第九章非发酵革兰阴性杆菌讲解

进行生化反应鉴定必要时做血清学鉴
定和噬菌体分型。
四、药物敏感性试验
对氯霉素、红霉素和庆大
霉素敏感，对青霉素、磺胺类
和呋喃类耐药。
第二节 李斯特菌属
包括产单核细胞、伊氏、无害、
格氏、斯氏、威氏李斯特菌等，只
有产单核细胞李斯特菌对人和动物
致病。
一、临床意义
广泛分布于自然界，常伴随EB病毒
引起传染性单核细胞增多症，也可引
本菌因培养条件而呈链状， 37℃培养动力阴 性， CAMP 试验阳性，常误判为 B 群链球菌 , 产单核细胞李斯特菌触酶试验为阳性。 本菌具有耐碱耐盐的特点，易误判为粪肠球 菌，粪肠球菌为触酶试验阴性，而产单核 细胞李斯特菌为阳性。
5.药物敏感性试验
本菌对多种抗生素敏感，以氨苄青
霉素为首选，尚有青霉素、链霉素、
3.细菌性抗原
(1) 菌体多糖抗原耐热、耐腐败, 经长时间煮 沸仍可与相应免疫血清发生沉淀反应 (Ascoli热沉淀反应)。抗原特异性不高,能 与其他需氧性芽胞杆菌发生交叉反应,应 用时应作综合分析。 (2) 荚膜多肽抗原在体内有抗吞噬作用,称为 侵袭因子，有助于病菌在体内繁殖扩散 和建立感染。荚膜肿胀试验对鉴定本菌 有一定意义。 (3) 芽胞抗原具有免疫原性和血清学诊断价 值。
三、微生物检验
1. 采取可疑食物、粪便和呕吐物进行 检验，必须作活菌计数。暴露空气 中的食品都受本菌污染。 2. 标本直接涂片革兰染色镜检，其形 态待征为G+大杆菌、呈链状排列、 芽胞圆形位于菌体中央或次极端， 不大于菌体。
3．活菌计数
将菌稀释液0．1ml注入空的无菌平皿，
将溶化冷至45℃营养琼脂适量倾人并立即
(3) 噬菌体裂解试验
取用37 ℃ 、4-6h待检肉汤培养物，
涂布于普通琼脂平板，将AP631炭疽噬
菌体1滴，于平板中央划一直线,置37℃
18h，出现噬菌斑或噬菌带者为阳性，
每份标本应作2-3个同样的试验，同时
滴种肉汤液作阴性对照。
(4) 串珠试验
将待检菌接种于含青霉素0.05—0.5U/ml
的培养基经37℃培养 6 h后，炭疽杆菌可 发生形态变化，显微镜下见大而均匀的 圆球状菌体呈成串样排列，类炭疽杆菌 无此现象。
二、微生物检验
1. 取病灶深部标本或痰和血液；肠炭疽取 粪便或呕吐物；置65℃水溶30min，将非芽 胞菌杀死，保留芽胞活性再进行增菌和分离 培养。 2. 直接镜检发现G+大杆菌、两端平截、竹 节状排列形成长链，并有明显荚膜，可见芽 胞，芽胞为卵圆形，位于菌体中央菌体不膨 大，可作初步报告。 3. 分离培养 一般接种血琼脂平板，35℃、 18-24h后可观察到较大、灰白色、边缘不整 齐和有轻微溶血的菌落。
鉴定
(1)形态学特征：包括镜检形态和菌落形态 （如上）。 (2)生化试验：能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗 糖。有些菌株迟缓发酵甘油和水杨素， 产酸不产气。能水解淀粉。不发酵鼠李 糖、半乳糖等其他糖类。能还原硝酸盐 为亚硝酸盐。VP试验不定。不产生吲哚 和硫化氢，不利用枸橼酸盐和分解尿素。 在牛乳中生长2-4天牛乳凝固后缓慢融 化。卵磷脂酶弱阳性、触酶阳性。
第十一章
+ G 需氧杆菌
第一节 炭疽芽胞杆菌
炭疽是人畜共患病，由于疫苗接种和卫生 条件改善，发病率明显下降，但可作为生物 武器。炭疽一年均可发生。人通过食入病菌 污染的食物；也可因接触带芽胞的皮毛、尘 土、干燥菌粉邮件和吸入气溶胶而感染。可 引起皮肤炭疽，胃肠炭疽，肺炭疽，可并发 败血症和脑膜炎。
一、微生物特性
3 ．细菌学检查是诊断该病的重要依据。 G+ 杆菌，厌氧或微需氧菌。初次分离要在厌氧 环境中培养，在血琼脂平板菌落周围有绿色 溶血环，触酶及氧化酶反应均阴性。液化明 胶，形成硫化氢。
