液相色谱基础知识培训教材

什么是色谱的分辨率？
分辨率的公式：
R
1 2
V2 V1 (W2 W1)
影响分辨率的因素：K’，a，N
分辨率的方程∶
R
k k 1
a 1 a
N 4
k' 是容量因子，表达了样品与柱填料的作用 强弱。
a 是选择性系数，描述两化合物分离的好坏
程度。是化学因素。
N 是理论塔板数，描述色谱峰的谱带展宽程 度。
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5、知人者智，自知者明。胜人者有力 ，自胜 者强。 20.9.12 20.9.12 03:15:4 603:15: 46Sept ember 12, 2020
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6、意志坚强的人能把世界放在手中像 泥块一 样任意 揉捏。 2020年 9月12 日星期 六上午3 时15分 46秒03 :15:462 0.9.12
液相色谱基础知识
Waters LC School 培训教材
常见的分离方式
蒸馏 离心 电泳 过滤 超滤
色谱
色谱法的分类
色谱
液相色谱
气相色谱
柱色谱
纸色谱
薄层色谱
高效液相色谱 HPLC
HPLC分离的机理
分离是一 个物理的 过程。
典型的仪器配置
色谱泵及控制器
数据处理及控制
色谱柱
检测器
W aters 486
液相色谱的检测模式
灵敏度、选择性、及适应能力
响应 灵敏度 线性范围 流速敏感 温度敏感 梯度淋洗
示差折光
通用 毫克
104
是 是 不可
电导
选择性 纳克
106
是 是 有限制
紫外
选择性 纳克
105
否 否 可以
荧光Байду номын сангаас选择性
P ic o g ra m
10 ~ 103
否 否 可以
电化学 选择性
P ic o g ra m
4.4% height
W 1.03
Good Column
Inject
4.4% height
W 1.44
Bad Column
提高柱效的方法
色谱柱本身
减小填料的颗粒度 找到最佳的流速(根据不同内径) 合适的温度 降低溶剂的粘度 增加柱长
其他影响柱效的因素
柱外效应
连接管路 进样器、检测器
进样体积 进样量
• 10、你要做多大的事情，就该承受多大的压力。9/12/2
020 3:15:46 AM03:15:462020/9/12
• 11、自己要先看得起自己，别人才会看得起你。9/12/2
谢 谢 大 家 020 3:15 AM9/12/2020 3:15 AM20.9.1220.9.12
• 12、这一秒不放弃，下一秒就会有希望。12-Sep-2012 S eptember 202020.9.12
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2、阅读一切好书如同和过去最杰出的 人谈话 。03:1 5:4603: 15:4603 :159/1 2/2020 3:15:46 AM
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3、越是没有本领的就越加自命不凡。 20.9.12 03:15:4 603:15 Sep-201 2-Sep-2 0
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4、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的 错儿。 03:15:4 603:15: 4603:1 5Saturday, September 12, 2020
进样器
液相色谱的应用（一）
“分析型液相色谱” 定性及定量分析
灵敏度的要求 样品的复杂性 样品量的要求 精度及准确度的要求 容易使用
液相色谱的应用（二）
“制备型液相色谱” 分离及纯化
化合物的稳定性 样品的复杂性 制备量的要求 纯度的要求，及纯度的鉴定 方法的安全性
开发液相色谱方法
问题∶什么样的分离结果是好的?分辨率?
色谱柱的柱效 N
理论塔板数计算公式：
N
s V1
2
W
W
s
方法
Wtan
16 切线法
Wh
5.54 半峰高
W3s
9
3s
W4s
16
4s
W5s
25
5s
用“切线”法计算柱效
Inject Inject
N4s
16 108..8700
2
8742 plates
VR 18.70
W 0.80
VR 16.63
106
是 是 脉冲的可以
色谱条件的优化
分 离 度
速 度 容 量
开发液相色谱方法
分辨率是色谱分离中主要考虑的因素
在开发色谱方法时，有很多因素是很重要
的。除分辨率之外，以下几个因素都要考
虑。
灵敏度
成本
载样量
容易使用
分析速度
色谱柱寿命
溶剂损耗
效率
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1、有时候读书是一种巧妙地避开思考 的方法 。20.9. 1220.9. 12Saturday, September 12, 2020
容量因子 k'
与峰高的关系
与R的关系
改变k'值的方法∶
调节流动相的极性、pH、离子强度等 梯度淋洗
选择性系数 a
定义∶ a tR2 t0 k 2
tR1 t0 k 1
a =1 时两组分分不开，
改变a的途径
改变固定相 改变流动相 改变温度 改变样品的本身性质
R a 1 a
a ，k'，N∶如何控制分辨率?
• 13、无论才能知识多么卓著，如果缺乏热情，则无异 纸上画饼充饥，无补于事。Saturday, September 12, 202
012-Sep-2020.9.12
• 14、我只是自己不放过自己而已，现在我不会再逼自 己眷恋了。20.9.1203:15:4612 September 202003:15
N4s
16106..6683
2
9569 plates
不好的色
谱柱的柱效反 而比好色谱柱 的要高，因为 其拖尾部分测 不出来
W 0.68
用“5s”法计算柱效
N5
25
18.70 1.03
2
8240 plates
VR 18.70
VR 16.63
N5 s
25
16.63 1.44
2
3334 plates
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7、最具挑战性的挑战莫过于提升自我 。。20 20年9 月上午3 时15分 20.9.12 03:15S eptember 12, 2020
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8、业余生活要有意义，不要越轨。20 20年9 月12日 星期六3 时15分 46秒03 :15:461 2 September 2020
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9、一个人即使已登上顶峰，也仍要自 强不息 。上午 3时15 分46秒 上午3时 15分03 :15:462 0.9.12