液相色谱基础知识培训教材
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LabAlliace高效液相色谱系统培训教材一、液相色谱系统的基本原理1、色谱法分类按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。
气相色谱法适用于分离挥发性化合物。
GC根据固定相不同又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC)，其中以GLC应用最广。
液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。
LC同样可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC)。
此外还有超临界流体色谱法(SFC)，它以超临界流体（界于气体和液体之间的一种物相）为流动相（常用CO2），因其扩散系数大，能很快达到平衡，故分析时间短，特别适用于手性化合物的拆分。
按原理分为吸附色谱法(AC)、分配色谱法(DC)、离子交换色谱法(IEC)、排阻色谱法(EC，又称分子筛、凝胶过滤(GFC)、凝胶渗透色谱法(GPC）和亲和色谱法。
(此外还有电泳)。
按操作形式可分为纸色谱法(PC)、薄层色谱法(TLC)、柱色谱法。
2、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
又称为色层法、层析法。
色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。
后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。
高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。
液相色谱基础知识Waters LC School 培训教材23页文档
46、我们若已接受最坏的，就再没有什么损失。——卡耐基 47、书到用时方恨少、事非经过不知难。——陆游 48、书籍把我们引入最美好的社会，使我们认识各个时代的伟大智者。——史美尔斯 49、熟读唐诗三百首，不会作诗也会吟。——孙洙 50、谁和我一样用功，谁就会和我一样成功。——莫扎特
液相色谱基础知识Waters LC School 培训教材
1、纪律是管理关系的形式。——阿法 纳西耶 夫 2、改革如果不讲纪律，就难以成功。
3、道德行为训练，不是通过语言影响 ，而是 让儿童 练习良 好道德 行为， 克服懒 惰、轻 率、不 守纪律 、颓废 等不良 行为。 4、学校没有纪律便如磨房里没有水。 ——夸 美纽斯
高效液相色谱法基本知识培训-化验员入门培训
改变α是改变后一组分相对于前一组分的保 留时间。α的改变可以选择不同的固定相或
流动相来实现。但改变固定相在液相色谱 中比较麻烦。如在一个色谱系统中,用二根 不同固定的柱子,则又必须考虑到流动相的
适应性。比较行之有效的办法是改变流动 相的极性,如采用连续改变流动相极性的梯
度洗脱或温度程序等方法来提高分离选择 性。
k’= tR/tM-1= tR’/tM 可见,容量因子就是调整保留时间与死时间的 比值。在液相色谱中，k’只与固定相、流动相性 质及柱温有关,而与流速和柱尺寸无关。
理论塔板数n和塔板高度H
理论塔板数n是反映物质在固定相和流动相 中动力学特性的重要色谱参数,它是代表色 谱柱分离效能的指标。
计算公式为:
n=16(tR/W)2=5.54(tR/Wh/2)2 tR为保留时间, W为峰宽， Wh/2为半高峰宽 塔板高度H计算公式为： H=L/n L为色谱柱长度。
分离因子(α)及分离度（R）
1.分离因子(α) α= k2’/k1’=tR2’/tR1’ α代表了二个物质在相同的色谱条件下的分 离选择性。物质的化学性质或结构上的差 异,反映在与固定相和流动相之间作用力也 有所差异上。这就是色谱分离的基础。
中保留程度的参数,并作为色谱定性的指标。 其表示方法有保留时间、保留体积、调整 保留时间和调整保留体积。
保留时间和保留体积
一般认为,当进样量很小 时,样品从柱中流出呈高斯曲 线分布。从进样开始到峰极 大值所需时间时间称为保留 时间,以tR表示。由于流出时 间与流动相流速成反比,因此 又可用保留体积作为保留值 参数,以VR表示。VR=tR・FC 式中, tR为保留时间(min), FC 为流动相流速（ml/min)。
