胶体金生产工艺配方原则PPT课件
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胶体金的制备及其应用PPT课件
胶体金用于电镜水平的研究，主要包括：①细胞悬液 或单层培养中细胞表面抗原的观察。②单层培养中细胞内 抗原的检测。③组织抗原的检测。
金标记在电镜水平的应用，主要方法包括： 包埋前染色、包埋后染色、免疫负染色、双标记 技术和原位杂交技术等。
实验证明，该法样本用量少、检测速度快、 对比明显、操作简单、敏感性和特异性高，既可 用于抗原检测，也可用于抗体检测，因此，可同 时适用于科研和诊断。
• 目前电镜水平的免疫金染色(IGS)，光镜水平的 免疫金银染色(IGSS)，以及肉眼水平的斑点免疫 金染色技术日益成为科学研究和临床诊断的有力 工具
免疫胶体金技术的基本原理
• 免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度
的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑 褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚 集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定 性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也 可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银 染色。
主要内容
• 概述 • 免疫胶体金技术的基本原理 • 胶体金的特性 • 胶体金的制备方法 • 胶体金的鉴定和保存 • 免疫胶体金制备和保存 • 免疫胶体金应用
概述
• 胶体金溶液：胶体金溶液是指分散相粒子直径
在l—150 nm之间的金溶胶，属于多相不均匀体系， 颜色呈桔红色到紫红色。
• 1971年胶体金作为标记物开始用于免疫组织化 学,Faulk等应用电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察 沙门氏菌,此后他们把胶体金与多种蛋白质结合；
下述标记步骤最为常见：
• ①用0.1mol/L K2CO3或0.1mol/L HCl调节金溶胶至所需pH( 标记ＳＰＡ时调到pH6.0)。
金标记在电镜水平的应用，主要方法包括： 包埋前染色、包埋后染色、免疫负染色、双标记 技术和原位杂交技术等。
实验证明，该法样本用量少、检测速度快、 对比明显、操作简单、敏感性和特异性高，既可 用于抗原检测，也可用于抗体检测，因此，可同 时适用于科研和诊断。
• 目前电镜水平的免疫金染色(IGS)，光镜水平的 免疫金银染色(IGSS)，以及肉眼水平的斑点免疫 金染色技术日益成为科学研究和临床诊断的有力 工具
免疫胶体金技术的基本原理
• 免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度
的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑 褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚 集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定 性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也 可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银 染色。
主要内容
• 概述 • 免疫胶体金技术的基本原理 • 胶体金的特性 • 胶体金的制备方法 • 胶体金的鉴定和保存 • 免疫胶体金制备和保存 • 免疫胶体金应用
概述
• 胶体金溶液：胶体金溶液是指分散相粒子直径
在l—150 nm之间的金溶胶，属于多相不均匀体系， 颜色呈桔红色到紫红色。
• 1971年胶体金作为标记物开始用于免疫组织化 学,Faulk等应用电镜免疫胶体金染色法(IGS)观察 沙门氏菌,此后他们把胶体金与多种蛋白质结合；
下述标记步骤最为常见：
• ①用0.1mol/L K2CO3或0.1mol/L HCl调节金溶胶至所需pH( 标记ＳＰＡ时调到pH6.0)。
胶体金试纸条的制备PPT课件
5min后测各管。根据胶体金颗粒
的大小，OD在520～580nm之间
测定，以OD值为纵坐标，蛋白质
用量为横坐标作一曲线，取曲线
最先与横轴相接近的那一点处的
蛋白质用量为最适稳定量。图中
10nm的胶体金溶液中蛋白质的最
适稳定量为45μg/ml。
第17页/共37页
（2）目测法：以目测法确定胶体金与待标记蛋 白质用量比例，将标记的蛋白质逐级稀释后（由 5μg～45μg另设对照管），各取等体积顺序加 入一系列装有1ml胶体金的试管中，5min后， 在上述各管内分别加入0.1ml 10%氯化钠，依 表顺序进行。
第15页/共37页
常 见 蛋 白 标 记 条 件
第16页/共37页
➢最小蛋白用量的确定
（ 1 ） 光 电 比 色 法 ： 制 备 一 系 列 不
同浓度的等体积蛋白质溶液
（1ml），分别加入5ml胶体金中，
迅 速 混 匀 ， 然 后 ， 各 加 入 1ml
10% NaCl 溶 液 ， 摇 匀 ， 静 置
颗粒结合，用直接免疫细胞化学技术检测沙门菌的 表面抗原。
➢1974------实现间接免疫金染色法 Romano将胶体金标记到马抗人的IgG上，
实现了间接免疫金染色法 第3页/共37页
胶体金技术的种类及优点
快速免疫金渗滤法(immuogold filtration assay ,IGFA) 即穿流式(flow through)的固相膜免疫测定。 主要由两部分组成：膜渗滤装置和标记结合物。 前者为一塑料小盒，其中填满吸水性物质，面上紧贴 放置一片吸附有抗体(以双抗体夹心法测抗原为例)的硝 酸纤维膜，标记结合物为免疫金。
A：金标记抗体 B：标本中的抗原 C：包被抗体 D：NC膜 E：吸水材料 F：塑料盒
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PPT78页)
245 185 140 100
胶体金诊断试剂工艺配方原则
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
不同种类膜的 IgG结合能力
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
7
Made by：QS HLJ
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
12
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
吸附过程
溶液中的蛋白
吸附
蛋白转移到表面区域 蛋白在表面重排
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
13
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
不同种类膜的 BSA结合能力
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
8
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
为什么蛋白会结合到膜上?
结合力是什么?
▪ 静电 ▪ 疏水力
这两种结合力的效应是什么?
