第九章非发酵革兰阴性杆菌讲解

(3) 噬菌体裂解试验
取用37 ℃ 、4-6h待检肉汤培养物，
涂布于普通琼脂平板，将AP631炭疽噬
菌体1滴，于平板中央划一直线,置37℃
18h，出现噬菌斑或噬菌带者为阳性，
每份标本应作2-3个同样的试验，同时
滴种肉汤液作阴性对照。
(4) 串珠试验
将待检菌接种于含青霉素0.05—0.5U/ml
的培养基经37℃培养 6 h后，炭疽杆菌可 发生形态变化，显微镜下见大而均匀的 圆球状菌体呈成串样排列，类炭疽杆菌 无此现象。
3.细菌性抗原
(1) 菌体多糖抗原耐热、耐腐败, 经长时间煮 沸仍可与相应免疫血清发生沉淀反应 (Ascoli热沉淀反应)。抗原特异性不高,能 与其他需氧性芽胞杆菌发生交叉反应,应 用时应作综合分析。 (2) 荚膜多肽抗原在体内有抗吞噬作用,称为 侵袭因子，有助于病菌在体内繁殖扩散 和建立感染。荚膜肿胀试验对鉴定本菌 有一定意义。 (3) 芽胞抗原具有免疫原性和血清学诊断价 值。
进行生化反应鉴定必要时做血清学鉴
定和噬菌体分型。
四、药物敏感性试验
对氯霉素、红霉素和庆大
霉素敏感，对青霉素、磺胺类
和呋喃类耐药。
第二节 李斯特菌属
包括产单核细胞、伊氏、无害、
格氏、斯氏、威氏李斯特菌等，只
有产单核细胞李斯特菌对人和动物
致病。
一、临床意义
广泛分布于自然界，常伴随EB病毒
引起传染性单核细胞增多症，也可引
1．革兰阳性。无芽胞、无荚膜和鞭毛，具
多形性。
2 ．营养要求较高，兼性厌氧，在 25℃～ 41℃
中生长，在5％人血琼脂上，置3％～5％CO2
35℃培养48h，可形成针尖大小的菌落。
3．pH测定 若pH﹥4．5为可疑。
4 ．胺试验
将 lOOg ／ L KOH l ～ 2 滴滴在待检
物上，若发出鱼腥样胺臭味即胺试验阳性。
（7）重碳酸盐生长毒力试验
将待检菌接种于含O．5％NaHCO3
和10％马血清的琼脂平板上，置10％ CO2环境37℃24-48h，有毒株形成荚 膜，菌落呈粘液型，无毒株不形成荚 膜，呈粗糙型菌落。
(8) 毒素动物试验
炭疽芽胞杆菌是惟一具有致病力，致病 物质为炭疽毒素，故对该毒素的检测显得 十分重要 取纯培养接种于肉汤培养液37℃ 24h,吸取0.1m1接种小鼠皮下,小鼠于72—96h 发病并死亡 接种部位呈胶样水肿，肝脾肿 大出血，血液黑色且不凝固：取心血、肝脾 涂片染色镜检分离培养，可检出炭疽杆菌。
第十一章
+ G 需氧杆菌
第一节 炭疽芽胞杆菌
炭疽是人畜共患病，由于疫苗接种和卫生 条件改善，发病率明显下降，但可作为生物 武器。炭疽一年均可发生。人通过食入病菌 污染的食物；也可因接触带芽胞的皮毛、尘 土、干燥菌粉邮件和吸入气溶胶而感染。可 引起皮肤炭疽，胃肠炭疽，肺炭疽，可并发 败血症和脑膜炎。
一、微生物特性
常的感官性状，这点应引起注意。
二、微生物特性
1. G+大杆菌，多数呈链状排列。形成椭圆 形芽胞，位于菌体中心或次极端，不小 于菌体，引起食物中毒的菌株多为周毛菌, 有动力，不形成荚膜。 2. 为需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普 通平板上35℃生长良好。菌落较大，表面 粗糙似白蜡状，