分类
化学键合相的分类可以有不同的依据。按 键合相的表面结构为单分子键合和聚合键 合；按性质分为Si-O-C,Si-O-Si-N,Si-O-S-C； 按键合有机硅烷的功能团分为极性键合相、 非极性键合相和离子性键合相三种。
液相培训内容
L600系列液相色谱仪培训内容一、基本原理色谱技术是利用待测组分与流动相、固定相之间的作用（分配系数）不同，从而实现分离的过程。
先解释2个名词：1、流动相：顾名思义是在整个系统中处于流动状态的流体。
流动相是液体的叫液相（就是我们今天要学习的这一款仪器），起到运输样品和参与组分分离的作用。
流动相是气体的叫气相，只起运输样品的作用。
2、固定相：是静止不动的一相，装填或涂布于色谱柱内，参与组分分离。
“分离”是色谱区别于光谱仪器最大的特点和作用，一般的光谱仪器只能通过波长等特性从混合物中去选择待测物，一般一次只能检测一种物质；而色谱能够将复杂的混合物逐一分离成单一组分，逐个检测，可以实现多种组分的同时分析，比如我们熟悉的色素，苏丹红1、2、3、4，就可以一针进样同时检测。
二、仪器结构及各部分的使用要点液相色谱一般由输液系统、进样系统、分离系统、检测系统和数据处理系统构成。
下面我们按照这个组成的顺序逐一讲解每一部分的使用要点。
1、输液系统输液系统顾名思义就是用来输送流动相的部分，它包含了“输”和“液”两部分，“输”的部分就是指高压输液泵，它就像我们人体的心脏一样，是一切动力的源头，没有它液体不可能流动。
“液”就是指流动相了，它就像我们人体的血液一样，在泵给与的动力下，运送到整个系统。
下面分别讲解这两部分的使用方法和注意事项。
（1）流动相a、流动相类型：我们一般使用的流动相有三种类型，第一种是纯的有机溶剂，如甲醇、乙腈、四氢呋喃等，其中甲醇是最常用的，通常用它来冲洗平衡系统，C18柱在工作完后需要保存在纯甲醇中。
第二种是检测样品用的流动相，根据标准或方法来配置，通常含有缓冲盐。
第三种是10%-20%的甲醇水溶液（比例并不需要非常的准确），它是用于纯有机溶剂与含有缓冲盐的流动相之间的过渡冲洗液，因为缓冲盐溶于水但不溶于有机溶剂，如果不过渡直接更换，就会使缓冲盐在有机溶剂中析出成结晶盐，造成系统的堵塞，尤其是色谱柱，这是不可逆的损坏。
LabAlliace高效液相色谱系统培训教材(增加)
LabAlliace高效液相色谱系统培训教材一、液相色谱系统的基本原理1、色谱法分类按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC)。
气相色谱法适用于分离挥发性化合物。
GC根据固定相不同又可分为气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC)，其中以GLC应用最广。
液相色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳定性差的物质。
LC同样可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC)。
此外还有超临界流体色谱法(SFC)，它以超临界流体（界于气体和液体之间的一种物相）为流动相（常用CO2），因其扩散系数大，能很快达到平衡，故分析时间短，特别适用于手性化合物的拆分。
按原理分为吸附色谱法(AC)、分配色谱法(DC)、离子交换色谱法(IEC)、排阻色谱法(EC，又称分子筛、凝胶过滤(GFC)、凝胶渗透色谱法(GPC）和亲和色谱法。
(此外还有电泳)。
按操作形式可分为纸色谱法(PC)、薄层色谱法(TLC)、柱色谱法。
2、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。
又称为色层法、层析法。
色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。
后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。
液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。
高效液相色谱法(High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于60年代后期引入了气相色谱理论而迅速发展起来的。
岛津液相色谱操作培训课件——基础知识
9
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