▪ 使蛋白从溶液中分离出来 ▪ 长久结合作用
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
❖盐
▪ 通常不会影响 ▪ 对某些蛋白，两性离子的盐类有助于蛋白结合 ▪ 减少信号强度，消假阳
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
17
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
❖糖：对包被蛋白的稳定性有重要作用，减 缓老化速度，也可以增加亲水力。
❖惰性蛋白：对消除假阳有重要作用 ❖表面活性剂：增加亲水力，也可增色。
胶体金诊断试剂工艺配方原则
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
不同种类膜的 IgG结合能力
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
7
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
12
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
吸附过程
溶液中的蛋白
吸附
蛋白转移到表面区域 蛋白在表面重排
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
13
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
不同种类膜的 BSA结合能力
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
8
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
为什么蛋白会结合到膜上?
结合力是什么?
▪ 静电 ▪ 疏水力
这两种结合力的效应是什么?
▪ 使蛋白从溶液中分离出来 ▪ 长久结合作用
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
❖盐
▪ 通常不会影响 ▪ 对某些蛋白，两性离子的盐类有助于蛋白结合 ▪ 减少信号强度，消假阳
胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
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胶体金诊断试剂工艺配方原则概述(PP T78页)
❖糖：对包被蛋白的稳定性有重要作用，减 缓老化速度，也可以增加亲水力。
❖惰性蛋白：对消除假阳有重要作用 ❖表面活性剂：增加亲水力，也可增色。
胶体金组研发思路(ppt)
胶体金制备方法简介
化学还原法
01
通过还原剂将金离子还原成金原子，形成胶体金颗粒。常用的
还原剂包括柠檬酸三钠、硼氢化钠等。
光化学法
02
利用光照激发金离子产生自由基，进而形成胶体金颗粒。该方
法制备的胶体金颗粒尺寸均匀，但设备成本较高。
微波辅助法
03
利用微波加热快速制备胶体金，具有反应速度快、颗粒均匀等
胶体金分类
根据金纳米颗粒的大小和形状，胶体 金可分为球形、棒状、星形等不同类 型。
胶体金物理化学性质
光学性质
胶体金具有独特的表面等离子体 共振吸收带，呈现出鲜艳的颜色，
且颜色随颗粒大小变化而变化。
电学性质
胶体金具有良好的导电性和电化学 稳定性，可用于制备电子器件和传 感器。
催化性质
胶体金具有较高的催化活性，可用 于催化氧化、还原和偶联等反应。
建立完善的反馈机制
及时收集研发过程中的问题和建议，对研发流程进行持续优化和改进。
鼓励创新思维和技术更新
鼓励团队成员提出新的想法和技术方案，不断推动胶体金组研发水平的提升。
05 数据分析与成果展示
实验数据收集整理方法
原始数据记录
确保实验数据的准确性和 可追溯性，详细记录实验 条件、操作步骤和原始数 据。
研发经验
在相关领域有一定的研发经验 ，了解行业发展趋势和前沿技 术。
创新能力
具备较强的创新意识和解决问题 的能力，能够针对研发过程中遇 到的问题提出有效的解决方案。
团队协作能力
具备良好的团队协作精神和沟 通能力，能够与团队成员共同 协作，推进研发项目的进展。
团队内部职责划分
项目负责人
负责整个研发项目的规划、实施和监 控，确保项目按照计划推进并达成预 期目标。
胶体金组研发思路(ppt)
确定研发周期和预算
根据市场需求和产品定位，确定胶体 金组研发的应用领域，如医学诊断、 环境监测、食品安全等领域。
根据研发目标和性能指标，制定合理 的研发计划，明确各阶段的任务和时 间节点，确保研发进度和质量。
设定性能指标
根据应用领域和市场需求，设定胶体 金组的性能指标，如灵敏度、特异性、 稳定性等，确保产品能够满足实际需 求。
广泛应用
随着人们对胶体金组认识的加深和需求的增加，未来胶体金组有望在 医疗、环保、食品等领域得到广泛应用。
06
结论
胶体金组研发的重要性和意义
胶体金组技术是现代生物技术领 域的重要分支，其研发对于推动 生命科学、医学、农业等领域的
发展具有重要意义。
胶体金组技术能够实现快速、准 确、灵敏的检测，对于疾病诊断、 食品安全、环境监测等领域具有
广泛的应用前景。
胶体金组技术的研发有助于提升 国家科技实力和创新能力，为经 济发展和社会进步提供强有力的