4 ．本菌对湿热及化学消毒剂很敏感。对青 霉素、头孢菌素、红霉素和四环素等均敏感。
第四节阴道加特纳菌
加特纳菌属仅有一个菌种阴道加特纳菌。 DNA中G+Cmol％为42～44。 在阴道内过度生长，造成阴道正常菌群微生 态平衡失调，而引起非特异细菌性阴道 病 。可导致妇产科多种严重并发症。如 子宫全切术后感染、绒毛膜炎等。本菌还 能引起新生儿败血症和软组织感染。 正常妇女阴道内也能检出本菌，因此，一般 情况下，不作阴道加特纳菌分离。
4. 炭疽毒素
由保护性抗原、致死因子和水肿因
子三种蛋白质形成的外毒素复合物， 后两者单独不能发挥生物活性作用，
都必须与保护性抗原组合才能引起实
验动物的水肿致死。
5. 抵抗力
本菌芽胞的抵抗力很强，在干燥土
壤或皮毛中常温下可存活数十年, 传
染性可持续数十年之久。芽胞对碘及
氧化剂较敏感, 1：2500碘液、0.5％ 过氧乙酸10min即杀死。
(9)植物凝集试验
炭疽杆菌菌体多糖是某些植物凝集 素受体，用凝集素试验检测炭疽杆菌。 常用的方法有荧光标记试验和酶联凝
集素吸附试验。本试验可与其他类炭
疽芽胞杆菌相鉴别。
(五) 药物敏感性试验
本菌对磺胺类、青霉素、链霉 素、四环素、红霉素、氯霉素和 环丙沙星均敏感，大多能抑制芽 胞和繁殖体的生长。
第二节 蜡样芽胞杆菌
属于需氧芽胞杆菌属中的一种革 兰阳性杆菌，因在普通营养琼脂平 板上能形成芽胞，其菌落表面粗糙 似白蜡状，故名，简称蜡样杆菌。 广泛分布于水、土壤、尘埃、淀粉 制品、乳及乳制品等食品，并可在 其中生长繁殖，引起食物中毒。近 年来国内也有引起菌血症的报道。
一、临床意义
蜡样芽胞杆菌引起的食物中毒有腹 泻型和呕吐型两型 , 由不耐热的和耐热 的肠毒素引起，以夏秋季最为多见，中 毒食物大多无腐败变质 , 表现为完全正
起脑膜炎，菌血症等。污染奶制品引
起食物中毒。也可感染新生儿。致病
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物质是溶血素和菌体表面成分。机体
上靠细胞免疫清除李斯特菌。
二、微生物特性
1．为G+短小杆菌，成双排列。偶尔可见双球状， 有动力，不产生芽胞，在含血清的葡萄糖蛋 白胨水中能形成粘多糖荚膜。、 2．为兼性厌氧菌，营养要求不高，在含有血液、 血清、腹水等培养基上生长更好。最适生长 温度为30℃～37℃，因在4℃能生长故可进行 冷增菌。在血琼脂平板上于35℃经18-24h培 养，形成狭窄的β-溶血环，灰白色菌落。
四环素、氯霉素和红霉素等敏感，对
磺胺、杆菌肽和多粘菌素耐药。
第三节丹毒丝菌属
1．包括红斑丹毒丝菌、产单核细胞丹毒丝菌、
扁桃体丹毒丝菌，其中红斑丹毒担菌是丹毒 丝菌属中的代表菌种。 2．红斑丹毒牡菌为红丹毒丝菌病的病原，主要 发生在鱼类、家畜、家禽和兔类，人类也感 染发病，接触动物或其产品经皮肤损伤而引 起类丹毒。以局部感染为主，继而发展成淋 巴管炎，可转变成关节炎。也可引起急性败 血症或心内膜炎。
3．生化反应
可发酵多种糖类，如葡萄糖、果糖、蕈糖、 麦芽糖和水杨素，产酸不产气，甲基红和 V-P 反应阳性，触酶阳性，可使石蕊牛乳 缓慢产酸并使其脱色，能水解精氨酸产氨： 不还原硝酸盐，不形成吲哚，不液化明胶 和凝固血清，不分解尿素，有时可产生硫 化氢。25℃有动力，37℃无动力或缓慢。
4．抗原性
1.本菌为致病性细菌中最大的G+杆菌。两 端平截，无鞭毛，呈竹节状排列，芽胞位于 菌体中央，有毒菌株有荚膜。 2.为需氧或兼性厌氧菌，生长条件不严格, 最适温度为30℃～35℃，形成灰色、扁平干 燥、不溶血粗糙型菌落，边缘呈卷发状，使 明胶表面液化成漏斗状。有毒菌株在血琼脂 平板上可产生荚膜，用接种针挑取时呈粘丝 状。