HPLC vs GC
液相色谱：以液体作为流动相 的色谱分离方法
) 适用于高沸点、大分子、强极性和热 稳定性差的化合物的分析
) 流动相具有运载样品分子和选择性分 离的双重作用
气相色谱：以气体作为流动相的色谱 分离方法
岛津液相色谱操作培训 ---基础知识
1
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
2
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
岛津HPLC的历史
1969 1972 1978 1981 1982 1984 1991 1997 2000 2004
) 适用于沸点较低、热稳定性好的中小分子化 合物的分析
) 流动相只起运载样品分子的能力
10
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
HPLC分类
正相模式 (NP-LC) 反相模式 (RP-LC) 反相离子对色谱 (IPC) 离子交换色谱 (IEC) 尺寸排阻色谱 (GPC / GFC)
THECNLOGY BREAKTHROUGH
LC-20A Prominence
3
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
LC-20A Prominence
4
Shimadzu International Trading (Shanghai) Co. Limited
液相色谱基础知识培训教材
Inject Inject
用“5s”法计算柱效
Inject
Good Column
Bad Column
液相色谱基础知本身
. 减小填料的颗粒度 . 找到最佳的流速(根据不同内径) . 合适的温度 . 降低溶剂的粘度 . 增加柱长
液相色谱基础知识培训教材
其他影响柱效的因素
` 柱外效应
. 连接管路 . 进样器、检测器
` 进样体积 ` 进样量
液相色谱基础知识培训教材
容量因子 k'
与峰高的关系
与R的关系
改变k'值的方法∶
调节流动相的极性、pH、离子强度等 梯度淋洗
液相色谱基础知识培训教材
选择性系数 a
` 定义∶
. a =1 时两组分分不开，
` 改变a的途径
程度。是化学因素。 . N 是理论塔板数，描述色谱峰的谱带展宽程
度。
液相色谱基础知识培训教材
色谱柱的柱效 N
理论塔板数计算公式：
W
s
方法
Wtan
16 切线法
Wh
5.54 半峰高
W3s
9
3s
W4s
16
4s
W5s
25
5s
液相色谱基础知识培训教材
用“切线”法计算柱效
不好的色 谱柱的柱效反 而比好色谱柱 的要高，因为 其拖尾部分测 不出来
2020/11/26
液相色谱基础知识培训教材
` “分析型液相色谱” ` 定性及定量分析
. 灵敏度的要求 . 样品的复杂性 . 样品量的要求 . 精度及准确度的要求 . 容易使用
液相色谱基础知识培训教材
液相色谱的应用（二）
高效液相色谱仪基础培训课程
Majors 和 Kirkland 发明 microparticulate packed columns 1977 Microprocessor controlled pumps 1978 Micron packing 1983 Microbore column
作用
参与分离作用
分析样品无分子量限制
分析样品分子量一般小于 500 amu
液相色谱的分类
❖ 反相色谱是目前使用最普遍的一种色谱方法
液相色谱分离模式 流动相 固定相
分离机制
吸附法
非极性溶剂 极性填料
吸附
反相色谱
分配法
正相色谱
尺寸排阻 离子交换
极性溶剂
非极性溶剂 非交互作用溶
剂 离子对试剂
非极性 极性固相
分配系数K
❖ 分配系数与组分、流动相和固定相的热力学性质有关， 也与温度、压力有关。
❖ 在条件（流动相、固定相、温度和压力等）一定，样 品浓度很低时（Cs、Cm很小）时，K只取决于组分的 性质，而与浓度无关。这只是理想状态下的色谱条件， 在这种条件下，得到的色谱峰为正常峰；在许多情况 下，随着浓度的增大，K减小，这时色谱峰为拖尾峰； 而有时随着溶质浓度增大，K也增大，这时色谱峰为前 延峰。因此，只有尽可能减少进样量，使组分在柱内 浓度降低，K恒定时，才能获得正常峰。
应用领域 药物分析 生物化学
食品、饮料 化学工业 环境分析 滥用药物
临床实验
样
品
抗生素, 镇静剂, 类固醇, 止痛?