支撑。
对未来胶体金组研发的建议与期望
加强基础研究
加大对胶体金组技术的基础研 究力度，探索新的应用领域和 场景，提高技术的稳定性和可
靠性。
促进产学研合作
加强企业、高校和研究机构的 合作，推动科技成果的转化和 应用，形成产业集聚和竞争优 势。
胶体金技术的基本原理基于抗原抗体 反应，通过将抗原或抗体固定在层析 材料上，当待测样本中含有相应的抗 体或抗原时，会与固定在层析材料上 的抗原或抗体发生结合，形成复合物 ，该复合物会随着层析材料移动并富 集在预设的位置，通过肉眼观察或仪 器检测即可判断待测样本是否含有目 标物质。
胶体金技术的特点与优势
关键技术
胶体金标记技术、特异性结合、信号放大技术
胶体金生产工艺配方原则参考幻灯片共81页
胶体金生产工艺配方原则参考幻灯片
11、获得的成功越大，就越令人高兴 。野心 是使人 勤奋的 原因， 节制使 人枯萎 。 12、不问收获，只问耕耘。如同种树 ，先有 根茎， 再有枝 叶，尔 后花实 ，好好 劳动， 不要想 太多， 那样只 会使人 胆孝懒 惰，因 为不实 践，甚 至不接 触社会 ，难道 你是野 人。(名 言网) 13、不怕，不悔(虽然只有四个字，但 常看常 新。 14、我在心里默默地为每一个人祝福 。我爱 自己， 我用清 洁与节 制来珍 惜我的 身体， 我用智 慧和知 识充实 我的头 脑。 15、这世上的一切都借希望而完成。 农夫不 会播下 一粒玉 米，如 果他不 曾希望 它长成 种籽； 单身汉 不会娶 妻，如 果他不 曾希望 有小孩 ；商人 或手艺 人不会 工作， 如果他 不曾希 望因此 而有收 益。-- 马钉路 德。
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基
谢
11、获得的成功越大，就越令人高兴 。野心 是使人 勤奋的 原因， 节制使 人枯萎 。 12、不问收获，只问耕耘。如同种树 ，先有 根茎， 再有枝 叶，尔 后花实 ，好好 劳动， 不要想 太多， 那样只 会使人 胆孝懒 惰，因 为不实 践，甚 至不接 触社会 ，难道 你是野 人。(名 言网) 13、不怕，不悔(虽然只有四个字，但 常看常 新。 14、我在心里默默地为每一个人祝福 。我爱 自己， 我用清 洁与节 制来珍 惜我的 身体， 我用智 慧和知 识充实 我的头 脑。 15、这世上的一切都借希望而完成。 农夫不 会播下 一粒玉 米，如 果他不 曾希望 它长成 种籽； 单身汉 不会娶 妻，如 果他不 曾希望 有小孩 ；商人 或手艺 人不会 工作， 如果他 不曾希 望因此 而有收 益。-- 马钉路 德。
21、要知道对好事的称颂过于夸大，也会招来人们的反感轻蔑和嫉妒。——培根 22、业精于勤，荒于嬉；行成于思，毁于随。——韩愈
23、一切节省，归根到底都归结为时间的节省。——马克思 24、意志命运往往背道而驰，决心到最后会全部推倒。——莎士比亚
25、学习是劳动，是充满思想的劳动。——乌申斯基
谢
胶体金技术简介 ppt课件
稳定性好：金标试剂稳定，可长期室温保存
检测标本种类多：既可用于测血清/血浆/全血，又可用于测 尿或唾液,或处理后的组织等固体样品
6
免疫层析法应用领域
类别 人类医学
农牧业 环境 食品安全
应用领域
检测的物质
各级医院,血站,CDC,防 疫站,诊断中心；家庭
自检；商检系统；边检 口岸；公安系统.
女性妊娠（hCG,LH等)
传染病（乙肝五项、艾滋,、梅毒、流感等） 肿瘤标志物（AFP、、粪便血红蛋白等）
心梗系列(肌钙蛋白、肌红蛋白、肌酸激酶）
毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒等）
畜牧兽医站, 商检系统, 传染病（禽流感、兽瘟疫等）
边检口岸,农牧类院系
和研究所
病毒（烟草花叶病毒、犬细小病毒等）
环保监测部门,研究机 有害物质超标 构
喷点法与浸泡法的比较 (AJQ3000喷头)
1.释放快慢 2.液体量不同，干燥快慢，边缘
效应 3.生产方便性
20
样品垫
材料选择
各成分的作用 1.缓冲溶液的作用 (PH) 2.盐的作用 3.大分子蛋白BSA\PVP 4.表面活性剂 Tween-20,TritonX-100
21
吸水纸
吸水效率 进口与国产纸的差异
一步法
固相系统,常温保存
开发周期长,使用方便
20-40nm 胶体金 大孔径膜 侧向流动
免疫渗滤法
多步法
液体/固相系统 液体需要冷冻保存 开发周期短,使用不方便
10-15nm 胶体金 小孔径膜 竖向流动
4
免疫层析法技术优势:简单/现场/快速
1.打开包装取出试纸条 2.直接插入待测样品中 3. 目测读出结果（3-10分钟内）
胶体金 ppt课件
(三) 技术要点
• 1.试剂盒组成 ①滴金反应板 (图20-1)胶体 金免疫渗滤试验中主要试剂成分之一， 由塑料小盒、吸水垫料和点加了抗原或 抗体的醋酸纤维素膜片三部分组成。② 胶体金标记物 ③洗涤液 。
2.操作要点
• 2.操作要点 ①将反应板平放于实验台面上，于 小孔内滴加含待测抗原标本1-2滴，待完全渗 入；②于小孔内滴加胶体金标记抗体试剂1-2 滴，待完全渗入；
• （2）胶体金的颜色和光吸收性：对同一
种物质的水溶胶金颗粒来说，粒子大小 不同，颜色亦不同，胶体金颗粒在5～ 20nm之间，吸收波长520nm，呈葡萄酒 红色，20～40nm之间吸收波长530nm， 液体为深红色，60nm的金溶液主要吸收 波长600nm，金溶液呈兰紫色，若离心