3. 能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、 水杨素、果糖等。能胨化牛乳, 液化明胶。VP试验阳性，卵磷 脂酶阳性。 4. 抵抗力强, 能耐受100℃30min。
1．采集患者血液，脑脊液，分泌物或脓液，咽 喉拭子；病死畜、禽病变组织等标本。 2．标本直接检查 为G+小杆菌，多数菌体一端 膨大。呈两极着色，易误认为双球菌。 3．分离培养 将标本置4℃中冷增菌后再行分 离，在血平板上形成较小圆形、光滑而有狭 窄β-溶血环的菌落。
4.鉴定
当遇到 25℃培养有动力的杆菌，而不符合 G杆菌鉴定时，应考虑到李斯特菌。
三、微生物检验
1. 采取可疑食物、粪便和呕吐物进行 检验，必须作活菌计数。暴露空气 中的食品都受本菌污染。 2. 标本直接涂片革兰染色镜检，其形 态待征为G+大杆菌、呈链状排列、 芽胞圆形位于菌体中央或次极端， 不大于菌体。
3．活菌计数
将菌稀释液0．1ml注入空的无菌平皿，
将溶化冷至45℃营养琼脂适量倾人并立即
本菌因培养条件而呈链状， 37℃培养动力阴 性， CAMP 试验阳性，常误判为 B 群链球菌 , 产单核细胞李斯特菌触酶试验为阳性。 本菌具有耐碱耐盐的特点，易误判为粪肠球 菌，粪肠球菌为触酶试验阴性，而产单核 细胞李斯特菌为阳性。
5.药物敏感性试验
本菌对多种抗生素敏感，以氨苄青
霉素为首选，尚有青霉素、链霉素、
3 ．细菌学检查是诊断该病的重要依据。 G+ 杆菌，厌氧或微需氧菌。初次分离要在厌氧 环境中培养，在血琼脂平板菌落周围有绿色 溶血环，触酶及氧化酶反应均阴性。液化明 胶，形成硫化氢。
4 ．本菌对湿热及化学消毒剂很敏感。对青 霉素、头孢菌素、红霉素和四环素等均敏感。
第四节阴道加特纳菌
加特纳菌属仅有一个菌种阴道加特纳菌。 DNA中G+Cmol％为42～44。 在阴道内过度生长，造成阴道正常菌群微生 态平衡失调，而引起非特异细菌性阴道 病 。可导致妇产科多种严重并发症。如 子宫全切术后感染、绒毛膜炎等。本菌还 能引起新生儿败血症和软组织感染。 正常妇女阴道内也能检出本菌，因此，一般 情况下，不作阴道加特纳菌分离。
(5) 青霉素抑制试验
将待检菌分别接种于青霉素5、10、
100U／ml的普通琼脂平板，37 ℃培
养24h，炭疽芽胞杆菌一般在含5U／
ml的青霉素平板上仍能生长，在含
10、100U／ml青霉素的平板上受到
抑制而不生长。
(6) 串珠青霉素抑制联合试验
将待检菌新鲜肉汤培养物0.1ml滴于预 温的兔血琼脂平板上，用L形玻棒均匀涂 布，干后用含青霉素1 U／片纸片贴于平 板，37℃1—2h，低倍镜下观察，可见纸 片周围有一无菌生长的抑菌环，其外周青 霉素浓度低,菌体细胞壁受抑而成为串珠。 平板继续37℃孵育8-12h, 测量抑菌环直径。
1.本菌为致病性细菌中最大的G+杆菌。两 端平截，无鞭毛，呈竹节状排列，芽胞位于 菌体中央，有毒菌株有荚膜。 2.为需氧或兼性厌氧菌，生长条件不严格, 最适温度为30℃～35℃，形成灰色、扁平干 燥、不溶血粗糙型菌落，边缘呈卷发状，使 明胶表面液化成漏斗状。有毒菌株在血琼脂 平板上可产生荚膜，用接种针挑取时呈粘丝 状。
3．生化反应
可发酵多种糖类，如葡萄糖、果糖、蕈糖、 麦芽糖和水杨素，产酸不产气，甲基红和 V-P 反应阳性，触酶阳性，可使石蕊牛乳 缓慢产酸并使其脱色，能水解精氨酸产氨： 不还原硝酸盐，不形成吲哚，不液化明胶 和凝固血清，不分解尿素，有时可产生硫 化氢。25℃有动力，37℃无动力或缓慢。