(5) 青霉素抑制试验
将待检菌分别接种于青霉素5、10、
100U／ml的普通琼脂平板，37 ℃培
养24h，炭疽芽胞杆菌一般在含5U／
ml的青霉素平板上仍能生长，在含
10、100U／ml青霉素的平板上受到
抑制而不生长。
(6) 串珠青霉素抑制联合试验
将待检菌新鲜肉汤培养物0.1ml滴于预 温的兔血琼脂平板上，用L形玻棒均匀涂 布，干后用含青霉素1 U／片纸片贴于平 板，37℃1—2h，低倍镜下观察，可见纸 片周围有一无菌生长的抑菌环，其外周青 霉素浓度低,菌体细胞壁受抑而成为串珠。 平板继续37℃孵育8-12h, 测量抑菌环直径。
分为 4 个血清型， 1 型主要感染啮齿动物，各 型对人类均可致病，但以 1a 和 lb 最为多见， 本菌与葡萄球菌、链球菌、肺炎链球菌及 大肠埃希菌等具有共同抗原、
5．抵抗力
在土壤、粪便、饲料中能长期存活。耐 盐耐碱耐酸。对热敏感，对—般消毒剂敏 感，70％的乙醇5min即可杀 死本菌。
三、微生物检验
混均，冷凝后置35℃培养24—48h，计数
产生蜡样光泽菌落乘以稀释倍数，即为每
毫升样品所含活菌数。认为105个／g或／
ml时，即有发生食物中毒的可能。
4. 分离培养 为需氧或兼性厌氧，营养
要求不高，在普通营养琼脂平板上即
能生长,最适温度35℃,最适pH7.0-7.4, 菌落表面有蜡光似毛玻璃状蜡样菌落,
1．采集患者血液，脑脊液，分泌物或脓液，咽 喉拭子；病死畜、禽病变组织等标本。 2．标本直接检查 为G+小杆菌，多数菌体一端 膨大。呈两极着色，易误认为双球菌。 3．分离培养 将标本置4℃中冷增菌后再行分 离，在血平板上形成较小圆形、光滑而有狭 窄β-溶血环的菌落。
4.鉴定
当遇到 25℃培养有动力的杆菌，而不符合 G杆菌鉴定时，应考虑到李斯特菌。
（7）重碳酸盐生长毒力试验
将待检菌接种于含O．5％NaHCO3
和10％马血清的琼脂平板上，置10％ CO2环境37℃24-48h，有毒株形成荚 膜，菌落呈粘液型，无毒株不形成荚 膜，呈粗糙型菌落。
(8) 毒素动物试验
炭疽芽胞杆菌是惟一具有致病力，致病 物质为炭疽毒素，故对该毒素的检测显得 十分重要 取纯培养接种于肉汤培养液37℃ 24h,吸取0.1m1接种小鼠皮下,小鼠于72—96h 发病并死亡 接种部位呈胶样水肿，肝脾肿 大出血，血液黑色且不凝固：取心血、肝脾 涂片染色镜检分离培养，可检出炭疽杆菌。
1．革兰阳性。无芽胞、无荚膜和鞭毛，具
多形性。
2 ．营养要求较高，兼性厌氧，在 25℃～ 41℃
中生长，在5％人血琼脂上，置3％～5％CO2
35℃培养48h，可形成针尖大小的菌落。
3．pH测定 若pH﹥4．5为可疑。
4 ．胺试验
将 lOOg ／ L KOH l ～ 2 滴滴在待检
物上，若发出鱼腥样胺臭味即胺试验阳性。
所有菌株对氨苄青霉素、羧苄青霉素、 苯唑青霉素、青霉素、万古霉素和 甲硝唑敏感；对萘啶酸、新霉素、 粘菌素和磺胺嘧啶耐药。
常的感官性状，这点应引起注意。
二、微生物特性
1. G+大杆菌，多数呈链状排列。形成椭圆 形芽胞，位于菌体中心或次极端，不小 于菌体，引起食物中毒的菌株多为周毛菌, 有动力，不形成荚膜。 2. 为需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普 通平板上35℃生长良好。菌落较大，表面 粗糙似白蜡状，
3. 能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖、 水杨素、果糖等。能胨化牛乳, 液化明胶。VP试验阳性，卵磷 脂酶阳性。 4. 抵抗力强, 能耐受100℃30min。