去掉较大的金颗胶体金的制备并不难，但要制好高质量的胶体金 却也并非易事。因此对每次制好的胶体金应加以 检定，主要检查指标有颗粒大小，粒径的均一程 度及有无凝集颗粒等。在日光下仔细观察比较胶 体金的颜色，可以粗略估计制得的金颗粒的大小。 当然也可用分光光度计扫描λmax来估计金颗粒的 粒径。制备的胶体金最好作电镜观察，并选一些 代表性的作显微摄影，可以比较精确地测定胶体 金的平均粒径。 良好的胶体金应该是清亮透明的， 若制备的胶体金混浊或液体表面有漂浮物，提示 此次制备的胶体金有较多的凝集颗粒。
最常用的制备方法为柠檬酸盐还原法。
①先配制HAuC14水溶液，加热至沸。②搅动下准 确加入一定量的柠檬酸三钠 （Na3C6H5O7·2H2O）水溶液。③继续加热煮 沸一定时间。此时可观察到淡黄色的氯金酸水溶 液在柠檬酸钠加入后很快变灰色，续而转成黑色， 随后逐渐稳定成红色。全过程约2～3min。④冷 却至室温后用蒸馏水恢复至原体积。通过改变柠 檬酸三钠的用量可以制得不同大小的胶体金颗粒
胶体金及金标抗体的制备(免疫学检验技术课件)
— *—
胶体金和免疫金的制备
胶体金
1、又称金溶胶，为金盐还原后的金颗粒 悬液。 2、胶体金结构：一个基础金核（原子金 Au）及包围在外的双离子层构成，内层负 电荷（AuCL2-），外层正电荷（H+）。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
— *—
胶体金和免疫金的制备
胶体金 3、胶体金颗粒大小为1-100nm，大小不同呈色不同。（25nm为橙黄色、10-20nm为酒红色、30-80nm为紫红色） 4、对电解质敏感，某些蛋白质等大分子物质有保护胶体金、 加强其稳定性的作用。 5、引起胶体聚沉的主要因素包括电解质、温度和浓度等。
免疫学检验技术
胶体金和免疫金的制备
教学培训课件
胶体金和免疫金的制备
金免疫技术 金免疫技术：是固相膜免疫分析技术的一种，是以胶体金作 为标记物，标记已知抗原或抗体，用于检测未知抗体或抗原 的一种检测方法。 特点：简便、快速、安全、应用广泛、适合急诊；本法灵敏 度不及酶标法，不能准确定量，只能作为定性或半定量试验。
金颗粒
优质金颗粒
劣质金颗粒
— *—
胶体金和免疫金的制备
免疫金 制备 1、制备原理：免疫金是抗原或抗体与胶体金的结合物质。目 前认为，这种结合是蛋白质表面携带的正电荷与胶体金颗粒表 面的负电荷借静电吸附而形成的牢固结合。 2、制备过程：蛋白溶液逐滴加入胶体金溶液中，同时用磁力 搅拌，数分钟后加入稳定剂。 3、保存：免疫金溶液使用稀释液调制成工作浓度后保存。
— *—
胶体金和免疫金的制备
胶体金 制备 1、制备原理：胶体金是氯金酸在还原剂（如柠檬酸钠、鞣酸 等）作用下聚合成的一定大小的金属颗粒，进而形成带负电荷 的疏水胶溶液。依据还原剂的类型和作用的强弱，可制备0.8150nm大小不等的胶体金。 2、制备方法：目前最常用的方法是使用柠檬酸三钠做还原剂 的制备方法。
胶体金和免疫金的制备
胶体金
1、又称金溶胶，为金盐还原后的金颗粒 悬液。 2、胶体金结构：一个基础金核（原子金 Au）及包围在外的双离子层构成，内层负 电荷（AuCL2-），外层正电荷（H+）。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
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胶体金和免疫金的制备
胶体金 3、胶体金颗粒大小为1-100nm，大小不同呈色不同。（25nm为橙黄色、10-20nm为酒红色、30-80nm为紫红色） 4、对电解质敏感，某些蛋白质等大分子物质有保护胶体金、 加强其稳定性的作用。 5、引起胶体聚沉的主要因素包括电解质、温度和浓度等。
免疫学检验技术
胶体金和免疫金的制备
教学培训课件
胶体金和免疫金的制备
金免疫技术 金免疫技术：是固相膜免疫分析技术的一种，是以胶体金作 为标记物，标记已知抗原或抗体，用于检测未知抗体或抗原 的一种检测方法。 特点：简便、快速、安全、应用广泛、适合急诊；本法灵敏 度不及酶标法，不能准确定量，只能作为定性或半定量试验。
金颗粒
优质金颗粒
劣质金颗粒
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胶体金和免疫金的制备
免疫金 制备 1、制备原理：免疫金是抗原或抗体与胶体金的结合物质。目 前认为，这种结合是蛋白质表面携带的正电荷与胶体金颗粒表 面的负电荷借静电吸附而形成的牢固结合。 2、制备过程：蛋白溶液逐滴加入胶体金溶液中，同时用磁力 搅拌，数分钟后加入稳定剂。 3、保存：免疫金溶液使用稀释液调制成工作浓度后保存。
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胶体金和免疫金的制备
胶体金 制备 1、制备原理：胶体金是氯金酸在还原剂（如柠檬酸钠、鞣酸 等）作用下聚合成的一定大小的金属颗粒，进而形成带负电荷 的疏水胶溶液。依据还原剂的类型和作用的强弱，可制备0.8150nm大小不等的胶体金。 2、制备方法：目前最常用的方法是使用柠檬酸三钠做还原剂 的制备方法。
胶体金生产工艺配方原则概述
胶体金生产工艺配方原则概述引言胶体金是一种重要的纳米材料，具有广泛的应用前景。