4．抗原性
第二节 蜡样芽胞杆菌
属于需氧芽胞杆菌属中的一种革 兰阳性杆菌，因在普通营养琼脂平 板上能形成芽胞，其菌落表面粗糙 似白蜡状，故名，简称蜡样杆菌。 广泛分布于水、土壤、尘埃、淀粉 制品、乳及乳制品等食品，并可在 其中生长繁殖，引起食物中毒。近 年来国
蜡样芽胞杆菌引起的食物中毒有腹 泻型和呕吐型两型 , 由不耐热的和耐热 的肠毒素引起，以夏秋季最为多见，中 毒食物大多无腐败变质 , 表现为完全正
二、微生物检验
1. 取病灶深部标本或痰和血液；肠炭疽取 粪便或呕吐物；置65℃水溶30min，将非芽 胞菌杀死，保留芽胞活性再进行增菌和分离 培养。 2. 直接镜检发现G+大杆菌、两端平截、竹 节状排列形成长链，并有明显荚膜，可见芽 胞，芽胞为卵圆形，位于菌体中央菌体不膨 大，可作初步报告。 3. 分离培养 一般接种血琼脂平板，35℃、 18-24h后可观察到较大、灰白色、边缘不整 齐和有轻微溶血的菌落。
混均，冷凝后置35℃培养24—48h，计数
产生蜡样光泽菌落乘以稀释倍数，即为每
毫升样品所含活菌数。认为105个／g或／
ml时，即有发生食物中毒的可能。
4. 分离培养 为需氧或兼性厌氧，营养
要求不高，在普通营养琼脂平板上即
能生长,最适温度35℃,最适pH7.0-7.4, 菌落表面有蜡光似毛玻璃状蜡样菌落,
四环素、氯霉素和红霉素等敏感，对
磺胺、杆菌肽和多粘菌素耐药。
第三节丹毒丝菌属
1．包括红斑丹毒丝菌、产单核细胞丹毒丝菌、
扁桃体丹毒丝菌，其中红斑丹毒担菌是丹毒 丝菌属中的代表菌种。 2．红斑丹毒牡菌为红丹毒丝菌病的病原，主要 发生在鱼类、家畜、家禽和兔类，人类也感 染发病，接触动物或其产品经皮肤损伤而引 起类丹毒。以局部感染为主，继而发展成淋 巴管炎，可转变成关节炎。也可引起急性败 血症或心内膜炎。
4. 炭疽毒素
由保护性抗原、致死因子和水肿因
子三种蛋白质形成的外毒素复合物， 后两者单独不能发挥生物活性作用，
都必须与保护性抗原组合才能引起实
验动物的水肿致死。
5. 抵抗力
本菌芽胞的抵抗力很强，在干燥土
壤或皮毛中常温下可存活数十年, 传
染性可持续数十年之久。芽胞对碘及
氧化剂较敏感, 1：2500碘液、0.5％ 过氧乙酸10min即杀死。
鉴定
(1)形态学特征：包括镜检形态和菌落形态 （如上）。 (2)生化试验：能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗 糖。有些菌株迟缓发酵甘油和水杨素， 产酸不产气。能水解淀粉。不发酵鼠李 糖、半乳糖等其他糖类。能还原硝酸盐 为亚硝酸盐。VP试验不定。不产生吲哚 和硫化氢，不利用枸橼酸盐和分解尿素。 在牛乳中生长2-4天牛乳凝固后缓慢融 化。卵磷脂酶弱阳性、触酶阳性。
分为 4 个血清型， 1 型主要感染啮齿动物，各 型对人类均可致病，但以 1a 和 lb 最为多见， 本菌与葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌及 大肠埃希菌等具有共同抗原、
5．抵抗力
在土壤、粪便、饲料中能长期存活。耐 盐耐碱耐酸。对热敏感，对—般消毒剂敏 感，70％的乙醇5min即可杀 死本菌。