高效液相色谱法测定甲硝唑的含量ppt课件
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迟到、早退、缺一次实验以上者或考试不及格者均不能得优秀，缺两次实
验的不能得良好，缺该课程1/3以上者或不参加实验考试者，均没有实验 成绩。
实验报告的书写格式：
（1）实验名称 （2）实验目的 （3）实验内容及步骤 （4）实验结果
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 注意排气泡：purge 流速设置
2．提前5-10min进入实验室，检查实验所需物品是否齐全， 做好实验准备工作。
3．实验时严肃认真，根据实验指导要求进行操作，仔细观 察和记录，并进行独立思考，按时完成实验内容和实验报 告。
4．保持实验室安静，实验时不得随意走动和谈笑。室内严 禁吸烟、不允许在实验室内接听手机.
5．保持实验室清洁整齐，书包、衣帽等应放在指定位置， 不能置于实验台上；一切实验用具用完后擦洗干净，放回 原处。
优点：应用最广，灵敏度高，线性范围宽。是高效液 相色谱仪的标准配置。它的最重要特征是对流动相的流速 （脉冲）和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱。
缺点：对无紫外吸收的组分不响应，而对紫外吸收较 大的溶剂如苯不能作流动相使用。
高效液相色谱的主要分离方法
液相色谱根据固定相性质可分为以下几种：
● 吸附色谱 (Adsorption Chromatography) ● 键合相色谱（Bonded phase chromatography ） ● 离子交换色谱（Ion Exchanger Chromatogr.） ● 空间排阻色谱（Size Exclusion Chromatogr.） ● 亲合色谱（Affinity Chromatography）
2. 标准溶液配制
精密称取在105℃条件下干燥至恒重的甲 硝唑对照品10mg，置于50mL容量瓶中， 用0.1M HCl溶液溶解并定容至刻度，即得 浓度为0.2mg/mL的甲硝唑标准储备液，备 用。
3、标准曲线的建立
精密量取甲硝唑标准储备液分别为0.3ml、 0.5ml、0.7ml、0.9ml、1.1ml置于10ml的 容量瓶中，然后用0.1M HCl溶液定容至刻度， 得到浓度梯度为6μg/mL、10μg/mL、 14μg/mL、18μg/mL和22μg/mL的标准溶 液，分别过0.22μm的微孔滤膜过滤，滤液置 于1.5ml的EP管中并标号，各进样20μL检测， 以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回 归。
实验步骤
色谱操作条件; 标准溶液配制； 标准曲线的建立； 样品溶液的配制； 甲硝唑样品含量测定。
1.色谱操作条件：
色谱柱：C18柱（150×4.6mm,5μm）； 流动相：乙腈：0.02%三氟乙酸水溶液（20：80） 流速：1mL/min 检测波长：277nm 柱温：35℃ 进样量：20μL
实验器材与材料
实验器材：高效液相色谱仪、精密天平、 50ml烧杯、玻璃棒、称量纸、10ml容量瓶、 50ml容量瓶、注射器、洗瓶、EP管、滤膜。
实验材料：甲硝唑原料、蒸馏水、HCl、乙腈、 三氟乙酸、超纯水。
0.1M HCl溶液配制：准确量取HCl溶液 8.3ml, 用蒸馏水定容至1000ml，即得。
在以上五种分离方式中，反相键合相色谱应用 最广，因为它采用醇—水或腈—水体系作流动相。 纯水易得廉价，它的紫外吸收极小。在纯水中添 加各种物质可改变流动相选择性。使用最广的反 相键合相是十八烷基键合相，即让十八烷基 （C18H37—）键合到硅胶表面。这种键合相又 称ODS（Octadecylsilyl）键合相，如国外的 partisil5-ODS、Zorbax-ODS、Shim-pack CLC-ODS，国产的YWG-C18等。
实验目的Βιβλιοθήκη Baidu
熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能； 了解反相色谱法的原理、优点和应用。 了解流动相的选择依据及配制方法； 掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基
本方法。
实验原理