在生产胶体金的过程中，合理的工艺配方是保证产品质量和生产效率的关键因素。
本文将概述胶体金生产工艺配方的原则和注意事项，以帮助生产人员制定合适的配方。
工艺配方原则原料选择胶体金的制备通常使用两种主要成分：还原剂和金盐。
合理的原料选择对于获得高质量的胶体金至关重要。
1.还原剂：常用的还原剂包括氢氯酸，甘氨酸，乳酸等。
选择还原剂时应考虑其还原能力、稳定性和成本等因素。
较强的还原剂能够更有效地还原金离子，但过强的还原剂可能会引起胶体金的聚集，降低产品质量。
2.金盐：常用的金盐是氯金酸，其选择应考虑溶解度、稳定性和成本等因素。
合适的金盐选择可以提高胶体金的产率和稳定性。
摩尔比摩尔比是指原料之间的摩尔配比。
合理的摩尔比有助于控制胶体金的粒径和分散度。
1.还原剂和金盐的摩尔比：还原剂和金盐的摩尔比对于控制胶体金的粒径和形状至关重要。
较高的还原剂摩尔比可以得到小粒径的胶体金，但还原剂的过量可能会导致聚集。
根据所需的产品特性，应在实验室中进行不同摩尔比的试验，找到最佳比例。
2.稳定剂和金粒子的摩尔比：为了提高胶体金的稳定性，可以添加一定比例的稳定剂。
稳定剂的选择应考虑其对金粒子的吸附能力和稳定性。
合理的稳定剂摩尔比可以增加胶体金的稳定性，防止其聚集和沉淀。
反应条件反应条件是影响胶体金合成过程的另一个重要因素。
合理的反应条件可以提高产率和产品质量。
1.温度：反应温度对于胶体金的生成速率和粒径分布具有重要影响。
适当的温度可以促进反应速率，但过高的温度可能会导致过快的反应和不均匀的粒径分布。
因此，应在实验室中进行不同温度条件下的试验，并选择最适宜的温度。
2.pH值：反应体系的pH值对胶体金的合成也起重要作用。
不同pH值下，金离子的还原速率和粒子形态可能存在差异。
在选择反应条件时，应考虑具体的研究目的和所需产品特性。
注意事项在制备胶体金的过程中，还需要注意以下事项，以确保产品质量和实验室安全：1.实验室安全：在进行胶体金合成实验时，要注意操作安全，遵循实验室安全操作规程，佩戴个人防护装备。
胶体金介绍ppt课件-PPT课件
评价指标
灵敏度：试剂具有检测出最低量被检物的能力。 灵敏度是诊断试剂的首要质量指标。 特异性：试剂正确检定不存在的被检物质的能力（即 无假阳性）。 精密度：重复测定值之间的符合程度，批内CV（变 异系数）值应小于15%。 稳定性：试剂在规定条件下能储存的时间。
发展方向
形式创新
显示窗口的设计、显示结果显示设计
吸水棒吸水后会改变颜色
技术创新
Technology 技术
项目开发技术路线图
抗体的制备 抗体膜的制备 装配
固相膜筛选
胶体金标记 技术的研究
胶体金的制备 胶体金标记物的制备 胶体金标记物吸附在玻纤上
固相技术 的选择优化
试纸板的生产 切割
组装、包装
膜的介绍
1、硝酸纤维素膜 在检测线和对照线条带区域固 定抗体 2、包被材料 将抗原或抗体通过喷膜机喷到 硝酸纤维膜上的过程叫包被过程。
3、喷膜机 喷膜机是将包被液包被到膜上 面的机器。 影响产品质量和实验效果的参 数有： ①喷膜速度 ②喷膜参数 ③灌注量 ④线条间隔和位置
金子垫的介绍
1、标记材料 将胶体金和标记材料结 合起来的过程叫标记。 标记材料的作用是和胶 体金标记物结合，捕获目 标蛋白，结合膜上T线材 料，从而显示出检测结果。
试纸条组成结构
胶体金垫 样品垫 控制线（C线） 吸水滤纸
PVC底板
层析方向 测试线 （T线）
NC膜（硝酸纤维素膜）
胶体金层析法一般原理介绍
（双抗体夹心）
（以HCG检测为例）
视频
早早孕产品形式
图片
形式
试纸条
卡型
笔型
电子验孕笔价格源自最经济3-5元5-10元
>$5.0
胶体金组研发思路PPT课件
检测方法-胶体金法
2
1 不同环境下的稳定性好、易保存、运输，在室温下可长期保存，不
需冷藏。
2 操作简便、易于肉眼观察结果，不需经过特殊复杂培训，操作者安
全，对环境无污染。
3 操作快速、短时间获得检测结果，一般10—15 分钟即可得出结论，
便于大批量筛查，取量少，检测成本均较低，无需特殊仪器。
4 适用范围广泛，检测标本种类多，可用于查血、尿液或粪便，因而
标金过程
4
胶体金的标记
复溶 离心
PH 蛋白ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
调试
封闭液
pH：在pH接近和稍高于蛋白质的等电点时,胶体金蛋
白质的吸附力最强;pH过高过低都不利于两者的结合, 因此标记时选择精密的酸碱度测定仪器或者试纸条, 采用不同方法重复校正,并进行梯度试验找到最佳的 标记pH。
蛋白：过多蛋白质标记,造成浪费的同时引起试纸
适合各种检查。特异性较强、结果有可重复性。
胶体金的制备
3
胶体金的制备并不难，但要制好高质量的胶体金却也并非易事。因此对每 次制好的胶体金应加以检定，主要检查指标有颗粒大小，粒径的均一程度 及有无凝集颗粒等。
要还原材料：氯 金酸（HAuCl4）
所用还原剂： 柠檬酸钠
还原制备金溶胶
采用化学还原法制备胶体金时， 通过改变反应体 系中氯金酸与还原剂的比例（增加或减少还原剂 的量） 可得到所需不同直径的金颗粒。
胶体金组研发思路
目录
●明确对象 ●检测方法-胶体金法 ●胶体金的制备 ●标金过程 ●试纸条的组成 ●性能评估 ●投入市场
明确对象
1
猪瘟
犬细小 犬瘟
猪瘟
• 猪瘟病毒是猪瘟的病原,主要通过直接接触，或由于接触 污染的媒介物而发病。
