槐花米中芦丁的提取分离和鉴定

蒸馏水，维持
滤液
沉淀（粗品芦丁）均分2份
原体积。 • 2%的硫酸用
重结晶
按1:60量加入蒸馏水，沉 淀悬浮于蒸馏水中，加热煮 沸15分钟后，趁热抽滤
水解
98%浓硫酸自 己配制，注意
按1:70量加入2%硫
浓硫酸和水的
酸，加热40min，放
加入顺序。
冷静置，抽滤
残渣
抽滤时，热烧杯勿直接放在实 验台上，防止烧杯炸裂。
一、实验目的要求
1、掌握黄酮类化合物的提取和分离的原理和 方法。
2、掌握黄酮类成分的主要理化性质及鉴别方 法。
3、了解IR及NMR在黄酮类化合物结构鉴定中 的应用。
二、实验原理 中药槐米中的主要化学成分 ❖主要含有芦丁、槲皮素，还含少量皂苷类及
多糖、粘液质等。 ❖槐米含芦丁可高达23.5%，槐花开放后降至
▪ 芦丁可溶于乙醇、吡啶、甲酰胺、甘油、丙酮、冰醋酸、 乙酸乙酯中，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚。
▪ 芦丁的溶解度，在冷水中1:10000，沸水中1:200，沸乙醇 中1:60，沸甲醇中1:7
▪ 芦丁分子中具有较多酚羟基，显弱酸性，易溶于碱液中， 酸化后又可析出，因此可以用碱溶酸沉的方法提取芦丁。
碱溶酸沉法原理
调节 PH8-9
1.5g CaO 加10ml水
直火加热
保持微 沸
注3意0m及时in补充水
和石灰乳，维持 PH 8~9
双层滤纸趁 热抽滤
• 趁热抽滤时，注意防 止滤液因减压而沸腾。
滤液 残渣
在60-70度下，用 浓盐酸调PH3-4
静置
2、芦丁的精制与水解
第一次实验所得滤液
• 酸水解过程
抽滤
中，注意补充
❖ 在提取前应将槐花米粉碎，使芦丁易于被热水溶出。 粉碎不可过细，以免过滤时速度过慢；
❖ 本实验用碱溶酸沉法提取，加入石灰乳可以达到碱性 溶解的目的，又可除去槐花米中所含的大量粘液质， 但应严格控制其碱性pH8～9，不可超过pH10。如 pH值过高，加热提取过程中芦丁可被水解破坏，降 低收得率。加酸沉淀时，控制pH3～4,不宜过低，否 则芦丁可生成佯盐而溶于水，也降低收得率。
13.0%。 ❖芦丁可用于治疗毛细血管脆性引起的出血症，
并用作高血压辅助治疗剂。 ❖芦丁还可以作为制备槲皮素、羟乙基槲皮素、
HO
O
OH
OH 槲皮素的化学结构式
O
OH O
glc rha
芦丁的化学结构式
OH
HO 7 5
OH 3' 4' O
3 OH
OH
O
芦丁的性质
❖ 芦丁为浅黄色粉末或极细微淡黄色针状结晶，含3分子结 晶水（C27H30O16·3H2O），加热至185℃以上熔融并开始 分解。
由槐花米中提取芦丁的方法很多，本实 验是根据芦丁在冷水和热水中的溶解度差异 的特性进行提取和精制，或根据芦丁分子中 具有酚羟基，显弱酸性，能与碱成盐而增大 溶解度，以碱水为溶剂煮沸提取，其提取液 加酸酸化后则芦丁游离析出。
三、实验流程
1、芦丁的提取
槐花米 （15g）
加水 300m
l
搅拌下加 入石灰乳
②醋酸乙酯—甲酸—水(8：1：1)。 ❖ 显色剂：①喷三氯化铝试液，待乙醇挥干后，置紫外灯
(365nm)下观察。
5、芦丁的IR、1HNMR鉴定
❖ 样品：自制芦丁。 ❖ 实验：KBr压片，红外分光光度仪测试。 ❖ IR谱图与芦丁标准谱图对照。 ❖ DMSO-d6作溶剂，测芦丁的1HNMR。
四、注意事 项
五、思 考题
❖ 苷类结构的检识大体程序如何？ ❖ 苷类水解的方法？ ❖ 怎样确定芦丁结构中的糖基是连接在槲皮素
3-OH上？ ❖ 苷元的结构怎样确定？ ❖ 怎样确定苷键的构型？
六、实验课后总 结与讨论
❖ 芦丁提取 ❖ 芦丁的分离纯化 ❖ 芦丁的理化鉴别 ❖ 芦丁的苷元-槲皮素的制备 ❖ 芦丁与槲皮素的波谱鉴定
滤液 冷却 静置，抽滤
精制芦丁
滤液
沉淀
糖鉴定
干燥、 95％
乙醇重结晶
槲皮素
3、芦丁、槲皮素的理化鉴别方法
实验名称百度文库
实验试剂
Molish反应 盐酸-镁粉反应
10%α-萘酚乙醇、溶液浓硫酸
盐酸-镁粉
醋酸镁反应
1％醋酸镁甲醇溶液
现象
芸香苷
槲皮素
紫色环
无现象
红色～紫红色 黄色荧光（紫外灯）
三氯化铝反应 锆-柠檬酸反应
1％三氯化铝乙醇溶液 （紫外灯）
2％二氯氧锆甲醇溶液2％ 柠檬酸甲醇溶液3～4滴
黄色荧光 黄色并褪色 黄色不褪色
4、芦丁的TLC鉴定
❖ 样品： ①自制芦丁乙醇液; ②自制槲皮素乙醇液。
❖ 对照品：①芦丁对照品乙醇液; ②槲皮素对照品乙醇液。
❖ 吸附剂：聚酰胺薄膜。 ❖ 展开剂：①氯仿—甲醇—甲酸(15：5：1);