包涵体(inclusionbody)表达的蛋白的复性

子家的店里。木子是个听话的孩子，所以她总是在假期里帮妈妈打下手。木子记
缺乏真核生物中翻译后修饰所需酶类，致使中间 体大量积累，容易形成包涵体沉淀。因此有人采
用共表达分子伴侣的方法以增加可溶蛋白的比
例。 包涵体表达的有利因素： 1、可溶性蛋白在细胞内容易受到蛋白酶的 攻击，包涵体表达可以避免蛋白酶对外源蛋白的 降解。
因可能是合成速度太快，以至于没有足够的时间
进行折叠，二硫键不能正确的配对，过多的蛋白
间的非特异性结合，蛋白质无法达到足够的溶解 度等。 2、重组蛋白的氨基酸组成：一般说含硫氨 基酸越多越易形成包涵体，而脯氨酸的含量明显
与包涵体的形成呈正相关。
3、重组蛋白所处的环境：发酵温度高或胞 内 pH 接近蛋白的等电点时容易形成包涵体。 4、重组蛋白是大肠杆菌的异源蛋白，由于
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白。如有人在 pH9.0 溶解牛生长激素和牛凝乳蛋 白酶包涵体。有些蛋白可以溶解在 60mMHCl 中。
这些方法只适合于少部分蛋白的增溶。
变性剂的使用浓度和作用时间：一般在偏碱 性性的环境中如 pH8.0-9.0，尿素在碱性环境中
不稳定，一般不要超过 pH1.0。有些蛋白只能用
盐酸胍如 IL-4。增溶时一般室温过夜，但盐酸胍 在 37 度 1 小时便可以使多数蛋白完全变性溶解。
2、降低了胞内外源蛋白的浓度，有利于表 达量的提高。 3、包涵体中杂蛋白含量较低，且只需要简 单的低速离心就可以与可溶性蛋白分离，有利于
分离纯化。
4、对机械搅拌和超声破碎不敏感，易于破 壁，并与细胞膜碎片分离。 破菌：
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1、机械破碎 2、超声破碎 3、化学方法破碎 分离： 1、离心：5000-20000g15min 离心，可使大 多数包涵体沉淀，与可溶性蛋白分离。 2、过滤或萃取方法：
性剂如尿素、盐酸胍等。
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包涵体的形成： 主要因为在重组蛋白的表达过程中缺乏某 些蛋白质折叠的辅佐因子，或环境不适，无法形 成正确的次级键等原因形成的。 1、表达量过高，研究发现在低表达时很少 形成包涵体，表达量越高越容易形成包涵体。原
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洗涤： 由于脂体及部分破碎的细胞膜及膜蛋白与 包涵体粘连在一起，在溶解包涵体之前要先洗涤 包涵体，通常用低浓度的变性剂如 2M 尿素在 50mMTrispH7.0-8.5 左右,1mMEDTA 中洗涤。此外
可以用温和去垢剂 TritonX-100 洗涤去除膜碎片
和膜蛋白。 溶解：
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常用的变性剂有尿素、盐酸胍，通过离子间 的相互作用，破坏包涵体蛋白间的氢键而增溶蛋
白。其中尿素的增溶效果少差，异氰硫酸胍最强。
去垢剂：如强的阴离子去垢剂 SDS，可以破 坏蛋白内的疏水键，可以增溶几乎所有的蛋白。
问题是由于 SDS 无法彻底的去除而不允许在制药
过程中使用。 极端 pH：可以破坏蛋白的次级键从而增溶蛋
关键词：包涵体 inclusionbody 复性蛋白包 涵体表达蛋白的复性是一个世界性的难题，没有
通用的方法，甚至没有靠得住的规律，只能试。
可以参考以下文章。该文出处已经忘了，如 果有人知道原创作者或网上出处，请补充。 包涵体表达的蛋白的复性 包涵体：
Байду номын сангаас
包涵体是指细菌表达的蛋白在细胞内凝集， 形成无活性的固体颗粒。 包涵体的组成与特性： 一般含有 50%以上的重组蛋白，其余为核糖 体元件、RNA 聚合酶、外膜蛋白 ompC、ompF 和 ompA 等，环状或缺口的质粒 DNA，以及脂体、脂 多糖等，大小为 0.5-1um，难溶与水，只溶于变