高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动相 泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。 注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被 分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱 信号。本实验以甲硝唑为测定对象，以反相HPLC来 分离检测未知样中甲硝唑的含量。以甲硝唑标准系列 溶液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归，再根据样 品中甲硝唑的峰面积，由线性方程计算其浓度。
色谱柱pH值范围不同：酸性柱、碱性柱、中性柱。 安装方向
柱温箱：保持温度稳定。
(3) 液相色谱检测器
a.紫外检测器 b.光电二极管阵列检测器 c.示差折光检测器 d.荧光检测器 e.电导检测器
紫外检测器
紫外检测器对占物质总数约80%的物质（有机和部分 无机物质）均可检测，既可测190--350 nm范围的光吸 收变化，也可向可见光范围350---700 nm 延伸。
考核办法
实验习惯10％： 迟到1次扣1分，旷课一次扣3分，值日生必须最后走，早走者扣1分。
预习报告10%： 不能简单抄书，要学会总结归纳。
实验报告20％： 当堂绘图，当堂交报告，迟交报告者要扣分。
实验操作30%： 要能独立完成实验；实验结果必须交老师检查；出现重大失误者要扣分
实验考试成绩30％： 操作10%，笔试20%
（2）进样器
样品液吸取方法：上下反复抽取液体，速 度稍快，直到肉眼看不见气泡为止，水平 持进样针（液体吸取数量可多余20μL）， 注入进样器。
进样器存在的两个位置：load（右上）和 inject。
(2) 高效分离柱
柱体为直型不锈钢管，C18柱标准内径及柱长为 4.6*150mm或4.6*250mm，填料颗粒粒度5μm。
6．爱护实验室一切仪器设备，珍惜药品及一切消耗用品(如 纱布、拭镜纸、载玻片等)，节约水、电。按操作规程使 用显微镜、解剖镜等，使用前要检查，使用后要擦拭整理， 如发现损坏或故障应及时报告指导教师。
7．实验完毕后，值日生值日。值日工作范围包括：关闭水、 电、门、窗；检查仪器，显微镜是否完好；查看水池，实 验台，桌椅，地面是否干净整齐；最后在值日生记录本上 登记值日情况，再交于老师签字后方可离开。
药剂综合实验须知
实验项目
一 高效液相色谱法测定甲硝唑的含量 二 氨茶碱加样回收率实验 三 氨茶碱溶液稳定性实验 四 紫外分光光度计法测定氨茶碱含量 五 氨茶碱原料药稳定性实验 六 五味子散剂的制备 七 SOD的含量测定 八 芦丁的提取和鉴别
实验要求
1．课前认真预习，明确本次实验的目的、要求、内容、方 法及步骤
验的不能得良好，缺该课程1/3以上者或不参加实验考试者，均没有实验 成绩。
实验报告的书写格式：
（1）实验名称 （2）实验目的 （3）实验内容及步骤 （4）实验结果
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：150～350×105 Pa。 注意排气泡：purge 流速设置
2．提前5-10min进入实验室，检查实验所需物品是否齐全， 做好实验准备工作。
3．实验时严肃认真，根据实验指导要求进行操作，仔细观 察和记录，并进行独立思考，按时完成实验内容和实验报 告。
4．保持实验室安静，实验时不得随意走动和谈笑。室内严 禁吸烟、不允许在实验室内接听手机.
5．保持实验室清洁整齐，书包、衣帽等应放在指定位置， 不能置于实验台上；一切实验用具用完后擦洗干净，放回 原处。
优点：应用最广，灵敏度高，线性范围宽。是高效液 相色谱仪的标准配置。它的最重要特征是对流动相的流速 （脉冲）和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱。
缺点：对无紫外吸收的组分不响应，而对紫外吸收较 大的溶剂如苯不能作流动相使用。
高效液相色谱的主要分离方法
液相色谱根据固定相性质可分为以下几种：
● 吸附色谱 (Adsorption Chromatography) ● 键合相色谱（Bonded phase chromatography ） ● 离子交换色谱（Ion Exchanger Chromatogr.） ● 空间排阻色谱（Size Exclusion Chromatogr.） ● 亲合色谱（Affinity Chromatography）
2. 标准溶液配制
精密称取在105℃条件下干燥至恒重的甲 硝唑对照品10mg，置于50mL容量瓶中， 用0.1M HCl溶液溶解并定容至刻度，即得 浓度为0.2mg/mL的甲硝唑标准储备液，备 用。
3、标准曲线的建立
