柱的使用可以避免传统TLC和HPLC的缺点,同时免疫亲和柱与TLC和HPLC法结合可以大大提高工作效率,提高灵敏度和准确度.
黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法是以单克隆免疫亲和柱为分离手段,用荧光计,紫外灯作为检测工具的快速分析方法.它克服了TLC和HPLC法在操作过程中使用剧毒的真菌毒素作为标定标准物和在样品预处理过程中使用多种有毒,异味的有机溶剂,毒害操作人员和污染环境的缺点.同时黄曲霉毒素免疫亲和柱-荧光光度计法分析速度快,一个样品只需10-15min,比传统方法快几个小时甚至几天时间;仪器设备轻便容易携带,自动化程度高 ,操作简单,直接读出测试结果,可以在小型实验或现场使用.可以进行黄曲霉毒素总量 (B1B2G1G2) 的测定,检测限可达到1ug/kg,达到黄曲霉毒素标准限量值以下测定范围为1-300ug/kg.
黄曲霉毒素免疫亲和柱-高效液相色谱法比传统的HPLC法更加安全,可靠,灵敏度和准确度高.它采用单克隆抗体免疫技术,可以特效性地将黄曲霉毒素或其他真菌毒素分离出来,分离效率和回收率高.
分析原理试样中的黄曲霉毒素用一定比例的甲醇/水提取液经过过滤,稀释后,用免疫亲和柱净化,以甲醇将亲和柱上的黄曲霉毒素淋洗下来,在淋洗液中加入溴
溶液衍生,以提高测定灵敏度,然后用荧光分光光度计进行定量.也可以将甲醇-黄曲霉毒素淋洗液的一部分注入HPLC中,对黄曲霉毒素B1,B2,G1,B2分别进行定量分析.免疫亲和柱是用大剂量的黄曲霉毒素单克隆抗体固化在水不溶性的载体上,然后装柱而成.该方法的测定范围0-300ug/kg.
(2) 酶联免疫吸附法:
1996年,Nakane 建立了辣根过氧化物酶标记抗体的测定技术.由于该方法简便,敏感,特异,可作为多种抗原或抗体的测定,20世纪70年代后期,该方法引入真菌毒素的检测中,下面介绍的是竞争性酶联免疫吸附间接法检测黄曲霉毒素B1.
原理:将已知抗原吸附在固态载体表面,洗除末吸附抗原,加入一定量抗体与待测样品(含有抗原)提取液的混合液,竞争培养后,在固相载体表面形成抗原抗体复合物.洗除多余抗体成分,然后加入酶标记的抗球蛋白的第二抗体结合物,与吸附在固体表面的抗原抗体结合物相结合,再加入酶底物.在酶的催化作用下,底物发生降解反应,产生有色物质,通过酶标检测仪测出酶底物的降解量,从而推知被测样品中的抗原量.
(3) 微柱筛选法可以用来半定量测定各种食品中黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2的总量.
原理样品提取液中的黄曲霉毒素被微柱管风硅镁型吸附层吸附后,在波长
365nm紫外光灯下显示蓝紫色荧光环,其荧光强度与黄曲霉毒素在一定的光密度范围内成正比例关系.若硅镁型吸附剂层未出现蓝紫色荧光,则样品为阴性(方法。