市场比例 30
氨基酸, 蛋白, 糖类, 脂质类
10
人工合成甜味剂, 抗氧化剂, 黄曲霉素, 添 加剂
《液相色谱实验基础》课件
环境水中有机污染物的液相色谱分析
总结词
该实验旨在检测环境水体中的有机污染物，为环境保护提供科学依据。
详细描述
实验采用反相液相色谱法，通过色谱柱分离水中的有机污染物，再通过检测器检测各组分的含量。实 验过程中需注意水样的采集、保存和前处理，以确保结果的准确性和可靠性。
中药成分的液相色谱分析
总结词
该实验通过液相色谱法对中药中的有效 成分进行分析，为中药质量控制提供依 据。
在使用液相色谱仪时，应确保电源电 压稳定，避免仪器受到电压波动的影 响。
在实验过程中，应保持实验室整洁， 避免仪器受到灰尘、震动等影响。
在进行样品处理和分离时，应遵循实 验室安全规定，佩戴个人防护用品， 如实验服、化学防护眼镜、化学防护 手套等。
实验室安全规定与防护措施
实验室应配备灭火据实验需求选择合适的液相色谱柱 ，如分离的组分类型、分离度要求等 。
03
实验操作方法
样品前处理方法
01
02
03
样品溶解
将待测样品溶解在适当的 溶剂中，以便于后续的色 谱分析。
过滤与离心
去除样品中的杂质和颗粒 物，提高色谱分离效果。
衍生化
对于某些不易直接检测的 化合物，需要进行衍生化 反应以提高检测灵敏度。
使用液相色谱仪记录实验过程中产生的数据，包括峰高、峰 面积等。
数据整理
对采集的数据进行清洗和整理，去除异常值和缺失值，确保 数据准确性和完整性。
谱图解析与定性定量分析
谱图解析
根据液相色谱谱图，解析 各个峰对应的物质成分。
定性分析
通过对比已知标准品色谱 图和未知样品的色谱图， 确定样品中存在的物质种 类。
用于食品中添加剂、色 素、农药残留等的检测
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• 10、你要做多大的事情，就该承受多大的压力。9/12/2
020 3:15:46 AM03:15:462020/9/12
• 11、自己要先看得起自己，别人才会看得起你。9/12/2
谢 谢 大 家 020 3:15 AM9/12/2020 3:15 AM20.9.1220.9.12
• 12、这一秒不放弃，下一秒就会有希望。12-Sep-2012 S eptember 202020.9.12
•
5、知人者智，自知者明。胜人者有力 ，自胜 者强。 20.9.12 20.9.12 03:15:4 603:15: 46Sept ember 12, 2020
•
6、意志坚强的人能把世界放在手中像 泥块一 样任意 揉捏。 2020年 9月12 日星期 六上午3 时15分 46秒03 :15:462 0.9.12
液相色谱基础知识
Waters LC School 培训教材
常见的分离方式
蒸馏 离心 电泳 过滤 超滤
色谱
色谱法的分类
色谱
液相色谱
气相色谱
柱色谱
纸色谱
薄层色谱
高效液相色谱 HPLC
HPLC分离的机理
分离是一 个物理的 过程。
典型的仪器配置
色谱泵及控制器
数据处理及控制
色谱柱
检测器
W aters 486
容量因子 k'
与峰高的关系
与R的关系
改变k'值的方法∶
调节流动相的极性、pH、离子强度等 梯度淋洗
选择性系数 a
定义∶ a tR2 t0 k 2
tR1 t0 k 1
a =1 时两组分分不开，
改变a的途径
改变固定相 改变流动相 改变温度 改变样品的本身性质
R a 1 a
a ，k'，N∶如何控制分辨率?