精密量取甲硝唑标准储备液分别为0.3ml、 0.5ml、0.7ml、0.9ml、1.1ml置于10ml的 容量瓶中，然后用0.1M HCl溶液定容至刻度， 得到浓度梯度为6μg/mL、10μg/mL、 14μg/mL、18μg/mL和22μg/mL的标准溶 液，分别过0.22μm的微孔滤膜过滤，滤液置 于1.5ml的EP管中并标号，各进样20μL检测， 以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标进行线性回 归。
实验步骤
色谱操作条件; 标准溶液配制； 标准曲线的建立； 样品溶液的配制； 甲硝唑样品含量测定。
1.色谱操作条件：
色谱柱：C18柱（150×4.6mm,5μm）； 流动相：乙腈：0.02%三氟乙酸水溶液（20：80） 流速：1mL/min 检测波长：277nm 柱温：35℃ 进样量：20μL
实验器材与材料
实验器材：高效液相色谱仪、精密天平、 50ml烧杯、玻璃棒、称量纸、10ml容量瓶、 50ml容量瓶、注射器、洗瓶、EP管、滤膜。
实验材料：甲硝唑原料、蒸馏水、HCl、乙腈、 三氟乙酸、超纯水。
0.1M HCl溶液配制：准确量取HCl溶液 8.3ml, 用蒸馏水定容至1000ml，即得。
在以上五种分离方式中，反相键合相色谱应用 最广，因为它采用醇—水或腈—水体系作流动相。 纯水易得廉价，它的紫外吸收极小。在纯水中添 加各种物质可改变流动相选择性。使用最广的反 相键合相是十八烷基键合相，即让十八烷基 （C18H37—）键合到硅胶表面。这种键合相又 称ODS（Octadecylsilyl）键合相，如国外的 partisil5-ODS、Zorbax-ODS、Shim-pack CLC-ODS，国产的YWG-C18等。
实验目的Βιβλιοθήκη Baidu
熟悉高效液相色谱仪主要结构组成及功能； 了解反相色谱法的原理、优点和应用。 了解流动相的选择依据及配制方法； 掌握高效液相色谱法进行定性和定量分析的基
本方法。
实验原理
高效液相色谱法是采用高压输液泵将规定的流动相 泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。 注入的供试品，由流动相带入柱内，各成分在柱内被 分离，并依次进入检测器，由数据处理系统记录色谱 信号。本实验以甲硝唑为测定对象，以反相HPLC来 分离检测未知样中甲硝唑的含量。以甲硝唑标准系列 溶液的色谱峰面积对其浓度进行线性回归，再根据样 品中甲硝唑的峰面积，由线性方程计算其浓度。
色谱柱pH值范围不同：酸性柱、碱性柱、中性柱。 安装方向
柱温箱：保持温度稳定。
(3) 液相色谱检测器
a.紫外检测器 b.光电二极管阵列检测器 c.示差折光检测器 d.荧光检测器 e.电导检测器
紫外检测器
紫外检测器对占物质总数约80%的物质（有机和部分 无机物质）均可检测，既可测190--350 nm范围的光吸 收变化，也可向可见光范围350---700 nm 延伸。
考核办法
实验习惯10％： 迟到1次扣1分，旷课一次扣3分，值日生必须最后走，早走者扣1分。
预习报告10%： 不能简单抄书，要学会总结归纳。
实验报告20％： 当堂绘图，当堂交报告，迟交报告者要扣分。
实验操作30%： 要能独立完成实验；实验结果必须交老师检查；出现重大失误者要扣分
实验考试成绩30％： 操作10%，笔试20%
（2）进样器
样品液吸取方法：上下反复抽取液体，速 度稍快，直到肉眼看不见气泡为止，水平 持进样针（液体吸取数量可多余20μL）， 注入进样器。
进样器存在的两个位置：load（右上）和 inject。
(2) 高效分离柱
柱体为直型不锈钢管，C18柱标准内径及柱长为 4.6*150mm或4.6*250mm，填料颗粒粒度5μm。
6．爱护实验室一切仪器设备，珍惜药品及一切消耗用品(如 纱布、拭镜纸、载玻片等)，节约水、电。按操作规程使 用显微镜、解剖镜等，使用前要检查，使用后要擦拭整理， 如发现损坏或故障应及时报告指导教师。
7．实验完毕后，值日生值日。值日工作范围包括：关闭水、 电、门、窗；检查仪器，显微镜是否完好；查看水池，实 验台，桌椅，地面是否干净整齐；最后在值日生记录本上 登记值日情况，再交于老师签字后方可离开。
药剂综合实验须知
实验项目
一 高效液相色谱法测定甲硝唑的含量 二 氨茶碱加样回收率实验 三 氨茶碱溶液稳定性实验 四 紫外分光光度计法测定氨茶碱含量 五 氨茶碱原料药稳定性实验 六 五味子散剂的制备 七 SOD的含量测定 八 芦丁的提取和鉴别
实验要求
1．课前认真预习，明确本次实验的目的、要求、内容、方 法及步骤