胶体金试纸条的制备 ppt课件
颗粒； • ⑥硼氢化钠还原法(1982年)可合成3—17nm大小的金颗粒； • ⑦单宁酸—柠檬酸三钠还原法(1985年)可合成3～17nm大
小的金颗粒。
胶体金合成
制备胶体金试纸条常用的一般是柠檬酸三钠还原法
» 将100ml的0.1％H2AuCl4加入200ml的锥形瓶中，并 将其置于搅拌电热炉上，加入一个磁力条并将溶液 加热至沸腾。
注意事项
（1）氯金酸易潮解，应干燥、避光保存。 （2）氯金酸对金属有强烈的腐蚀性，因此在配制 氯金酸水溶液时，不应使用金属药匙称量氯金酸。
（3）用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水或三 蒸馏水，或者是高质量的去离子水。
（4）是以制备胶体金的玻璃容器必须是绝对清洁 的，用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。最好是经 硅化处理的，硅化方法可用5％二氯甲硅烷的氯仿 溶液浸泡数分钟，用蒸馏水冲净后干燥备用。
（2）目测法：以目测法确定胶体金与待标记蛋白
质用量比例，将标记的蛋白质逐级稀释后（由 5μg～45μg另设对照管），各取等体积顺序加入 一系列装有1ml胶体金的试管中，5min后，在上述 各管内分别加入0.1ml 10%氯化钠，依表顺序进行。
发现 1、2 号管出现黑色沉淀且红色全部褪去，3 号管虽 然能保持红色，但是管底也出现了一定量的黑色沉淀，而
» 向沸腾的溶液中加入1.5ml的0.1％二合水柠檬酸三 钠，Na3C6H5O7.2H2O
» 当获得深红颜色的溶液时停止加热
胶体金的合成
胶体金 1％柠檬酸 粒径 三钠加入量 （nm） （ml）*
16
2.00
24.5 1.50
41
1.00
71.5 0.70
呈色
橙色 橙红 红色 紫色
λmax
518nm 522nm 525nm 535nm
小的金颗粒。
胶体金合成
制备胶体金试纸条常用的一般是柠檬酸三钠还原法
» 将100ml的0.1％H2AuCl4加入200ml的锥形瓶中，并 将其置于搅拌电热炉上，加入一个磁力条并将溶液 加热至沸腾。
注意事项
（1）氯金酸易潮解，应干燥、避光保存。 （2）氯金酸对金属有强烈的腐蚀性，因此在配制 氯金酸水溶液时，不应使用金属药匙称量氯金酸。
（3）用于制备胶体金的蒸馏水应是双蒸馏水或三 蒸馏水，或者是高质量的去离子水。
（4）是以制备胶体金的玻璃容器必须是绝对清洁 的，用前应先经酸洗并用蒸馏水冲净。最好是经 硅化处理的，硅化方法可用5％二氯甲硅烷的氯仿 溶液浸泡数分钟，用蒸馏水冲净后干燥备用。
（2）目测法：以目测法确定胶体金与待标记蛋白
质用量比例，将标记的蛋白质逐级稀释后（由 5μg～45μg另设对照管），各取等体积顺序加入 一系列装有1ml胶体金的试管中，5min后，在上述 各管内分别加入0.1ml 10%氯化钠，依表顺序进行。
发现 1、2 号管出现黑色沉淀且红色全部褪去，3 号管虽 然能保持红色，但是管底也出现了一定量的黑色沉淀，而
» 向沸腾的溶液中加入1.5ml的0.1％二合水柠檬酸三 钠，Na3C6H5O7.2H2O
» 当获得深红颜色的溶液时停止加热
胶体金的合成
胶体金 1％柠檬酸 粒径 三钠加入量 （nm） （ml）*
16
2.00
24.5 1.50
41
1.00
71.5 0.70
呈色
橙色 橙红 红色 紫色
λmax
518nm 522nm 525nm 535nm
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pH
蛋白在等电点最不稳定
沉淀剂
通常用醇降低蛋白的稳定性，也可润湿膜，减少膜带 有的静电，利于结合包被。
盐
通常不会影响 对某些蛋白，两性离子的盐类有助于蛋白结合 减少信号强度，消假阳
17
Made by：QS HLJ
糖：对包被蛋白的稳定性有重要作用，减 缓老化速度，也可以增加亲水力。
19
பைடு நூலகம்
Made by：QS HLJ
推荐的起始缓冲液
10mM Phosphate pH 7.0 3% Ethanol
20
Made by：QS HLJ
“潜水艇” 效应
表面活性剂处理过的膜在使用时的常见问 题
因为使用的表面活性剂是水溶性的 喷膜时这些表面活性剂被“冲走”了
21
Made by：QS HLJ
11
Made by：QS HLJ
蛋白结合到固相材料上
蛋白结合到固相材料上是一个多步骤过程 取决于
蛋白溶液扩散到固相表面 蛋白从溶液中分离出来 蛋白吸附到固相上 蛋白重排到最低能态
12
Made by：QS HLJ
吸附过程
溶液中的蛋白
吸附
蛋白转移到表面区域 蛋白在表面重排
13
Made by：QS HLJ
多位点结合
只有1个位点的结合是可逆的
多位点结合使得蛋白稳定在固相表面， 即使其中的每个单位点都是可逆的
14
Made by：QS HLJ
影响蛋白结合的因素
蛋白缓冲液 使用的膜 蛋白自身 应用体系
15
Made by：QS HLJ
蛋白缓冲液
没有通用的缓冲液，不同的系统必须分别 优化。
25
Cluster free, high quality gold reagent
Clustered, poor quality gold reagent Made by：QS HLJ
胶体金的生产
胶体金的形成是还原HAuCl4.
