各种尼帕病毒的检测技术综述

各种尼帕病毒的检测技术综述

摘要：尼帕病毒(Nipah virus,NiV)是一种烈性人畜共患病原体,该病毒自从1998年在马来西亚暴发后,相继在新加坡、印度、孟加拉等国多次出现,引发人类重症呼吸道和神经系统疾病,病死率较高。由于NiV的高致病性、具有大流行的潜在威胁以及缺乏有效的抗病毒药物和疫苗,因此建立灵敏、快速、特异的检测和诊断方法对于防控未来的NiV疫情尤为重要。本文就NiV检测方法的研究进展进行概述。

关键词：尼帕病毒(NiV); 病毒分离; 分子诊断; 血清学检测;

Abstract：The Nipah virus(NiV)is a zoonotic paramyxovirus. Since an outbreak in Malaysia in 1998,the virus has reappeared in Singapore,India,Bangladesh and other countries,resulting in severe and fatal human respiratory and neurologic diseases. Due to the high pathogenicity of the NiV,the potential for pandemics,and the lack of efficacious antiviral drugs and vaccines,the research and development of sensitive,rapid,and specific diagnostic tools for preventing and controlling future outbreaks is crucial. Here,we discuss research progress on the detection methods for the NiV.

Keyword：Nipah virus(NiV); Virus isolation; Molecular diagnosis; Serum detection;

在过去的几十年中，世界各地多次出现导致严重烈性疾病的病毒暴发事件，包括已知及未知的病毒病原体，如严重急性呼吸道综合征冠状病毒、埃博拉病毒、拉沙热病毒、马尔堡病毒、尼帕病毒、亨德拉病毒、裂谷热病毒和中东呼吸综合征冠状病毒等。上述病毒引发的疾病在全球范围内对人类健康产生了严重影响，造成巨大的经济损失。1998年9月下旬，马来西亚的怡保（Ipoh）附近报告了第一例尼帕病毒感染病例，并于1999年3月在Kampung sungai nipah地区病人样本中首次成功分离，因此命名为尼帕病毒（Nipah virus,NiV)。根据其外观NiV被分类为副黏病毒科（Paramyxovirinae），又因其与亨德拉病毒（Hendra virus,HeV）抗血清有强烈的交叉反应，且进一步测序表明其为一种新型副黏病毒，故与HeV 一同被划为亨尼帕病毒属（Henipavirus）。自从NiV首次暴发以来，相继在马来西亚、新加坡、孟加拉国、印度和菲律宾五个国家出现，导致人群严重感染与高死亡率。目前，尚无特异性治疗药物和预防疫苗，对感染高风险地区的动物宿主和环境进行持续监测有助于发现感染的早期迹象，控制疾病暴发。本文旨在通过对各种NiV检测方法的描述和分析，加强人们对于NiV疫情防控的认识，应对潜在的传染病疫情。

1、NiV基因结构

NiV属副黏病毒科亨尼帕病毒属，是一种包膜病毒，形状多形，病毒颗粒平均直径500nm（范围180nm～1 900nm），有囊膜和刺突，基因组为不分节段的单负链RNA。基因组

从3' 端开始编码6种结构蛋白，依次是核蛋白（Nucleoprotein,N）、磷蛋白（Phosphoprotein,P）、基质蛋白（Matrix protein,M）、融合蛋白（Fusion protein,F）、糖蛋白（Glycoprotein,G）和大蛋白（Large protein,L）。其中P基因由于开放编码区不同，还编码3种非结构蛋白C、V、W。病毒核衣壳由N、L、P三种蛋白组成，囊膜由M、G、F三种蛋白组成。NiV有两个主要家系：马来西亚株（NiV‐M）和孟加拉株（NiV‐B),NiV‐M与NiV‐B氨基酸同源性大于92%，核苷酸序列的同源性为91.8%。两种毒株非常相似，但长度不同，NiV‐M基因组长度为18 246 nt,NiV‐B基因组为18 252 nt，多出的6nt主要位于F基因的5' 端非编码区。本文作者下载了GenBank发布的全部30条NiV全基因组序列，MEGA7.0软件构建全基因进化树，分析结果表明，NiV分为明显的两支，马来西亚和柬埔寨检测到的NiV毒株为同一分支，而孟加拉国和印度流行的毒株则为另一分支（图1）。

2、流行病学特征

狐蝠属果蝠已被确认是NiV的主要自然宿主。另外，NiV也可感染其他哺乳动物，如猪、猫、狗、马、人等。区别于大多数副黏病毒，NiV拥有更广泛的宿主范围。流行病学研究表明，与被NiV感染的动物密切接触，以及食用被携带NiV蝙蝠污染的椰枣汁是导致NiV由动物向人传播的重要因素。此外，在孟加拉国和印度的NiV暴发中有明显的人际传播。

研究表明，大多数NiV感染病例的潜伏期不到15d，特殊情况下潜伏期可延长至4个月或更久。NiV感染引发疾病始于非特异性症状，如突然发烧、头痛和肌痛，甚至恶心和呕吐。然后病毒扩散至不同的器官和系统，引发系统性血管炎、肺炎、脑炎等疾病。根据WHO报告的数据，截至2018年6月，NiV疫情出现在马来西亚、新加坡、孟加拉国、印度和菲律宾五个国家，共有643名实验室确诊患者，导致至少380人（59%）死亡，其中新加坡病死率最低，为9.1%，而印度和孟加拉国的病死率最高，分别达到75.3%和75.9%（图2）。

图1 尼帕病毒全基因组核酸序列进化分析

Figure 1 Phylogenetic analyses of nucleic acid sequences of the whole genome of Nipah Virus(NiV)

3、NiV检测方法