凝胶过滤法使蛋白质脱盐
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2 加入样品时应注意不要搅动床面，使样品与床 面的洗拖脱液混合，影响分离效果。
在合成凝胶时，控制环氧氯丙烷的用量，可以制成网孔 大小不同的葡聚糖凝胶，从G-10~G-200。G后的数字 代表每克干胶充分溶胀后吸水的克数×10，也反映了 凝胶网孔的相对大小，数字越小，其溶胀后的网孔越 小。一般G-10~G-50适用于蛋白质与小分子或无机盐的 分离，G-75~G-200适用于分子质量大于10000Da的蛋 白质的相互分离。
5 收集检测：用1.5mL离心管收集洗脱液，每管 收集1mL。边收集边进行蛋白质与铵盐的检测。 取洗脱液2滴置于小试管中，加入磺柳酸1滴，
如有蛋白质洗脱下来，则有白色混浊或沉淀 出现。取洗脱液2滴加入白瓷板中，加入纳氏 试剂1滴，如有铵盐洗脱下来，则有黄红色沉 淀。
注意事项
1 装柱时，凝胶中的水不宜过多，用玻棒搅动小 烧杯中的凝胶，轻缓倒入柱中，凝胶的高度 应是层析柱高度的3/4~4/5。如层析柱中凝胶 高度不够，应在凝胶床面未形成之前再加入 葡聚糖凝胶，要尽量防止由于加胶次数较多， 致使胶中出现节痕。同时，要避免柱床内产 生气泡。
本实验是用G-25使蛋白பைடு நூலகம்与硫酸铵分离。
蛋白质混合物上柱
样品上柱后， 小分子进入微孔， 大分子不能进入
小分子后洗脱下来
材料与试剂
纳氏试剂：HgI2 11.5g及KI 18g溶于无离子水中， 稀释至50mL，加入6mol/L NaOH 50mL，静止 后取出清液储存于棕色瓶中。
蛋白质-（NH）2SO4溶液：0.25%牛血清蛋白、 0.1% （NH）2SO4和10%蔗糖混合溶液。
凝胶过滤法使蛋白质脱盐
实验目的
学习凝胶过滤法分离纯化物质的原理与操 作技术。
实验原理
葡聚糖凝胶（Sephadex G-25）具有网状结 构，小分子物质能进入其内部，而大分 子物质却被排阻在外部，当一混合溶液 通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质 就按不同相对分子量被分开。
葡聚糖凝胶是葡萄糖通过α-1，6-糖苷键形成的葡聚糖长 链，与交联剂环氧氯丙烷以醚键相互交联而成的具有 三维结构的多孔网状结构物。
实验步骤
1 溶胀凝胶：用去离子水浸泡Sephadex G-25凝胶24h以
上或用去离子水沸水浴溶胀约2h。 2 凝胶装柱：将溶胀的凝胶轻缓倒入柱中，使其自然沉 降，沉降后凝胶柱的高度为柱高的3/4~4/5切柱床面平整， 床面维持0.5cm高的洗脱液。 3 洗柱：除杂，一般洗脱液体积为柱床体积的2~3倍。 4 加样洗脱：取0.5mL的样品，取样器尖头沿管壁伸到床 面之上，慢慢将样品加到凝胶床面上。拧松夹子，待样 品全部进入凝胶柱中，接通洗脱液，开始洗脱并收集洗 脱液。
在合成凝胶时，控制环氧氯丙烷的用量，可以制成网孔 大小不同的葡聚糖凝胶，从G-10~G-200。G后的数字 代表每克干胶充分溶胀后吸水的克数×10，也反映了 凝胶网孔的相对大小，数字越小，其溶胀后的网孔越 小。一般G-10~G-50适用于蛋白质与小分子或无机盐的 分离，G-75~G-200适用于分子质量大于10000Da的蛋 白质的相互分离。
5 收集检测：用1.5mL离心管收集洗脱液，每管 收集1mL。边收集边进行蛋白质与铵盐的检测。 取洗脱液2滴置于小试管中，加入磺柳酸1滴，
如有蛋白质洗脱下来，则有白色混浊或沉淀 出现。取洗脱液2滴加入白瓷板中，加入纳氏 试剂1滴，如有铵盐洗脱下来，则有黄红色沉 淀。
注意事项
1 装柱时，凝胶中的水不宜过多，用玻棒搅动小 烧杯中的凝胶，轻缓倒入柱中，凝胶的高度 应是层析柱高度的3/4~4/5。如层析柱中凝胶 高度不够，应在凝胶床面未形成之前再加入 葡聚糖凝胶，要尽量防止由于加胶次数较多， 致使胶中出现节痕。同时，要避免柱床内产 生气泡。
本实验是用G-25使蛋白பைடு நூலகம்与硫酸铵分离。
蛋白质混合物上柱
样品上柱后， 小分子进入微孔， 大分子不能进入
小分子后洗脱下来
材料与试剂
纳氏试剂：HgI2 11.5g及KI 18g溶于无离子水中， 稀释至50mL，加入6mol/L NaOH 50mL，静止 后取出清液储存于棕色瓶中。
蛋白质-（NH）2SO4溶液：0.25%牛血清蛋白、 0.1% （NH）2SO4和10%蔗糖混合溶液。
凝胶过滤法使蛋白质脱盐
实验目的
学习凝胶过滤法分离纯化物质的原理与操 作技术。
实验原理
葡聚糖凝胶（Sephadex G-25）具有网状结 构，小分子物质能进入其内部，而大分 子物质却被排阻在外部，当一混合溶液 通过凝胶过滤层析柱时，溶液中的物质 就按不同相对分子量被分开。
葡聚糖凝胶是葡萄糖通过α-1，6-糖苷键形成的葡聚糖长 链，与交联剂环氧氯丙烷以醚键相互交联而成的具有 三维结构的多孔网状结构物。
实验步骤
1 溶胀凝胶：用去离子水浸泡Sephadex G-25凝胶24h以
上或用去离子水沸水浴溶胀约2h。 2 凝胶装柱：将溶胀的凝胶轻缓倒入柱中，使其自然沉 降，沉降后凝胶柱的高度为柱高的3/4~4/5切柱床面平整， 床面维持0.5cm高的洗脱液。 3 洗柱：除杂，一般洗脱液体积为柱床体积的2~3倍。 4 加样洗脱：取0.5mL的样品，取样器尖头沿管壁伸到床 面之上，慢慢将样品加到凝胶床面上。拧松夹子，待样 品全部进入凝胶柱中，接通洗脱液，开始洗脱并收集洗 脱液。