HAuCL4 + e-
Au0
还原剂越强，得到的金颗粒越小
生产 40nm诊断用金颗粒一般用柠檬酸三钠
蛋白标记原理
蛋白质在等电点或稍偏碱的情况下，依 靠静电引力或疏水力或共价键，被牢固 地吸附于胶体金颗粒表。由于蛋白质分 子牢固地结合在金颗粒表面，形成一个 蛋白层，从而阻止了胶体金颗粒的相互 接触，使该胶联溶液较为稳定。
30
Made by：QS HLJ
要点
蛋白的预处理
使用低浓度和正确的pH值，确保最小的聚 集
合适的蛋白量（可通过盐滴定进行评价）
搅拌速度、容器的洁净程度、离心的速 度
31
Made by：QS HLJ
盐滴定
盐滴定不能衡量蛋白单层的形成 盐滴定只能代表盐溶液中多少量的蛋白可
为什么蛋白会结合到膜上?
结合力是什么?
静电 疏水力
这两种结合力的效应是什么?
使蛋白从溶液中分离出来 长久结合作用
9
Made by：QS HLJ
静电作用力
静电作用力是正负电荷相互吸引产生的作用 力
疏水作用力
疏水作用力又称为疏水键。它是由侧链的疏 水基团相互接近. 而形成的一种作用力。 对维持分子的三、四级结构起着重要的作 用。每一个蛋白质都具有疏水基团和亲水 基团。
26
Made by：QS HLJ
胶体金颗粒的形成
27
Made by：QS HLJ
胶体金的生产
2种重要步骤
直接形成 分步形成
大多数人用分步形成
比较容易控制颗粒大小，CV也比较小 能够生产出大颗粒胶体金
28
Made by：QS HLJ
颗粒大小对胶体的影响
29
Made by：QS HLJ
惰性蛋白：对消除假阳有重要作用 表面活性剂：增加亲水力，也可增色。
18
Made by：QS HLJ
缓冲液的基本成分
各种缓冲系: Tris-HCl, PB, CB等 盐类：NaCl 糖：蔗糖，海藻糖等 表面活性剂：Tween20，Triton x-100等 惰性蛋白：Casein等 防腐剂 ：叠氮钠，卡松等
10
Made by：QS HLJ
蛋白质疏水性状和亲水性状
当蛋白质溶解在溶剂中时，蛋白质处于非常 稳定的状态，此时蛋白质的亲水基团展开 在外，疏水基团收缩在内，亲水基团和水 分子接触，保证了溶解性的状态；当蛋白 质沉淀出来时，疏水基团展开，亲水基团 收缩，此时为疏水状态，也呈现不稳定的 固体状态，疏水基团和其他固体物的疏水 基团通过疏水作用力结合，达到固定的目 的。
反应动力学
流速增加,反应速率减低 流速增加,检测时间缩短 流速增加,灵敏度降低 流速增加,试剂用量增加 流速增加,背景降低 距离增加,流速降低 孔径增加,蛋白结合量减少
22
Made by：QS HLJ
二、和金子垫相关的配方和原理
和金子垫相关的工艺和配方有： 1）标记工艺； 2）金标稀释液 3）金垫处理液
5
Made by：QS HLJ
孔径对侧向层析速度的影响
标称孔径 (m)
3 5 8 12
层析 4.5 cm 的时间 (sec)
245 185 140 100
6
Made by：QS HLJ
不同种类膜的 IgG结合能力
7
Made by：QS HLJ
不同种类膜的 BSA结合能力
8
Made by：QS HLJ
23
Made by：QS HLJ
标记工艺
胶体金：一般指金的水溶液，又称金溶胶。 ---金以微小的粒子分散在水中所形成的金溶
胶。 其中分散的金颗粒直径一般在1~100nm之间，
为负电荷分布。
24
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高质量结合物
单个分散的颗粒 圆形颗粒 很少聚集 这样得到的胶体稳定性 和重复性好
作用：提供适合的PH, 改善亲水性, 增溶 性,提高稳定性
定律: “蛋白在缓冲液中越不稳定，蛋白结合力越 强”
16
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缓冲液的优化
离子强度
对于蛋白从溶液中脱离出来很重要，少量的离子强度， 蛋白难以从溶液中脱离沉淀出来，过量的的离子强度， 溶液配制中就已会出现沉淀。
胶体金诊断试剂工艺 配方原则
内
容
一、和膜相关的配方和原理 二、和金子垫相关的配方和原理 三、和样品垫相关的配方和原理 四、相关问题
2
Made by：QS HLJ
一、和膜相关的配方和原理
电镜下的NC膜
3
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硝酸纤维膜生产工艺图
4
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孔径定义的问题
蛋白在等电点最不稳定
沉淀剂
通常用醇降低蛋白的稳定性，也可润湿膜，减少膜带 有的静电，利于结合包被。
盐
通常不会影响 对某些蛋白，两性离子的盐类有助于蛋白结合 减少信号强度，消假阳
17
Made by：QS HLJ
糖：对包被蛋白的稳定性有重要作用，减 缓老化速度，也可以增加亲水力。
19
பைடு நூலகம்
Made by：QS HLJ
推荐的起始缓冲液
10mM Phosphate pH 7.0 3% Ethanol
20
Made by：QS HLJ
“潜水艇” 效应
表面活性剂处理过的膜在使用时的常见问 题
因为使用的表面活性剂是水溶性的 喷膜时这些表面活性剂被“冲走”了
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Made by：QS HLJ
11
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蛋白结合到固相材料上
蛋白结合到固相材料上是一个多步骤过程 取决于
蛋白溶液扩散到固相表面 蛋白从溶液中分离出来 蛋白吸附到固相上 蛋白重排到最低能态
12
Made by：QS HLJ
吸附过程
溶液中的蛋白
吸附
蛋白转移到表面区域 蛋白在表面重排
13
Made by：QS HLJ
多位点结合
只有1个位点的结合是可逆的
多位点结合使得蛋白稳定在固相表面， 即使其中的每个单位点都是可逆的
14
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影响蛋白结合的因素
蛋白缓冲液 使用的膜 蛋白自身 应用体系
15
Made by：QS HLJ
蛋白缓冲液
没有通用的缓冲液，不同的系统必须分别 优化。
25
Cluster free, high quality gold reagent
Clustered, poor quality gold reagent Made by：QS HLJ
胶体金的生产
胶体金的形成是还原HAuCl4.