进样器
液相色谱的应用（一）
“分析型液相色谱” 定性及定量分析
灵敏度的要求 样品的复杂性 样品量的要求 精度及准确度的要求 容易使用
液相色谱的应用（二）
“制备型液相色谱” 分离及纯化
化合物的稳定性 样品的复杂性 制备量的要求 纯度的要求，及纯度的鉴定 方法的安全性
开发液相色谱方法
问题∶什么样的分离结果是好的?分辨率?
106
是 是 脉冲的可以
色谱条件的优化
分 离 度
速 度 容 量
开发液相色谱方法
分辨率是色谱分离中主要考虑的因素
在开发色谱方法时，有很多因素是很重要
的。除分辨率之外，以下几个因素都要考
虑。
灵敏度
成本
载样量
容易使用
分析速度
色谱柱寿命
溶剂损耗
效率
•
1、有时候读书是一种巧妙地避开思考 的方法 。20.9. 1220.9. 12Saturday, September 12, 2020
什么是色谱的分辨率？
分辨率的公式：
R
1 2
V2 V1 (W2 W1)
影响分辨率的因素：K’，a，N
分辨率的方程∶
R
k k 1
a 1 a
N 4
k' 是容量因子，表达了样品与柱填料的作用 强弱。
a 是选择性系数，描述两化合物分离的好坏
程度。是化学因素。
N 是理论塔板数，描述色谱峰的谱带展宽程 度。
色谱柱的柱效 N
理论塔板数计算公式：
N
s V1
2
W
W
s
方法
Wtan
16 切线法
Wh
5.54 半峰高
W3s
9
3s
W4s
16
4s
W5s
25
5s
用“切线”法计算柱效
Inject Inject
N4s
16 108..8700
2
8742 plates
VR 18.70
W 0.80
VR 16.63
• 13、无论才能知识多么卓著，如果缺乏热情，则无异 纸上画饼充饥，无补于事。Saturday, September 12, 202
012-Sep-2020.9.12
• 14、我只是自己不放过自己而已，现在我不会再逼自 己眷恋了。20.9.1203:15:4612 September 202003:15
液相色谱的检测模式
灵敏度、选择性、及适应能力
响应 灵敏度 线性范围 流速敏感 温度敏感 梯度淋洗
示差折光
通用 毫克
104
是 是 不可
电导
选择性 纳克
106
是 是 有限制
紫外
选择性 纳克
105
否 否 可以
荧光 选择性
P ic o g ra m
10 ~ 103
否 否 可以
电化学 选择性
P ic o g ra m
N4s
16106..6683
2
9569 plates
不好的色
谱柱的柱效反 而比好色谱柱 的要高，因为 其拖尾部分测 不出来
W 0.68
用“5s”法计算柱效
N5
25
18.70 1.03
2
8240 plates
VR 18.70
VR 16.63
N5 s
25
16.63 1.44
2
3334 plates
•
7、最具挑战性的挑战莫过于提升自我 。。20 20年9 月上午3 时15分 20.9.12 03:15S eptember 12, 2020
•
8、业余生活要有意义，不要越轨。20 20年9 月12日 星期六3 时15分 46秒03 :15:461 2 September 2020
•
9、一个人即使已登上顶峰，也仍要自 强不息 。上午 3时15 分46秒 上午3时 15分03 :15:462 0.9.12
•
2、阅读一切好书如同和过去最杰出的 人谈话 。03:1 5:4603: 15:4603 :159/1 2/2020 3:15:46 AM
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3、越是没有本领的就越加自命不凡。 20.9.12 03:15:4 603:15 Sep-201 2-Sep-2 0
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4、越是无能的人，越喜欢挑剔别人的 错儿。 03:15:4 603:15: 4603:1 5Saturday, September 12, 2020
4.4% height
W 1.03
Good Column
Inject
4.4% height
W 1.44
Bad Column
提高柱效的方法
色谱柱本身
减小填料的颗粒度 找到最佳的流速(根据不同内径) 合适的温度 降低溶剂的粘度 增加柱长
其他影响柱效的因素
柱外效应
连接管路 进样器、检测器
进样体积 进样量