HAuCL4 + e-
Au0
还原剂越强，得到的金颗粒越小
生产 40nm诊断用金颗粒一般用柠檬酸三钠
蛋白标记原理
蛋白质在等电点或稍偏碱的情况下，依 靠静电引力或疏水力或共价键，被牢固 地吸附于胶体金颗粒表。由于蛋白质分 子牢固地结合在金颗粒表面，形成一个 蛋白层，从而阻止了胶体金颗粒的相互 接触，使该胶联溶液较为稳定。
30
Made by：QS HLJ
要点
蛋白的预处理
使用低浓度和正确的pH值，确保最小的聚 集
合适的蛋白量（可通过盐滴定进行评价）
搅拌速度、容器的洁净程度、离心的速 度
31
Made by：QS HLJ
盐滴定
盐滴定不能衡量蛋白单层的形成 盐滴定只能代表盐溶液中多少量的蛋白可
为什么蛋白会结合到膜上?
结合力是什么?
静电 疏水力
这两种结合力的效应是什么?
使蛋白从溶液中分离出来 长久结合作用
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Made by：QS HLJ
静电作用力
静电作用力是正负电荷相互吸引产生的作用 力
疏水作用力
疏水作用力又称为疏水键。它是由侧链的疏 水基团相互接近. 而形成的一种作用力。 对维持分子的三、四级结构起着重要的作 用。每一个蛋白质都具有疏水基团和亲水 基团。
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胶体金颗粒的形成
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胶体金的生产
2种重要步骤
直接形成 分步形成
大多数人用分步形成
比较容易控制颗粒大小，CV也比较小 能够生产出大颗粒胶体金
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颗粒大小对胶体的影响
29
Made by：QS HLJ
惰性蛋白：对消除假阳有重要作用 表面活性剂：增加亲水力，也可增色。
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缓冲液的基本成分
各种缓冲系: Tris-HCl, PB, CB等 盐类：NaCl 糖：蔗糖，海藻糖等 表面活性剂：Tween20，Triton x-100等 惰性蛋白：Casein等 防腐剂 ：叠氮钠，卡松等
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Made by：QS HLJ
蛋白质疏水性状和亲水性状
当蛋白质溶解在溶剂中时，蛋白质处于非常 稳定的状态，此时蛋白质的亲水基团展开 在外，疏水基团收缩在内，亲水基团和水 分子接触，保证了溶解性的状态；当蛋白 质沉淀出来时，疏水基团展开，亲水基团 收缩，此时为疏水状态，也呈现不稳定的 固体状态，疏水基团和其他固体物的疏水 基团通过疏水作用力结合，达到固定的目 的。
反应动力学
流速增加,反应速率减低 流速增加,检测时间缩短 流速增加,灵敏度降低 流速增加,试剂用量增加 流速增加,背景降低 距离增加,流速降低 孔径增加,蛋白结合量减少
22
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二、和金子垫相关的配方和原理
和金子垫相关的工艺和配方有： 1）标记工艺； 2）金标稀释液 3）金垫处理液
5
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孔径对侧向层析速度的影响
标称孔径 (m)
3 5 8 12
层析 4.5 cm 的时间 (sec)
245 185 140 100
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Made by：QS HLJ
不同种类膜的 IgG结合能力
7
Made by：QS HLJ
不同种类膜的 BSA结合能力
8
Made by：QS HLJ
23
Made by：QS HLJ
标记工艺
胶体金：一般指金的水溶液，又称金溶胶。 ---金以微小的粒子分散在水中所形成的金溶
胶。 其中分散的金颗粒直径一般在1~100nm之间，
为负电荷分布。
24
Made by：QS HLJ
高质量结合物
单个分散的颗粒 圆形颗粒 很少聚集 这样得到的胶体稳定性 和重复性好
作用：提供适合的PH, 改善亲水性, 增溶 性,提高稳定性
定律: “蛋白在缓冲液中越不稳定，蛋白结合力越 强”
16
Made by：QS HLJ
缓冲液的优化
离子强度
对于蛋白从溶液中脱离出来很重要，少量的离子强度， 蛋白难以从溶液中脱离沉淀出来，过量的的离子强度， 溶液配制中就已会出现沉淀。
胶体金诊断试剂工艺 配方原则
内
容
一、和膜相关的配方和原理 二、和金子垫相关的配方和原理 三、和样品垫相关的配方和原理 四、相关问题
2
Made by：QS HLJ
一、和膜相关的配方和原理
电镜下的NC膜
3
Made by：QS HLJ
硝酸纤维膜生产工艺图
4
Made by：QS HLJ
孔径定义的问题